一种小木通组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种小木通组织培养的快速繁殖方法，包括小木通无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根培养等步骤，本发明方法所制备的小木通分化率高，生长周期短，生产成本低，为小木通资源的开发利用提供理论研究基础和技术依据。
【专利说明】 一种小木通组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及小木通组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]小木通，Clematis毛茛科,又称川木通,大木通,淡木通等,是一种常绿攀缘状木质藤本植物，高可达6米。茎圆柱形，具纵条纹，小枝具棱，披白色短柔毛，后渐脱落至无毛，干后黑褐色或微红褐色，在中国分布于西藏东部、云南、贵州、四川、甘肃和陕西南部、湖北、湖南、广东、广西、福建西南部。越南也有分布。本种以藤茎入药，中药名为川木通，味淡、微苦，性寒，有小毒，归心、小肠及膀胱经，种植方法主要自然繁殖。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种小木通的快速繁殖方法，由该方法所制备的小木通分化率高，生长周期短，生产成本低，为小木通资源的开发利用提供理论研究基础和技术依据。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取小木通幼嫩的叶片,流水冲洗40min,超净工作台上10%的过氧化氢处理8min,无菌水冲洗6次至无残留，消毒处理过的小木通叶片接入N6+6-BA0.5mg/L+2, 4-D0.5mg/L+Vclg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基N6+6-BA0.5mg/L+KT0.7mg/L进行分化诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，光期14h/d，温度24°C，获得的分化出来的芽苗接入MS+NAA0.1-0.15mg/L中培养，获得健壮的芽苗，附加蔗糖40g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照80001x，温度24°C，长约3cm的芽苗取出，浸泡在0.2%的Cu离子溶液中浸泡3min，取出后浸泡在含有10-30mg/LNAA溶液的浅盘中lmin，无菌水冲洗干净，插入黄土:稻壳=2:1的营养袋中，定期喷水，除草，覆盖65%的遮阴网，温度28°C，湿度75%，并保持通风透气。
[0005]采用本发明制备的小木通生根率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取小木通幼嫩的叶片,流水冲洗40min,超净工作台上10%的过氧化氢处理8min,无菌水冲洗6次至无残留，消毒处理过的小木通叶片接入N6+6-BA0.5mg/L+2, 4-D0.5mg/L+Vclg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基N6+6-BA0.5mg/L+KT0.7mg/L进行分化诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，光期14h/d，温度24°C，获得的分化出来的芽苗接入MS+NAA0.lmg/L中培养，获得健壮的芽苗，附加蔗糖40g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照80001x，温度24°C，长约3cm的芽苗取出，浸泡在0.2%的Cu离子溶液中浸泡3min，取出后浸泡在含有lOmg/LNAA溶液的浅盘中lmin,无菌水冲洗干净,插入黄土:稻壳=2:1的营养袋中，定期喷水，除草，覆盖65%的遮阴网，温度28°C，湿度75%，并保持通风透气，成活率89%。
[0008]实施例2
取小木通幼嫩的叶片,流水冲洗40min,超净工作台上10%的过氧化氢处理8min,无菌水冲洗6次至无残留，消毒处理过的小木通叶片接入N6+6-BA0.5mg/L+2, 4-D0.5mg/L+Vclg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基N6+6-BA0.5mg/L+KT0.7mg/L进行分化诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，光期14h/d，温度24°C，获得的分化出来的芽苗接入MS+NAA0.15mg/L中培养，获得健壮的芽苗，附加蔗糖40g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照80001x，温度24°C，长约3cm的芽苗取出，浸泡在0.2%的Cu离子溶液中浸泡3min，取出后浸泡在含有30mg/LNAA溶液的浅盘中lmin，无菌水冲洗干净，插入黄土:稻壳=2:1的营养袋中，定期喷水，除草，覆盖65%的遮阴网，温度28°C，湿度75%，并保持通风透气，成活率91%。
[0009]实施例3
取小木通幼嫩的叶片,流水冲洗40min,超净工作台上10%的过氧化氢处理8min,无菌水冲洗6次至无残留，消毒处理过的小木通叶片接入N6+6-BA0.5mg/L+2, 4-D0.5mg/L+Vclg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基N6+6-BA0.5mg/L+KT0.7mg/L进行分化诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，光期14h/d，温度24°C，获得的分化出来的芽苗接入MS+NAA0.15mg/L中培养，获得健壮的芽苗，附加蔗糖40g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照80001x，温度24°C，长约3cm的芽苗取出，浸泡在0.2%的Cu离子溶液中浸泡3min，取出后浸泡在含有20mg/LNAA溶液的浅盘中lmin，无菌水冲洗干净，插入黄土:稻壳=2:1的营养袋中，定期喷水，除草，覆盖65%的遮阴网，温度28°C，湿度75%，并保持通风透气，成活率92%。
【权利要求】
1.一种小木通组织培养的快速繁殖方法，包括小木通无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根培养等，其主要步骤如下: (1)取小木通叶片，对其进行消毒处理； (2)取步骤(I)消毒处理过的小木通叶片接入N6+6-BA0.5mg/L+2, 4-D0.5mg/L+Vclg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22°C ； (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织放入培养基N6+6-BA0.5mg/L+KT0.7mg/L进行分化诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照20001χ，光期14h/d，温度24°C ； (4)取步骤(3)获得的分化出来的芽苗接入MS+NAA0.1-0.15mg/L中培养，获得健壮的芽苗，附加蔗糖40g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照80001χ，温度24°C ； (5)取步骤(4)获得的芽苗进行野外生根诱导。
2.按照权利要求1所述的一种小木通组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述小木通无菌叶片的获得为，取小木通幼嫩的叶片，流水冲洗40min，超净工作台上10%的过氧化氢处理8min,无菌水冲洗6次至无残留。
3.按照权利要求1所述的一种小木通组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(5)中生根诱导的方法为长约3cm的芽苗取出，浸泡在0.2%的Cu离子溶液中浸泡3min，取出后浸泡在含有10-30mg/LNAA溶液的浅盘中lmin，无菌水冲洗干净，插入黄土:稻壳=2:1的营养袋中，定期喷水，除草，覆盖65%的遮阴网，温度28°C，湿度75%，并保持通风透气。
【文档编号】A01H4/00GK104255505SQ201410540415
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司