专利名称：一种地衣芽孢杆菌202及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物保护领域，尤其涉及一种内生生防菌株，具体 地说涉及一种高效防治香蕉枯萎病的地衣芽孢杆菌202及应用。
背景技术：
香蕉枯蒌病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)侵染引起的一种毁灭性病害，是香蕉生产的毁灭性土 传病害。病原菌从受伤的根茎侵入，通过维管束向假茎及叶部蔓延， 堵塞木质部导管，直至植株枯萎死亡。香蕉枯蒌病菌是土壤习居菌， 其厚垣孢子能够在土壤中存活8 10年。香蕉枯蒌病在在珠江三角 洲香蕉产区的多个县市均有分布，近年有迅速发展的趋势。该病病 园病株率一般约为10% 40%，严重的达90%以上，以致蕉园丢荒， 危害极大。
目前对香蕉枯蒌病的防治尚无理想药剂和抗病菌种， 一些栽培 管理措施只能起到局部的控制作用，寻找一，伊经济、安全、有效的 防治方法是当务之急，近年来，根际有益细菌的研究为香蕉枯萎病 的生物防治提供了新途径，许多根际有益细菌也能够诱导植物产生 系统抗性，使植物获得广谱抗病能力。根际有益细菌诱导植物产生 的防护作用安全而有效，在植物病害生物防治中具有重要的应用价 值。
从香蕉植株内分离筛选获得对香蕉枯萎病菌具有拮抗作用的生 防细菌菌株，对香蕉枯萎病的防治具有重要意义，但圏前相关技术仍旧很薄弱甚至空白。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的空白，提供一种地衣芽孢杆菌 202，是一种从香薫植株内分离筛选获得对香蕉枯萎病菌具有拮抗作 用的生防细菌菌株，低浓度下能够有效抑制香蕉枯萎病菌的生长，对 香蕉枯萎病的防治具有重要意义。
本发明的另 一个目的是提供了所述高效防治香蕉枯萎病的地衣
芽孢杆菌202的制备方法。
本发明还有一个目的是提供了所述高效防治香蕉枯萎病的地衣 芽孢杆菌202在防止香薫病灾害方面的多种应用。
本发明的技术方案是提供- -种高效防治香蕉枯萎病的地衣芽孢 杆菌202，所述地衣芽孢杆菌202，」feci"iAS Wc力ey7jYb27^;s 202， 于2007年7月2日在湖北武汉武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物 保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO: M207093。_
所述高效防治香蕉枯萎病的地衣芽孢杆菌202经平板对峙筛选 获得。
本发明还提供了所述的高效防治香蕉枯萎病的地衣芽孢杆菌202 的应用，其一是对香薰枯萎病菌4号小种的平板拮抗作用。
其二是防止香蕉植株主根部及维管束褐化或腐烂方面的应用。 其三是对番茄枯萎病菌、玉米弯孢叶斑病菌、胶孢炭疽病菌、棉 花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、小麦赤霉病菌或西瓜枯萎病菌的拮抗作 用。本发明的有益效果是
(1) 地衣芽孢杆菌202为植物内生菌，对香薫枯萎病菌抑制作 用强，对多种病原真菌具有拮抗作用，具有拮抗细菌在植物病害生物 防治中所起到的非常重要的作用，例如种类和数量众多，在植物根
际根内、根际大量存在；对病原菌的作用方式多种多样；繁殖速度 快等优点，本发明通过大量实验证明地衣芽孢杆菌202菌株能够有 效抑制香蕉枯萎病齒的生长，抑菌谱广，对棉花枯萎病菌、棉花黄萎 病菌、四瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌、弯孢叶斑病菌、香蕉炭疽病菌 等多种病原真菌都有拮抗作用；环境安全性好，具有良好的开发应用 前景，尤其是对香蕉枯萎病的防治具有重要意义。
(2) 本发明所述菌株培养条件简单、容易保存，易于工业化生 产，具有良好的开发应用前景。
图1地衣芽孢杆菌202对F0C4菌丝的抑制作用 图2接种30天后香蕉苗维管束症状 图3地衣芽孢杆菌202对番茄枯萎病菌的抑制作用 图4地衣芽孢杆菌202对胶胞炭疽菌的抑制作用 图5地衣芽孢杆菌202对香蕉炭疽病菌的抑制作用 图6地衣芽孢杆菌202对棉花枯萎病的抑制作用
具体实施例方式
下面结合具体实施例及附图对本发明作进一步详细的描述。 所述地衣芽孢杆菌202， T^cy27"s"c力e;7i/ara7is202，于2007年7月2日在湖北武汉武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心
保藏，保藏号为CCTCC NO: M207093。
实施例1地衣芽孢杆菌202对香薫枯萎病菌4号小种FOC4的平板
拮抗作用实验
在马铃薯蔗糖培养基PDA平板中央接入直径为5mm的FOC4菌 丝块，随后在等距离FOC4菌丝块的三角上放入直径为5mm的灭菌 滤纸片，每，滤纸片上接入地衣芽孢杆菌202培养液IOPL，以不接 地衣芽孢菌202培养液的平板为对照，25 28'C培养箱中培养5 7 天，测定抑菌圈直径，有附图1可见地衣芽孢杆菌202对香薫枯萎病 菌抑制作用强。
实施例2地衣芽孢杆菌202防止香蕉植株主根部及维管束褐化或腐 烂实验，温室盆栽防效。
选择株高15cm左右的巴西香薫幼苗，进行3种不同处理(1)
清水健株对照香蕉苗根部浸泡在无菌水中后直接移栽在营养钵中生 长；(2)将香蕉苗根部浸泡在地衣芽孢杆菌202培养液中30min后，
移栽至营养钵中，再将20mL的FOC4孢子悬浮液灌根接入营养钵土 壤中；(3)发病对照香蕉苗根部灌根接种20mLFOC4的孢子悬浮 液，不接种地衣芽孢杆菌202培养液。以上处理，每处理组20株。 之后26'C培养，分别于接种后10d、 20d、 30d调查发病率和病情指 数，三次重复。与对照相比，地衣芽孢杆菌202能有效地降低香蕉枯 萎病的发生程度，接种30d后效果最明显，根部及维管束褐化、腐烂 程度明显减轻，见附图2，其中A:清水接种对照，无褐变、无腐烂现象；D、 E:同时接种地衣芽孢杆菌202接种液和F0C4孢子悬浮液， 轻微褐变、无腐烂；F、 G、 H、 I:只接种F0C4孢子悬浮液，严重褐 变、腐烂。
实施例3地衣芽孢杆菌202对多种病原菌的拮抗作用
采用平板对峙法，测试地衣芽孢杆菌202对番茄枯萎病菌、玉米 弯孢叶斑病菌、胶孢炭疽病菌、棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、小麦 赤霉病菌、西瓜枯萎病菌等7种病原菌的拮抗效果，在PM平板中央 接入直径为5mm的靶标菌丝块，随后在等距离F0C4菌丝块的三角上 放入直径为5mm的灭菌滤纸片，每片滤纸片上接入地衣芽孢杆菌202 培养液IO化，以不接地衣芽孢菌202培养液的平板为对照，28'C培 养箱中培养5 7d，测定抑菌圈直径。地衣芽孢杆菌202抑菌谱较广， 对棉花枯萎病菌等多种病原真菌具有拮抗作用，见表1以及附图3。 从附图3中可看到地衣芽孢杆菌202对番茄枯萎病菌的抑制作用；附 图4中可观察到地衣芽孢杆菌202对胶胞炭疽菌的抑制作用；附图5 中可观察到地衣芽孢杆菌202对香蕉炭疽病菌的抑制作用；附图6中 可观察到地衣芽孢杆菌202对棉花枯萎病的抑制作用。
表l:地衣芽孢杆菌202对多种病原菌的抑制作用
病原菌
棉花枯萎病
棉花黄蒌病 西瓜枯蒌病
抑制半径
+++ +++ ++番茄枯萎病
++
弯孢叶斑病 香蕉炭疽病
+
++
+++
一无抑制作用
++:抑菌圈直径4 8mm
+:抑菌圈直径1 4mm +++:抑菌圈直径〉8mm
权利要求
1、一种地衣芽孢杆菌202，于2007年7月2日在湖北武汉武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NOM207093。
2、 权利要求1所述地衣芽孢杆菌202的制备方法，其特征在于 所述地衣芽孢杆菌202通过平板对峙筛选获得。
3、 权利要求1所述地衣芽孢杆菌202的应用，其特征在于对香 蕉枯蒌病菌4号小种的平板拮抗作用。
4、 权利要求1所述地衣芽孢杆菌202的应用，其特征在于防止 香蕉植株主根部及维管束褐化或腐烂方面的应用。
5、 权利要求1所述地衣芽孢杆菌202的应用，其特征在于对番 茄枯萎病菌、玉米弯孢叶斑病菌、胶孢炭疽病菌、棉花枯萎病菌、棉 花黄蒌病菌、小麦赤霉病菌或西瓜枯萎病菌的拮抗作用。
全文摘要
本发明公开了一种地衣芽孢杆菌202，Bacillus licheniformis202，于2007年7月2日在湖北武汉武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NOM207093。本发明同时公开了其制备方法以及应用，所述地衣芽孢杆菌202菌株经平板对峙、盆栽试验筛选获得，能够有效抑制香蕉枯萎病菌的生长，抑菌谱广，对棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、西瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌、弯孢叶斑病菌或香蕉炭疽病菌等多种病原真菌都有拮抗作用，环境安全性好，具有良好的开发应用前景。
文档编号C12N1/20GK101440356SQ20081018307
公开日2009年5月27日 申请日期2008年12月2日 优先权日2007年12月4日
发明者孙正祥, 王振中, 纪春艳 申请人:华南农业大学