专利名称：一种蘑菇菌种的保藏方法
技术领域：
本发明涉及的是一种食物菌种的保藏方法，具体涉及的是一种蘑菇菌种的保藏方法。
背景技术：
菌种作为一种重要的生物资源，为了保持其优良性状不变，应当及时对其进行保藏，目前食物菌菌种保藏方法主要有液氮低温保藏法、斜面定期移植法、液体石蜡法、砂土管保藏法以及自然基质宝藏法等，其中液氮低温保藏法是目前比较种先进的一种方法，但费用较高，国外保藏机构多采用此法；在我国，目前生产或研究中所食用菌菌种仍然主要采用试管或瓶保藏法，主要缺点有保存时间短，菌种稳定性不好，易发生变异或退化，成本高，携带不方便等缺点。蘑菇含水量高，组织非常细嫩，菌盖表面没有明显的保护结构，常温下采I 2天， 菇体内的水分就会大量蒸发散失，菌盖开始破膜、开伞、萎缩、褐变，甚至腐烂，菌柄伸长，商商品价值下降甚至消失，而蘑菇菌种采用试管或瓶保藏法以及液体石蜡法、砂土管保藏法保藏时，根据其蘑菇菌育种的规律，品种更新的周期约3-5年，期间无须转管或只转管一次是合适的，保藏期太长反而意义不大。保藏期太短则由于频繁扰动和温度、光照变化，时常出现操作污染和菌种退化，菌种稳定性不好，携带不方便。
发明内容
针对现有技术上存在的不足，本发明目的是在于提供一种适用范围广、保藏期长、 成本低，成活率高以及方便携带和稳定可靠的蘑菇菌种保藏方法。为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现
本发明的一种蘑菇菌种保藏方法，其特征在于，其保藏方法包括如下步骤
(O培养基配制；其包括小麦提取液20-30%，木粉30-40%，酵母提取液I. 5_3%，蔗糖
O.8-2%，乳糖I. 2-2. 6%，缓冲剂O. 5-1%,氯化钙O. 6-1%,硫酸镁O. 8-1. 5%，琼脂1%_2%，料水 30-70%, PH6. 1-7.0，制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸；
(2)加大填料量减少与空气接触面；待培养基冷却至22-24°C时，将蘑菇菌种接种至载体上，在22°C无菌培养箱内培养100小时，然后将载体连同菌种一并取下，并按照试管底部大小剪切至相应大小放置在试管中，稍压实，加棉塞，在通过高压蒸汽128°C灭菌40-50分钟，连容器搬入无菌室；
(3)真空冷冻干燥；将步骤(2)中装入菌种的载体试管放入冷冻干燥机，将温速度为每分钟3°C，冷却至_40°C，恒温预冻2小时，然后开启真空泵，在20分钟内真空度达到22帕后，以每25分钟隔板温度升高5°C，真空度降低6帕，待隔板温度升高25°C，真空降到O. 5 帕，样品升高为250C ；
(4)置换管塞；接种时将用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑试管置换棉塞；(5)包装与温度控制；用保险袋和保险盒双重保护菌种，置于5±1°C恒温冰箱冷藏，使菌种不易失活。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述缓冲剂为硫酸钙或碳酸钙。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液20%,木粉31%，酵母提取液2%，蔗糖O. 8%，乳糖2%，缓冲剂O. 5%,氯化钙O. 7%，硫酸镁 I. 2%，琼脂 I. 2%，料水 41%，PH 为 6. 8。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液25%，木粉30%,酵母提取液I. 6%，蔗糖1%，乳糖I. 5%，缓冲剂O. 8%,氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 3%，琼脂I. 9%，料水44%，PH为6. 5。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液30%,木粉15%，酵母提取液2. 8%，蔗糖I. 2%，乳糖2. 5%，缓冲剂O. 6%,氯化钙O. 9%， 硫酸镁1%，琼脂I. 2%，料水37%，PH为6. 7。根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述料水比为1:1.
本发明通过对蘑菇菌种进行引导驯化，以提高低温耐冻性、耐负压行及复水成活率等性能，然后制备冷冻管进行保存，确保长入内部的菌丝可长期存活；并通过木粉填充空隙一方面可增加木质类养分，另一方面减慢水分的散失，而且与空气接触面只有试管内径大小， 加上特制试管塞，可保持培养基3年失水率小于30%，具有成本低廉、操作简单、稳定可靠， 保藏期长、成活率高和适用范围广的优点，值得推广使用。
具体实施例方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式
，进一步阐述本发明。实施例I :
(O首先配制培养基，其组成配方包括小麦提取液20%,木粉31%，酵母提取液2%，蔗糖O. 8%，乳糖2%，缓冲剂(本实施例采用的是硫酸钙)0. 5%,氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 2%，琼脂 1.2%，料水41%。配制溶液PH为6. 8。制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸；
(2)然后加大填料量减少与空气接触面；待培养基冷却至24°C时，将蘑菇菌种接种至载体上,在22°C无菌培养箱内培养100小时，再将载体连同菌种一并取下，并按照试管底部大小剪切至相应大小放置在试管中，稍压实，加棉塞，在通过高压蒸汽128°C灭菌45分钟， 连容器搬入无菌室；
(3)真空冷冻干燥；将步骤(2)中装入菌种的载体试管放入冷冻干燥机，将温速度为每分钟3°C，冷却至_40°C，恒温预冻2小时，然后开启真空泵，在20分钟内真空度达到22帕后，以每25分钟隔板温度升高5°C，真空度降低6帕，待隔板温度升高25°C，真空降到O. 5 帕，样品升高为250C ；
(4)置换管塞；接种时将用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑试管置换棉塞；
(5)包装与温度控制；用保险袋和保险盒双重保护菌种，减少空气交换和灰尘进入，防止试管表面吸潮，置于5± 1°C恒温冰箱冷藏，使菌种不易失活。本实施例中，上述料水配比为1:1 实施例2 本实施例的配制培养基，其组成配方小麦提取液25%，木粉30%，酵母提取液I. 6%，蔗糖1%，乳糖I. 5%，缓冲剂(本实施例采用的是碳酸钙)0. 8%,氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 3%，琼脂 I. 9%，料水44%，PH为6. 5。，氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 2%，琼脂I. 2%，料水41%。本实施例的其余操作步骤与实施例I相同，现不加以赘述。实施例3:
本实施例保藏方法，其步骤为
(O培养基配制，其组成配方包括小麦提取液30%，木粉15%，酵母提取液2. 8%，蔗糖
I.2%，乳糖2. 5%，缓冲剂(碳酸钙或硫酸钙)O. 6%,氯化钙O. 9%，硫酸镁1%，琼脂I. 2%，料水 37%，PH为6.7。其中，料水比为1:1。然后制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面
铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸。(2)加大填料量减少与空气接触面；待培养基冷却至22°C时，将蘑菇菌种接种至载体上,在22°C无菌培养箱内培养100小时，再将载体连同菌种一并取下，并按照试管底部大小剪切至相应大小放置在试管中，稍压实，加棉塞，在通过高压蒸汽128°C灭菌50分钟， 连容器搬入无菌室；
(3)真空冷冻干燥；将步骤(2)中装入菌种的载体试管放入冷冻干燥机，将温速度为每分钟3°C，冷却至_40°C，恒温预冻2小时，然后开启真空泵，在20分钟内真空度达到22帕后，以每25分钟隔板温度升高5°C，真空度降低6帕，待隔板温度升高25°C，真空降到O. 5 帕，样品升高为25。。。(4)置换管塞；接种时将用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑试管置换棉塞。(5)包装与温度控制；用保险袋和保险盒双重保护菌种，减少空气交换和灰尘进入，防止试管表面吸潮，置于4°C恒温冰箱冷藏，使菌种不易失活。实施例4:
对上述实施例1-3进行复水试验测试，经测试，实施例I的菌种存活率在85%，实施例2 的菌种存活率在92%，实施例3的菌种存活率在88%，通过实施例1-3的试管长期保存3年， 实施例I的失水率为10%，实施例I的失水率为15%，实施例3的失水率为8%。以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
权利要求
1.一种蘑菇菌种保藏方法，其特征在于，其保藏方法包括如下步骤(O培养基配制；其包括小麦提取液20-30%，木粉30-40%，酵母提取液I. 5_3%，蔗糖O.8-2%，乳糖I. 2-2. 6%，缓冲剂O. 5-1%,氯化钙O. 6-1%,硫酸镁O. 8-1. 5%，琼脂1%_2%，料水 30-70%, PH6. 1-7.0，制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸；(2)加大填料量减少与空气接触面；待培养基冷却至22-24°C时，将蘑菇菌种接种至载体上，在22°C无菌培养箱内培养100小时，然后将载体连同菌种一并取下，并按照试管底部大小剪切至相应大小放置在试管中，稍压实，加棉塞，在通过高压蒸汽128°C灭菌40-50分钟，连容器搬入无菌室；(3)真空冷冻干燥；将步骤(2)中装入菌种的载体试管放入冷冻干燥机，将温速度为每分钟3°C，冷却至-40°C，恒温预冻2小时，然后开启真空泵，在20分钟内真空度达到22帕后，以每25分钟隔板温度升高5°C，真空度降低6帕，待隔板温度升高25°C，真空降到O. 5 帕，样品升高为250C ；(4)置换管塞；接种时将用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑试管置换棉塞；(5)包装与温度控制；用保险袋和保险盒双重保护菌种，置于5土TC恒温冰箱冷藏，使菌种不易失活。
2.根据权利要求I所述的一种蘑菇菌种保藏方法，其特征在于，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液20%，木粉31%，酵母提取液2%，蔗糖O. 8%，乳糖2%，缓冲剂O. 5%,氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 2%，琼脂I. 2%，料水41%，PH为6. 8。
3.根据权利要求I所述的一种蘑菇菌种保藏方法，其特征在于，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液25%，木粉30%，酵母提取液I. 6%，蔗糖1%，乳糖I. 5%，缓冲剂O. 8%, 氯化钙O. 7%，硫酸镁I. 3%，琼脂I. 9%，料水44%，PH为6. 5。
4.根据权利要求I所述的一种蘑菇菌种保藏方法，其特征在于，，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液30%，木粉15%，酵母提取液2. 8%，蔗糖I. 2%，乳糖2. 5%，缓冲剂O.6%,氯化钙O. 9%，硫酸镁1%，琼脂I. 2%，料水37%，PH为6. 7。
5.根据权利要求I至4任意一项所述的一种蘑菇菌种保藏方法，其特征在于，上述缓冲剂为硫酸钙或碳酸钙。
6.根据权利要求I至4任意一项所述的一种蘑菇菌种保藏方法，其特征在于，上述料水比为1:1。
全文摘要
本发明公开了一种蘑菇菌种保藏方法，其保藏方法步骤为(1)培养基配制；(2)加大填料量减少与空气接触面；(3)真空冷冻干燥；(4)置换管塞；(5)包装与温度控制；用保险袋和保险盒双重保护菌种，置于5±1℃恒温冰箱冷藏，使菌种不易失活。本发明提高低温耐冻性、耐负压行及复水成活率等性能，然后制备冷冻管进行保存，确保长入内部的菌丝可长期存活；并通过木粉填充空隙一方面可增加木质类养分，另一方面减慢水分的散失，而且与空气接触面只有试管内径大小，加上特制试管塞，可保持培养基3年失水率小于30%，具有成本低廉、操作简单、稳定可靠，保藏期长、成活率高和适用范围广的优点，值得推广使用。
文档编号C12N1/04GK102586114SQ20121003922
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月21日 优先权日2012年2月21日
发明者钱建良 申请人:常熟市方塔涂料化工有限公司