ernaria alternata是在世界范围内出现的腐生物，其可在经济上重要的宿主植物中引起植物致病 性反应。如下所述针对运些真菌植物病原体，检测所选择的S.na化1ensiS菌株。
[0041] 将来自所选择的S.natalensis菌株的冻结小瓶（甘油储液）或冻干管转移至含 20ml酵母麦芽提取培养液(YME)的100ml带有挡板的锥形瓶中。将冻干管重新悬浮在生理盐 水中并在转移至培养基之前，在室溫下胆存1小时。将锥形瓶在培养摇床中在28°C、180rpm 下培养3天。
[0042] 对于每种菌株，将20化1液体培养基转移至YME琼脂平板(含20ml培养基的90mm培 养皿)并利用无菌涂布器使其分散在培养基表面。随后，将琼脂平板在28°C下培养4天W增 强平板表面的完全菌落覆盖。
[0043]将所选择的真菌从甘油储液（200μ1)直接涂布至YME琼脂并随后在28°C下培养4 天。
[0044] 如下所述进行生物检测。如上所述制备的过度生长的Str邱tomyces和真菌平板被 用于产生琼脂栓塞(plug)。通过使用无菌穿孔器(直径为11mm)切掉琼脂并随后用预先灭菌 的刮伊（spa化la)除去它来制备栓塞。用在培养皿背面的线标记新鲜产生的未接种的YME琼 脂平板。将运条具有4cm的固定长度的线置于培养皿的中央。随后，将经Str邱tomyces接种 的琼脂栓塞转移至新鲜ΥΜΕ琼脂平板上所述线的左端。对于各种真菌，重复上述"栓塞转移" 步骤。将各种真菌栓塞放置在相同Y^征琼脂平板上所述线的右端。一式Ξ份地，用每种真菌 挑战每种Streptomyces菌株。对于每种被检测的真菌，通过使用被放置在培养皿左侧的未 经接种的琼脂栓塞来取得(一式Ξ份地)对照样品。接下来，将平板放置在培养箱中，其中栓 塞在上。随后，将平板在28°C胆存7天。7天后，在琼脂栓塞(S化eptomyces样品）的相反方向 上测量真菌菌落的半径。对于对照样品，重复该步骤。通过使用下式来计算抑制区百分 比计）：100 % * (ro-ri) /ro，其中r日是来自对照样品的真菌菌落的半径（Wmm计，针对栓塞半 径进行校正)且其中ri是来自Str邱tomyces抑制的样品的真菌菌落的半径（Wmm计，针对栓 塞半径进行校正）
[0045] 结果显示:朝向产生那他霉素的S.natalensis菌株的真菌生长被显著抑制。所有 菌株均胜过无S.na化lensis的对照样品且根据被检测的菌株，平均抑制从53 %到66 %不等 (参见表1)。结果清楚显示：S.natalensis菌株具有抑制不同种类的真菌植物病原体的潜 能。
[0046] 具有内部编码DS73870和DS73871的S.natalensis菌株被选择用于进一步的研究。 根据布达佩斯条约的条款，所述菌株于2014年5月20日被保藏在荷兰真菌培养物保藏中屯、 (CBS)，乌特勒支，荷兰。S.natalensis菌株DS73870已被保藏为菌株CBS137965。 S.na化lensis菌株DS73871已被保藏为菌株CBS137966。
[0047] 实施例2
[004引产生那他霉素的Streptomyces菌株的抗真菌活性
[0049]在体外实验中检测下列产生那他霉素的Streptomyces菌株的抗真菌活性：StreptomycesnatalensisATCC_27448(模式菌株KStr邱tomycesnatalensisDS73871、 StreptomycesnatalensisDS73870和StreptomyceschattanoogensisATCC-19673。
[(K)加]针对所选择的Str邱tomyces菌株，检测5种真菌植物病原体:Fusari皿oxyspor皿f.sp.lycopersici(CBS414.90)、Colletotrichum gloeosporioides(CBS272.51)、 Alternaria alte;rnata(CBS103.33) 'Aspergillus nige;r(ATCC16404)和Botrytis cinerea(CBS156.71) eAspergillus niger(也被称为黑霉菌）是最常见的Aspergillus物种 之一。运种普遍存在的±壤居住者是不同类型作物严重损失的原因，例如:洋葱（黑腐病）、 葡萄（果腐病）和花生(冠腐病）eBotrytis cinerea是灰霉病的引发剂。该疾病在大范围作 物中被记录并具有高的经济影响。对于与r^usarium oxysporum f.sp. lycopersici、 Colletotrichum gloeosporioides和Alternaria alternata相关的植物疾病，参见实施例 1。如下所述，针对运些真菌植物病原体检测所选择的S. na化1 ens i S菌株。
[0051 ]将来自所选择的S.natalensis菌株的冻结小瓶(甘油储液)转移至含20ml酵母麦 芽提取培养液(YME)的100ml带有挡板的锥形瓶中。将锥形瓶在培养摇床中在28°C、180rpm 下培养3天。
[0052]对于每种菌株，将20化1液体培养基转移至YME琼脂平板并在28°C下培养4天W增 强平板表面的完全菌落覆盖。
[0化3] 将Boh^iscinerea从甘油储液（100μΙ)直接涂布至YME琼脂并随后在28°C下培 养9天。将所有其它所选择的真菌从甘油储液(200μ1)直接涂布至YME琼脂并随后在28°C下 培养4天。
[0054]根据实施例1中所述的程序进行生物检测，其中变化是:所有变量W五倍被检测。 根据对照样品的真菌菌落生长，将平板在28°C下储存7天或11天。培养之后，根据实施例1中 所述的方法测量真菌菌落的半径。
[0055] 结果显示：在所有被检测的样品中，与对照样品相比，朝向产生那他霉素的菌株 (Sheptomycesnatalensis&Str邱tomyceschat1:anoogensis)的真菌生长被抑制。根据所 测试的菌株，平均抑制从2%到78%不等(参见表2)。因此，运些结果清楚显示:产生那他霉 素的Streptomyces菌株具有抑制不同物种真菌植物病原体的潜能。
[0化6] 与S.chat化noogensis相比，S.natalensis菌株显示出真菌半径发展的更大降低。 此外，S.natalensis菌株DS73870和DS73871 明显胜过S.na化lensisATCC-27448菌株（=模 式菌株）。根据所检测的真菌菌株，S.natalensisATCC-27448的平均抑制在26%-53%之间 不等，而S.na化lensisDS73870和DS73871的平均抑制在59%-78%之间不等（参见表2)。 [0057]实施例3
[005 引产生那他霉素的Streptomycesnatalensis菌株DS73871&DS73870 抵抗Verticilliuma化o-atrum的抗真菌活性
[0059] 在另一个实验中，检测产生那他霉素的StreptomycesnatalensisDS73871和StreptomycesnatalensisDS73870抵抗Verticilliumalb〇-at;rum(CBS321.91)的抗真菌 活性。
[0060] Vedicilliuma化o-atrum与黄萎病有关。运种±传真菌可导致多种作物(主要在 较冷气候区域)严重的收获损失。
[0061]根据实施例1中所述的方法进行实验，条件是:所有变量W五倍被检测。为了产生 真菌栓塞，将Vedicilliumalb〇-atrum(CBS321.91)从甘油储液(200μ1)直接涂布至YME琼 脂并随后在28°C下培养4天。
[0062]朝向产生那他霉素的Streptomycesnatalensis菌株DS73871 和DS73870的 Ve;rticiIliuma化o-atrum的真菌半径在第11天时分别减小44%和45%。25天之后，对于菌 株DS73871和DS73870，抑制区甚至分别进一步减小至76%和71 % (参见表3)。
[0063]运些结果清楚显示：S.natalensisDS73870和DS73871 具有抑制Vedicillium albo-atrum白勺會 。
[0064]实施例4
[00化]产生那他霉素的StreptomycesnatalensisDS73871&DS73870抵抗Cercospora zeae-maydis的抗真菌活性
[0066] 在另一个实验中，检测产生那他霉素的Str邱tomycesna化lensis菌株DS73871和DS73870抵抗Cercosporazeae-maydis(CBS117757)的抗真菌活性。Cercosporazeae-maydis导致 "灰色叶斑病 "，其是玉蜀泰上最重要的叶部疾病之一。
[0067]根据实施例1中所述的方法进行实验，唯一例外是：将用于"生物检测"的培养皿 (包含细菌和霉菌栓塞二者)在28°C下培养28天而非7天。
[0068]结果（参见表 4)清楚显示了S.natalensis菌株DS73870 和DS73871 对Cercospora zeae-maydis生长的抑制效果。对于S.na化lensisDS7387巧日S.na化lensisDS73870,朝向 细菌菌株的真菌菌落的半径分别减少84%和63%。
[00~]实施例5
[0070]与其它Streptomycessp.相比，产生那他霉素的Streptomycesnatalensis DS73871和DS73870抵抗Colletot;richumgloeospo;rioides的抗真菌活性
[0071] 该实施例描述了产生那他霉素的菌株StreptomycesnatalensisDS73871& DS73870 和一些不产生那他霉素的51:'691:〇1117。6 3 89.(5.旨1'136113,5.旨1'136〇￥；[1'1(113和 S.;rochei)抵抗真菌植物病原体Colletot;richumgloeospo;rioides的抗真菌活性的比较。 所分析的不产生那他霉素的菌株获取自下列公共保藏：S.grisens(NRRLB1354)、 S.griseoviridis(NRRL2427)和S.rochei(CBS939.68)。
[0072] 根据实施例1中所述的方法进行实验，条件是:所有变量W五倍被检测且预培养时 间（培养液）从3天增加