专利名称：鸡新城疫病毒保藏剂的制配方法
技术领域：
本发明涉及家禽生物制品，更具体涉及一种鸡新城疫病毒保藏剂的制配方法。
背景技术：
鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus NDV)一直被人们用于鸡瘟疫苗的生产，对鸡病毒性疾病的防治具有举足轻重的作用。二十世纪八十年代，作为诱生剂被广泛应用于人白细胞干扰素和抗肿瘤药物仙霉素(BC369)的生产。2001年2月长江日报报导，武汉协和医院普外科使用鸡新城疫病毒改变被俘癌细胞20％的表面抗原，制备肿瘤疫苗。现在国内外鸡新城疫病毒(NDV)一般采用冷冻干燥法和-30℃低温冰箱法保减，保藏期为2-3年，在上述条件下进行保藏，病毒血凝效价(HA)比较稳定。但问题是随着对鸡新城疫病毒资源的开发利用，需要该病毒溶液在4～8℃冰箱内保藏一个月或一个月以上的时间，但此病毒液在4～8℃条件下保藏3-4天后，病毒血凝效价即会迅速下降，鸡新城疫病毒血凝效价不够稳定发明内容本发明的目的在于提供一种鸡新城疫病毒保藏剂的制配方法，工艺简单，操作方便，能使病毒液保藏时间长，病毒效价保持稳定。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施，其步骤是(1)将9-10日龄鸡胚在无菌条件下，接种鸡新城疫病毒-F株(NDV-F)(该毒株血凝效价为640，用无菌生理盐水稀释20倍)，每个鸡胚接种0.2ml于尿囊腔中，封口后置36℃培养箱孵化4-5天，培养结束后在4℃冰箱放置过夜，并在无菌室取出尿囊液，即为增殖的NDV-F病毒。
(2)将上述病毒液用0.45μ微孔滤膜(上海市集成药厂产品)，加压过滤，滤液无菌试验为阴性，测定病毒血凝效价在640-1280之间。
(3)配制一定浓度的核酸酶溶液，核酸酶溶液分别由核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶配制。具体配法是称1g脱氧核糖核酸酶，加双蒸水100ml溶解、浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为脱氧核糖酸酶浓液，浓度为10mg/ml；称0.5g核糖核酸酶，加双蒸水100ml溶解、浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为核糖核酸酶浓液，浓度为5mg/ml。分别取脱氧核糖酸酶液和核糖核酸酶液0.5-2.5ml加到95-99ml病毒溶液中，使脱氧核糖核酸酶与核糖核酸酶的最终浓度分别为50-250μg/ml和25-125μg/ml。摇匀后置4～8℃冰箱内保藏。
(4)分别保藏15～35天，测定病毒血凝效价，结果显示效价为640-1280。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果采用本方法保藏鸡新城疫病毒，在4～8℃温度下，保藏时间为15～35天。保藏之后，病毒血凝效价保持不变，原来测定结果为640或者1280，保藏之后能够保持相对稳定。此法对鸡新城疫病毒的进一步开发和利用是非常有利的，在生物制品的生产过程中有较大的应用潜力。
具体实施例方式
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔滤膜过滤除菌，用肉汤培养液检测是否有细菌污染，无菌试验应为阴性。测定血凝效价为640。
(c)称脱氧核糖核酸酶(DNase)1g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为脱氧核糖核酸酶浓液，浓度为10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为核糖核酸酶浓液，浓度为5mg/ml。
(d)分别取脱氧核糖核酸酶浓液1ml和核糖核酸酶浓液1ml加入到上述病毒液98ml中，此时病毒液中脱氧核糖核酸酶(DNase)的最终浓度为100μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最终浓度为50μg/ml。
(e)混合均匀后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分别保藏15天、35天后，取样，测定血凝效价，效价均为640。
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔滤膜过滤除菌，用肉汤培养液检测是否有细菌污染，无菌试验应为阴性。测定血凝效价为640。
(c)称脱氧核糖核酸酶(DNase)1g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为脱氧核糖核酸酶浓液，浓度为10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为核糖核酸酶浓液，浓度为5mg/ml。
(d)分别取脱氧核糖核酸酶浓液0.5ml和核糖核酸酶浓液0.5ml加入到上述病毒液99ml中，此时病毒液中脱氧核糖核酸酶(DNase)的最终浓度为50μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最终浓度为25μg/ml。
(e)混合均匀后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分别保藏15天、35天后，取样，测定血凝效价，效价均为640。
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔滤膜过滤除菌，用肉汤培养液检测是否有细菌污染，无菌试验应为阴性。测定血凝效价为640。
(c)称脱氧核糖核酸酶(DNase)1g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为脱氧核糖核酸酶浓液，浓度为10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为核糖核酸酶浓液，浓度是5mg/ml。
(d)分别取脱氧核糖核酸酶浓液2.5ml和核糖核酸酶浓液2.5ml加入到上述病毒液95ml中，此时病毒液中脱氧核糖核酸酶(DNase)的最终浓度为250μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最终浓度为125μg/ml。
(e)混合均匀后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分别保藏15天、35天后，取样，测定血凝效价，效价均为640。
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔滤膜过滤除菌，用肉汤培养液检测是否有细菌污染，无菌试验应为阴性。测定血凝效价为1280。
(c)称脱氧核糖核酸酶(DNase)1g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为脱氧核糖核酸酶浓液，浓度为10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为核糖核酸酶浓液，浓度为5mg/ml。
(d)分别取脱氧核糖核酸酶浓液2.5ml和核糖核酸酶浓液0.5ml加入到上述病毒液97ml中，此时病毒液中脱氧核糖核酸酶(DNase)的最终浓度为250μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最终浓度为25μg/ml。
(e)混合均匀后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分别保藏15天、35天后，取样，测定血凝效价，效价均为1280。
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔滤膜过滤除菌，用肉汤培养液检测是否有细菌污染，无菌试验应为阴性。测定血凝效价为1280。
(c)称脱氧核糖核酸酶(DNase)1g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为脱氧核糖核酸酶浓液，浓度为10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加双蒸水100ml，溶解，浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为核糖核酸酶浓液，浓度为5mg/ml。
(d)分别取脱氧核糖核酸酶浓液0.5ml和核糖核酸酶浓液2.5ml加入到上述病毒液97ml中，此时病毒液中脱氧核糖核酸酶(DNase)的最终浓度为50μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最终浓度为125μg/ml。
(e)混合均匀后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分别保藏15天、35天后，取样，测定血凝效价，效价均为1280。
权利要求
1.一种鸡新城疫病毒保藏剂的制配方法，将9-10日龄鸡胚在无菌条件下，接种鸡新城疫病毒-F株，每个鸡胚接种于尿囊腔中，封口后置36℃培养箱孵化4-5天，培养结束后在4℃冰箱放置，在无菌室取出尿囊液，将病毒液用0.45μ微孔滤膜，加压过滤，其特征是配制核酸酶溶液，首先是称脱氧核糖核酸酶，加双蒸水溶解、浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为脱氧核糖核酸酶浓液，浓度为10mg/m；其次是称核糖核酸酶，加双蒸水溶解、浓配，并经0.45μ微孔滤膜过滤，滤液为核糖核酸酶浓液，浓度为5mg/ml；第三是分别取脱氧核糖核酸酶浓液和核糖核酸酶浓液0.5-2.5ml加到95-99μg/ml病毒溶液中，使脱氧核糖核酸酶与核糖核酸酶的浓度为50-250μg/ml和25-125μg/ml，摇匀后置4-8℃冰箱内保藏。
全文摘要
本发明公开了一种鸡新城疫病毒保藏剂的制配方法，其特征是首先称脱氧核糖核酸酶，加双蒸水溶解、浓配，过滤；其次是称核糖核酸酶，加双蒸水溶解、浓配，过滤；第三是分别取脱氧核糖核酸酶浓液和核糖核酸酶浓液加到病毒溶液中，使浓度分别为50－250μg/ml和25－125μg/ml，摇匀内保藏。本发明工艺简单，操作方便，使病毒液保藏时间长，病毒效价保持稳定。
文档编号C12N7/01GK1392255SQ0213871
公开日2003年1月22日 申请日期2002年6月27日 优先权日2002年6月27日
发明者陈绳亮, 李天宪, 严哲, 熊克娟, 范兆军, 张忠, 王瑶 申请人:中国科学院武汉病毒研究所