至4天W使所有菌株完全生长。在28°C下培养6天后，测定对 Colletotrichumgloeospo;rioides(CBS272.51)的菌落半径的真菌抑制。
[0073] 结果可在表5中找到。在所有样品中，与对照相比（无Streptomycessp.)，朝向相 对的Str邱tomyces物种的C.gloeosporioides的真菌半径明显减小。此外，与不产生那他霉 素的Streptomyces物种（在7%-33%之间）相比，StreptomycesnatalensisDS73871 和 DS73870二者均显示出更强的抑制效果(分别为56%和54% )。
[0074]实施例6
[00巧]与其它Streptomycessp.相比，产生那他霉素的Streptomycesnatalensis DS73871&DS73870抵抗F'usariumoxysporumf.sp.lycopersici的抗真菌活性
[0076] 在另一个实验中，比较产生那他霉素的Str邱tomycesnatalensis菌株DS73871& DS73870与不产生那他霉素的Str邱tomyces物种Snourse巧日S.grisens的抵抗F'usarium oxysporumf.sp.lycopersici的抗真菌活性。
[0077] 文献中充分描述了所有巧巾被选择的Str邱tomyces物种产生抗真菌组分的能力。 所分析的不产生那他霉素的菌株获取自下列公共保藏：Streptomycesnoursei (CBS240.57)和S.griseus(NRRLB1354)。
[0078]根据实施例1中所述的方法进行实验，条件是:所有变量W五倍被检测且预培养时 间（培养液）从3天增加至4天W使所有菌株完全生长。在28°C下培养7天后，测定化sarium 0巧sporumf.sp.lycopersici(CBS414.90)菌落半径的真菌抑制。
[00巧]F'usariumoxysporumf.sp.lycopersici(CBS414.90)的菌落生长可在表6中找 至Ij。当针对Streptomyces物种挑战时，平均抑制区明显减小(在11 %-60%之间）。然而，与不 产生那他霉素的Streptomyces物种（对于S.grisens和S.noursei，分别为11 %和32% )相 比，产生那他霉素的Str邱tomyces物种的真菌抑制明显更强(对于DS73870和DS73871，分别 为 60%和 54%)。
[0080]实施例7
[0081] 与纯净的那他霉素相比，产生那他霉素的StreptomycesnatalensisATCC27448 抵抗Colletot;richumgloeospo;rioides的抗真菌活性
[0082] 在另一个实验中，在ΥΜΕ琼脂平板上培养产生那他霉素的菌株Streptomyces natalensisATCC27448W测定琼脂培养基中的那他霉素浓度。在下一步中，将 Streptomycesnatalensis菌株与一定浓度范围的纯净那他霉素（溶解在甲醇中）抵抗 Colletotrichumgloeosporioides的生物活性进行比较。
[0083] 将包含Str邱tomycesnatalensisATCC27448培养基的冻结小瓶转移至含20ml 酵母麦芽提取培养液(ΥΜΕ)的100ml带有挡板的锥形瓶中。将锥形瓶在培养摇床中在28°C、 18化pm下培养4天。将20化1完全生长的培养液转移(一式两份地)至精确包含20mlYME琼脂 (YMEA)的90mm培养皿。随后，利用无菌涂布器将接种物分散在培养基表面。将平板在28°C下 培养4天W增强完全的菌落覆盖。培养后，将平板冻干(Alpha2-4LD冻干机，Christ)。将每 个琼脂平板的冻干内容物转移至容量瓶中并用预热的MilliQ(50°C)填充至终体积为 500ml〇
[0084] 揽拌该溶液持续约30分钟、离屯、(8分钟，21000rcf)并随后检测上清液的那他霉素 浓度。通过使用众所周知的基于文献的方法化化C-UV)来测定那他霉素浓度并反算在培养 基平板中的平均浓度。
[0085] 在下一步中，采用上述流程，在YMEA(每个90mm培养皿中20ml培养基)上繁殖完全 生长的Str邱tomycesnatalensisATCC27448培养物。利用如实施例1中所述的生物检测， 该培养物被用于针对Colletotrichumgloeospo;rioides(CBS272.51)的生物检测。除了经 StreptomycesnatalensisATCC27448接种的样品之外，通过使用未接种的琼脂栓塞来获 取对照样品。
[0086] 平行地，生产含不同浓度的纯净那他霉素的YMEA平板。因此，通过将那他霉素(分 析级，DSMFoodSpecialties,Delft,荷兰)溶解在甲醇(Merck,用于液相色谱的梯度级，> 99.9%)中来制备那他霉素储液。随后，W1:19的比率将那他霉素储液加入到液体YME琼脂 中（45°C，通过降低含水量从而针对甲醇加入进行校正)并在培养基中彻底混合。琼脂中的 最终那他霉素浓度分别为:500、375、250、175、100、75、50、25、10和Oppm那他霉素。Oppm的那 他霉素YMEA平板仅包含5 % (重量/重量）甲醇。将液体YEMA转移至培养皿(每个90mm培养皿 中20ml培养基，WS倍进行）。凝固后，YEMA平板被用于如实施例1中所述的针对 Colletotrichumgloeospo;rioides(CBS272.51)的生物检测。在同一天内处理所有样品。
[0087] 在28°C下培养7天后，测定Colletotrichumgloeospo;rioides(CBS272.51)的真菌 半径和抑制区（参见实施例1中所述的方法）。
[0088] 在琼脂培养基中预培养期间由StreptomycesnatalensisATCC27448产生的那 他霉素的平均浓度被测定为低于lOppm(但不是化pm)。通过将lOppm纯净的那他霉素直接溶 解在琼脂栓塞中，Colletotrichumgloeosporioides的抑制区没有由Streptomyces natalensisATCC27448琼脂栓塞产生的抑制区大（参见表7)。在高得多的浓度等级（约 375ppm)下，匹配到相似的抑制区。
[0089] 实施例8
[0090] 处理玉米植物
[0091] 提供产生那他霉素的细菌菌株(ATCC27448)的抱子的甘油储液。来自储液的等分 试样被用于在含有200mL不含薦糖的YEME液体培养基(参见www.elabprotocols.com)和玻 璃珠(用于打碎凝聚体)的11烧瓶中培养菌株。将培养瓶放在28°C的2(K)rpm摇床中持续72小 时。将产生的悬浮物转移至250ml管中并在8000巧m下离屯、15分钟。将产生的沉淀物重新悬 浮在无菌水中至终浓度为200mg/ml。运种悬浮物被用作用于W下溫室实验的菌株接种物。
[0092] 在30%V8汁液（juice)琼脂平板中培养Cercosporazeae-maydis并在日见光、25 °C下培养2周（参见Beckman和化yne，1983)。为了制备用于溫室研究的接种物，通过用3ml 0.01%Tween-20灌注(flood)平板并用无菌的移液吸头轻轻地取出抱子来收获分生抱子。 进行该过程两次。所产生的分生抱子悬浮物获得约ΙΟ4个分生抱子/ml。
[0093] 通过将玉米种子(PioneerHybrid35F40)首先用70%乙醇冲洗、然后浸在次氯酸 钢溶液中来对其进行表面消毒。将得到的玉米种子浸在0.5 %化C10+-滴Tween-20中持续 20分钟。然后用无菌蒸馈水冲洗种子5次。
[0094] 将种子播撒在含粗糖的/膨胀的赔石（Therm-0-RockWest，Inc.，AZ)的3.25"x 3.25"x3.25"的盆中。每个盆中播撒两粒种子。当幼苗出现时，将它们变稀疏W在每个盆中 留下一株植物。
[00M]使植物在具有W下条件的溫室中生长：白天溫度为25°C且夜间溫度为18°C; 14小 时日光和10小时黑暗。在整个生长阶段，向植物提供完全肥料。
[0096] 种植后四十二(42)天，开始处理。所施加的处理为：
[0097]a)处理1:对照；
[0098]b)处理2:首先用产生那他霉素的细菌菌株接种植物，4天后，用Cercosporazeae-maydis接种植物；
[0099] C)处理3:首先用Cercosporazeae-maydis接种植物，4天后，用产生那他霉素的细 菌菌株接种植物；
[0100] d)处理4:用产生那他霉素的细菌菌株接种植物；
[0101] e)处理5:用Cercosporazeae-maydis接种植物。
[0102] 每种处理进行10个生物学重复。
[0103] 通过将Cercosporazeae-maydis抱子悬浮物直接喷洒在叶子上来用病原体接种 玉米植物。然后将玉米植物封闭在透明塑料篷中W维持植物周围相对高的湿度。高相对湿 度是在玉米叶片上建立Cercosporazeae-maydis感染的要求。施用处理后5天，除去塑料覆 主rm〇
[0104] 通过将2ml产生那他霉素的细菌菌株添加在植物的根部区域来施用该菌株。运等 效于每盆400mg接种物。
[0105] 开始每种处理后，监测植物的疾病发展W及生长促进五周。
[0106] 为了评估生长是否存在统计学显著差异，在种植后天数(DAP)为84天时测量株高 (立高法(standinghei曲tmethod))。结果显示:在84DAP时，用单独的产生那他霉素的细 菌菌株处理的植物比任何其它处理产生更高的植物(参见图1)。运证明：产生那他霉素的细 菌菌株增强了植物生长。
[0…7] 实施例9
[0108]利用StreptomycesnatalensisDS73870和DS73871 的植物处理对人为地用 化izoctoniasolani感染的生长在±壤中的窝宦（let化ce)的影响
[0109] 从9日龄的MEA培养基琼脂平板（培养溫度为24°C)中获得Rhizoctoniasolani (CBS323.84)(±传的植物病原体)并将其溶解在水中。将真菌接种物(5〇1111/1±壤)穿过± 壤(90%泥炭、10%沙)彻底混合。用经接种的±壤填充苗盘(