专利名称：一种固体发酵制备的双歧杆菌复合保护剂的制作方法
技术领域：
本发明属于微生物领域，涉及一种固体发酵制备的双歧杆菌复合保护剂。
背景技术：
以固体发酵工艺生产制备不同种双歧杆菌Bifidobacteria，均有文献报道。然而， 这类产品在室温下保存过程中，活菌死亡率高，保存12个月后，活菌含量下降98%以上，严 重影响了产品质量。因为单位重量的产品中，双歧杆菌活菌数量是评判产品质量优劣的关 键指标，活菌越多，产品质量越好。在冷藏的条件下，采用提高基质PH值、获得人工驯化的 耐氧菌株和耐酸菌株的技术，其液态活菌保藏期(活菌含量> lX106cfu/ml)最多可延至 15d 21d ；而采用冷冻保藏的方法，虽然可以显著延长液态活菌保藏期，但维持冷冻费用 较高，运输不方便，对冷冻保藏中心的依赖性过强。固体发酵前往培养基中或发酵后干燥前 往发酵物中添加双歧因子(低聚异麦芽糖等)和一些中草药提取物虽有延长活菌保存期的 作用，但效果不令人满意。专利文献中所公开的一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂 (CN1566329A)，是以淀粉、葡萄糖酸钙、低聚异麦芽糖和茶多酚为原料，是由王厚德发明的。 由于后来又发现了效果更好的本复合保护剂，经申请人同意，撤回了该申请。专利文献中公 开的一种高活性双歧杆菌干粉制剂的复合保护剂(CN1844352)等，虽然其对双歧杆菌的保 护有一定作用，但效果仍不理想。
发明内容
本发明的目的在于提供一种固体发酵制备的双歧杆菌复合保护剂，解决了双歧杆 菌固体发酵物及其功能性食品、医药制剂生产过程中存在的活菌含量低、保藏期短问题。本发明的构思是，发明者以两歧双歧杆菌Bifidobacterium bifidum和婴儿双歧 杆菌B. infantis为试验菌株，研究了 24种食品级单一保护剂对双歧杆菌固体发酵物存活 率的影响，初步筛选出16种抗氧化或抗干燥的单一保护剂。在此基础上，研究了不同的复 合制剂对双歧杆菌固体发酵物存活率的影响，筛选优化出6种优良的抗氧化和抗干燥的复 合保护剂。对6种复合保护剂进行双歧杆菌固体发酵物活菌保存期试验，进一步筛选出一 种既能抗氧化、抗干燥又耐贮藏的优良复合保护剂。具体地，本发明所说的一种固体发酵制 备的双歧杆菌复合保护剂配方组成为可溶性淀粉80% 88%、乳清蛋白粉2% 14%、低 聚果糖2% 8%。本发明是采用下列技术方案完成的(1)双歧杆菌菌种①两歧双歧杆菌B. bifidum②婴儿双歧杆菌B. infantis(2)双歧杆菌菌种培养与固体发酵①原种液体培养
采用双歧杆菌培养基[陈天寿，等，微生物培养基的制造与应用，第335页(1995 年)]。0. IMPa下灭菌30min，厌氧下速冷至42°C后，立即接种体积百分比5%的原种溶液。 在上述培养基上倒一层0. 5 1. Ocm厚度的无菌食用豆油，在厌氧下37°C培养48h后，终止 培养，于厌氧0 4°C下保存备用。②一级菌种培养取蛋白胨6.0 11. 0g，酵母膏3.0 6. 0g，乳糖8.0 11.0g，微量盐溶液30 45ml,(其中 CaCl2O. 1 0. 5g, MgSO4O. 2 0. 4g, K2HPO4O. 5 2. 0g, KH2PO4O. 5 2. Og, NaHC035. 0 18. OgjNaCl 1. 0 2. 0g，蒸溜水 1000ml)，蒸溜水 1000ml，pH6. 8 7. 2，以此 作为一级菌种培养基。0. IMPa下灭菌45min，灌入无色透明的磨口细口玻璃瓶，容积500ml， 立既在上述培养基上倒一层0. 5cm左右厚的无菌食用豆油，使液面离瓶口 2. 6 3. Ocm0 冷至40°C，立即接种5%原种培养物，以磨口瓶盖封口，并于37 38°C恒温培养箱中培养 48 96h，每隔3h摇动lmin。细胞数达2cfu/ml时，终止培养，在厌氧条件下保存备用。③二级菌种培养培养基同一级菌种，培养容器为厌氧种子罐，接入一级菌种量为10%。待细胞数达 2. 0亿cfu/ml (约24 48h)时，终止培养。④固体发酵取脱脂大豆粉21. 0 % 38. 5 %，麸皮46. 0 % 66. 0 %，小麦全粉8. 0 % 13.0%，低聚异麦芽糖1. 5% 3.0%，酵母膏粉0. 0.2%，总重量100%。另外加入 VB1 1. 0 3. Omg/kg, VB22. 0 5. 0mg/kg,生物素0· 6 2. 2mg/kg,用自来水溶解后再加入。 加固形物总重的30 50%的自来水，搅拌均勻，在0. IMPa下灭菌120min，冷却至40°C，在 无菌条件下接种20 % 30 %的二级菌种。将培养物包装置厌氧固体发酵罐中，于37°C下厌 氧培养24 48h至湿基细胞数达1. 5X10ncfu/g以上后，终止培养，得固体发酵物。(3)本发明复合保护剂的制作①组成 可溶性淀粉80 % 88 %，乳清蛋白粉2 0Z0 14%，低聚果糖2 % 8 %。优选为淀粉86%，乳清蛋白粉8%，低聚果糖6%。②原料要求各原料均为食品级。③制作按组成比例称取各原料可溶性淀粉、乳清蛋白粉和低聚果糖，合并，在105°C下干 热灭菌60min，冷却后在无菌条件下粉碎并过120目筛。在不锈钢药物搅拌机中搅勻，装入 内衬无毒塑料薄膜的编织袋中，备用。(4)本发明复合保护剂的使用方法①本发明复合保护剂加入时间不同种双歧杆菌固体发酵结束后，干燥开始前加 入。将其与固体发酵物在药物或食品搅拌器中搅勻后，立即进行冻干，真空干燥或电热鼓风 干燥处理，至物料含水≤ 6. 0%，终止干燥。②本发明复合保护剂加入量该复合保护剂与双歧杆菌固体发酵物按重量比 1 4 10加入。优选为1 6加入。不同种双歧杆菌固体发酵物中加入本发明复合保护剂后，干燥过程中和保存期内活菌死亡率下降，有利于保证产品质量。具体实旅方式以下通过试验例来进一步阐述本发明所述复合保护剂的有效效果，这些试验例包 括了本发明复合保护剂对延长双歧杆菌活菌保存期的效果的试验，本发明复合保护剂加入 双歧杆菌固体发酵物中的时间试验及加入量试验。试验例1本发明复合保护剂延长双歧杆菌活菌保存期的效果试验(1)试验材料复合保护剂A 可溶性淀粉86 %，乳清蛋白粉8 %，低聚果糖6 %。复合保护剂B 可溶性淀粉80%，乳清蛋白粉2%，低聚果糖8%。对照组不加任何保护剂。试验菌种两歧双歧杆菌B. bifidum,婴儿双歧杆菌B. Infantis02种双歧杆菌固体发酵物。(2)试验方法2种双歧杆菌固体发酵结束后，立即将各复合保护剂分别拌入2种发酵物中。加入 量100g不同复合保护剂分别加入到600g 2种固体发酵物中。拌勻后立即真空干燥，控制 料温< 42°C至物料含水量< 6 %，然后装入0号硬胶囊置26 °C恒温条件下保存，定期检测双 歧杆菌活菌数。试验结果见表1。表1固体发酵物保存期内活菌数目(保存温度26°C，X ±SD，η = 12)
权利要求
一种固体发酵制备的双歧杆菌复合保护剂，其特征是，它由下述原料组成可溶性淀粉80％～88％、乳清蛋白粉2％～14％、低聚果糖2％～8％。
2.根据权利要求1所述的复合保护剂，其特征是配方组成为可溶性淀粉86%、乳清 蛋白粉8%、低聚果糖6%。
全文摘要
一种固体发酵制备的双歧杆菌复合保护剂，属于微生物领域，涉及一种固体发酵制备的双歧杆菌复合保护剂，它由可溶性淀粉、乳清蛋白粉和低聚果糖按一定重量配比制备而成。本发明制剂是在双歧杆菌固体发酵结束后、干燥开始前按比例加入的。该制剂具有延长固体发酵制备的双歧杆菌的保存期和降低干燥过程中活菌死亡率的功能。
文档编号C12N1/20GK101988039SQ200910063448
公开日2011年3月23日 申请日期2009年8月6日 优先权日2009年8月6日
发明者王厚德 申请人:喻超;王厚德