一种歪头菜植株再生的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种歪头菜植株再生的快速繁殖方法，包括无菌苗的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，生根诱导等步骤。本研究利用培养出来的无菌苗作为外植体材料，诱导出愈伤组织并实现了植株再生，为实现歪头菜的转基因育种提供了技术平台。
【专利说明】一种歪头菜植株再生的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]歪头菜，Kicia豆科,别名三铃子，多年生草本,莖直立,偶数羽状复叶，具有小叶2枚，总状花序预生或腋生，蝶形花，蓝紫色或紫红色，花期6-7月份，荚果扁平，果期8-9月份。分布于我国东北、华北、西北、华东、华中、西南，生于草地、山沟、岸边、林缘或向阳的灌丛中，喜光，稍耐阴、耐瘠薄，喜冷凉气候。可以做饲料、药用及观赏，全草入药，能解热，利尿，理气，止痛，主治头晕，浮肿，胃痛；外用治疗等，采用种子进行繁殖。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供歪头菜植株再生的快速繁殖方法，本研究利用培养出来的无菌苗作为外植体材料，诱导出愈伤组织并实现了植株再生，为实现歪头菜的转基因育种提供了技术平台。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取歪头菜种子在清水中浸泡8h后，在75%酒精中浸泡lmin，无菌水冲洗3次，0.1%的升汞溶液浸泡lOmin，无菌水冲洗5次，播种于装有MS培养基的150ml三角瓶，每瓶播种2 O粒，2 5 °C暗培养萌发，14 h / d光照培养，培养出来的无菌苗的子叶切割，接入培养基为SN6+IBA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照强度12001x，光照时间12h/d，温度25±2°C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基 SN6+KT0.2-0.3mg/L+2, 4-D0.1-0.2mg/L+CM10%,附加蔗糖 30g/L,琼脂 6.5g/L，pH5.8，光照23001x，光照时间12h/d，温度25±2°C，分化培养出来的歪头菜芽苗放入培养基MS+CCC1.5-2.0mg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照23001x,光照时间12h/d,温度25±2°C,揭开瓶盖,注入薄层无菌水，隔两天补一次水，一周后将成功炼苗的试管苗取出，洗净根上残余培养基，移栽至育苗盘，向育苗盘中喷施多菌灵消毒，每天早晚喷施水雾，栽培温度为25±2°C,利用自然散射光。
[0005]采用本发明制备的歪头菜成活率高，培养周期短，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取歪头菜种子在清水中浸泡8h后，在75%酒精中浸泡lmin，无菌水冲洗3次，0.1%的升汞溶液浸泡lOmin，无菌水冲洗5次，播种于装有MS培养基的150ml三角瓶，每瓶播种20粒，25°C暗培养萌发，14h/d光照培养，培养出来的无菌苗的子叶切割，接入培养基为SN6+IBA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L 进行愈伤组织诱导，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，pH5.8，光照强度12001x，光照时间12h/d，温度25±2°C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基SN6+KT0.2mg/L+2, 4-D0.lmg/L+CM10%,附加蔗糖 30g/L,琼脂 6.5g/L, ρΗ5.8，光照 23001χ,光照时间12h/d，温度25±2°C，分化培养出来的歪头菜芽苗放入培养基MS+CCC1.5mg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照23001x，光照时间12h/d，温度25±2°C，揭开瓶盖，注入薄层无菌水，隔两天补一次水，一周后将成功炼苗的试管苗取出，洗净根上残余培养基，移栽至育苗盘，向育苗盘中喷施多菌灵消毒，每天早晚喷施水雾，栽培温度为25±2°C，利用自然散射光，成活率90%。
[0008]实施例2
取歪头菜种子在清水中浸泡8h后，在75%酒精中浸泡lmin，无菌水冲洗3次，0.1%的升汞溶液浸泡lOmin，无菌水冲洗5次，播种于装有MS培养基的150ml三角瓶，每瓶播种20粒，25°C暗培养萌发，14h/d光照培养，培养出来的无菌苗的子叶切割，接入培养基为SN6+IBA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L 进行愈伤组织诱导，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，pH5.8，光照强度12001x，光照时间12h/d，温度25±2°C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基SN6+KT0.3mg/L+2, 4-D0.2mg/L+CM10%,附加蔗糖 30g/L,琼脂 6.5g/L, ρΗ5.8，光照 23001χ,光照时间12h/d，温度25±2°C，分化培养出来的歪头菜芽苗放入培养基MS+CCC2.0mg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照23001x，光照时间12h/d，温度25±2°C，揭开瓶盖，注入薄层无菌水，隔两天补一次水，一周后将成功炼苗的试管苗取出，洗净根上残余培养基，移栽至育苗盘，向育苗盘中喷施多菌灵消毒，每天早晚喷施水雾，栽培温度为25±2°C，利用自然散射光，成活率91%。
[0009]实施例3
取歪头菜种子在清水中浸泡8h后，在75%酒精中浸泡lmin，无菌水冲洗3次，0.1%的升汞溶液浸泡lOmin，无菌水冲洗5次，播种于装有MS培养基的150ml三角瓶，每瓶播种20粒，25°C暗培养萌发，14h/d光照培养，培养出来的无菌苗的子叶切割，接入培养基为SN6+IBA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L 进行愈伤组织诱导，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，pH5.8，光照强度12001x，光照时间12h/d，温度25±2°C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基SN6+KT0.3mg/L+2, 4-D0.lmg/L+CM10%,附加蔗糖 30g/L,琼脂 6.5g/L, ρΗ5.8，光照 23001χ,光照时间12h/d，温度25±2°C，分化培养出来的歪头菜芽苗放入培养基MS+CCC2.0mg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照23001x，光照时间12h/d，温度25±2°C，揭开瓶盖，注入薄层无菌水，隔两天补一次水，一周后将成功炼苗的试管苗取出，洗净根上残余培养基，移栽至育苗盘，向育苗盘中喷施多菌灵消毒，每天早晚喷施水雾，栽培温度为25±2°C，利用自然散射光，成活率92%。
【权利要求】
1.本发明研究了一种歪头菜植株再生的快速繁殖方法，包括无菌苗的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，生根诱导等，其主要步骤如下: (1)取歪头菜的种子经过消毒处理培养出无菌苗； (2)将步骤(1)培养出来的无菌苗的子叶切割，接入培养基为SN6+IBA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照强度12001x，光照时间12h/d，温度25±2°C ； (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织放入分化培养基SN6+KT0.2-0.3mg/L+2, 4-D0.1-0.2mg/L+CM10%,附加蔗糖 30g/L,琼脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 23001χ,光照时间12h/d，温度 25±2°C ； (4)取步骤(3)分化培养出来的歪头菜芽苗放入培养基MS+CCC1.5-2.0mg/L培养基中进行壮苗培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照23001x，光照时间12h/d，温度25±2°C ； (5)取步骤(4)壮苗后的歪头菜试管苗进行生根诱导。
2.按照权利要求1所述的一种歪头菜植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(1)中所述歪头菜无菌苗的获得为，取歪头菜种子在清水中浸泡8h后，在75%酒精中浸泡lmin,无菌水冲洗3次，0.1%的升汞溶液浸泡lOmin，无菌水冲洗5次，播种于装有MS培养基的150ml三角瓶，每瓶播种20粒，25°C暗培养萌发，14h/d光照培养。
3.按照权利要求1所述的一种歪头菜植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(4)歪头菜生根诱导的方法为揭开瓶盖，注入薄层无菌水，隔两天补一次水，一周后将成功炼苗的试管苗取出，洗净根上残余培养基，移栽至育苗盘，向育苗盘中喷施多菌灵消毒，每天早晚喷施水雾，栽培温度为25±2°C，利用自然散射光。
【文档编号】A01H4/00GK104255526SQ201410550320
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月17日 优先权日:2014年10月17日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司