一种山杏组织培养基、其制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养领域，特别涉及一种山杏组织培养基、其制备方法及应用。
【背景技术】
[0002]山杏(Armeniaca sibirica(L.)Lam)为蔷薇科杏属植物，是集生态效益、社会效益和经济效益于一体的木本粮油经济树种。山杏产区将其列为经济发展的重点经济林树种，是经济发展、农民增收的重要保证。但山杏产业的发展却受到品种及栽培管理欠缺的阻碍。
[0003]河北省平泉县正在筹划山杏种植体系的改革，引进优良品种是必要条件，但购买新品种苗木成本高，且没有在承德当地进行引种试验，存在一定风险；嫁接技术虽然可以实现品种的改变，但由于嫁接亲和力、砧木对嫁接苗的影响等因素，嫁接后的山杏苗木是否能够与原有母本性状保持一致，还未有更深入的研究，而且将现有的野生山杏全部嫁接成新品种也是不现实的。因此，需要根据产区当地的栽培环境选择性状优良的苗木进行大规模的繁育以用于生产。
[0004]在三北地区，山杏栽培生产常会遇早春寒流的侵袭，导致大幅度减产，选择抗寒、高产、晚开花的品种符合本地区的栽培环境。各山杏主产区野生山杏类型丰富，其中有抗寒、高产、晚开花、抗逆性强的品种，如果将其栽培利用，将会大大推动山杏产业的发展，但这些野生资源数量少，且分布不均，如何在短时间内获得大量与上述母株优良性状一致的优良苗木是摆在山杏产业发展要面前的首道难题。植物无性系繁殖技术为此提供了一条更为可靠的途径。利用植物无性系繁殖技术可以在短时间内获得大量与母本植株性状一致的苗木，且成本低廉，不受季节限制，是现代化工厂育苗的主要手段。
[0005]如果在组培条件下，以农艺性状优良的山杏单株为材料，建立其高效克隆繁殖体系，从而实现其工厂化育苗，则可一年四季进行，能大大提高山杏育种、育苗的效率，缩短工作进程。
[0006]CN 103392597 A公开了一种北美海棠的组织培养方法，包括初代培养、继代培养、生根培养和炼苗移栽，以北美海棠当年生嫩枝条为外植体，经过无菌接种于初代培养基上培养一段时间后，将初代培养基上的北美海棠小苗切割后接种在继代培养基上进行继代培养，当丛生苗长到2-3cm时转接到生根培养基上进行生根诱导形成生根苗，生根苗经过炼苗驯化得到再生植株。所述组织培养的方法已经有较成功的经验，但是山杏较难生根，此方法对山杏却不太适用。
[0007]刘小蕾等发表在植物生理学通讯第44卷第3期的“西伯利亚杏的组织培养”中介绍了杏的组织再生培养，但是其采用的是愈伤组织再生苗，马锋旺的报道“山杏原生质体培养再生植株”采用的是原生质体再生苗，并非通过母体采集样品、经过初代培养和继代培养而来，这些离体苗本身是否发生了基因上的变异没有定论，并不符合建立工厂化育苗体系的目的。
【发明内容】
[0008]本发明利用组织培养技术，提供一种山杏组织培养基、其制备方法及应用，通过本方法将初代培养而来的山杏组织培养的生根率提高到了 95%以上。
[0009]为达上述目的，本发明采用如下技术方案:
[0010]第一方面，本发明提供了一种山杏组织培养的生根培养基，所述生根培养基包括1/2MS培养基、4-8g/L的琼脂、25-50g/L的蔗糖、植物生长调节剂IBA2_4mg/L和15杏仁壳木醋液。
[0011]本发明中，所述山杏壳木醋液有助于山杏生根，提高生根率，配合植物生长调节剂，使得山杏生根率可以达到95%以上，平均根长1.68-1.98cm，平均根数4.2-5.78条。
[0012]使用1/2MS培养基，添加4-8g/L的琼脂，30g/L蔗糖，25_50g/L的蔗糖、植物生长调节剂IBA 2.0-4.0mg/L，pH值调至5.8，在121°C下灭菌17min后，加入稀释1500-2500倍的、灭菌后的山杏仁壳木醋液，待其凝固后备用；将经过初代培养、继代培养2-3代后的山杏组织培养苗接种至制备好的生根培养基中，观察山杏组培苗生根情况。7天后即可观察到有根长出，随时观察山杏组培苗的生根情况。
[0013]所述琼脂可以为4g/L、5g/L、6g/L、7g/L 或 8g/L。
[0014]所述蔗糖可以为25g/L、26g/L、28g/L、30g/L、32g/L、33g/L、35g/L、36g/L、38g/L、40g/L、42g/L、45g/L、46g/L、48g/L 或 50g/L。
[0015]所述植物生长调节剂IBA 可以为 2mg/L、2.5mg/L、3mg/L、3.5mg/L 或 4mg/L。
[0016]优选地，所述生根培养基由1/2MS培养基、5g/L的琼脂、30g/L的蔗糖、植物生长调节剂IBA 2.0-3.0mg/L和1500-3000倍杏仁壳木醋液组成。优选地，所述生根培养基的pH值为5.5-6，例如可以是5.5,5.6,5.7,5.8,5.9或6，优选为5.8。
[0017]第二方面，本发明提供了一种山杏组织培养的生根培养基的制备方法，包括如下步骤:
[0018](1)配制生根基本培养基，使用1/2MS培养基，添加5.0g/L琼脂，30g/L蔗糖，植物生长调节剂IBA 2.5-3.0mg/L, PH值调至5.8，在121°C下灭菌17min备用；
[0019](2)将山杏壳制成的木醋液稀释1500-3000倍灭菌后加入生根基本培养基中，待其凝固后备用，既得山杏组培苗生根培养基；
[0020](3)将经过初代培养、继代培养2-3代后的山杏组织培养苗接种至(2)制备的生根培养基中。
[0021]第三方面，本发明提供了一种山杏组织培养的方法，包括如下步骤:将山杏外植体进行预处理、初代培养、继代培养和生根培养；
[0022]其中，所述生根培养采用如第一方面所述的生根培养基。
[0023]优选地，所述山杏外植体选自山杏的茎段和/或茎尖。
[0024]所述初代培养的时间为23-35天，例如可以是23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天或35天，优选为26-32天。
[0025]优选地，所述继代培养的代数为2-3代。
[0026]优选地，所述继代培养的时间为15-20天，例如可以是15天、16天、17天、18天、19天或20天。
[0027]本发明中，山杏组织培养的时间短，整个培养过程只需2个月，相比于其他方法缩短了培