专利名称：含有活性物质的包衣微粒的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于含活性物质的包衣微粒的包衣材料。所述包衣材料包含气相成分并且能够起到调节微粒密度和通过吸收作用于微粒上的冲击力防止微粒受到损害的双重作用。本发明还涉及生产此种包衣微粒的方法，诸如这样的方法，其中在进入包衣室之前对包含气相成分、包衣材料和任选地溶剂的包衣进料进行加压。此外，本发明涉及此包衣微粒在多种应用中的用途。
已知的酶颗粒配制技术包括a)喷雾干燥的产品，其中在喷雾干燥塔中将液体含酶溶液进行雾化形成小液滴，小液滴在沿干燥塔下落的途中干燥形成含酶微粒物质。这种方法可以生产非常小的微粒(Michael S.Showell(编者)；粉末状去污剂；表面活性剂科学杂志(Surfactant Science Series)；1998；vol.71；140-142页；Marcel Dekker)。
b)分层式产品，其中围绕预形成的惰性核心微粒包被一层酶，在该技术中，典型地在使预形成的核心微粒流化的流化床设备中，将含酶溶液进行雾化，再使含酶溶液粘附到核心微粒上并干燥直到在核心微粒表面形成干燥酶层。如果能够得到所需尺寸的有用核心微粒就能利用此方法获得所需尺寸的微粒。对此类产品的说明参见如WO 97/23606。
c)吸附性核心微粒，其中不是围绕核心包被一层酶，而是将酶吸附在核心表面之上和/或之内。对此方法的说明参见WO 97/39116。
d)压出产品或制成丸状的产品，其中将含酶糊状物压制成小丸，或在压力下将其挤压通过小的开孔并切成微粒，随后进行干燥。通常此种微粒的尺寸较大，这是由于制备挤压孔的材料(通常是带有钻孔的板)限制了挤压孔上可允许施加的压力降。除此之外，如果使用小的开孔，很高的压出压力会使酶糊状物中的热生成量增加，这对酶是有害的(Michael S.Showell(编者)；粉末状去污剂；表面活性剂科学杂志(SurfactantScience Series)；1998；vol.71；page 140-142；Marcel Dekker)。
e)颗粒状产品，其中将酶粉末悬浮于熔融蜡中，并例如经旋转式圆盘喷雾器，将所得悬浮液喷射进入冷却室，在冷却室中液滴迅速固化(MichaelS.Showell(编者)；粉末状去污剂；表面活性剂科学杂志(SurfactantScience Series)；1998；vol.71；page 140-142；Marcel Dekker)。在所得产品中，酶均匀地遍布于整个惰性材料中，而不是集中在其表面。文献US 4,016,040和US 4,713,245也涉及到这个技术。
f)混合制粒产品，其中将含酶液体添加到具有常规制粒成分的干粉组合物中，液体和粉末以适当比例进行混合，并且随着液体中的水分被吸收到干粉中，干粉中的各成分开始粘合凝聚，微粒增大，这样就形成了含酶颗粒。对此方法的说明见US 4,106,991(NOVO NORDISK)及相关文献EP170360 B1(NOVO NORDISK)，EP 304332 B1(NOVO NORDISK)，EP 304331(NOVO NORDISK)，WO 90/09440(NOVO NORDISK)和WO 90/09428(NOVONORDISK)。在可利用各种高剪切力混合器作为制粒机的该方法的特定产品中，可将由酶、填料和粘合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以加固微粒，得到所谓的T-粒，经加固的微粒更为结实，可释放出较少的酶尘(见下页)。
迄今为止，已知的酶制剂有“干制剂”，即由固体微粒的聚集物组成，和“液体制剂”，即含有酶/酶粒的溶液或悬浮液的液体。
WO01/25322公开了一种泡沫成分，其中包含聚合材料、溶解助剂和活性组分的混合物。
WO01/24990公开了制备泡沫成分的方法，所述的方法包括将粘性混合物从旋转式挤压板压出到接受表面这样的步骤。
WO01/25323公开了含有聚合材料和活性组分的弹性制品。
此外，我们发现，由于微粒一般按照制备物单位重量中的活性量进行出售，这就需要使用轻的包衣以使活性物质能占有大多数的重量由此提供高活性物质含量的微粒。
因此本发明的目的是提供能够降低包衣微粒的粉尘形成并同时能够降低整个包衣微粒的真实密度的轻量包衣。
本发明提供由包衣和含活性物质的核心微粒组成的包衣微粒，其中包衣含有气相成分并且用于制备包衣微粒的包衣和方法具有所需要的性质。
本发明还提供包衣微粒的制备方法和含有包衣微粒的组合物及其应用。
本发明的另一方面是提供制备本发明包衣微粒的方法，其包含选自如下的步骤(a)提供含气相成分的包衣材料并将含有该气体的包衣材料加于核心微粒上；或(b)提供含产气成分的包衣材料，将此包衣材料加于核心微粒上然后处理核心微粒使得从产气成分产生气体。
此外另一方面是利用含有本发明包衣微粒的组合物清洁物体和改进面团质量。图表的简要说明无图。发明详述在处理含活性物质的固体微粒时，一个主要问题是可能对操作此干燥固体组合物的操作者有害的活性物质粉尘的形成。
虽然可以将活性物质结合在本领域已知的可抑制活性粉尘形成的干燥固体微粒中，但正如利用已知的Heubach方法所测定到的，事实上活性物质粉尘仍可以从微粒中释放出来。由此，需要有进一步的改进。
常规微粒通常是固体且易碎，这使得它们在应变作用下易受到损坏。然而，通过利用本发明的包衣包裹微粒，机械弹性“缓冲”材料就被置于含活性物质的核心微粒和引起微粒产生应变的环境之间。定义如本文所用，化合物的“真实密度”这一术语，应解释为指所述化合物的以单位体积重量表示的密度，这可以通过将已称重的化合物浸入到不能溶解此化合物的液体中测量液体分散体的体积增加(即被化合物替代的液体体积)来确定。举例来说，将1克化合物加到体积为10cm3的不能溶解此化合物的液体中，在所述加入后，液体-化合物混合物的体积增加到11cm3，这样化合物替代了1cm3液体，化合物的真实密度是1g/cm3。液体的真实密度可以计量为已测体积的液体的重量。
本文所用的术语“蜡”，应解释为熔点位于25-150℃之间的化合物。
本文所用的短语“包衣微粒直径和核心微粒直径之间的比率”(以下缩写为DT/DC)应理解为包含核心微粒和包衣的微粒的直径除以单独的核心微粒的直径。例如，如果直径为100μm的核心微粒包被上一层200μm厚的包衣，则包衣微粒的直径是(200+100+200)＝500μm而DT/DC是500μm/100μm＝5。
本文所用的有关包衣的术语“基本上不含有酶”是指每克包衣材料中含有少于5mg的酶。实际上即是，没有将活性物质添加到包衣进料中。包衣本发明的包衣包含气相成分。
我们发现通过结合气相成分，包衣密度降低，并且同时由于包衣中具有可压缩的气相，弹性得以增加。尤其是，结合气相成分的包衣基质可以是固相材料。
气相成分应理解为指任一种气体或气体混合物，如大气，二氧化碳，氮气，稀有气体。特别地，气相成分是二氧化碳。
气相成分应该构成包衣材料的至少20％体积(v/v)，尤其是至少40％体积，更尤其是至少60％体积，最尤其是至少80％体积。一般这需要在给定的温度和压力下每升包衣材料(溶剂除外)溶解至少0.01，尤其是0.03，更尤其是0.06，甚至更尤其是0.16摩尔的气体。
包含在包衣中的气体可以以截留在其它包衣材料基质中的气泡形式存在。轻球体轻球体是具有低的真实密度的小微粒。具体来说，它们是内部充满空气或气体的中空球形微粒。通常可以通过膨胀固体材料来制备这样的物质。轻球体可以是无机物类如3MTM的SCOTCHLITETM玻璃泡(中空玻璃球体)，PQ公司的Q-CEL(中空的硼硅酸盐玻璃微球体)和/或Extendospherese(陶瓷中空球体)。轻球体也可以是有机物类如PQ公司的PM-系列(塑料中空球体)，AKZO Nobel的Expancel(中空塑料球体)和Potters Industries的Luxsil和Sphericel和/或SHELL的Styrocell，后者是聚苯乙烯球体。Styrocell的聚苯乙烯中含有戊烷，其在加热之后沸腾并使材料膨胀或爆开(此反应类似于玉米种子膨胀变成爆米花的过程)而留下具有低真实密度的轻聚苯乙烯材料。此外，多糖如淀粉或其衍生物也是优选的材料。Biodac是由纤维素(造纸业的废料)制成的非中空轻型材料的实例，其可以从GranTek Inc获得。可以将这些材料以单独的形式或以不同轻型材料混合物的形式包含在本发明颗粒中。其它包衣材料包衣材料还包含适于截留气相成分的材料基质。这种材料包括但不限于蜡，多肽，和碳水化合物聚合物，它们可形成截留气体的弹性网。
在此列出的蜡包括熔点位于20-150℃之间的聚合化合物。优选的蜡是熔点在所述范围内的有机化合物或有机化合物的盐。在本发明上下文中，术语“蜡”还包括两个或多个不同种蜡的混合物。此外，蜡或蜡混合物的一个重要特征是蜡应该(特别是在中性和碱性溶液中)是水溶性的或水可分散的，所以当将本发明的包衣微粒引入水溶液中，即用水进行稀释时，蜡应分解和/或溶解，从而使结合在微粒中的活性物质迅速释放和溶解到水溶液中。水溶性蜡的实例有聚乙二醇(PEG)。因此对于水溶性蜡，蜡的溶解度应该尤其达到75份蜡比25份水，如PEG 1000。可分散在水溶液中的水不溶性蜡有甘油三酯和油。
室温(25℃)下蜡应处于固态，因此其熔点或熔融范围(聚合蜡趋向于在一定温度范围内发生熔化)应在此温度之上。蜡尤其可以具有约35℃到约120℃的熔点或熔融范围。为了能在蜡融解的温度和含微粒的液体组合物的一般贮藏温度(20-30℃)之间设置合理差值，优选此下限。此外，可以预期到，当蜡的熔点低于35℃时微粒的制备将是困难的。另一个熔点或范围在约40℃到约100℃之间，如约50℃到约80℃。在另一实施方案中，蜡应具有约150道尔顿到10,000道尔顿的分子量。
本发明的蜡可以是任一种化学合成的蜡。同样适当的是它也可以是从自然界分离出来的蜡或其衍生物。因此，本发明的蜡可以选自下列非限制性列表中的蜡。-蜡类型的聚乙二醇，缩写为PEG。可购买获得具有不同分子大小的不同PEG蜡，其中低分子PEG也具有低熔点。适宜的PEG的实例有如德国BASF的PEG 1500，PEG 3000，PEG 4000，PEG 6000，PEG 9000。为了满足蜡和/或酶微粒所需要的真实密度和熔点性质，低熔点蜡和高熔点蜡的混合物也被考虑为本发明的一个非常有用的实施方案。-聚丙烯或聚乙烯或其混合物。-在室温下呈固态的非离子表面活性剂，如具有高水平的乙氧基基团的乙氧基化脂肪醇，例如BASF的Lutensol AT80，其每分子中含有80个单位的环氧乙烷。作为备选方案，环氧乙烷、环氧丙烷的聚合物或其共聚物是有用的，如嵌段聚合物，例如德国BASF的Pluronic PE 6800。-分离自天然源的蜡，如巴西棕榈蜡(熔点位于80-88℃)，小烛树蜡(熔点位于68-70℃)和蜂蜡。其它天然蜡和其衍生物是源自如海洋来源的动物或植物的蜡。此种蜡的实例有氢化公牛脂，氢化棕榈油，氢化棉籽油和/或氢化大豆油，其中此处所用的术语“氢化”应解释为使不饱和碳水化合物链(例如甘油三酯中)饱和，其中碳＝碳双键被转化为碳-碳单键。氢化棕榈油可以从如Hobum Oele und Fette GmbH(德国)或Deutche CargillGmbH(德国)商购。-脂肪酸醇，如Condea Chemie GMBH(德国)的线性长链脂肪酸醇NAFOL 1822(C18，20，22)，其熔点位于55-60℃之间，真实密度约为0.96g/cm3。-甘油单酯和/或甘油二酯是有用的蜡，如硬脂酸甘油酯，其中硬脂酸是硬脂酸和棕榈酸的混合物。此种蜡的实例是Danisco Ingredients(丹麦)的Dimodan PM，其真实密度约为1g/cm3。-脂肪酸，如氢化线性长链脂肪酸。-石蜡，即固态烃。-微晶蜡。
在其它实施方案中，适用于本发明的蜡可以在并入此处作为参考的C.M.McTaggart等，Int.J.Pharm.19，139(1984)或Flanders等.，DrugDev.Ind.Pharm.13，1001(1987)中找到。
多肽可以选自明胶、胶原蛋白、酪蛋白、脱乙酰壳多糖、聚天冬氨酸和聚谷氨酸。
碳水化合物聚合物可以选自果胶，淀粉，改性淀粉，纤维素，改性纤维素，角叉藻聚糖，阿拉伯树胶，金合欢胶，黄原胶，刺槐豆胶和瓜耳胶。应用于本发明上下文中的术语“改性淀粉”表示的是，经过某种至少部份的化学修饰，酶修饰和/或物理或物化修饰的淀粉(天然淀粉)，其一般相对于“亲本”淀粉表现出改变的性质。
适当的化学修饰包括，但不限于羟基基团的酯化(如通过乙酰化来完成)；羟基基团的醚化；氧化(如通过与氯气或次氯酸盐反应来完成)；交联(如通过与甲醛或表氯醇反应来完成)。
适当的酶修饰包括，举例来说，利用淀粉降解酶或淀粉修饰酶，例如淀粉酶如α-淀粉酶或葡糖淀粉酶进行处理。
适当的物理或物化修饰包括，尤其是，所谓的糊化作用。此处所用的有关淀粉的术语“糊化的”与本领域的用法一致(参见，如.A.Xu和P.A.Seib，Cereal Chem.70(1 993)，第463-470页)。
合成聚合物可选自聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，聚乙烯醇(PVA)，聚乙酸乙烯酯，聚丙烯酸酯，聚甲基丙烯酸酯，聚丙烯酰胺，聚磺酸酯，聚羧酸酯，及其共聚物，尤其是水溶性的聚合物或共聚物。包衣中还可以包含一种或多种常用的包衣材料，尤其是在水中可溶的或可分散的材料。常用包衣材料可参见如WO 89/08694，WO 89/08695，EP 270608 B1和/或WO 00/01793中的说明。常用包衣材料的其它实例可以在US 4,106,991，EP 170360，EP304332，EP 304331，EP 458849，EP 458845，WO 97/39116，WO 92/12645A，WO 89/08695，WO 89/08694，WO 87/07292，WO 91/06638，WO 92/13030，WO93/07260，WO 93/07263，WO 96/38527，WO 96/16151，WO 97/23606，US5,324,649，US 4,689,297，EP 206417，EP 193829，DE 4344215，DE 4322229A，DD 263790，JP 61162185 A和/或JP 58179492中找到。
包衣中可以包含选自以下的材料粘合剂、纤维、盐、水不溶性矿物质、色素、酶稳定剂、蜡或其组合。
包衣中的颗粒材料可以充当成核剂提高气相形成趋势。
在具体的实施方案中包衣可以包含-酶稳定剂。如常规用于制粒领域的酶稳定剂或保护剂可以作为包衣的组分。稳定剂或保护剂可分成如下几类碱性或中性物质、还原剂、抗氧化剂和/或第一过渡系金属离子的盐。每一类都可以与同类或不同类的其它保护剂联合使用。碱性保护剂的实例有碱金属的硅酸盐、碳酸盐或碳酸氢盐，它们通过活跃地中和如氧化剂提供化学清除效应。还原性保护剂的实例有亚硫酸盐、硫代亚硫酸盐、硫代硫酸盐或MnSO4，抗氧化剂的实例有甲硫氨酸、丁化羟基甲苯(BHT)、丁化羟基苯甲醚(BHA)。稳定剂尤其可以是硫代硫酸盐，如硫代硫酸钠或甲硫氨酸。酶稳定剂还可以是硼酸盐、硼砂、甲酸盐、二元和三元羧酸、可逆的酶抑制剂如含有巯基基团的有机化合物或烷基化的或芳基化的硼酸。基于硼的稳定剂的实例可以在WO96/21716中找到，而优选的基于硼的稳定剂是4-甲酰基苯基硼酸或其衍生物，其说明参见WO 96/41859，此处的两个公开文献都并入此处作为参考。有用的酶稳定剂的其它实例还有明胶，酪蛋白，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和脱脂乳粉末。保护剂在包衣中的量可以占包衣的5-40％ w/w，尤其是5-30％，如10-20％。
-增溶剂。在包衣微粒是去污剂制剂的一种成分的情况下包衣的溶解度是特别重要的。如本领域专业人员所熟知的，许多试剂可以通过多种方法起到提高制剂溶解度的作用，本领域已知的典型试剂可以参见国家标准药典。因此，核心微粒可任选地含有任何能够增加包衣微粒溶解度的试剂。
-无机物，如水溶性的和/或不溶性的无机盐如磨得很细的碱金属的硫酸盐，碱金属的碳酸盐和/或碱金属的氯化物，粘土如高岭土(如SPESWHITETM英文的China Clay)，膨润土，滑石，沸石，碳酸钙，和/或硅酸盐。
-粘合剂，如具有高熔点或不定高熔点的非蜡性质的粘合剂，如聚乙烯吡咯烷酮，糊精，聚乙烯醇，纤维素衍生物，例如羟丙基纤维素，甲基纤维素或CMC。适宜的粘合剂是糖粘合剂如来自法国Roquette Freres的Glucidex 21DTM。
-纤维材料如纤维形式的纯或不纯的纤维素。其可以是锯屑、纯的纤维状纤维素、棉或其它形式的纯或不纯的纤维状纤维素。还可以使用基于纤维状纤维素的助滤剂。几种品牌的纤维状纤维素已投入市场，如CEPOTM和ARBOCELLTM。纤维状纤维素助滤剂的相关实例有Arbocel BFC200TM和Arbocel BC200TM。此外可以使用如EP 304331 B1所述的合成纤维，并且典型的合成纤维可由聚乙烯，聚丙烯，聚酯，尤其是尼龙，聚甲酸乙烯酯，聚(甲基)丙烯酸化合物制成。
-交联剂如与酶相容的表面活性剂，例如乙氧基化醇，尤其是带有10到80个乙氧基基团的乙氧基化醇。它们在包衣和核心微粒中都可以存在。
-可以将悬浮剂、介体(用于在如洗涤应用中提高微粒溶解后的漂白作用)和/或溶剂掺入核心微粒中。
-粘度调节剂。粘度调节剂可存在于包衣中。
包衣材料应该通过形成连续的均质层包封核心微粒。
在微粒或颗粒中，根据需要包衣可行使许多功能。因此，举例来说，包衣可达到一种或多种下列效果(i)进一步减小核心微粒的粉尘形成倾向；(ii)进一步保护核心微粒中的活性物质免受漂白物质/系统(如过硼酸盐，过碳酸盐，有机过酸等)的氧化；(iii)微粒被引入液体介质(如水性介质)后按所需要的速率溶解；(iv)为本发明的微粒提供更好的物理强度。
包衣还可以含有一种或多种下列物质氯清除剂、增塑剂、色素、润滑剂(如表面活性剂或抗静电剂)和芳香剂。
本发明上下文中，可用于包衣层中的增塑剂包括，例如多羟基化合物如糖、糖醇、甘油、甘油三羟甲基丙烷、新戊二醇、三乙醇胺、单-、二-和三甘醇或分子量低于1000的聚乙二醇(PEG)；尿素，邻苯二甲酸酯如邻苯二甲酸的二丁酯或二甲酯；硫氰酸酯，非离子表面活性剂如乙氧基化醇和乙氧基化磷酸酯和水。
适宜的色素包括，但不限于，细碎的增白剂，如二氧化钛和高岭土，有色色素，水溶性着色剂，以及一种或多种色素和水溶性着色剂的组合。
如本文中所用，术语“润滑剂”是指任何能够减少表面摩擦，润滑颗粒表面，减少静电增加的倾向，和/或减少颗粒的脆性的试剂。润滑剂也可以通过减少包衣中粘合剂的粘性，在加包衣方法的改进中起到相关作用。因此，润滑剂可以用作抗凝聚剂和润湿剂。
适宜的润滑剂的实例有低分子量的聚乙二醇(PEGs)，乙氧基化脂肪醇和矿物油。润滑剂尤其可以是矿物油或非离子表面活性剂，更尤其是，该润滑剂不易与其它包衣材料混溶。
在本发明的一个具体实施方案中，利用如在丹麦专利申请WO00/01793第5-9页及所给实例所述的具有高恒定湿度的保护性包衣材料给本发明的核心微粒加包衣，此申请特此并入作为参考。
在另一实施方案中，本发明包衣比已知的包衣厚，在这一点上DT/DC是至少1.1，尤其是至少1.5，更尤其是至少2.5，更尤其是至少2，更尤其是至少3，最尤其是至少4。但DT/DC优选低于约100，尤其是低于约50，更尤其是低于25，最尤其是低于10。DG/DC的范围尤其可以是约4到约6。
包衣层的厚度可以是至少25μm，尤其是厚度可以是至少50μm如至少75μm，至少100μm，至少150μm，至少200μm，至少250μm，或尤其是至少300μm。
在某些实施方案中，包衣可以包括几个包衣层，每一层都有特定功能。
在一个实施方案中，包衣具有由液体润滑剂形成的外层。使用润滑剂的目的是润滑颗粒以提高颗粒的流动能力，并且进一步抑制操作中单个颗粒发生碰撞时的粉尘形成。
含有气相成分的包衣材料应具有低于0.8g/cm3，尤其是低于0.6g/cm3，更尤其是低于0.4g/cm3和最尤其是低于0.2g/cm3的真实密度。核心微粒核心微粒包含活性物质。除活性物质外，核心微粒可利用任何能够为核心材料提供所需要的功能性质的方法或材料进行构建，例如核心可由一旦引入水介质后就能容易地使活性物质释放出来的材料组成。在一个实施方案中，核心微粒是由微粒载体(I)以及加于载体表面上的活性物质吸附层和/或含酶层(II)构成的，并任选地含有保护性还原剂。在核心材料中甚至还可以有额外的包衣为核心材料提供所需要的功能性质。另一种核心微粒可以是所谓的T-粒，其中活性物质和成粒材料混合形成酶遍布于整个核心中的颗粒，如US 4,106,991实施例1的描述。可利用任何常规方法和非活性材料制备核心微粒。已知的常用核心微粒和材料的实例尤其可参见US4,106,991(优选)，EP 170360，EP 304332，EP 304331，EP 458849，EP 458845，WO 97/39116，WO 92/12645，WO 89/08695，WO 89/08694，WO 87/07292，WO 91/06638，WO 92/13030，WO 93/07260，WO 93/07263，WO 96/38527，WO 96/16151，WO 97/23606，US 5,324,649，US 4,689,297，EP 206417，EP193829，DE 4344215，DE 4322229 A，DD 263790，JP 61162185 A，JP58179492中的描述。
就本发明的一个特定实施方案来说，核心微粒可以根据US 4,106,991中说明的方法通过将一层活性物质加于“安慰剂”载体(不含活性物质的载体)之上进行制备。任选地，额外的活性物质可以吸附在载体表面上。
在本发明一个的特定实施方案中，核心微粒还可以包含如上述有关包衣一节中所描述的保护剂，其尤其以适当量如占包衣微粒的0.1-1％ w/w，尤其是0.1-0.5％ w/w，如0.33％ w/w的量与活性物质混合。保护剂可以是抗氧化剂，还原剂或其混合物。
在一个实施方案中，本发明的核心微粒含有分散于粘弹性液体基质中的活性物质，其中在锥板式流变仪中在25℃和1Hz的正弦频率ω下测定时粘弹性液体基质的η′和η″均位于103至1014Pa之间。构成活性物质和任选地其它有用成分所在基质的粘弹性液体原则上可以是任何能够满足为本发明粘弹性核心微粒设定的粘性和弹性要求的材料或材料混合物。
尤其是，材料可以是有机粘弹性材料，例如，包含或含有机聚合物和/或单体或由其组成的液体材料。材料如碳水化合物聚合物(如，果胶)、蛋白质(如)、明胶、糖、葡萄糖浆、修饰的植物油或其混合物，可以被转变成或配制成具有如上所述的粘弹性性质的液体状态。
尤其是，组成粘弹性液体基质的大多数成分可以是水溶性的。
在一个实施方案中，在锥板流变仪中在25℃和1Hz的正弦频率ω下测定时粘弹性液体基质具有108到1012Pa，尤其是109到1011Pa的η′和η″。在另一实施方案中，在锥板流变仪中在25℃和1Hz的正弦频率ω下测定时粘弹性液体基质具有104至1011Pa的η′和η″。
本发明上下文中所使用的术语“液体”应理解为是指材料的一种性质。液体材料被定义为这样一种材料，当形变力即应变施加到液体材料上时，只要材料发生形变，它就能够获得一定量值的应力，即单位面积所受压力。但一旦形变停止，应力水平立即降低到稳态水平，这总是为精确零值。液体物质不能在液体内部保持或维持持久应力。
如果从形变发生以后到材料中的应力达到精确零值的时间跨度足够长，则此液体(流体)是粘弹性的。可利用包含两个参数η′(ω)和η″(ω)的简单模型对粘弹性液体进行描述，这两个参数可以容易地在锥板流变仪(如Bohlin流变仪)中相对于不同的正弦频率ω进行测定。η′(ω)可以解释为粘弹性液体的弹性，而η″(ω)可以解释为粘弹性液体的粘性。以度计量的比率δ＝η′(ω)/η″(ω)的正切值，称为损耗角正切值＝tanδ。此定义在本领域是公认的，参见如Bird R.B.，Armstrong R.C.，HassagerO.″聚合物液体的动力学(Dynamics of polymeric liquids)″，卷1流体力学(Fluid mechanics)，John Wiley and Sons，第六章，特别是实施例6.1.2.1第281页，1977。当在锥板流变仪(如Bohlin流变仪)中使用1Hz正弦频率在25℃下测定时，本发明的粘弹性液体具有位于103到1014Pa之间的η′和η″。
应用于本发明的粘弹性液体可以是不含水或至少仅含有极少量水的材料。水可以是与液体成分结合的，或者液体可含有从潮湿环境中吸收的水。因此液体中的水量取决于液体的各成分，各成分的吸湿性和周围环境的湿度。用于本发明的粘弹性液体可含有低于30％ w/w(重量/重量)的水，尤其是低于20％ w/w的水，尤其是10％ w/w的水，尤其是低于5％ w/w的水，更尤其是低于3％ w/w，更尤其是低于1％ w/w或无法检测到的水量。
核心微粒尤其应小于700μm或600μm，尤其是在50至500μm之间，如100至400μm，最尤其是200至300μm。
通常核心微粒可以具有低于3g/cm3，优选低于2g/cm3，更优选低于1.5g/cm3的真实密度。
活性物质本发明的活性物质可以是任何同微粒周围环境分开对其有益的活性成分或活性成分混合物。术语″活性物质″意在包括所有这样的成分，即，当将本发明微粒应用于某一过程中时，这些成分从微粒中被释放出来后能够起到改进此过程的作用。适宜的活性物质是会发生失活和/或能够引起本发明组合物中其它成分失活的物质。正如所述，活性物质可以以离散的固体微粒形式分散存在于核心微粒中。
活性物质可以是天然无机物(如下文提到的漂白成分)或者有机物。尤其是，活性物质可以是通常对周围环境非常敏感并能通过埋入微粒中受益的活性生物材料，如来自微生物的材料。尤其是，活性物质可以是肽或多肽如酶。
本发明上下文中，酶可以是任一种酶或不同种酶的组合。因此，当提及“酶”时通常可以理解为包括了一种酶或多种酶的组合。
应理解的是酶变体(例如通过重组技术产生的)包括在术语“酶”的含义之内，此种酶变体的实例被公开在，例如EP 251,446(Genencor)，WO91/00345(Novo Nordisk)，EP 525,610(Solvay)和WO 94/02618(Gist-Brocades NV)。
应用于本说明书及权利要求书中的酶分类的依据是国际生物化学和分子生物学协会命名委员会的建议(1992)，Academic Press，Inc.，1992(Recommendation(1992)of the Nomenclture committee of theInternational Union of Biochemistry and Molecular Biology)。
因此，适于结合在本发明颗粒中的酶的类型包括氧化还原酶(EC1.-.-.-)，转移酶(EC 2.-.-.-)，水解酶(EC 3.-.-.-)，裂解酶(EC 4.-.-.-)，异构酶(EC 5.-.-.-)和连接酶(EC6.-.-.-)。
在本发明上下文中，氧化还原酶尤其可以是过氧化物酶(EC.1.11.1)，漆酶(EC 1.10.3.2)和葡萄糖氧化酶(EC 1.1.3.4)]。商品化氧化还原酶(EC1.-.-.-)的实例有GluzymeTM(来自Novo Nordisk A/S的酶)。其它的氧化还原酶可从其它经销商处获得。转移酶尤其可以是属于下列任一个亚类的转移酶a)转移单碳基团的转移酶(EC 2.1)；b)转移醛或酮残基的转移酶(EC 2.2)；酰基转移酶(EC 2.3)；
c)糖基转移酶(EC 2.4)；d)转移除甲基基团外的烷基或芳基基团的转移酶(EC 2.5)；以及e)转移含氮基团的转移酶(EC 2.6)。
可用于本发明中的转移酶的一个实例是转谷氨酰胺酶(蛋白质-谷氨酰胺γ-谷氨酰转移酶；EC 2.3.2.13)。
适宜的转谷氨酰胺酶的其它实例参见WO 96/06931(Novo NordiskA/S)的说明。
在本发明上下文中水解酶尤其可以是羧酸酯水解酶(EC 3.1.1.-)如脂肪酶(EC 3.1.1.3)；植酸酶(EC 3.1.3.-)，如3-植酸酶(EC 3.1.3.8)和6-植酸酶(EC 3.1.3.26)；糖苷酶(EC 3.2，其属于此处所称的″糖酶″)，如α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)；肽酶(EC 3.4，也称为蛋白酶)；及其它羰基水解酶。
在本发明中，术语“糖酶”不仅用于指能够断裂具有尤其是5和6元环结构的糖链(如，淀粉或纤维素)的酶(即糖苷酶，EC 3.2)，而且还指能够使碳水化合物异构化的酶，例如将6元环结构如D-葡萄糖异构化为5元环结构如D-果糖。
适当的糖酶包括下列各项(括号中是EC编号)α-淀粉酶(EC3.2.1.1)，β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)，葡聚糖1，4-α-葡糖苷酶(EC3.2.1.3)，内切-1，4-β-葡聚糖酶(纤维素酶，EC 3.2.1.4)，内切-1，3(4)-β-葡聚糖酶(EC 3.2.1.6)，内切-1，4-β-木聚糖酶(EC 3.2.1.8)，葡聚糖酶(EC 3.2.1.11)，几丁质酶(EC 3.2.1.14)，聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)，溶菌酶(EC 3.2.1.17)，β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.21)，α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)，β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.2 3)，淀粉-1，6-葡糖苷酶(EC 3.2.1.33)，木聚糖1，4-β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)，葡聚糖内切-1，3-β-D-葡糖苷酶(EC 3.2.1.39)，α-糊精内切-1，6-α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.41)，蔗糖α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.48)，葡聚糖内切-1，3-α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.59)，葡聚糖1，4-β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.74)，葡聚糖内切-1，6-β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.75)，阿拉伯聚糖内切-1，5-α-L-阿拉伯糖苷酶(EC 3.2.1.99)，乳糖酶(EC 3.2.1.108)，脱乙酰壳多糖酶(EC3.2.1.132)和木糖异构酶(EC 5.3.1.5)。
商品化的蛋白酶(肽酶)的实例包括KANNASETM，EVERLASETM，ESPERASETMALCALASETM，NEUTRASETM，DURAZYMTM，SAVINASETM，PYRASETM，PANCREATICTRYPSIN NOVO(PTN)，BIO-FEEDTMPRO和CLEAR-LENSTMPRO(皆来自NovoNordisk A/S，Bagsvaerd，丹麦)。
其它商品化的蛋白酶包括MAXATASETM，MAXACALTM，MAXAPEMTM，OPTICLEANTM和PURAFECTTM(来自Genencor International Inc.或Gist-Brocades)。
商品化的脂肪酶的实例包括LIPOPRIMETM，LIPOLASETM，LIPOLASETMULTRA，LIPOZYMETM，PALATASETM，NOVOZYMTM435和LECITASETM(皆来自NovoNordisk A/S)。
其它商品化的脂肪酶包括LUMAFASTTM(Genencor International Inc.的门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)脂肪酶)；LIPOMAXTM(GistBrocades/Genencor Int.Inc的类产碱假单胞菌(Ps.pseudoalcligenes)脂肪酶；以及Solvay Enzymes的芽孢杆菌属(Bacillus)脂肪酶。其它脂肪酶可以从其它经销商处获得。
商品化的糖酶的实例包括ALPHA-GALTM，BIO-FEEDTMALPHA，BIO-FEEDTMBETA，BIO-FEEDTMPLUS，BIO-FEEDTMPLUS，NOVOZYMETM188，CELLUCLASTTM，CELLUSOFTTM，CEREMYLTM，CITROZYMTM，DENIMAXTM，DEZYMETM，DEXTROZYMETM，FINIZYMTM，FUNGAMYLTM，GAMANASETM，GLUCANEXTM，LACTOZYMTM，MALTOGENASETM，PENTOPANTM，PECTINEXTM，PROMOZYMETM，PULPZYMETM，NOVAMYLTM，TERMAMYLTM，AMGTM(淀粉葡糖苷酶NOVO)，MALTOGENASETM，SWEETZYMETM和AQUAZYMTM(皆来自Novo Nordisk A/S)。其它糖酶可来自其它经销商。
在本发明核心微粒中活性物质如酶(按照纯的酶蛋白进行计算)的含量按核心微粒重量计算典型地是约20％到65％，尤其是不少于25％，如不少于30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％或65％重量。制备包衣微粒的方法制备核心微粒制备核心微粒的方法包括在上述的参考文献中公开的那些方法，即a)喷雾干燥的产品，b)分层式产品，c)吸附式产品，d)压出产品或制成丸状的产品，e)颗粒状产品，f)混合制粒产品。
制备粘弹性液体核心微粒的方法包括PA 2000 01459中描述的那些方法。
制备粘弹性液体核心微粒的方法应总是包括步骤将活性物质和任选地其它材料(优选干燥固体微粒形式)分散在粘弹性液体基质中以优选得到均匀的分散体。此步骤适于在升高的温度下进行，以便粘性低于成品微粒的粘性。然而，还需小心不要过热破坏活性物质。在此上下文中，一个重要特征是粘弹性液体基质中含有低量的水，这是因为缺少水时比存在水时可以应用更高的温度而不会严重破坏活性物质。
制成该混合物之后，可以应用多种不同的步骤从分散体制备液体微粒。
在一个实施方案中，使分散体冷却直至冻结并对分散体进行挤压和或研磨以得到冰冻液体小微粒。
在另一实施方案中，分散体的加工是在粘弹性液体基质处于液态时，通过将分散体轧成粘弹性液体材料薄片再切成碎片来进行的。此方法类似于意大利面食的制作方法，即先将材料制成薄片再将该薄片切成所需形状的切片。
在第三个实施方案中，将分散体压过小孔并切成小片。
从上述方法得到的微粒优选进行圆化以得到球形或近球形的微粒。这一操作通常可以在如制药丸机(Marumarizer)中进行。然而，优选利用微粒的液体性质使微粒成型。通过在流化床干燥器中流化微粒并对微粒加热，粘弹性液体基质的表面张力将使微粒变成球形。此方法也方便了所有的后继加包衣步骤，这是因为加包衣的操作可以在微粒圆化之后，但仍在对微粒进行流化之时进行。在流化床加包衣过程中，将含包衣材料的溶液和流化的核心微粒一起喷雾，溶液溶剂蒸发后包衣材料就沉积在核心微粒表面。加包衣使用含气体的包衣的一个优点在于所得包衣的弹性，这样的包衣能够吸收冲击力，从而在单个微粒上引起较小的机械应变并且进一步限制粉尘形成问题发生。
可利用几种方法将含气相成分的包衣加于核心微粒上。一种方法是将气体混合进包衣材料中，如通过充分混合或通过在包衣材料呈液体形式的温度下向液态包衣材料中通入气体使之起泡，然后在冷却条件下将液态包衣材料喷射到核心微粒上以使包衣材料在核心微粒上沉淀并固化，这样就将气相成分截留在包衣中。此方法也适用于将轻球体结合到包衣材料中。
另一种提供含气相成分的包衣的方法是制备含产气成分的包衣材料，将该包衣材料加于核心微粒上并处理包衣微粒使得产气成分产生气体。在一个实施方案中处理是物理性的，如加热。在另一实施方案中，将相对易挥发的成分，如低级烷烃例如异戊烷混合进包衣中并通过对包衣微粒加热，如在巴氏杀菌法中只加热包衣，使挥发性成分沸腾并在包衣中产生出充满气体的气泡，室温下包衣固化后气泡将被固定或截留在包衣中。此种包衣类型还可以用碳水化合物聚合物，通过使包含在该聚合物中的水沸腾(爆米花式爆裂反应)来制备。
另一类型的处理是化学处理。在一个实施方案中，将通过该处理发生化学反应后至少一种产物是气体的化合物混合进包衣材料中，然后通过对包衣微粒进行此化学处理来产生气体。在一个特定实施方案中化合物可以是碳酸氢盐，可以将其混合在包衣材料中，然后给核心微粒加上该包衣并以酸处理包衣微粒，由此形成截留在固体包衣中的二氧化碳气体。
可利用任一种常用的包衣方法如在搅拌机或流化床中，将包衣加至核心微粒上。在流化床包衣法的一个特定的实施方案中，将含有包衣材料的溶液和经流化的核心微粒一起喷雾，然后通过蒸发溶液溶剂使包衣材料沉积在核心微粒表面，参见如US 6,136,772。
如果在流化床中给核心微粒加包衣，则通常可以在0到100℃，尤其是10到90℃，更尤其是10到80℃或最尤其是10到70℃下加包衣。流化床的进口空气温度一般可以为40到200℃，尤其是40到100℃，更尤其是40到80℃。
如果包衣中含有蜡并且加包衣是在混合器中进行的时，则混合器的温度应高于蜡的熔融温度。通常位于30到100℃之间。
泡沫样的或多孔的微粒还可以通过加压使进料和气体混合然后对其进行喷雾干燥来获得，就像生产喷雾干燥的咖啡产品一样，参见如US3,749,378。
举例来说，包衣微粒可以通过包含下列步骤的方法进行制备(i)在压力高于大气压时，提供包含包衣材料，气相成分和任选地溶剂的包衣进料，(ii)在包衣室中将含气体的包衣进料加至核心微粒上，(iii)完全或部分地将压力释放至大气压，其中所述的压力释放可在步骤(ii)之前或之后进行。
此方法的一个优点是可以得到具有(按重量计)高活性物质含量的包衣微粒，而且为了获得多孔的保护性包衣，不需要在加包衣步骤之后进行额外的处理如加热或化学处理。
包衣进料进入包衣室后，利用喷嘴对包衣进料进行雾化。大体上，根据本发明可以使用至少两种类型的喷嘴。喷嘴可以是进行内部或外部混合的双流喷嘴(TFN)，其中气相成分和包衣材料分别在喷嘴的内部或外部进行混合。双流喷嘴的代表性实例公开在US 6,161,778。或者，喷嘴可以是压力式双流喷嘴((P TFN)。压力式双流喷嘴的实例公开在US 5,272,820。
或者，包衣进料成分可在进入喷嘴之前进行混合和预膨胀。
所应用的压力可根据待包衣的核心的性质、气相成分及其在包衣材料中的溶解度、液体的粘性和所需要的液滴尺寸在较宽范围内进行变化。因此原则上从约2×105Pa到约5×107Pa的任何压力都可应用于气相成分上，优选1×106Pa到约2×107Pa的压力。
压力释放的程度取决于需要的气体形成程度，以及待包衣的核心的性质。可能有利的是，使包衣室中的压力只部分释放到大气压，并在包衣微粒离开所述室之后释放其余压力，或者在排放之前释放室中的压力。这对于反压非常高的情况可能有利，在这种情况下如果一步释放压力会导致包衣效果较差。
在本发明方法的一个实施方案中，能够引起截留在包衣材料中的气相成分膨胀的压力释放可以一步完成。所述的压力释放可以在包衣进料离开喷嘴之前进行。然而，在本发明优选的实施方案中，压力释放是在包衣进料离开喷嘴并进入包衣室后进行的。
在本发明方法的另一个实施方案中，压力释放通过至少一个初级和一个次级步骤完成。因此为了防止过多突然的发泡，在几个步骤中完成包衣进料的膨胀可能是有利的。
通过逐步压力释放可以控制泡沫形成并由此得到更稳定和较不敏感的泡沫。在应用为了溶解足够量必须在高压下使用的气相时，如大约7-8×106Pa压力下PVA中的CO2，逐步压力释放尤其有用。在这种情况下，初步压力释放达到如大约2-3×105Pa可能是合适的。
在本发明方法中，使用进行内部混合的TFN的优点是，在包衣进料中形成所需要的反压力以便在雾化之前溶解气体。内部混合型喷嘴能够将雾化气体和液体恰在它们离开喷嘴头之前进行混合。快速的压力降使溶解气体在小液滴中形成小气泡，进而引起泡沫形成。
因此在本发明方法的一个实施方案中，包衣进料借助双流喷嘴(TFN)进入包衣室。
PTFN是压力喷嘴和双流喷嘴的组合。包衣进料的雾化是由液压和提供的压缩气体的组合压力导致的。就作用于包衣进料的反压力来说，PTFN具有与内部混和型TFN相同的优势。另外，它可以灵活地对反压力进行独立调控，而内部混合型TFN总是具有与雾化气体提供的压力相同的反压力。
因此在另一个本发明实施方案中，包衣进料借助压力式双流喷嘴(PTFN)进入包衣室。
在另一个本发明实施方案中，为进一步增强气体形成的趋势对包衣进料进行加热。所述的加热可在各种温度，优选不超过200℃下进行。
包衣进料离开喷嘴之后进入包衣室。包衣室可以是许多本身已知的包衣室中的任一种。这样，所述的室可以是包衣装置形式，其中包衣进料以及待加包衣的核心微粒从包衣室上部进入包衣室。在沿着包衣室下落的途中，核心微粒被加上包衣和干燥并从包衣室下部离开。所述实施方案的代表性实例参见US 5,993,549。
或者，包衣室可以是一种流化床装置，其中混有以上公开的气相成分的包衣进料从包衣室底部进入室。流化床室包括一个用于容纳待加包衣的核心微粒的箱体和一个放置并安排在所述箱体底部的底板。所述装置的一个特别优选的实施方案公开在US 5,718,764，其内容被并入此处作为参考。
在本发明方法的一个特定实施方案中，所述方法包括联合进行微粒的流化包衣和干燥，由此在流化床底部将第一层包衣材料涂到微粒上。接着包衣微粒上升通过一个或几个竖置在流化床中的通流管(draft tube)，此通流管内部的气流与管外的气流相比增强。随着包衣微粒上升通过管体，包衣微粒干燥，在离开管体之后，微粒将缓慢漂移到流化床底部并在此处重新进入通流管再次进行包衣。由于包衣微粒在所述管体中被干燥，故结块较少，因而得到更为均匀地包裹上包衣的微粒。
US 5,236,503描述了一种流化床Wurster包衣机，其中在流化床中竖置了一个或多个均带喷嘴的通流管。
在本发明的一个实施方案中，流化床是底部喷射式流化床，流化床中竖置均配有TFN或PTFN喷嘴的一个或多个通流管。
在本发明方法的另一个实施方案中，包衣室是具有一个槽和一圈引导浆叶(guide vane)的流化床，如Hüttlin的EP 0541759B1，EP 0436787B1，EP0370167B1和EP 0212397A2中公开的那些。
包衣材料应通过形成一个连续的均匀层对核心微粒进行包封。
包衣微粒一般是50至2000微米。应用于去污剂中时微粒通常是400至700微米而应用于焙烤业中时通常是50至200微米。
含包衣微粒的组合物及其应用本发明还涉及含有本发明包衣微粒的组合物。此组合物可以是任何组合物，但组合物尤其可以是旨在用于如食品，烘焙和/或去污剂工业中的那些。因此，此组合物可以是食物，烘焙食品用面粉，面团或去污剂组合物或待掺入这些组合物中的添加剂。本发明还包括此组合物的应用，如用于提高食品如面包的质量，或用于清洁物品如含纤维素的织物。
焙烤在一个本发明的具体实施方案中，我们发现我们研制的含有活性物质的包衣微粒在焙烤业中是有用处的。
在面粉厂和焙烤业内，已充分确立了活性物质如酶的使用。因此本发明提供了含有本发明包衣微粒的焙烤组合物，尤其是面团改良剂组合物或含有面团改良剂的面粉组合物。
在焙烤业中使用酶时，优选某几种酶活性。面粉中淀粉酶含量的变化导致烘焙质量的差异。为了标化面粉有必要添加淀粉酶。淀粉酶和戊聚糖酶通常能够为酵母发酵提供糖、增大面包体积、延迟淀粉凝沉作用、并且降低变味速率和由戊聚糖胶引起的粘性。糖酶的实例在下面给出。
可利用某些生麦淀粉酶延长面包的保存期两天或两天以上，且不会在产品中引起粘性。通过从淀粉分子的非还原端切下低分子量的糖和糊精可以对糊化淀粉进行选择性修饰。淀粉经这样的修饰就极少有可能发生凝沉作用。产生的低分子量糖能够提高焙烤物的水保持能力，而且不会产生能够导致成品出现粘性的中长度糊精。在面包焙烤过程中酶被失活，所以可以认为它是一种加工助剂，不必在标签上说明。
可利用真菌α-淀粉酶来改良面包体积，并可进一步提供优质均一结构的面包屑。
所述的α-淀粉酶是能够产生麦芽糖、糊精和葡萄糖的胞内酶。谷类和一些细菌的α-淀粉酶在高于淀粉糊化温度的温度下失活，因此将这些酶添加到小麦面团中时会产生小的面包体积和粘性的面包内部。Fungamyl具有热不稳定的优点并且刚好在低于糊化温度的温度下失活。
含有大量的戊聚糖酶和半纤维素酶活性的酶制品能够提高面团的易操作性和稳定性，并且可以改进面包的新鲜度、面包屑的结构和面包体积。
通过水解面粉中的戊聚糖片断，戊聚糖将丧失大量的水结合能力，然后水就可被淀粉和面筋利用。面筋变得更加柔韧和易延展，而淀粉更容易糊化。戊聚糖酶可与乳化剂组合或作为乳化剂的替代物来使用。
去污剂本发明的包衣微粒还可以被添加到去污剂组合物中并因此成为其成分。
例如，可以将本发明的去污剂组合物配制成用于手洗或机洗的衣物去污剂组合物，包括适用于预处理污染织物的清洗添加组合物或织物柔顺组合物，或用于普通家庭硬表面清洁处理的去污剂组合物，或适用于手工或机器洗碗碟操作的组合物。
在一个特定方面，本发明提供了含本发明包衣微粒的去污剂添加剂。去污剂添加剂以及去污剂组合物中可包含一种或多种其它的酶如蛋白酶，脂肪酶，角质酶(Cutinase)，淀粉酶，糖酶，纤维素酶，果胶酶，甘露聚糖酶，阿拉伯聚糖酶，半乳聚糖酶，木聚糖酶，氧化酶，如漆酶和/或过氧化酶。
一般来说，所选择的酶的性质应该与所选去污剂相兼容，(即最适pH，与其它酶的或非酶的组分的相容性等)，并且酶应该以有效量存在。
蛋白酶适宜的蛋白酶包括动物，植物或微生物来源的蛋白酶，优选微生物来源的蛋白酶。还包括化学修饰过的或蛋白质工程化的突变体。蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶，尤其是碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的实例有枯草杆菌蛋白酶，尤其来源于芽孢杆菌的那些，如枯草杆菌蛋白酶Novo，枯草杆菌蛋白酶Carlsberg，枯草杆菌蛋白酶309，枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(说明参见WO 89/06279)。胰蛋白酶样蛋白酶的实例有胰蛋白酶(如猪或牛源的)和镰孢霉(Fusarium)蛋白酶(对其的描述参见WO 89/06270和WO 94/25583)。
有用的蛋白酶的实例是在WO 92/19729，WO 98/20115，WO 98/202116和WO 98/34946中描述的变体，尤其是在一个或多个如下位点发生替代的变体27，36，57，76，87，97，101，104，120，123，167，170，194，206，218，222，224，235和274。
优选的商业化的蛋白酶包括ALCALASETM，SAVINASETM，PRIMASETM，DURALASETM，ESPERASETM，和KANNASETM(Novo Nordisk A/S)，MAXATASETM，MAXACALTM，MAXAPEMTM，PROPERASETM，PURAFECTTM，PURAFECT OXPTM，FN2TM，和FN3TM(Genencor International Inc.)。
脂肪酶适宜的脂肪酶包括细菌和真菌来源的脂肪酶。还包括化学修饰过的或蛋白质工程化的突变体。有用的脂肪酶的实例包括腐质霉属(Humicola)(同义词Thermomyces)，(如EP 258 068和EP 305 216中描述的)H.lanuginosa(T.lanuginosus)或(如WO 96/13580中描述的)H.insolens的脂肪酶；假单胞菌属(Pseudomonas)，如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218 272)，洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 331 376)，施氏假单胞菌(P.stutzeri)(GB1,372,034)，荧光假单胞菌(P.fluorescens)，假单胞菌属菌株SD 705(WO95/06720和WO 96/27002)，P.wisconsinensis(WO 96/12012)的脂肪酶；芽孢杆菌属(Bacillus)，如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)(Dartois等(1993)，Biochemica et Biophysica Acta，1131，253-360)，嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)(JP 64/744992)或短小芽孢杆菌(B.pumillus)(WO 91/16422)的脂肪酶。
其它实例有例如在WO 92/05249，WO 94/01541，EP 407 225，EP 260105，WO 95/35381，WO 96/00292，WO 95/30744，WO 94/25578，WO 95/14783，WO 95/22615，WO 97/04079和WO 97/07202中描述的脂肪酶变体。
优选的商业化的脂肪酶包括LIPOLASETM和LIPOLASE ULTRATM(NovoNordisk A/S)。
淀粉酶适宜的淀粉酶(α和/或β)包括细菌和真菌来源的淀粉酶。还包括化学修饰过的或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括，举例来说，芽孢杆菌属如地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的特定菌株的α-淀粉酶，详细说明参见GB 1,296,839。
有用的淀粉酶的实例有在WO 94/02597，WO 94/18314，WO 96/23873和WO 97/43424中描述的变体，特别是在一个或多个如下位点发生替代的变体15，23，105，106，124，128，133，154，156，181，188，190，197，202，208，209，243，264，304，305，391，408，和444。
商业化的淀粉酶有DURAMYLTM，TERMAMYLTM，FUNGAMYLTM和BANTM(NovoNordisk A/S)，RAPIDASETM和PURASTARTM(来自Genencor InternationalInc.)。
纤维素酶适宜的纤维素酶包括细菌和真菌来源的纤维素酶。还包括化学修饰过的或蛋白质工程化的突变体。适宜的纤维素酶包括芽孢杆菌属，假单胞菌属，腐质霉属，镰孢属(Fusarium)，梭孢壳属(Thielavia)，枝顶孢属(Acremonium)的纤维素酶，例如在US 4,435,307，US 5,648,263，US5,691,178，US 5,776,757和WO 89/09259中公开的由Humicola insolens，嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila) 和尖镰孢(Fusariumoxysporum)产生的真菌纤维素酶。
尤其适宜的纤维素酶是有益于颜色维护的碱性和中性纤维素酶。这样的纤维素酶的实例有EP 0 495 257，EP 0 531 372，WO 96/11262，WO96/29397，WO 98/08940中描述的纤维素酶。其它实例有如在WO 94/07998，EP 0 531 315，US 5,457,046，US 5,686,593，US 5,763,254，WO 95/24471，WO 98/12307和PCT/DK98/00299中描述的纤维素酶变体。
商业化的纤维素酶包括CELLUZYMETM，和CAREZYMETM(Novo(NordiskA/S)，CLAZINASETM，和PURADAX HATM(Genencor International Inc.)，和KAC-500(B)TM(Kao Corporation)。
过氧化物酶/氧化酶适宜的过氧化物酶/氧化酶包括植物，细菌或真菌来源的过氧化物酶/氧化酶，还包括化学修饰过的或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括鬼伞属(Coprinus)如灰盖鬼伞(C.cinereus)的过氧化物酶，及其变体，如在WO 93/24618，WO 95/10602，和WO 98/15257中描述的那些。
商业化的过氧化物酶包括GUARDZYMETM(Novo Nordisk A/S)。
可以通过添加含一种或多种酶的各单独添加剂，或通过添加包含所有这些酶的组合添加剂，使去污剂组合物中包含这些去污剂酶。本发明的去污剂添加剂，即单独添加剂或组合添加剂可以按一定方式配制，以使之包含一种或多种含不同酶的本发明微粒。
本发明的去污剂组合物可以采取任一种方便的干燥形式，如条状，片片，粉末，颗粒或糊。它还可以是液体去污剂，尤其是非水性液体去污剂。
去污剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，其可以是非离子的(包括半极性的)和/或阴离子的和/或阳离子的和/或两性离子的表面活性剂。表面活性剂的含量按重量计一般是0.1％到60％。
当去污剂中包括阴离子表面活性剂时，去污剂通常包含大约1％到大约40％的阴离子表面活性剂，如直链烷基苯磺酸盐，α-烯属磺酸盐，烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)，脂肪醇乙氧基硫酸盐，仲链烷磺酸盐，α-磺基脂肪酸甲酯，烷基-或链烯基丁二酸或皂。
当去污剂中包含非离子表面活性剂时，去污剂通常含有约0.2％到约40％的非离子表面活性剂，例如乙氧基化脂肪醇、乙氧基化壬基酚、烷基多苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、多羟基烷基脂肪酸酰胺或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(“葡糖酰胺”)。
去污剂可以包含0-65％的去污剂增洁剂或络合剂，例如沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸、乙二胺四乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、烷基-或链烯基琥珀酸、可溶性硅酸盐或层叠式硅酸盐(例如购自Hoechst的SKS-6)。
去污剂可以包含一种或多种聚合物。实例为羧甲基纤维素、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)、聚(乙烯基咪唑)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸月桂醇酯/丙烯酸共聚物。
去污剂可包含漂白系统，它可包含H2O2源如过硼酸盐或过碳酸盐，并可以同形成过酸的漂白活化剂如四乙酰基乙二胺或壬酰氧基苯磺酸盐进行组合。另外，漂白系统可包含如酰胺，亚酰胺，或砜类型的过氧酸。
本发明的去污剂组合物中的酶可以通过诸如以下的常规稳定剂稳定多元醇如丙二醇或丙三醇、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物如芳香硼酸酯或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯基硼酸，且所述的组合物也可以按WO92/19709和WO 92/19708中所述制备。
所述的去污剂还可以包含其它的常规去污剂成分，例如织物调理剂(包括黏土)、增泡剂、泡沫抑制剂、抗腐蚀剂、污物悬浮剂、抗污物再沉淀剂、染料、杀菌剂、光学增白剂、助溶剂、失泽抑制剂或香料。
目前认为在去污剂组合物中任何酶都可以以相当于每升洗涤液中具有0.01-100mg酶蛋白质，优选每升洗涤液0.05-5mg酶蛋白质，尤其是每升洗涤液中具有0.1-1mg酶蛋白质的量加入。
此外，本发明的酶可以添加到如WO 97/07202所公开的去污剂制剂中，该文献特此引入作为参考。
在混合器中分别以A和B包被上述未加包衣的颗粒(按US 4,106,991实施例22的描述)得到两种颗粒A7.0％ PEG 4000和0.7％甘油并以1.0％高岭土一起磨成粉末以防止粘性B7.0％ PEG 4000和0.7％甘油和0.8％ Expancel 461DE20轻球体。未有任何问题即产生此颗粒。包衣材料的密度是PEG 40001.22g/ml甘油1.26g/mlExpancel 461DE200.07g/ml在颗粒B的包衣混合物中Expancel的体积百分数(或气体体积分数)约为64％。
对聚合物在85℃下加热1小时，使其缓慢溶解于水/甘油混合物。
所用装置由一个低压泵和一个高压泵相连组成，其间有一个气体喷头。利用压力式双流喷嘴(PTFN)或内混型双流喷嘴(TFN)对包衣进料进行雾化。CO2气体可通过喷头注入。可以将两泵间管道中的压力调到最大压力106Pa。CO2气体的进给速率是312g/h。
利用PTFN和30-35kg/小时的进料速率，可以以90-100kg/小时的雾化耗气量实现包衣进料的雾化。雾化只通过压力(液压)雾化是不能完成的。所产生的浓稠泡沫状物具有0.50g/ml的松湿密度。
利用内混型TFN和30-35kg/小时的进料速率，可以以60-70kg/小时的雾化耗气量雾化包衣进料。所产生的浓稠泡沫状物具有0.50g/ml的松湿密度。
权利要求
1.包含包衣和含有活性物质的核心微粒的包衣微粒，其中包衣中含有气相成分。
2.如权利要求1所述的微粒，其中气相成分占包衣材料的至少20％体积。
3.如权利要求2所述的微粒，其中包括气相成分的包衣材料具有低于0.8g/cm3的真实密度。
4.如前述任一权利要求所述的微粒，其中气相成分被限制于轻球体内。
5.如前述任一权利要求所述的微粒，其中包衣还包含选自蜡、多肽、和碳水化合物聚合物的材料。
6.如权利要求5所述的微粒，其中蜡是聚乙二醇。
7.如权利要求5所述的微粒，其中多肽选自明胶、胶原蛋白、酪蛋白、脱乙酰壳多糖、聚天冬氨酸和聚谷氨酸。
8.如权利要求5所述的微粒，其中碳水化合物聚合物选自果胶、淀粉、改性淀粉、纤维素、改性纤维素、角叉藻聚糖、阿拉伯树胶、金合欢胶、黄原胶、刺槐豆胶和瓜耳胶。
9.如前述任一权利要求所述的微粒，其中气相成分选自空气、二氧化碳、氮气、稀有气体。
10.制备如权利要求1-9所述的包衣微粒的方法，包括选自以下的步骤(a)提供含气相成分的包衣材料并将此含气体的包衣材料加于核心微粒上或(b)提供含产气成分的包衣材料，将该包衣材料加于核心微粒上并处理包衣微粒以从产气成分中产生气体。
11.如权利要求10所述的方法，包括步骤(b)。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述产气成分是挥发性成分并且所述处理是加热。
13.如权利要求11所述的方法，其中所述产气成分是碳酸氢盐并且所述处理是酸处理。
14.根据权利要求10的步骤(a)的方法，其中步骤(a)包括(i)在高于大气压的压力下，提供包含包衣材料、气相成分和任选地溶剂的包衣进料，(ii)在包衣室中将含气体的包衣进料加于核心微粒上，(iii)完全或部分地将压力释放至大气压，其中所述的压力释放可在步骤(ii)之前或之后进行。
15.如权利要求14所述的方法，其中在步骤(a)中，压力是2×105Pa到5×107Pa。
16.如权利要求14所述的方法，其中压力释放一步完成。
17.如权利要求14所述的方法，其中压力释放在至少一个初级和一个次级步骤中完成。
18.如权利要求16所述的方法，其中初级压力释放是在进入包衣室之前进行的。
19.如权利要求14-18所述的方法，其中所述包衣进料通过双流喷嘴(TFN)进入包衣室。
20.如权利要求14-18所述的方法，其中所述包衣进料通过压力式双流喷嘴(PTFN)进入包衣室。
21.如权利要求14-20所述的方法，其中所述包衣室是流化床。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述的流化床是其中竖置有一个或多个通流管的底部喷射型流化床。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述的流化床在每一个通流管中都配置有TFN或PTFN型喷嘴。
24.如权利要求14所述的方法，其中所述的气相成分选自空气、二氧化碳和氮气，尤其是二氧化碳。
25.如权利要求14所述的方法，其中包衣微粒的包衣中的气相成分占除溶剂以外的包衣的至少20％体积，优选40％，更优选60％，甚至更优选80％体积。
26.如权利要求14所述的方法，其中所述包衣材料含有蜡、多肽、碳水化合物聚合物以及合成聚合物。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述多肽选自明胶、胶原蛋白、酪蛋白、脱乙酰壳多糖、聚天冬氨酸和聚谷氨酸。
28.如权利要求26所述的方法，其中所述碳水化合物聚合物选自果胶、淀粉、改性淀粉、纤维素、改性纤维素、角叉藻聚糖、阿拉伯树胶、金合欢胶、黄原胶、刺槐豆胶和瓜耳胶。
29.如权利要求26所述的方法，其中所述合成聚合物选自聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚磺酸酯、聚羧酸酯及其共聚物，优选水溶性的聚合物或共聚物。
30.如权利要求14所述的方法，其中所述包衣进料还包括增塑剂。
31.如权利要求14所述的方法，其中所述核心是含酶核心。
32.如权利要求14所述的方法，其中包衣微粒的尺寸为100-5000μm，优选200-3000μm，最优选300-2000μm。
33.含有如权利要求1-9所述的微粒的组合物。
34.如权利要求33所述的组合物，其特征在于其是还含有表面活性剂的去污剂组合物。
35.如权利要求33所述的组合物，其特征在于其是还含有面粉的面团组合物。
36.权利要求34的组合物的用途，用于清洁物体。
37.权利要求35的组合物的用途，用于改良面团。
全文摘要
本发明涉及包含包衣和含活性物质的核心微粒的包衣微粒，其中所述包衣包含气相成分。本发明还涉及制备该包衣微粒的方法，包括选自如下的步骤(a)提供含气相成分的包衣材料并将此含气体的包衣材料加于核心微粒上；或(b)提供含产气成分的包衣材料，将该包衣材料加于核心微粒上并处理包衣微粒以从产气成分中产生气体。本发明还涉及该包衣微粒在多种应用中的用途。
文档编号C12N9/98GK1468092SQ01816760
公开日2004年1月14日 申请日期2001年10月1日 优先权日2000年10月2日
发明者O·西蒙森, P·巴克, O 西蒙森 申请人:诺和酶股份有限公司