一种净化水体的微生物制剂的制备方法

专利名称：一种净化水体的微生物制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及水体污染控制技术领域，特别涉及一种高效去除多种污染物的 净化水体的微生物制剂的制备方法。
背景技术：
目前，净化水体的方法主要有物理、化学和生物方法。物理方法效果显 著，但劳动量大，见效时间较长，使用比较复杂，费用较高；化学药物虽然 见效快，但成本高，毒副作用较大，且在水体中有一定的残留，长期使用对 于水体以及周围生态环境会造成污染；生物方法毒副作用小，利于恢复生态 环境，因此备受人们的关注。但是目前应用于水体净化的菌种作用效果不稳 定，难以对具有多种污染物的水体进行净化。从环境中筛选净化多种污染物、 适于多种水体环境且净化效果稳定的菌株是当前生物修复技术的一大难题。

发明内容
本发明经过大量的试验研究工作，发现了一种制备性能优良、高效低毒、 操作简便且适用范围较广的净化水体的微生物制剂的制备方法。 本发明的目的是提供一种净化水体的微生物制剂的制备方法。 本发明通过以下技术方案实现
1、 取水体；采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，pH值为8.2 8.4，用涂布平 板分离法对水体中的细菌进行分离；并对所形成的单菌落进行纯化，连续纯 化3次。
2、 对步骤1纯化后的菌株进行染色观察，选取产荚膜，有异染粒，革兰氏染色阴性细菌，并通过对废水COD、 N、 P去除率试验，以及含有悬浮物 和偶氮染料废水的絮凝与脱色试验选取净化水体效果最好的两种菌株。
3、 将步骤2所得两菌株分别接入肉汤液体培养基，放入摇床，在100~120 r-min-1， 35 38。C下培养10~24h，制得菌体浓度约为lO^mr1的菌悬液。
4、 将步骤3所得两种菌悬液混合均匀，即得到菌体浓度约为1(^ml"的 微生物制剂。
为了更好的效果，步骤3优选120rmin"， 37匸下培养24h。 本发明产品使用时，先将本发明微生物制剂稀释100倍得稀释菌悬液，
在所需净化的水体中，按每吨水加入20 P 1稀释菌悬液即可。
本发明产品可应用于养殖水体，自然水体，以及生活、农业或工业废水等。 本发明从水体中分离纯化选取的菌株具有以下特性特征假单胞菌属，
杆状，革兰氏染色阴性，产荚膜，细胞内有异染粒和聚P-羟基丁酸。 本发明的优点和积极效果
1、 本发明产品能去除多种污染物，可显著降低水体中COD、可溶性磷、 氨氮和硝态氮含量，从而控制水体藻类的发生，防止水华的出现，
2、 本发明产品具有强大的絮凝、脱色效果。
3、 本发明产品具有高效低毒的特点，应用于养殖水体时可提高水产品的 产量和质量，增加水产养殖的经济和社会效益；应用于自然水体可防治水体 污染、改善水域生态环境。
4、 本发明产品使用方便。本发明产品为天然微生物，见效较快，使用方 便简单，对水环境无副作用。
、 本发明产品适于各种水体环境，可应用于养殖水体，自然水体，及生活、农业及工业废水等。
具体实施例方式
为了进一步了解本发明，下面以实施例作进一步说明，但并不限制本发明。
实施例1 制备微生物制剂
制备牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，pH值为8.2 8.4，备用； 取天津市西青区南河镇南河村鱼池及天津市东丽区华明镇永和村虾池的 上覆水作为分离纯化菌株的水体，备用。
用涂布平板分离法对水体中的细菌进行分离。并对单菌落连续纯化3次。 进行染色观察，选取产荚膜，有异染粒，革兰氏染色阴性细菌。之后通 过对废水COD、 N、 P去除率试验，以及含有悬浮物和偶氮染料废水的絮凝 与脱色试验，从上述所选取的细菌中选取水体净化效果最好的两种菌株。
将两菌株分别接入肉汤液体培养基，放入摇床，在120rmin'1， 37"C下培 养24h，得菌体浓度约为10tml"的菌悬液。
将所得两种菌悬液均匀混合在一起，即得到菌体浓度约为lf^mr1的微生 物制剂。
实验例l COD去除率试验 取试验水体四种
1、 自制葡萄糖废水取250mg蔗糖、48mg氯化铵、2mg磷酸二氢钾， 用蒸馏水定容至500ml;
2、 生活污水取自食堂洗碗槽内废水500ml;
3、 养殖水体取天津市西青区南河镇南河村鱼池上覆水500ml4、天津市东丽区华明镇永和村虾池的上覆水500ml。
将实施例1所得微生物制剂稀释IOO倍，在上述每种废水中分别加入1^1， 之后于24、 48、 72、 96h测定COD含量，结果显示微生物制剂在48h对四 种废水的COD去除率均在80%以上。
实验例2 氮、磷含量去除率试验
取40cm (长)x30cm (宽)x35cm (高)鱼缸6个，分别装入从天津市 西青区南河镇南河村鱼池和天津市东丽区华明镇永和村虾池取来底泥和上覆 水，约4cm厚，再分别缓慢注入各自的上覆水至高度为20cm。鱼缸四周用黑 布包围，随机排列在窗口，在自然光和室温下培养5个月。每月将实施例1 所得微生物制剂稀释100倍的菌悬液20^1注入上覆水中，每组设2个样本， 并设对照。每月采上覆水测定可溶性磷、氨态氮及硝态氮含量，共测5次。
实验结果显示微生物制剂可明显降低上覆水可溶性磷、氨氮和硝硝态 氮含量。与对照相比，东丽池塘上覆水可溶性磷含量5个月下降了 87.43%， 西青池塘下降了 59.28%。氨氮含量东丽池塘比对照下降了 72.83%,西青池塘 下降了 59.28%。硝态氮含量东丽池塘比对照下降了 49.61%，西青池塘下降了 40.65% 。
实验例3 絮凝率试验
1、 不同温度下微生物制剂的絮凝效果
分别将10^1微生物制剂投加于6个装有4g^的高岭土悬浊液100ml的三 角瓶中，分别加热至10。C、 15°C、 20°C、 25°C、 30°C、 35°C，静置30min， 测定絮凝率，结果表明在2(TC时絮凝效果最好，絮凝率可达87.62%;
2、 不同浓度的微生物制剂用量的絮凝效果-取6个装有4g/L的高岭土悬浊液100ml的三角瓶中，分别加入1^1 、 5pl、 IO(J 、 15(^1 、 20^1 (lO^mr1)稀释IOO倍菌悬液，培养30min，测定絮凝率， 结果表明加入10nl微生物制剂，30min后，絮凝率达86.25%。
3、不时间微生物制剂的絮凝效果
取5个装有4g/L的高岭土悬浊液100ml的三角瓶中，加入1(^1 (lOSnl") 稀释100倍菌悬液，分别静置15min、 20min、 30 min、 40 min、 50min测定 絮凝率，结果表明微生物制剂在絮凝30min即可达到良好絮凝效果，絮凝率 为88%。
实验例4脱色试验
对黑墨水和偶氮染料废水的絮凝和脱色试验各取50ml黑墨水和偶氮染料 废水于小烧杯中，分别加入lOpl (1(^ml—1)稀释100倍菌悬液，同时做空白 试验(CK)， 24h后观察，发现黑墨水已絮凝沉淀，上覆水变清；偶氮染料废水 已脱色。
权利要求
1、一种净化水体的微生物制剂的制备方法，其特征在于包括步骤1)取水体；采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，pH值为8.2～8.4，用涂布平板分离法对水体中的细菌进行分离；并对所形成的单菌落进行纯化，连续纯化3次；2)对步骤1)纯化后的菌株进行染色观察，选取产荚膜，有异染粒，革兰氏染色阴性细菌，并通过对废水COD、N、P去除率试验，以及含有悬浮物和偶氮染料废水的絮凝与脱色试验选取净化水体效果最好的两种菌株；3)将步骤2)所得两菌株分别接入肉汤液体培养基，放入摇床，在100～120r·min-1，35～38℃下培养10～24h，制得菌体浓度约为108·ml-1的菌悬液；4)将步骤3)所得两种菌悬液混合均匀，即得到菌体浓度约为108·ml-1的微生物制剂。
2、 根据权利要求1所述的净化水体的微生物制剂的制备方法，其特征在 于步骤3)中将两菌株分别接入肉汤液体培养基培养时，培养条件为在120 rmin-1， 37。C下培养24h。
全文摘要
本发明涉及一种净化水体的微生物制剂的制备方法，步骤包括从水体中分离纯化菌株，并从所得菌株中筛选两种菌株，将两菌株分别接入肉汤液体培养基在所述条件下培养10～24h，制得菌体浓度约为10⁸·ml^-1的菌悬液，将所得两种菌悬液混合，即得到菌体浓度约为10⁸·ml^-1的微生物制剂；本发明产品具有絮凝、脱色效果好速度快、对水中COD、可溶性磷、氨氮及硝态氮去除率高等特点；且制备成本低，使用方便，可广泛应用于河流、水库、池塘、湖泊以及其他污水的生物修复。
文档编号C12N1/20GK101643715SQ200910070250
公开日2010年2月10日 申请日期2009年8月27日 优先权日2009年8月27日
发明者卢显芝, 王永刚, 田秀平, 郝建朝 申请人:天津农学院