一种通脱木组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种通脱木组织培养的快速繁殖方法，包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根诱导、炼苗移栽等步骤。本发明方法采用植物组织培养技术，作为植物生物技术中重要组成的部分，该方法可克服传统繁殖方法的不足，在短期内大量扩繁优良品种，并能够为利用遗传转化技术在短期内定向改良培育新品种提供再体系，为通脱木商品化、产业化、规模化生产奠定基础。
【专利说明】一种通脱木组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及通脱木的组织培养，属于生物【技术领域】。
[0002]
【背景技术】
通脱木，rice-paper Wafli,又称木通树、通草、天麻子,五加科,常绿灌木或小乔木，高1-3.5m，叶大，互生，聚生于茎顶，叶片纸质或薄革质，掌状5-11裂，裂片通常为叶片全长的1/3-1/2，稀至2/3，倒卵状长圆形卵状长圆形，每一裂片常又有2-3个小裂片，全缘或有粗齿，上面深绿色，无毛，下面密被白色星状绒毛，伞形花序聚生成顶生或近顶生大型复圆锥花序，长达50cm以上；花瓣4，稀5，三角状卵形，长2mm，雄蕊5，与花瓣同数；子房下位，2室，花柱2，离生，果球形，熟时紫黑色，花期10-12月，果期翌年1-2月。喜光，喜温暖，在湿润、肥沃的土壤上生长良好，根的横向生长力强，并能形成大量根蘖。通脱木分布于长江以南各省区，陕西也有。中药用通草作利尿剂，并有清凉散热功效。通脱木常规的栽植方法为播种繁殖，或挖取根蘖移植，但成活率低，极少栽培。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是通脱木组织培养的繁殖方法，本发明采用作为植物生物技术重要组成部分的植物组织培养技术可克服传统繁殖方法的不足，在短期内大量扩繁优良品种，并能够为利用遗传转化技术在短期内定向改良培育新品种提供再体系，为通脱木商品化、产业化、规模化生产奠定基础。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案:
取通脱木新抽嫩枝上的茎段，切取长度4cm，附带1-2腋芽，流水冲洗45min，在超净工作台上，切成2cm的小段，70%酒精处理20s，1%高锰酸钾处理16min，无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌茎段接种到改良DKW+IBA 0.lmg/L+GA3 lmg/L的培养基中进行腋芽的诱导，添加0.04%的DTT，且采用过滤灭菌，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，培养温度24土 1°C，自然光照射，诱导出来的芽接入改良 DKW+2，4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl2 5-1OmoI/L+整形素0.5-lmg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照25001x，光期14h/d，温度24±1°C，培养出来的丛生芽接入2/3MS+丁酰肼0.5-1.5mg/L培养基中进行生根诱导，附加葡萄糖35g/L，琼脂5g/L，pH5.9，先将培养出来的丛生芽进行暗处理3天，温度3°C，3天后光照2000lx，温度26±1°C，待生根60d的无菌苗，平均根长2cm左右，打开瓶苗的封口膜，将其在日光温室内炼苗7d，之后用镊子取出幼苗，再用蒸馏水洗净根上所带的培养基，然后用0.1%高锰酸钾浸泡5min，移栽入珍珠岩:水苔=2:1的基质中，移栽后应置于阴凉通风处，保持环境温度28°C，防阳光直射，保持湿度85%，移栽大约I周后，新叶开始生长，新根开始伸长，施加少量氮肥，30天后调查幼苗的成活率。
[0005]采用本发明制备的通脱木成活率高，生长周期短，生产过程中污染少，能耗低，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取通脱木新抽嫩枝上的茎段，切取长度4cm，附带1-2腋芽，流水冲洗45min，在超净工作台上，切成2cm的小段，70%酒精处理20s，1%高锰酸钾处理16min，无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌茎段接种到改良DKW+IBA 0.lmg/L+GA3 lmg/L的培养基中进行腋芽的诱导，添加0.04%的DTT，且采用过滤灭菌，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，培养温度24土 1°C，自然光照射，诱导出来的芽接入改良DKW+2，4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl2 5mol/L+整形素0.5mg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照25001x，光期14h/d，温度24±1°C，培养出来的丛生芽接入2/3MS+丁酰肼0.5mg/L培养基中进行生根诱导，附加葡萄糖35g/L，琼脂5g/L，pH5.9，先将培养出来的丛生芽进行暗处理3天，温度3°C，3天后光照2000lx，温度26 ± I °C，待生根60d的无菌苗，平均根长2cm左右，打开瓶苗的封口膜，将其在日光温室内炼苗7d，之后用镊子取出幼苗，再用蒸馏水洗净根上所带的培养基，然后用0.1%高锰酸钾浸泡5min，移栽入珍珠岩:水苔=2:1的基质中，移栽后应置于阴凉通风处，保持环境温度28°C，防阳光直射，保持湿度85%，移栽大约I周后，新叶开始生长，新根开始伸长，施加少量氮肥，30天后调查幼苗的成活率，成活率90%。
[0008]实施例2
取通脱木新抽嫩枝上的茎段，切取长度4cm，附带1-2腋芽，流水冲洗45min，在超净工作台上，切成2cm的小段，70%酒精处理20s，1%高锰酸钾处理16min，无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌茎段接种到改良DKW+IBA 0.lmg/L+GA3 lmg/L的培养基中进行腋芽的诱导，添加0.04%的DTT，且采用过滤灭菌，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，培养温度24土 1°C，自然光照射，诱导出来的芽接入改良DKW+2, 4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl2 1mol/L+整形素lmg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照25001x，光期14h/d，温度24±1°C，培养出来的丛生芽接入2/3MS+丁酰肼1.5mg/L培养基中进行生根诱导，附加葡萄糖35g/L，琼脂5g/L，pH5.9，先将培养出来的丛生芽进行暗处理3天，温度3°C，3天后光照2000lx，温度26 ± I °C，待生根60d的无菌苗，平均根长2cm左右，打开瓶苗的封口膜，将其在日光温室内炼苗7d，之后用镊子取出幼苗，再用蒸馏水洗净根上所带的培养基，然后用0.1%高锰酸钾浸泡5min，移栽入珍珠岩:水苔=2:1的基质中，移栽后应置于阴凉通风处，保持环境温度28°C，防阳光直射，保持湿度85%，移栽大约I周后，新叶开始生长，新根开始伸长，施加少量氮肥，30天后调查幼苗的成活率，成活率89%。
[0009]实施例3
取通脱木新抽嫩枝上的茎段，切取长度4cm，附带1-2腋芽，流水冲洗45min，在超净工作台上，切成2cm的小段，70%酒精处理20s，1%高锰酸钾处理16min，无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌茎段接种到改良DKW+IBA 0.lmg/L+GA3 lmg/L的培养基中进行腋芽的诱导，添加0.04%的DTT，且采用过滤灭菌，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，培养温度24土 1°C，自然光照射，诱导出来的芽接入改良DKW+2, 4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl2 1mol/L+整形素lmg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照25001x，光期14h/d，温度24土 1°C，培养出来的丛生芽接入2/3MS+丁酰肼lmg/L培养基中进行生根诱导，附加葡萄糖35g/L，琼脂5g/L，pH5.9，先将培养出来的丛生芽进行暗处理3天，温度3°C，3天后光照20001x，温度26土 1°C，待生根60d的无菌苗，平均根长2cm左右，打开瓶苗的封口膜，将其在日光温室内炼苗7d，之后用镊子取出幼苗，再用蒸馏水洗净根上所带的培养基，然后用0.1%高锰酸钾浸泡5min，移栽入珍珠岩:水苔=2:1的基质中，移栽后应置于阴凉通风处，保持环境温度28°C，防阳光直射，保持湿度85%，移栽大约I周后，新叶开始生长，新根开始伸长，施加少量氮肥，30天后调查幼苗的成活率，成活率93%。
【权利要求】
1.一种通脱木组织培养的快速繁殖方法，包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根诱导、炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取通脱木的茎段，进行消毒处理； (2)将步骤(I)消毒处理过的无菌茎段接种到改良DKW+IBA0.1 mg/L+GA3lmg/L的培养基中进行腋芽的诱导，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，培养温度24±1°C，自然光照射； (3)取步骤(2)诱导出来的芽接入改良DKW+2, 4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl25-10mol/L+整形素0.5-lmg/L培养基中进行丛生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，琼脂7g/L，PH5.8，光照 25001x，光期 14h/d，温度 24±1°C ； (4)将步骤(3)培养出来的丛生芽接入2/3MS+丁酰肼0.5-1.5mg/L培养基中进行生根诱导，附加葡萄糖35g/L，琼脂5g/L，ρΗ5.9 ； (5)将步骤(4)培养出来的丛生芽分株进行炼苗移栽。
2.按照权利要求1所述的一种通脱木组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述通脱木无菌茎段的获得为取通脱木新抽嫩枝上的茎段，切取长度4cm，附带1-2腋芽，流水冲洗45min，在超净工作台上，切成2cm的小段，70%酒精处理20s，1%高锰酸钾处理16min,无菌水冲洗干净。
3.按照权利要求1所述的一种通脱木组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)腋芽的诱导培养基中添加0.04%的DTT，且采用过滤灭菌，对防止褐化具有明显的效果。
4.按照权利要求1所述的一种通脱木组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(4)中生根诱导的条件为先将培养出来的丛生芽进行暗处理3天，温度3°C，3天后光照20001x，温度 26±1°C。
5.按照权利要求1所述的一种通脱木组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(5)通脱木炼苗移栽的方法为:生根60d的无菌苗，平均根长2cm左右，打开瓶苗的封口膜，将其在日光温室内炼苗7d，之后用镊子取出幼苗，再用蒸馏水洗净根上所带的培养基，然后用0.1%高锰酸钾浸泡5min，移栽入珍珠岩:水苔=2:1的基质中，移栽后应置于阴凉通风处，保持环境温度28°C，防阳光直射，保持湿度85%，移栽大约I周后，新叶开始生长，新根开始伸长，施加少量氮肥，30天后调查幼苗的成活率。
【文档编号】A01H4/00GK104247664SQ201410550344
【公开日】2014年12月31日 申请日期:2014年10月17日 优先权日:2014年10月17日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司