本发明涉及食用菌栽培领域，涉及一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法。
背景技术：
：蛹虫草又称北虫草，研究表明，蛹虫草有效化学成分的种类及含量与冬虫夏草相同或相似，对人体也具有相同或相似的功能，它们均含有虫草酸、虫草素、虫草多糖、SO天酶和麦角甾醇等生物活性物质，具有提高免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、抗辐射、降血糖、降血脂和延缓衰老等作用。2009年，中华人民共和国卫生部公告第3号，批准蛹虫草为新资源食品，食用量≤2克/天。2013年，中华人民共和国卫生部公告第1号，现批准茶树花、盐地碱蓬籽油、美藤果油、盐肤木果油、广东虫草子实体、阿萨伊果和茶藨子叶状层菌发酵菌丝体为新资源食品。生产工艺简述为广东虫草菌种经接种、培养，采收子实体后烘干制成，食用量≤3克/天。同时蛹虫草已经被社会公认，其推广前景巨大。蚕蛹做为蛹虫草寄住，要求蚕蛹饱满新鲜，如蚕化蛹后时间长了，外壳变软、体内营养物被消耗，染菌率高。蚕蛹饱满好注射菌量受限制高，菌种注射量小，发菌时间长，染菌几率高，成功率下降。5龄蚕做为蛹虫草寄住，蚕饱满度好，菌种注射量受限制，5龄蚕活动量很大，菌种在注射后又流出来一部分。公开号CN102440149的中国专利文献采用冰块或在4～6℃环境中低温麻醉20～30min，降低5龄蚕活动量，但此方法增加工序，转移环境，增加污染概率，费时费力费能源。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法，用以解决现有用蚕蛹或蚕培育蛹虫草效率不高的问题。为实现上述目的，本发明公开了以下技术方案：本发明公开的一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法，所述方法包括：蛹虫草菌种的制备：将蛹虫草斜面母钟接种于斜面培养基上，活化菌种，待菌丝体见光转黄后刮取斜面培养基上的菌丝体，接种到液体培养基中；菌种扩培：将上述得到的液体蛹虫草菌种继续避光培养，首先静止培养48h，以后以140r/min每天摇2次，每次摇5min，继续培养4-5天；接种：在扩培后得到的液体菌种添加磷酸氢二钾和硫酸镁，使菌液中的磷酸氢二钾和硫酸镁的浓度变为原来的1.5-2倍，再以140r/min摇10分钟，在无菌室将摇匀后的菌液注入经消毒并沥干后的寄主蚕体内，从蚕中后部气孔进针，边退针边注射，一直到注射饱满为止；暗培养管理：将接种后培养的蚕避光培养，11～13天蚕彻底僵化，16～20天2/3的蚕体布满白色菌丝，发菌完成；光培养管理：将经暗培养发菌完成的蚕置于培养蛹虫草的容器中在光照的条件下培养20～25天。本发明公开的上述一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法中，所述接种中寄主选择做完茧且没蜕皮变蛹的变态前期的蚕。本发明公开的上述一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法中，所述蚕为柞蚕或桑蚕。本发明公开的上述一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法中，所述蛹虫草菌种的制备中的液体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、葡萄糖1％-2％、蔗糖0.5％-1％、蛋白胨0.5％、磷酸二氢钾0.15-0.3％、硫酸镁0.1-0.15％和维生素B10.001-0.01％，其余为蒸馏水。本发明公开的上述一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法中，所述接种中在扩培后得到的液体菌种添加磷酸氢二钾和硫酸镁，使菌液中所述磷酸氢二钾和硫酸镁的质量百分比分别变为0.25-0.6％和0.15-0.3％。本发明公开的上述一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法中，所述菌种扩培中避光培养的培养温度21～23℃。本发明公开的上述一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法中，所述暗培养管理中的培养温度为15～17℃，培养湿度为45％～55％。本发明公开的上述一种利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法中，所述光培养管理中的光照强度为200～400Lx，培养温度为20～23℃，培养湿度为85％～95％。本发明具有如下优点：该方法是以活体变态前期的蚕为寄主，采用注射的方法接种蛹虫草菌，因为变态前期的蚕躯体大，体液少，不爱动等特点，所以接种成活率大大提高。本发明在接种前将菌种培养基中无机盐浓度增加一倍再注射，为菌在蚕蛹内生长提供更适合的无机盐环境，将发菌时间缩短26.7％，生长时间缩短15.6％。采用本发明的方法后，变态前期的蚕的僵化率达到94％～100％，子实体长出率达到90％～100％；本发明的蛹虫草培育方法具有操作方便、培育成本低以及实验重现性好等优点，适用于大规模栽培，具有广阔的应用前景。具体实施方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例1用同样的菌种，同样的方法分别选择50只桑蚕和50只桑蚕蛹做寄主，具体的利用变态前期的蚕培育蛹虫草的方法步骤如下：(1)寄主的选择：选择做完茧且没蜕皮变蛹的桑蚕为寄主，选刚蜕变化蛹的桑蚕蛹为寄主；(2)蛹虫草菌种的制备：蛹虫草菌种的制备：将蛹虫草斜面母种接种于斜面培养基上，活化菌种，待菌丝体见光转黄后，刮取斜面培养基上的菌丝体，接种到液体培养基中，所述蛹虫草菌种的制备中的液体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆20％、葡萄糖2％、蔗糖0.5％、蛋白胨0.5％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.1％和维生素B10.01％，其余为蒸馏水；(3)菌种扩培：将步骤(2)得到的液体菌种继续避光培养，培养温度21～23℃，静止培养48h，以后以140r/min每天摇2次，每次5min，继续培养4-5天；(4)接种：将步骤(3)得到的液体菌种添加磷酸氢二钾和硫酸镁，使其浓度变为磷酸氢二钾0.3％，硫酸镁0.15％，以140r/min摇10min，选变态前的茧，剪开茧取出桑蚕，消毒、沥干，在无菌室将摇匀后的菌液注入经消毒并沥干后的寄主蚕体内；注射方法：从桑蚕中后部气孔进针，边退针边注射，一直到注射饱满为止；(5)暗培养管理：将经步骤(4)培养的桑蚕和桑蚕蛹避光培养，培养温度为15～17℃，培养湿度为45％～55％，及时检查，挑出被杂菌感染的蚕，11～13天蚕彻底僵化，16～20天2/3的蚕体布满白色菌丝，发菌完成；(6)光培养管理：将经步骤(5)培养发菌完成的桑蚕和桑蚕蛹置于培养蛹虫草的容器在光照的条件下培养，光照强度为200～400Lx，培养温度为20～23℃，培养湿度为85％～95％，培养时间为20～25天。表1桑蚕蛹和桑蚕发菌结束时间对比表天数15161718192021桑蚕蛹发菌结束个数002514192桑蚕发菌结束个数05359000上述表1中发菌结束以蚕体三分之二出现白毛为准，从表1可以看出桑蚕蛹的发菌时间明显长于桑蚕的发菌时间。表2桑蚕蛹和桑蚕采收结束时间对比表天数1920212223242526桑蚕蛹采收结束个数0001414136桑蚕采收结束个数0821171000上述表2中采收结束以子实体长孢子为准，从表2可以看出桑蚕蛹的采收时间明显长于桑蚕的采收时间。表3桑蚕蛹和桑蚕培育蛹虫草结果分析对比表项目发菌时间(天)僵化率(％)采收时间(天)出草率(％)桑蚕蛹19.38424.590桑蚕17.19821.296上述表3中，采收时间从光培养管理之后计，僵化率为僵化个数与总数的比值；出草率为出草的个数与总数的比值。从表3可以看出从发菌时间、采收时间上可以得出桑蚕蛹明显长于桑蚕，但僵化率和出草率桑蚕明显高于桑蚕蛹，桑蚕的发菌时间节省14.9％，采收时间减少15.6％，所以桑蚕比桑蚕蛹适合做寄主。实施例2用同样的菌种，同样的方法分别选择50只柞蚕和50只柞蚕蛹做寄主，具体的利用变态前期的柞蚕培育蛹虫草的方法步骤如下：(1)寄主的选择：选择做完茧且没蜕皮变蛹的柞蚕为寄主，选刚蜕变化蛹的柞蚕蛹为寄主；(2)蛹虫草菌种的制备：蛹虫草菌种的制备：将蛹虫草斜面母种接种于斜面培养基上，活化菌种，待菌丝体见光转黄后，刮取斜面培养基上的菌丝体，接种到液体培养基中，所述蛹虫草菌种的制备中的液体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆19％、葡萄糖1％、蔗糖1％、蛋白胨0.5％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.12％和维生素B10.005％，其余为蒸馏水。(3)菌种扩培：将步骤(2)得到的液体菌种继续避光培养，培养温度21～23℃，静止培养48h，以后以140r/min每天摇2次，每次5min，继续培养4-5天；(4)接种：将步骤(3)得到的液体菌种添加磷酸氢二钾和硫酸镁，使其浓度变为磷酸氢二钾0.4％，硫酸镁0.24％，以140r/min摇10min，选变态前的茧，剪开茧取出柞蚕，消毒、沥干，在无菌室将摇匀后的菌液注入经消毒并沥干后的寄主蚕体内；注射方法：从柞蚕中后部气孔进针，边退针边注射，一直到注射饱满为止；(5)暗培养管理：将经步骤(4)培养的桑蚕和桑蚕蛹避光培养，培养温度为15～17℃，培养湿度为45％～55％，及时检查，挑出被杂菌感染的蚕，11～13天蚕彻底僵化，16～20天2/3的蚕体布满白色菌丝，发菌完成；(6)光培养管理：将经步骤(5)培养发菌完成的柞蚕和柞蚕蛹置于培养蛹虫草的容器在光照的条件下培养，光照强度为200～400Lx，培养温度为20～23℃，培养湿度为85％～95％，培养时间为20～25天。表4柞蚕蛹和柞蚕发菌结束时间对比表天数16171819202122柞蚕蛹发菌结束个数619154柞蚕发菌结束个数334101上述表4中发菌结束以蚕体三分之二出现白毛为准，从表4可以看出柞蚕蛹的发菌时间明显长于柞蚕的发菌时间。表5柞蚕蛹和柞蚕采收结束时间对比表天数1920212223242526柞蚕蛹采收结束个数2313184柞蚕采收结束个数318188上述表5中采收结束以子实体长孢子为准，从表5可以看出柞蚕蛹的采收时间明显长于柞蚕的采收时间。表6柞蚕蛹和柞蚕培育蛹虫草结果分析对比表项目发菌时间(天)僵化率(％)采收时间(天)出草率(％)柞蚕蛹20.48824.590柞蚕17.29621.798上述表6中，采收时间从光培养管理之后计，僵化率为僵化个数与总数的比值；出草率为出草的个数与总数的比值。从表6可以看出从发菌时间、采收时间上可以得出柞蚕蛹明显长于柞蚕，但僵化率和出草率柞蚕明显高于柞蚕蛹，柞蚕的发菌时间节省18％，采收时间减少12.9％，所以柞蚕比柞蚕蛹适合做寄主。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页1 2 3