一种快速降低红三叶中异黄酮含量的方法与流程

本发明属于牧草生产与加工领域，具体涉及一种快速降低红三叶中异黄酮含量的方法。

背景技术：

红三叶是一种重要的豆科牧草，在全世界均有大面积种植。而且，红三叶中富含异黄酮成分，具有多种药用价值。然而作为牧草饲料，是牛、羊等反刍动物的主要食粮，也常常被用来饲喂猪和家禽等，但过高的异黄酮摄入会引起采食动物的激素水平紊乱，带来一系列的副作用，进而影响到食品安全。在生产实践中，目前尚未见到有效降低其中异黄酮含量方法的报道。

UV-C射线是太阳光谱的一部分，在日常生活中已被广泛利用于杀菌、消毒、灭蚊等方面。本专利利用UV-C可快速降低红三叶中异黄酮含量，工艺简单，生产成本低，对红三叶的产量影响不大，且易于产业化。

技术实现要素：

本发明提供了一种快速降低红三叶中异黄酮含量的方法。红三叶作为豆科主要牧草之一，在全球分布广泛，该方法可直接应用于红三叶牧草生产，提高其牧草的安全性。该方法工艺简单，环保，易于大规模推广。

快速降低红三叶中异黄酮含量的方法，其关键步骤如下：

将红三叶植株置于UV-C紫外照射装置中，照射功率5-150W，照射时间10-180分钟，采用间隔照射方式。其中的间隔时间建议为0-120小时。

UV-C紫外波长范围200-270nm，其中最常用的是254nm。

异黄酮含量测定的方法：

收集红三叶地上部分，自然风干，粉碎，将其置于乙醇水溶液中超声提取。取上清液，通过0.45微米有机膜过滤，制备待测液。待测液用HPLC检测。

优选的，所述乙醇水溶液，加入量是干粉体积的5-150倍，乙醇水溶液浓度为20-100wt％；超声提取时间为10-90分钟。

HPLC检测方法为：

流动相A为0.2％醋酸水，流动相B为色谱纯甲醇。

色谱条件如下：0-5min 40％B；10-20min 70％B；35min 85％B；40min 100％B。

对红三叶中的主要异黄酮成分紫檀苷、山槐素、芒柄花素和鹰嘴豆素等化合物进行分析检测。

本发明的工艺简单，而且所用的材料和配套技术均成熟可靠，成本较低，容易在生产实践中所大规模采用。此外，本方法处理的同时，大大降低牧草产品中病菌的含量，有利于后期贮存加工，并提高饲料的安全性。

附图说明

图1为本发明的结构示意图；

图2为本发明去除防紫外面料层和反光层后的结构示意图；

图3为除防紫外面料层和反光层的局部剖视图，

图中：1、紫外光装置；2、灯架；3、腔体；4、滚轮；5、敞开部；6、防紫外面料层；7、反光层；8、支腿。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

实施例1短期用UV-C处理红三叶植株

1、红三叶植株的处理：已培育8天红三叶幼苗，利用15w的紫外灯(254nm)照射。单次照射时间30min/天，分别处理1、2次，处理之间间隔24小时。照射功率20w。紫外线照射时间：上午9:30-10:00；苗处理时间：18:00。

2、红三叶异黄酮成分的分析检测：取自然风干的红三叶叶片0.1g，粉碎，用2mL乙醇浸泡，超声波提取30分钟。取上清液，通过0.45微米有机膜过滤，制备待测液。待测液用HPLC检测。

HPLC检测方法为：

流动相A为0.2％醋酸水，流动相B为色谱纯甲醇。

色谱条件如下：0-5min 40％B；10-20min 70％B；35min 85％B；40min 100％B。

通过对四种主要的异黄酮成分进行定量分析，比较处理1天和两天的变化情况。其中变化幅度(％)＝(对照组-处理组)/对照组*100。

通过测定，红三叶的株高和地上生物量没有明显变化。

照射1次后，除了了山槐素有少量的增加以外，其它异黄酮成分均有明显降低，而且其中以鹰嘴豆素降幅为最大。在红三叶异黄酮成分中芒柄花素和鹰嘴豆素含量较高，因此整体呈现出明显的降幅。照射2次后，所有的异黄酮成分均有显著降低，仍是鹰嘴豆素对UV-C响应最为敏感，其含量降幅接近50％。

表1利用UV-C处理后红三叶异黄酮成分含量变化情况

实施例2较长时间UV-C处理红三叶植株

1、红三叶植株的处理：已培育8天红三叶幼苗，利用15w的紫外灯(254nm)照射。每天照射时间15min/天，连续处理21天，处理之间间隔24小时。照射功率15w。紫外线照射时间：上午9:30-10:00；苗处理时间：18:00。

2、红三叶异黄酮成分的分析检测方法同实施例1。

表2利用UV-C处理21天后红三叶异黄酮成分含量变化情况

表2利用UV-C处理21天后红三叶生物量变化情况

利用UV-C长时间照射红三叶，虽然异黄酮含量有大幅度的下降，但是地上生物量有非常明显的损失，加之时间延长带来的能量消耗和成本的增加，因此本专利建议最佳照射时间为1-3天，每次照射时间为10-30分钟。

实施例3

处理红三叶幼苗时，使用如图1-3所示的一种用于快速降低红三叶异黄酮的装置，包括发出紫外光线的紫外光装置1和用于支撑所述紫外光装置1的灯架2，所述灯架2内还设置有与所述紫外光装置1相对应腔体3，所述腔体3至少具有一与灯架2外围空间连通敞开部5，所述紫外光装置1启动时，所述紫外光的光线穿过所述腔体3射向所述敞开部5，所述敞开部5的尺寸保证红三叶植物能够顺利穿过。

在实际种植过程中，发明人发现，采用紫外光线照射红三叶，红三叶中异黄酮的含量显著的降低，所以，在本申请中，通过设置灯架2，并在灯架2上设置紫外光装置1，紫外光装置1发出的紫外光线照射在腔体3内，在使用时，红三叶通过敞开部5、或者置于腔体3时，使红三叶受到紫外光线的照射，如此，实现红三叶中异黄酮含量的降低，采用本申请的装置，不仅能够显著并快速的降低红三叶中异黄酮的含量，而且，还不会在红三叶上残留化学药物，不仅有利环保，也能够提高红三叶作为饲料和牧草的品质。

作为其中一种实施方式，所述敞开部5位于所述腔体3的下侧。将敞开部5设置在下侧，在种植场或者收集场中，红三叶为铺开状态，可以拖动本申请的装置即可，在拖动本申请的装置过程中，红三叶逐步经过腔体3被紫外光线照射，进而使得紫外光线能够快速的照射红三叶，如此，提高照射效率。

所述灯架2外围包覆有防紫外面料层6。通过设置防紫外面料层6，能够有效的防止紫外光溢出。

作为其中一种实施方式，所述防紫外面料层6为尼龙防紫外面料层6或涤纶防紫外面料层6。尼龙防紫外面料层6或涤纶防紫外面料层6重量轻，并且质地柔软，方便装置的制造和使用。

作为其中一种实施方式，所述防紫外面料层6与所述灯架2之间还设置有反光层7，所述反光层7将照射在其上的紫外光束朝敞开部5反射。如此，提高紫外光线的利用率，进一步提高了红三叶被照射的效率。

作为其中一种实施方式，所述灯架2底部还设置有至少三个用于支撑起灯架2的支腿8，所述支腿8的高度与红三叶植物的高度相对应。保证本装置拖动时，红三叶植物能够顺利经过敞开部5被紫外光线照射。

作为其中一种实施方式，每一个所述支腿8的底部都设置有滚轮4。方便本装置的拖动，也进一步的提高了照射效率。

作为其中一种实施方式，至少有一个所述滚轮4为万向轮。方便本装置拖动过程中，方向的控制。

作为其中一种实施方式，所述紫外光装置1为若干并排设置的紫外光管。

作为其中一种实施方式，所述紫外光管的功率为2瓦-100瓦。

作为其中一种实施方式，所述紫外光装置1与所述灯架2之间为可拆卸的连接。通过可拆卸的设置多根紫外光管，能够有效保证紫外光照射强度，提高照射效率。

本发明工艺简单，所利用的配套技术均成熟可靠，开发成本低，易于实现，而且效果明显，对环境友好，具有良好的开发应用前景。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。