一种刺桐组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种刺桐组织培养的快速繁殖方法，包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根诱导、炼苗移栽等步骤。本发明可以控制条件，不受季节限制，全年连续生产，生长繁殖率高，并且保持原有的优良性状不变，可以实现刺桐优良无性系或单株迅速推广。
【专利说明】 一种刺桐组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及刺桐的组织培养，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]刺桐，variegata Linn.,又称海桐、山芙蓉、空桐树、木本象牙红,豆科，落叶乔木，高约20m，干皮灰色，具圆锥形皮刺；三出复叶互生，小叶菱形或菱状卵形；总状花序，花萼佛焰状暗红色，花蝶形，鲜红色，花期3月；荚果呈念珠状，种子红色。此花原产印度及马来西亚等地，性强健，萌发力强，生长快，开花时新梢可长达1.5米，花序长达50厘米，喜温暖湿润、光照充足的环境，耐旱也耐湿，对土壤要求不严，喜肥沃排水良好的砂壤土，不甚耐寒，见于树旁或近海溪边。树皮含生物碱下箴刺桐碱、刺桐灵、甜菜碱、胆碱，树皮或根皮入药，称海桐皮，祛风湿，舒筋通络，治风湿麻木，腰腿筋骨疼痛，跌打损伤，对横纹肌有松弛作用，对中枢神经有镇静作用。目前常用的繁殖方法为扦插，扦插成活率偏低。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是刺桐组织培养的方法，本发明可以控制条件，不受季节限制，全年连续生产，生长繁殖率高，并且保持原有的优良性状不变，可以实现优良无性系或单株迅速推广。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案:
切取3cm的刺桐带芽茎段放入500ml磨口广口瓶中，包上纱布，流水冲洗30min，在超净工作台上先用50%的Bleach水溶液消毒4min,之后迅速用无菌水洗漆3次，再用0.2%的升汞溶液灭菌12min，最后用无菌水洗涤5次，消毒处理过的刺桐带芽茎段接种到l/2Miller+0.lmg/L2，4，5-D+0.lmg/LIAA+l_2mg/L 谷胱甘肽 +15_20mg/L 夹竹桃霉素的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂9g/L，培养温度26°C，光照强度20001x，光照时间llh/d，pH5.8，培养基采用121°C、1.1kp进行高压灭菌15min，诱导出来的腋芽接入Miller+0.5mg/LZT+0.lmg/LNAA+IAA0.lmg/L培养基中进行丛生芽的增殖，培养出来的丛生芽接入培养基为l/2Miller+lmg/LIBA+0.5mg/LIAA进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂8g/L,培养温度28°C，光照强度70001x，光照时间15h/d，pH5.8，培养基采用121°C、1.1kp进行高压灭菌15min，培养条件均采用人工光照，封闭式，试管苗长至4cm，根数为3，揭开封口膜，在培养室内放置7d，然后取出单苗洗净根上附带的培养基，把根浸入800-1000倍的多菌灵溶液消毒3min，栽植于草炭:珍珠岩=1:1的基质里，栽植后1d内用塑料薄膜保湿，以1/4MS营养液进行叶面喷洒。
[0005]采用本发明制备的刺桐成活率高，操作简单无污染，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
切取3cm的刺桐带芽茎段放入500ml磨口广口瓶中，包上纱布，流水冲洗30min，在超净工作台上先用50%的Bleach水溶液消毒4min,之后迅速用无菌水洗漆3次，再用0.2%的升汞溶液灭菌12min，最后用无菌水洗涤5次，消毒处理过的刺桐带芽茎段接种到 l/2Miller+0.lmg/L2，4，5-D+0.lmg/LIAA+lmg/L 谷胱甘肽+15mg/L 夹竹桃霉素的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂9g/L，培养温度26°C，光照强度20001x，光照时间llh/d，pH5.8，培养基采用121°C、1.1kp进行高压灭菌15min，诱导出来的腋芽接入Miller+0.5mg/LZT+0.lmg/LNAA+IAA0.lmg/L培养基中进行丛生芽的增殖，培养出来的丛生芽接入培养基为l/2Miller+lmg/LIBA+0.5mg/LIAA进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂8g/L,培养温度28°C，光照强度70001x，光照时间15h/d，pH5.8，培养基采用121 °C、1.1kp进行高压灭菌15min，培养条件均采用人工光照，封闭式，试管苗长至4cm，根数为3，揭开封口膜，在培养室内放置7d，然后取出单苗洗净根上附带的培养基，把根浸入800倍的多菌灵溶液消毒3min，栽植于草炭:珍珠岩=1:1的基质里，栽植后1d内用塑料薄膜保湿，以1/4MS营养液进行叶面喷洒，成活率88%。
[0008]实施例2
切取3cm的刺桐带芽茎段放入500ml磨口广口瓶中，包上纱布，流水冲洗30min，在超净工作台上先用50%的Bleach水溶液消毒4min,之后迅速用无菌水洗漆3次，再用0.2%的升汞溶液灭菌12min，最后用无菌水洗涤5次，消毒处理过的刺桐带芽茎段接种到 l/2Miller+0.lmg/L2,4, 5-D+0.lmg/LIAA+2mg/L 谷胱甘肽+20mg/L 夹竹桃霉素的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂9g/L，培养温度26°C，光照强度20001x，光照时间llh/d，pH5.8，培养基采用121°C、1.1kp进行高压灭菌15min，诱导出来的腋芽接入Miller+0.5mg/LZT+0.lmg/LNAA+IAA0.lmg/L培养基中进行丛生芽的增殖，培养出来的丛生芽接入培养基为l/2Miller+lmg/LIBA+0.5mg/LIAA进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂8g/L，培养温度28°C，光照强度70001x，光照时间15h/d，pH5.8，培养基采用121°C、1.1kp进行高压灭菌15min，培养条件均采用人工光照，封闭式，试管苗长至4cm，根数为3，揭开封口膜，在培养室内放置7d，然后取出单苗洗净根上附带的培养基，把根浸入1000倍的多菌灵溶液消毒3min，栽植于草炭:珍珠岩=1:1的基质里，栽植后1d内用塑料薄膜保湿，以1/4MS营养液进行叶面喷洒，成活率92%。
[0009]实施例3
切取3cm的刺桐带芽茎段放入500ml磨口广口瓶中，包上纱布，流水冲洗30min，在超净工作台上先用50%的Bleach水溶液消毒4min,之后迅速用无菌水洗漆3次，再用0.2%的升汞溶液灭菌12min，最后用无菌水洗涤5次，消毒处理过的刺桐带芽茎段接种到 l/2Miller+0.lmg/L2,4, 5-D+0.lmg/LIAA+2mg/L 谷胱甘肽+20mg/L 夹竹桃霉素的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂9g/L，培养温度26°C，光照强度20001x，光照时间llh/d，pH5.8，培养基采用121°C、1.1kp进行高压灭菌15min，诱导出来的腋芽接入Miller+0.5mg/LZT+0.lmg/LNAA+IAA0.lmg/L培养基中进行丛生芽的增殖，培养出来的丛生芽接入培养基为l/2Miller+lmg/LIBA+0.5mg/LIAA进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂8g/L,培养温度28°C，光照强度70001x，光照时间15h/d，pH5.8，培养基采用121 °C、1.1kp进行高压灭菌15min，培养条件均采用人工光照，封闭式，试管苗长至4cm，根数为3，揭开封口膜，在培养室内放置7d，然后取出单苗洗净根上附带的培养基，把根浸入800倍的多菌灵溶液消毒3min，栽植于草炭:珍珠岩=1:1的基质里，栽植后1d内用塑料薄膜保湿，以1/4MS营养液进行叶面喷洒，成活率94%。
【权利要求】
1.一种刺桐组织培养的快速繁殖方法，包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根诱导、炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取刺桐的带芽茎段，进行消毒处理； (2)将步骤(I)消毒处理过的刺桐带芽茎段接种到l/2Miller+0.lmg/L2，4，5-D+0.lmg/LIAA+l-2mg/L谷胱甘肽的培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂9g/L，培养温度26°C，光照强度20001x，光照时间llh/d，pH5.8，培养基采用121°C、1.1kp进行高压灭菌15min ； (3)取步骤(2)诱导出来的腋芽接入Miller+0.5mg/LZT+0.lmg/LNAA+IAA0.lmg/L 培养基中进行丛生芽的增殖，培养条件同上； (4)将步骤(3)培养出来的丛生芽接入培养基为l/2Miller+lmg/LIBA+0.5mg/LIAA进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂8g/L，培养温度28°C，光照强度70001x，光照时间15h/d，ρΗ5.8，培养基采用121。。、1.1kp进行高压灭菌15min ； (5)将步骤(4)生根后的无菌苗进行野外炼苗移栽。
2.按照权利要求1所述的一种刺桐组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述刺桐无菌茎段的获得为切取3cm的刺桐带芽茎段放入500ml磨口广口瓶中，包上纱布，流水冲洗30min,在超净工作台上先用50%的Bleach水溶液消毒4min,之后迅速用无菌水洗涤3次，再用0.2%的升汞溶液灭菌12min，最后用无菌水洗涤5次。
3.按照权利要求1所述的一种刺桐组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)中刺桐的腋芽诱导培养基中附加15-20mg/L的夹竹桃霉素，防止内生菌的生成。
4.按照权利要求1所述的一种刺桐组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤中的培养条件均采用人工光照，封闭式。
5.按照权利要求1所述的一种刺桐组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(5)中刺桐的野外炼苗移栽的方法为揭开封口膜，在培养室内放置7d，然后取出单苗洗净根上附带的培养基，把根浸入800-1000倍的多菌灵溶液消毒3min，栽植于草炭:珍珠岩=1:1的基质里，栽植后1d内用塑料薄膜保湿，以1/4MS营养液进行叶面喷洒。
【文档编号】A01H4/00GK104285799SQ201410550345
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月17日 优先权日:2014年10月17日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司