专利名称：崇左金花茶组培繁殖方法及其诱导培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物组织培养繁殖领域，尤其是一种崇左金花茶组培繁殖方法及其诱导培养基。
背景技术：
崇左金花茶(C.chungtsoensis S. Y. Liang et L. D. Huang),常绿灌木，是最近新发现的金花茶珍稀品种，是继杜鹃红山茶之后，世界上发现的第二个四季开花的金花茶品种，它不但在金花茶族中颜色最鲜黄，而且全年不断开花。崇左金花茶仅在广西崇左的局部石灰岩低山地区有少量分布。该种与朽1檬黄金花茶近似，不同之处在于花大深黄色，花瓣 13-16瓣，四季开花。崇左金花茶花朵分布均匀，枝条稠密，全光照条件下可正常生长，具有很高的观赏价值，在家庭盆栽、园林美化以及茶花育种方面具有广阔的应用前景。崇左金花茶的自然分布范围狭窄、数量有限，由于枝条细弱、扦插生根率低，无性繁殖困难，难以满足园林花卉市场需求。迄今为止，国内外虽有一些关于金花茶组植物组织培养的报道，但未见关于崇 左金花茶的组培研究报道。发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种崇左金花茶组培繁殖方法，以有效利用现有资源快速繁殖崇左金花茶，保护这一世界上稀有的珍贵植物种质资源。
本发明要解决的另一技术问题是提供用于上述崇左金花茶组培繁殖方法的丛生芽诱导培养基和生根诱导培养基。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案崇左金花茶组培繁殖方法，将崇左金花茶的外植体接种到丛生芽诱导培养基中进行培养，待丛生芽长至3cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根诱导培养基中进行培养；
上述丛生芽诱导培养基以改良MS培养基为基础，含有下列浓度的物质
6-节氛基嘿呤2 4mg/L 3_ Π引噪乙酸O. 6 O. 8mg/L
其pH 值为 4. 5 5. 8 ;
上述生根诱导培养基以1/2改良MS培养基为基础，含有下列浓度的物质
Π引哚丁酸 O. 6 I. 2mg/L 或奈乙酸 O. 6 I. 2mg/L。
外植体为幼嫩种子。
幼嫩种子先经洗净并用O. I % HgCl2溶液消毒处理20 30min，再用O. 2% HgCl2 溶液消毒处理15 20min。
培养均在温度25±2°C、光照时间12 14h. cf1、光照强度20001x的条件下进行。
崇左金花茶丛生芽诱导培养基，以改良MS培养基为基础,含有下列浓度的物质
6_节氛基嘿呤2 4mg/L 3-Π引噪乙酸O. 6 O. 8mg/L。
崇左金花茶丛生芽诱导培养基的pH值为4. 5 5. 8。
上述改良MS 培养基含有成分为=Ca(NO3)2 · 4H20 300mg/L;MgSO4 · 7H20 370mg/L ;KN031900mg/L; NH4NO3 1650mg/L; KH2PO4 340mg/L; Na2 · EDTA 37. 3mg/L; FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L;KI0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/ L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L; 烟酸0. 5mg/L;盐酸批卩多酸0. 5mg/L;盐酸硫胺素0. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
崇左金花生根诱导培养基，以1/2改良MS培养基为基础,含有下列浓度的物质
Π引哚丁酸 O. 6 I. 2mg/L 或奈乙酸 O. 6 I. 2mg/L。
上述1/2 改良 MS 培养基含有成分为=Ca(NO3)2 ·4Η20 150mg/L; MgSO4 ·7Η20 185mg/ L ;KN039 50mg/L; NH4NO3 825mg/L; KH2PO4 170mg/L; Na2 .EDTA 37. 3mg/L; FeSO4 *7H20 27. 8mg/ L;KI0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H200.025mg/L; CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;烟酸 0. 5mg/L; 盐酸批卩多酸0. 5mg/L;盐酸硫胺素0. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
本发明采用改良MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA)+3_吲哚乙酸(IAA)作为崇左金花茶丛生芽诱导培养基，这两种生长激素组合在合适的浓度和弱酸性的环境下，可激活崇左金花茶体细胞内的作用酶，促进崇左金花茶外植体的萌发和生长，培养55天就能形成粗壮的丛生芽，扩繁达20倍。本发明还采用1/2改良MS+吲哚丁酸(IBA)或1/2改良MS+奈乙酸 (NAA)作为生根诱导培养基，能有效地促进崇左金花茶单苗生根形成新植株。应用上述三种诱导培养基的崇左金花茶组培繁殖方法，可快速有效地繁殖崇左金花茶，解决了其野生资源日益减少和自然繁殖率低的问题，有效地保护了这一世界上稀有的珍贵植物种质资源。
具体实施方式
实施例I
(I)丛生芽诱导
取崇左金花茶幼嫩种子，先用洗洁精清洗表面污垢，接着流水冲洗30min，然后在超净工作台上用75%乙醇处理30s，无菌水冲洗2次，再用O. IHgCl2消毒20min，无菌水冲洗5次；再用O. 2% HgCl2消毒15min,无菌水冲洗6次；用无菌滤纸吸干水分,挑出乳白色种胚植于用改良MS添加6-BA 4mg/L、IAA O. 6mg/L, pH值调节至5. O的培养基上，在温度为25土 1°C，光照时间为12h. cf1，光照强度20001x的条件下，培养65天，平均得到15. 2倍的丛生芽，丛生芽较粗壮，绿色，生长稍缓慢。
(2)生根诱导
待丛生芽生长至3 4cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根诱导培养基， 生根诱导培养基配方为在1/2改良MS上，添加IBA 0.6mg/L制成；在温度为25±1°C，光照时间为12h. cf1，光照强度20001x的条件下，培养30天开始生长出白色的不定根，50天长出I 2条，粗壮，长度约Icm的不定根。
实施例2
(I)丛生芽诱导
取崇左金花茶幼嫩种子，先用洗洁精洗去表面污垢，接着流水冲洗30min，然后在超净工作台上用75%乙醇处理40s，无菌水冲洗2次，再用O. IHgCl2消毒25min，无菌水冲洗5次；再用O. 2% HgCl2消毒15min,无菌水冲洗6次；用无菌滤纸吸干外植体,挑出乳白色种胚植于用改良MS添加6-BA 3mg/L、IAA O. 70mg/L, pH值调节至5. 5的培养基上，在温度为25±1°C，光照时间为12h. cf1，光照强度20001x的条件下，培养60天，平均得到18倍的丛生芽，丛生芽粗壮，叶浓绿色、肥厚，长势好。
(2)生根诱导
待丛生芽生长至3 4cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根诱导培养基， 生根诱导培养基配方为在1/2改良MS上，添加IBA I. 2mg/L制成；在温度为25±1°C，光照时间为12h. cf1，光照强度20001x的条件下，培养30天开始生出白色的不定根，50天长出 2 3条，粗壮，长度约2cm的不定根。
实施例3
(I)丛生芽诱导
取崇左金花茶幼嫩种子，先用洗洁精洗去表面污垢，接着流水冲洗30min，然后在超净工作台上用75%乙醇处理40s，无菌水冲洗2次，再用O. IHgCl2消毒30min，无菌水冲洗5次；再用O. 2% HgCl2消毒20min,无菌水冲洗6次；用无菌滤纸吸干外植体,植于用改良MS添加6-BA 2mg/L、IAA O. 8mg/L, pH值调节至5. 8的培养基上，在温度为25 土 1°C，光照时间为12h. cf1，光照强度20001x的条件下，培养55天，平均得到20倍的丛生芽，丛生芽较粗壮，叶浓绿色，生长较快。
(2)生根诱导
待丛生芽生长至3 4cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根诱导培养基， 生根诱导培养基配方为在1/2改良MS上，添加NAA 0.6mg/L制成；在温度为25±1°C，光照时间为12h. cf1，光照强度20001x的条件下，培养30天开始生长出白色的不定根，48天长出2条，粗壮，长度约2cm的不定根。
以上实施例中，改良MS培养基含有成分为Ca (NO3) 2 · 4H20 300mg/L;MgSO4 · 7H20 370mg/L;KN03 1900mg/L;NH4NO3 1650mg/L;KH2PO4 340mg/L;Na2 · EDTA 37.3mg/ L; FeSO4 · 7H2027. 8mg/L;KI 0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;烟酸0. 5mg/L;盐酸卩比卩多酸0. 5mg/L;盐酸硫胺素O. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
以上实施例中，上述1/2改良MS培养基含有成分为Ca (NO3) 2 · 4H20 150mg/ L; MgSO4 · 7H20185mg/L; KNO3 950mg/L; NH4NO3 825mg/L; KH2PO4 170mg/L; Na2 · EDTA 37. 3mg/ L; FeSO4 · 7H2027. 8mg/L;KI 0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;烟酸0. 5mg/L;盐酸卩比卩多酸0. 5mg/L;盐酸硫胺素O. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
权利要求
1.一种崇左金花茶组培繁殖方法，其特征在于将崇左金花茶的外植体接种到丛生芽诱导培养基中进行培养，待丛生芽长至3cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根诱导培养基中进行培养； 所述丛生芽诱导培养基以改良MS培养基为基础，含有下列浓度的物质 6-节氨基嘌呤2 4mg/L 3- Π引哚乙酸O. 6 O. 8mg/L 其pH值为4. 5 5.8 ; 所述生根诱导培养基以1/2改良MS培养基为基础，含有下列浓度的物质 口引哚丁酸O. 6 I. 2mg/L或奈乙酸O. 6 I. 2mg/L。
2.根据权利要求I所述的崇左金花茶组培繁殖方法，其特征在于所述外植体为幼嫩种子。
3.根据权利要求2所述的崇左金花茶组培繁殖方法，其特征在于所述幼嫩种子先经洗净并用O. I % HgCl2溶液消毒处理20 30min，再用O. 2% HgCl2溶液消毒处理15 20mino
4.根据权利要求3所述的崇左金花茶组培繁殖方法，其特征在于所述培养均在温度25±2°C、光照时间12 14h. Cf1、光照强度20001x的条件下进行。
5.一种崇左金花茶丛生芽诱导培养基，其特征在于以改良MS培养基为基础，含有下列浓度的物质 6-节氨基嘌呤2 4mg/L 3- Π引哚乙酸O. 6 O. 8mg/L。
6.根据权利要求5所述的崇左金花茶丛生芽诱导培养基，其特征在于该培养基的pH值为 4. 5 5. 8。
7.根据权利要求5或6所述的诱导培养基，其特征在于所述改良MS培养基含有成分 S:Ca(N03)2*4H20 300mg/L; MgSO4 · 7H20 370mg/L;KN03 1 900mg/L; NH4NO31650mg/L;KH2P04340mg/L; Na2 · EDTA 37. 3mg/L; FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L;KI 0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H200. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;烟酸 0. 5mg/L;盐酸吡哆酸0. 5mg/L;盐酸硫胺素O. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
8.—种崇左金花生根诱导培养基，其特征在于以1/2改良MS培养基为基础，含有下列浓度的物质 口引哚丁酸O. 6 I. 2mg/L或奈乙酸O. 6 I. 2mg/L。
9.根据权利要求8所述的诱导培养基，其特征在于所述1/2改良MS培养基含有成分 S:Ca(N03)2*4H20 150mg/L; MgSO4 · 7H20 185mg/L;KN03 950mg/L; NH4NO3825mg/L ;KH2P04170mg/L; Na2 · EDTA 37. 3mg/L; FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L;KI 0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H200. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;烟酸 0. 5mg/L;盐酸吡哆酸0. 5mg/L;盐酸硫胺素O. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
全文摘要
本发明公开了一种崇左金花茶组培繁殖方法及其诱导培养基，该方法采用改良MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA)+3-吲哚乙酸(IAA)作为崇左金花茶丛生芽诱导培养基，这两种生长激素组合在合适的浓度和弱酸性的环境下，可激活崇左金花茶体细胞内的作用酶，促进崇左金花茶外植体的萌发和生长，培养55天就能形成粗壮的丛生芽，扩繁达20倍。本发明还采用1/2改良MS+吲哚丁酸(IBA)或1/2改良MS+奈乙酸(NAA)作为生根诱导培养基，能有效地促进崇左金花茶单苗生根形成新植株。应用上述三种诱导培养基的崇左金花茶组培繁殖方法，可快速有效地繁殖崇左金花茶，解决了其野生资源日益减少和自然繁殖率低的问题，有效地保护了这一世界上稀有的珍贵植物种质资源。
文档编号A01H4/00GK102972291SQ20121048283
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月23日 优先权日2012年11月23日
发明者杨舒婷, 王华新, 林茂, 唐遒冥, 龚建英, 孙利娜, 杜铃, 廖美兰, 陈尔, 陈宝玲, 李娜, 黄欣, 汪小玉, 杜禹 申请人:广西壮族自治区林业科学研究院