一种利用秋冬休眠芽为外植体进行玫瑰组培快繁的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种利用秋冬季休眠芽为外植体进行玫瑰组培快繁的方法，属于观赏 植物种苗无性繁殖技术领域。
【背景技术】
[0002] 玫瑰（Rosa rugosa Thunb.)是蔷薇科蔷薇属落叶灌木，品种繁多，花色丰富，香 气浓郁，不仅是园林绿化的优良植物材料，而且是世界上最古老的天然香料植物之一，是香 水、化妆品等化工产品的香料来源和食品、饮品工业的重要添加原料，还是珍贵的中药材， 是集观赏、绿化、药用、美容、美食于一身的名贵花木。由其鲜花提取的玫瑰精油为世界名 贵精油，价格极其昂贵，被誉为"液体黄金"，主要用于高档香水、化妆品和保健行业中，具有 缓解精神压力、调节人体内分泌、延缓衰老、美容养颜等功效。正因为其在药用、食用、日用 化工等领域的广泛用途，国际国内市场对玫瑰种苗的需求日益增加，市场需求量大，前景广 阔。
[0003] 传统的玫瑰繁殖方法繁殖周期长，幼苗成活率低，难以实现工厂化快速生产，为满 足市场需求，建立一套玫瑰快速繁殖体系方法成为当下热点。利用玫瑰组织培养技术可实 现玫瑰的快速繁殖，综合已有研宄报道，多选取叶片及嫩茎腋芽为外植体，取材时间集中于 春夏植株生长季节，未见直接选取秋冬季休眠芽组织进行玫瑰快繁的相关内容。因此，研宄 建立一种以休眠芽为外植体的玫瑰微体快繁技术可以打破玫瑰秋冬季繁殖限制，提高玫瑰 繁殖效率。
[0004] 经文献检索，目前还没有任何关于利用玫瑰休眠芽进行组培快繁方面公开发表的 内容。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于打破玫瑰秋冬季繁殖限制，发明一种利用玫瑰秋冬季休眠芽进 行微体快繁的方法。
[0006] 本发明是通过以下技术方案实现的：一种利用秋冬季休眠芽为外植体进行玫瑰组 培快繁的方法，其特征在于包含以下步骤：
[0007]A外植体的消毒处理：于冬季晴朗天气剪取一年生生长健壮、无病虫害的枝条，用 软毛刷轻刷干净，剪成长约4cm，包含3-4个休眠腋芽的小段，用干净纱布包裹后流水冲洗 3h，移入无菌工作台进行消毒处理；
[0008] 先用75%酒精浸泡并匀速搅动60s，无菌水冲洗3-5遍，再用3% NaCIO浸泡并匀 速搅动lOmin，无菌水冲洗3-5遍，取出后用无菌滤纸吸干表面水分，用手术刀将其切成长 约lcm的单腋芽茎段备用；
[0009] B 初代培养：初代培养基配方为 MS+lmg/LBA+0. 05-0. lmg/LNAA+30g/L 蔗糖 +7g/ L琼脂，pH值为5. 8 ;培养条件为光照强度2000-3000Lx，光照时长14h/d，温度25±2°C ;将 消毒后的单腋芽茎段用手术刀剥去腋芽鳞片（注意避免伤及腋芽）后横向接入初代培养基 上，暗培养1周，20d后休眠芽萌发，30d后切取萌发且长势良好的休眠芽接入增殖培养基上 继续培养；
[0010] C 增殖培养：增殖培养基配方为 MS+l-2mg/LBA+0. 05mg/LNAA+0. 6mg/L GA3+30g/ L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5. 8 ;培养条件为光照强度2000-3000LX，光照时长14h/d，温度 25±2°C ;由初代培养基转接到增殖培养基上的休眠芽30d后可分化出大量丛生芽；
[0011] D 生根培养：生根培养基配方为1/2MS+0. 2-0. 5mg/LIBA+0. 2-0. 5mg/LNAA+l-l. 5g 活性炭+3〇g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5. 8;切取丛生芽中生长健壮、茎高l-2cm的不定芽 单芽，接入生根培养基；培养条件为光照强度2000-3000LX，光照时长14h/d，温度25±2°C; 培养2-3周后开始萌发不定根。
[0012] 所述步骤⑷中玫瑰秋冬季休眠芽的消毒方法为：75%酒精60s+3% NaCIO 10min〇
[0013] 所述步骤⑶中玫瑰秋冬季休眠芽初代培养基配方为MS+lmg/LBA+0. 05mg/ LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5. 8 ;
[0014] 所述步骤（B)中玫瑰秋冬季休眠芽剥去腋芽鳞片（注意避免伤及腋芽）后接种于 初代培养基上。
[0015] 所述步骤（C)中玫瑰秋冬季休眠芽增殖培养基配方为MS+2mg/LBA+0. 05mg/ LNAA+0.6mg/LGA3+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.8 ;所述步骤（D)中玫瑰秋冬季休眠芽 生根培养基配方为1/2MS+0. 2mg/LIBA+0. 2mg/LNAA+lg活性炭+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH 值为5. 8。
[0016] 本发明成功通过选取玫瑰秋冬季休眠芽为外植体，结合消毒方式，初代培养，增殖 培养，生根培养等一系列组织培养技术，实现利用秋冬季休眠芽快速繁殖玫瑰。
[0017] 本发明的优点在于：污染率低，繁殖系数高，培育周期短，打破秋冬季繁殖限制，很 好的解决了玫瑰传统繁殖方法效率低、周期长的问题，可应用于实际生产。
【具体实施方式】
[0018] 本发明方法选用玫瑰秋冬季休眠芽，通过对消毒方式、初代培养、增殖培养、生根 培养等四个主要步骤的调控，实现玫瑰秋冬季休眠芽组织的快速繁殖。具体包含以下步 骤：
[0019] A外植体的消毒处理：于冬季晴朗天气剪取一年生生长健壮、无病虫害的枝条，用 软毛刷轻刷干净，剪成长约4cm，包含3-4个休眠腋芽的小段，用干净纱布包裹后流水冲洗 3h，移入无菌工作台进行消毒处理；先用75%酒精浸泡并匀速搅动60s，无菌水冲洗3-5遍， 再用3% NaCIO浸泡并匀速搅动lOmin，无菌水冲洗3-5遍，取出后用无菌滤纸吸干表面水 分，用手术刀将其切成长约lcm的单腋芽茎段备用；
[0020] B初代培养：初代培养基配方为MS+lmg/LBA+0. 05mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼 脂，pH值为5. 8 ;培养条件为光照强度2000-3000LX，光照时长14h/d，温度25±2°C;将消毒 后的单腋芽茎段用手术刀剥去腋芽鳞片（注意避免伤及腋芽）后横向接入初代培养基上， 暗培养1周，20d后休眠芽萌发，30d后切取萌发且长势良好的休眠芽接入增殖培养基上继 续培养；
[0021] C 增殖培养：增殖培养基配方为 MS+2mg/LBA+0. 05mg/LNAA+0. 6mg/LGA3+30g/L 蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5. 8 ;培养条件为光照强度2000-3000LX，光照时长14h/d，温度 25±2°C ;由初代培养基转接到增殖培养基上的休眠芽30d后可分化出大量丛生芽；
[0022] D生根培养：生根培养基配方为1/2MS+0. 2mg/LIBA+0. 2mg/LNAA+lg活性炭++30g/ L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.8 ;切取丛生芽中生长健壮、茎高l-2cm的不定芽单芽，接入生 根培养基；培养条件为光照强度2000-3000LX，光照时长14h/d，温度25±2°C ;培养2-3周 后开始萌发不定根。
[0023] 本发明用以下实例中涉及的外植体处理与消毒、初代培养、增殖培养、生根培养技 术的研宄对本发明的技术方案进行充分说明，以证明本研宄成果的真实性、正确性与可操 作性。
[0024] a.外植体最佳消毒处理方式的研宄
[0025] 试材选用玫瑰品种"紫枝玫瑰"，将取回的外植体用上述A中方法预处理后，于无 菌工作台上用3种消毒方式对单休眠芽茎段进行消毒处理，剥去鳞片后接种于初代培养基