专利名称：：一种高通量基因检测与分型的微孔板装置的制作方法
技术领域：
：本实用新型涉及一种装置，特别是一种高通量基因检测与分型的微孔板装置，属于生物
技术领域：
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背景技术：
：基因芯片是应用已知核酸序列作为探针与互补的靶核苷酸序列杂交，通过随后的信号检测进行定性与定量分析。基因芯片在一微小的基片表面集成了大量的分子识别探针，能够在同一时间内平行分析大量的基因，进行大信息量的筛选与检测分析。目前的临床检测与基因诊断很多都应用到基因芯片技术，可快速地检测出样品中成千上万个基因的表达情况。尽管基因芯片可同一时间平行分析大量基因，但是到目前为止，市面上商品化的基因检测芯片基本上是针对一人份的设计，检测人员也只限于每次用一张基因芯片检测一份样品的基因表达情况，每检测一份样品，就得把检测所需的步骤重新再执行一遍，耗时费力，并由于多个样品检测的繁复的步骤重复导致体力和精神消耗，失败和错误的检测时有发生。至今市面上还没有非常好的产品能用大量基因芯片同时对多份样品进行检测。
发明内容本实用新型的目的在于构建一个装置，能高通量地对多份样品进行基因检测与分型，达到省时省力省试剂，检测精确的目的。本实用新型的要点在于，该装置由多孔微孔板与嵌在微孔内的基因芯片组成，嵌在微孔内的基因芯片，含有针对基因检测和分型的特异性探针阵列；该基因芯片可以以尼龙膜，硅片，玻璃片，塑胶片为基质。优选基质为尼龙膜，易于切割，成本低，操作简单，结果背景低。多孔微孔板可以是各种孔型，不同孔数的微孔板，包括圆形，方形或其他孔型的12孔，24孔，48孔，％孔，384孔等；微孔板的选择可根据所需检测基因型的多少而定；根据所采用的不同孔型或不同孔数的微孔板的微孔大小，可将膜质芯片裁剪成相应大小并嵌入微孔内，构建成三维的基因芯片装置。在这种装置中，微孔板既作为多张芯片的载体，也作为基因检测的反应容器。本实用新型革新了传统基因检测的单一手段，将现有的二维结构的基因芯片与微孔板结合构建成三维的装置，充分结合了基因芯片一次能同时检测一份样品中多个基因的优点和利用多孔微孔板一次能对多份样品进行检测的优点，将基因芯片嵌在多孔微孔板内构造成高通量检测装置，具有操作简单，省时省力省试剂，减少交叉污染，检测精确，结果判断直观等优点。图1本实用新型装置示意图。图2左图基因芯片上基因矩阵的排列，右图单个基因矩阵中HPV探针与质控点的分布(包括不同基因型探针，+ve:定位质控点，-ve:阴性质控点，HB:样本DNA提取和PCR过程的阳性质控点)。图3HPV微孔板杂交检测示意图。具体实施方式结合附图和具体实施方式对本实用新型的装置作进一步说明，但不以任何形式限制本实用新型实施例一高通量基因检测与分型的微孔板装置的构建此例使用96方孔微孔板结合边长为6.5毫米方形尼龙膜为基质的基因芯片。尼龙膜剪裁成合适的大小，固定于点样仪上，根据所需矩阵的大小，点样仪可一次完成基因型片384-500片。设计所需的探针数目并将其排列成矩阵，在点样仪中设置全自动程序进行点样。为了便于探针的固定，探针在5'端进行了多聚T和氨基修饰，并在催化剂的作用下，通过共价键固定于尼龙膜上，其他位点将以化学作用灭活，在基因芯片3上形成基因矩阵4。经过化学处理和点样完毕的基因芯片3就已经可以使用，将其裁成6.5毫米方形并放入96方孔微孔板1的微孔2中。高通量基因检测与分型的微孔板装置就完成构建，其示意图可参见图1。每个微孔2的反应试剂用量只需100-200微升，此微孔板装置可同时检测96人份。实施例二构建好的装置在人类乳头瘤病毒(HPV)的基因检测与分型中的应用在此例中，沿用实施例一的装置形式，将此装置运用于人类乳头瘤病毒(HPV)的基因检测与分型中。HPV有100多种基因型，而其中40多种与子宫颈癌和尖锐湿疣有密切的关系，此例中选取29种常见的基因型，包括HPV6，11，16，18，26，31，33，35，39，40，42，43，44，45，51，52，53，54，55,56，57，58，59，66，67，68,69，73，82。探针的设计选择是位于HPVLl区域的多变区，设计针对29种基因型的特异性探针。此基因芯片，特异性探针与质控点在尼龙膜上排列为6x6矩阵，如图2左图所示，矩阵点与点之间间隔为600微米，其具体特异性探针和质控点的分布如图2右图所示。HPV微孔板杂交检测流程如图3所示。此例结合聚合酶链式反应(PCR)，将目标DNA以倍数扩增。在HPV基因组的L1区域设计通用引物，引物以生物素标记，扩增后，带有生物素标记的PCR产物经过碱变性，中和后可被相对应的固定于基因芯片上的特异性探针所捕获。杂交完成后，通过过氧化物酶标记的链霉亲和素及其特异性底物TMB(3，3',5,5'-四甲基联苯胺)的显色反应得出结果。对基因芯片结果进行图像采集与分析，在短时间内给出基因型别资料。利用此例中的装置可以同时检测96份不同的样品，与利用传统的分型杂交方法(罗氏HPV分型试剂盒)同样检测96份样品，在操作需时，试剂用量，精确度等方面作的比较如下表所示<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>权利要求1.一种高通量基因检测与分型的微孔板装置，其特征在于该装置由多孔微孔板与嵌在微孔内的基因芯片组成。2.如权利要求1所述的高通量基因检测与分型的微孔板装置，其特征在于所述的多孔微孔板可以是方孔板或圆孔板或其他孔型的板。3.如权利要求1或2所述的高通量基因检测与分型的微孔板装置，其特征在于所述的多孔微孔板可以是12孔或24孔或48孔或96孔或384孔微孔板。4.如权利要求1所述的高通量基因检测与分型的微孔板装置，其特征在于所述的基因芯片可以是以尼龙膜为基质，或以硅片为基质，或以玻璃片为基质，或以塑胶片为基质。5.如权利要求1所述的高通量基因检测与分型的微孔板装置，其特征在于所述的基因芯片以尼龙膜为基质。6.如权利要求1所述的高通量基因检测与分型的微孔板装置，其特征在于所述的基因芯片含有针对基因分析和分型的特异性探针阵列。专利摘要本实用新型涉及一种装置，尤其是一种高通量基因检测与分型的多孔微孔板装置；该实用新型的装置由多孔微孔板与嵌在微孔内的基因芯片组成，多孔微孔板可以是各种孔型，不同孔数的微孔板，包括圆形，方形或其他孔型的12孔，24孔，48孔，96孔，384孔等，嵌在微孔内的基因芯片可以是以尼龙膜，硅片，玻璃片或塑胶片为基质，含有针对基因分型的特异性探针阵列；本实用新型革新了传统基因检测的单一手段，充分结合了基因芯片一次能同时检测一份样品中多个基因的优点和利用多孔微孔板一次能对多份样品进行检测的优点，将基因芯片嵌在多孔微孔板内构造成高通量检测装置，具有操作简单，省时省力省试剂，减少交叉污染，检测精确，结果判断直观等优点。文档编号C12M1/00GK201280550SQ2008200947公开日2009年7月29日申请日期2008年5月15日优先权日2008年5月15日发明者季晟琳,戚穗坚,曾志雄,杨梦甦申请人:港龙生物技术(深圳)有限公司