专利名称：产生可用作抗癌药的蒽环类代谢物的遗传修饰菌株的制作方法
技术领域：
本发明涉及波赛链霉菌(Sti^ptomyces peucetius)的遗传修饰菌株及其用途，即 将这种菌株用于通过单批发酵来产生高滴度(titre)的蒽环类代谢物(如4'-表道诺红 菌素(4'-印idaunorubicin)、13-二氢-表道诺红菌素、4'-表-领地霉素和ε -紫红霉 酮)的混合物，该混合物可用在本发明的下游工艺中，来生产活性药用成分表阿霉素和/或 去甲柔毛霉素。
背景技术：
道诺霉素类化合物是一类由多种链霉菌(如波赛链霉菌、天兰淡红链霉菌 (S. coerulorubidus)、灰色链霉菌(S. griseus)、链霉菌 C5 (Streptomyces sp. C5)、波塞链 霉菌表灰变种(S. peucetius var. caesius)和分枝链霉菌(S. Bifurcus))产生的抗肿瘤抗 生素。这类抗肿瘤抗生素中的基本化合物为道诺霉素(DiMarco等人，1964)。自从1967年 和1971年起，道诺霉素及其14-羟基衍生物阿霉素分别开始被用于癌症化疗。道诺霉素尤 其被用于血癌的治疗，而阿霉素展示出了较宽的抗瘤谱。在目前已知被用于临床应用的所 有七种蒽环类药物中，有六种属于道诺霉素类。在这些化合物的生产工艺中，使用道诺红菌 素(daimorubicin)或其糖苷配基-道诺红菌素酮作为起始物料以进行化学合成。蒽环类化合物被用于癌症化疗中已超过三十年的时间。阿霉素由于具有非常宽的 抗瘤谱，因此目前仍为主要使用的细胞毒素类药物。表阿霉素是重要程度仅次于阿霉素的 抗肿瘤抗生素，现在表阿霉素变得更为重要了。道诺霉素类化合物可由通式I表述，
权利要求
一种微生物菌株，其以至少0.5g/升发酵液的滴度产生蒽环代谢物。
2.根据权利要求1所述的菌株，其中该菌株以至少0.Ig/升发酵液的滴度分别产生化 合物表道诺红菌素、13-二氢-表道诺红菌素、4'-表-领地霉素和ε-紫红霉酮。
3.根据权利要求1和2中任意一项所述的菌株，其中该菌株所产生的表道诺红菌素、 13-二氢-表道诺红菌素、4'-表-领地霉素和ε-紫红霉酮中的任意一种占全部蒽环代 谢物部分的至少10%。
4.根据权利要求1至3中任意一项所述的菌株，其中内源性道诺霉素代谢物的生物合 成被阻断。
5.根据权利要求1至4中任意一项所述的菌株，其中所述鲍霉素的生产被随机诱变阻断。
6.根据权利要求1至5中任意一项所述的菌株，其中所述菌株携带有编码4'-酮还 原酶和进行0-甲基化所需的基因。
7.根据权利要求6所述的菌株，其中所述基因为ekr8和rdmB。
8.根据权利要求1至7中任意一项所述的菌株，其中该菌株选自链霉菌 (Streptomyces)属。
9.根据权利要求1至8中任意一项所述的菌株，其中该菌株优选选自波赛链霉菌 (Streptomyces peucetius)0
10.根据权利要求1至9中任意一项所述的菌株，其中该菌株更优选选自波塞链霉菌表 灰变禾中(Streptomyces peucetius var. caesius)。
11.一种通过发酵来生产蒽环代谢物的方法，其通过利用根据权利要求1至10中任意 一项所述的生产菌株来进行发酵。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述蒽环代谢物选自表道诺霉素类化合物和 紫红霉酮。
13.根据权利要求11和12中任意一项所述的方法，其中所述蒽环代谢物优选选自表道 诺红菌素、13-二氢-表道诺红菌素、4'-表-领地霉素和ε-紫红霉酮。
14.根据权利要求11至13中任意一项所述的方法，其中通过在任何时间添加树脂，从 发酵液中吸附出表道诺霉素类化合物粗品和ε _紫红霉酮。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述树脂选自离子型吸附剂和非离子型吸附剂。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述树脂选自聚苯乙烯。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述树脂选自XAD-7和DiaionΗΡ-20。
18.根据权利要求14至17中任意一项所述的方法，其中所述树脂的添加量为1克/升至100克/升。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述树脂的优选添加量为15克/升至40克/升。全文摘要
本发明涉及一种微生物菌株，其以至少0.5g/升发酵液的滴度产生蒽环代谢物。
文档编号C12R1/46GK101978043SQ200880015212
公开日2011年2月16日 申请日期2008年4月29日 优先权日2007年5月8日
发明者克里斯蒂娜·于利洪科, 米夏埃尔·兰贝特 申请人:W.C.贺利氏有限公司