专利名称：榉树组织培养快速繁殖方法
技术领域：
本发明属于植物繁殖技术领域，具体涉及一种榉树的组培快繁方法。
背景技术：
棒树schneideriana Hand.-Mazz.为偷科棒属植物。是珍贵硬质阔叶用材树种，榉树的木材材质坚硬有弹性，纹理美观有光泽，且无特殊气味，已成为许多家庭进行室内装饰和制造高档家具的首选材料，深受广大消费者喜爱。同时，榉树的树形美观，树叶会随季节呈现不同的颜色，具有很高的造园和观赏价值。而且，榉树病虫害少，具有很强的抗病能力；树冠和根系都很庞大，落叶量多，具有良好的水土保持和改良土壤效果，在保护和改善生态环境中起着十分重要的作用。但是，由于过多的砍伐和缺乏保护，榉树的野生资源已相当匮乏，榉树被列为国家二级保护植物。
随着经济的发展和人们对生活水平的新追求，目前全国各地宅区、公园、道路绿化方兴未艾，我国市场对绿化苗木，特别是珍稀树种的需求量越来越大，供需矛盾突出。加上我国人工林树种单一化与“针叶化”现象非常严重，造成了生态系统失衡和经济效益低下等一系列问题，发展优良硬质阔叶人工林已引起我国林业部门的高度重视。在新一代人工林树种结构调整中，选择材质优良的、速生性能和抗虫能力较强的珍稀树种如榉树造林已经成为专家们的共识，对优质速生榉树苗木的需求不断增加。但是，对榉树的研究，如引种驯化、新品种选育、繁殖和推广等方面的研究相对滞后，种子育苗良莠不齐现象非常严重，不能提供生产应用及市场供应的科技支撑。因此，对榉树的快速繁殖技术的研究尤为重要。目前关于榉树组织培养的研究报道主要有顶芽的组织培养和通过叶片诱导愈伤组织的组织培养。顶芽的组织培养得到的丛生芽苗木一致性比较差，繁殖系数低(27 125);叶片诱导愈伤组织的组织培养产生的再生植株与母株的一致性差。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种榉树组织培养快速繁殖的方法。为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为
榉树组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤
(1)将榉树幼嫩枝条用75%的酒精消毒25 35s，用无菌水冲洗，用O.1%升汞消毒8 12min，再用无菌水冲洗；
(2)将经步骤(I)处理后的枝条切成长O.8 1. 2cm至少含有一个腋芽的茎段，植入丛生芽诱导培养基中培养28 32天，获得丛生芽；其中，所述丛生芽诱导培养基为WPM +
I.O 3. O mg. L 1 BA + O I. O mg. L 1NAA,琼脂 6. 5 g. L 1 ,鹿糖 20 g. L \ pH 值为 5. 7 ；
(3)将经步骤(2)诱导培养后长出的丛生芽转入继代培养基中培养6(Γ65天，进行芽的增殖；其中，所述继代培养基为=WPM + 2. 0 3· O mg. L-1 BA+1. 0 2· O mg. T1NAA,琼脂6. 5g. L-1，鹿糖 20 g. I/1, pH 值为 5. 7 ；
(4)切取经步骤(3)继代培养后长出的高度为2.O cm以上的榉树健壮苗，植入生根培养基中培养45 50天，获得再生植株；其中，所述生根培养基为生根培养基为WPM +O. 5 I. O mg. Γ1 IBA+2. O g. L-1AC,琼脂 7. O mg. L' 蔗糖 20 g. Λ pH 值为 5. 7 ；
(5)将经步骤(4)获得的再生植株洗净，移植到由泥炭土和珍珠岩组成的混合基质中炼苗培养7 10天，再室外培养9(Γ100天，即可移至大田栽培，大田栽培时遮荫一周即可。优选地，步骤(I)所述榉树幼嫩枝条是当年生春季带芽幼嫩枝条。优选地，步骤(I)所述榉树幼嫩枝条是将含腋芽的榉树冬季落叶的健壮枝条置于装有蒸馏水的烧杯中，25°C下进行水培1(Γ15天后，由腋芽萌发而成的幼嫩枝条。优选地，步骤(5)所述的混合基质中泥炭土和珍珠岩的体积比为1:1。优选地，步骤(2)至(4)中的培养条件为室温24 ± 2 °C，光照强度PPFD =65. 5 μ · moL. m 2· s S光照时间每天16小时。
其中，本发明步骤(2)中丛生芽的诱导率为8(Γ90%;步骤(3)中芽增殖培养的芽增殖系数为7 10 ;步骤(4)中生根培养的生根率为86、5% ;步骤(5)中移栽至大田栽培的存活率为95 100%。与现有技术相比，本发明的有益效果为
I、本发明方法选择带芽茎段为外植体，并选择合适的各阶段培养基，进行组织培养，能够得到保持母株优良性状的大量苗木，可以100%保持原植株基因型及其所有的优良特性。2、本发明可实现工厂化育苗，并大批量生产整齐一致的榉树苗木，大幅度提高繁殖系数(343 1000)。繁殖系数的计算是繁殖一次时间是4个月，一年12个月可繁殖3次，一次的增殖系数是疒10，那么一年的繁殖系数为7X7X7 IOX IOX 10 (343 1000)。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明。实施例I
(1)将选取的榉树当年生春季带芽幼嫩枝条用75%的酒精消毒3(T35s，用无菌水冲洗3次，用O. 1%升汞消毒8min,再用无菌水冲洗3次；
(2)将经步骤(I)处理后的枝条切成长Icm至少含有一个腋芽的茎段，植入芽诱导培养基中培养28 30天，获得丛生芽；其中，所述芽诱导培养基为WPM + 3.0 mg. Γ1 BA，琼脂6. 5g. L—1，蔗糖20 g. L—1，pH值为5. 7，培养基高压灭菌20min ;丛生芽的诱导率为84 90% ；
(3)将经步骤(2)诱导培养后长出的丛生芽转入继代培养基中培养60天，进行芽的增殖，芽增殖系数为8 10 ;其中，所述继代培养基为WPM + 3.0 mg. L-1 BA+2. O mg. T1NAA,琼脂6. 5 g. L-1，蔗糖20 g. L-1，pH值为5. 7，培养基高压灭菌20min ；
(4)切取经步骤(3)继代培养后长出的高度为2.Ocm以上的榉树健壮苗，植入生根培养基中培养45天，获得再生植株，生根率为89、5%;其中，所述生根培养基为生根培养基为WPM + O. 5 mg. I/1 IBA+2. O g. L^1AC,琼脂 7. O mg Γ1，蔗糖 20 g. Λ pH 值为 5. 7，培养基高压灭菌20min ；
(5)将经步骤(4)获得的再生植株洗净，移植到由泥炭土和珍珠岩按体积比1:1组成的混合基质中炼苗培养7天，再室外培养90天，即可移至大田栽培，大田栽培时遮荫一周即可，移栽成活率为100%。上述步骤(2)至(4)中的培养条件为室温24 ± 2 °C，光照强度PPFD = 65. 5μ . moL. m_2· s_S光照时间每天16小时。试验结果表明，能够得到保持母株优良性状的大量苗木，可以100%保持原植株基因型及其所有的优良特性，具有较高的繁殖系数(512 1000)。实施例2
将含腋芽的榉树冬季落叶的健壮枝条置于装有蒸馏水的烧杯中，25°C下进行水培15 30天后，取得腋芽萌发而成的幼嫩枝条，然后进行如下步骤；
(1)将榉树幼嫩枝条用75%的酒精消毒25 30s，用无菌水冲洗3次，用O.1%升汞消毒12min,再用无菌水冲洗3次；
(2)将经步骤(I)处理后的枝条切成长I.2cm至少含有一个腋芽的茎段，植入丛生芽诱导培养基中培养3(Γ32天，获得丛生芽；其中，所述丛生芽诱导培养基为WPM+ 1.0 mg. Γ1BA+1. O mg. L-1NAA,琼脂 6. 5 g. L-1 ,鹿糖 20 g. L-1, pH 值为 5. 7,培养基高压灭菌 20min ；
(3)将经步骤(2)诱导培养后长出的丛生芽转入继代培养基中培养65天进行芽的增殖培养，芽增殖系数为7 9 ;其中，所述继代培养基为WPM +2.0 mg. L—1 BA+1. O mg. T1NAA,琼脂6. 5 g. L-1，蔗糖20 g. L-1，pH值为5. 7，培养基高压灭菌20min ；
(4)切取经步骤(3)继代培养后长出的高度为2.O cm以上的榉树健壮苗，植入生根培养基中培养50天，获得再生植株，生根率为86% ;其中，所述生根培养基为生根培养基为WPM +1.0 mg. I/1 IBA+2. O g. L^1AC,琼脂 7. O mg Γ1，蔗糖 20 g. Λ pH 值为 5. 7，培养基高压灭菌20min ；
(5)将经步骤(4)获得的再生植株洗净，移植到由泥炭土和珍珠岩按体积比1:1组成的混合基质中炼苗培养10天，再室外培养100天，即可移至大田栽培，大田栽培时遮荫一周即可，移栽成活率为95%。上述步骤(2)至(4)中的培养条件为室温24 ± 2 °C，光照强度PPFD = 65. 5 μ . moL. m_2· s_S光照时间每天16小时。试验结果表明，能够得到保持母株优良性状的大量苗木，可以100%保持原植株基因型及其所有的优良特性，具有较高的繁殖系数(343 729)。
权利要求
1.一种榉树组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤 (1)将榉树幼嫩枝条用75%的酒精消毒25 35s，用无菌水冲洗，用0.1%升汞消毒8 12min，再用无菌水冲洗； (2)将经步骤(I)处理后的枝条切成长0.8^1. 2cm至少含有一个腋芽的茎段，植入丛生芽诱导培养基中培养28 32天，获得丛生芽；其中，所述丛生芽诱导培养基为WPM + I. 0 3. 0 mg. L 1 BA + 0 I. 0 mg. L 1NAA,琼脂 6. 5 g. L 1 ,鹿糖 20 g. L \ pH 值为 5. 7 ； (3)将经步骤(2)诱导培养后长出的丛生芽转入继代培养基中培养60飞5天，进行芽的增殖，；其中，所述继代培养基为WPM + 2. 0 3. 0 mg. L-1 BA+1. 0 2. 0 mg. [1NAA,琼脂6. 5g. L-1，鹿糖 20 g. I/1, pH 值为 5. 7 ； (4)切取经步骤(3)继代培养后长出的高度为2.Ocm以上的榉树健壮苗，植入生根培养基中培养45 50天，获得再生植株；其中，所述生根培养基为WPM + 0. 5 1.0 mg. T1IBA+2. 0 g. L-1AC,琼脂 7. 0 mg L-1，蔗糖 20 g. L-1，pH 值为 5. 7 ； (5)将经步骤(4)获得的再生植株洗净，移植到由泥炭土和珍珠岩组成的混合基质中炼苗培养7 10天，再室外培养9(Tl00天，即可移至大田栽培。
2.如权利要求I所述榉树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤(I)所述榉树幼嫩枝条是当年生春季带芽幼嫩枝条。
3.如权利要求I所述榉树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤(I)所述榉树幼嫩枝条是将含腋芽的榉树冬季落叶的健壮枝条置于装有蒸馏水的烧杯中，25°C下进行水培15 30天后，由腋芽萌发而成的幼嫩枝条。
4.如权利要求I所述榉树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤(5)所述的混合基质中泥炭土和珍珠岩的体积比为1:1。
5.如权利要求I所述榉树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤(2)至(4)中的培养条件为室温24 ± 2 °C，光照强度PPFD = 65.5 y . moL. m—2. s—1，光照时间每天16小时。
全文摘要
本发明公开了一种榉树组织培养快速繁殖方法，该方法选择带芽茎段为外植体，并选择合适的各阶段培养基，进行组织培养，能够得到保持母株优良性状的大量苗木，可以100％保持原植株基因型及其所有的优良特性，大幅度提高了繁殖系数。
文档编号A01H4/00GK102792890SQ20121027310
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月3日 优先权日2012年8月3日
发明者金晓玲, 何平, 胡希军, 张日清, 廖飞勇, 汪灵丹 申请人:中南林业科技大学