含卤素安莎类抗生素生物合成基因簇的制作方法

专利名称：含卤素安莎类抗生素生物合成基因簇的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，涉及一种含卤素安莎类抗生素及其生物合成基因，特 别涉及一种链霉菌含卤素安莎类抗生素生物合成基因簇。
背景技术：
放线菌一直是获得微生物天然产物的重要微生物类群，传统的活性筛选，需要经 过发酵、分离提取、纯化及结构鉴定等繁杂过程，不仅工作量大且具有盲目性。近年来对多株代表性放线菌基因组的序列分析显示了其中次级代谢产物生物合 成基因的多样性。为了充分利用这些潜在的新活性化合物生物合成途径，基于序列相似性 指导的基因筛选日益成为微生物基因组探矿的重要策略。除了参与天然产物分子主要骨架 的次级代谢产物生物合成基因簇外，与之相关的其它后修饰酶基因也可作为指标基因来确 定菌株是否有产生某特定类型天然产物的能力。卤代酶参与了卤化物的生物合成过程，因 此从筛选卤代酶基因入手，有可能发现新的含卤素天然产物的生物合成基因簇。迄今为止已经从各种生物，包括细菌、真菌、各类动植物中分离出4000多种卤化 物，其中大部分由海洋生物产生。海洋是最大的生物有机卤素来源，已经发现的含卤素的新 抗生素如salinosporamide A就来源于海洋微生物。已有研究表明海洋放线菌的卤化酶 基因检出率高于陆地来源的放线菌，且其氨基酸序列与已知卤化酶明显不同，暗示其产生 新型卤代产物的潜力。从负责抗生素卤化的卤代酶基因序列和催化机理研究出发，有可能 从海洋微生物中发现新型的卤代酶，进而获得与其连锁或与之相关的抗生素生物合成基因 簇，为该类海洋微生物天然产物的研究开发奠定基础。

发明内容
本发明的目的在于提供一种含卤代安莎类抗生素生物合成基因簇的白浅灰链霉 菌Mi^ptomyces albogriseolus sp. 1-36，其菌种保藏号为(CGMCC NO. 3406)，保藏日期为 2009年11月5日，保藏地点为中国北京，保藏机构为中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心(CGMCC)。本发明的另一目的在于提供一个新的卤代安莎类抗生素生物合成基因簇，其基因 序列为SEQ ID NOl。本发明所提供的核苷酸序列或部分核苷酸序列，可利用聚合酶链式反应(PCR)的 方法或包含本发明序列的DNA作为探针进行Southern杂交的方法从其他微生物中得到卤 代安莎类抗生素生物合成基因簇。本发明还提供了从微生物基因组文库中分离卤代安莎类抗生素生物合成基因的 方法。本发明提供的核苷酸序列或多个序列可以与载体序列融合而得到重组序列和相 应的DNA分子。包含本发明所提供核苷酸序列或至少部分序列的克隆DNA可用来从链霉菌卤代安莎类抗生素基因组文库中定位更多的文库黏粒。这些文库黏粒至少包含本发明中的部分 序列，也包含有链霉菌卤代安莎类抗生素基因簇旁邻近区域未克隆的DNA。包含本发明的序列或至少部分序列的克隆基因可以通过合适的表达系统在外源 宿主中表达以得到对应的产物。这些外源宿主包括链霉菌、大肠杆菌、芽孢杆菌、酵母、植物 以及动物细胞等。本发明包含的氨基酸序列或基因序列可以通过转化、转导、接合转移等方法转入 其它安莎类抗生素产生菌中，以产生该种卤代安莎类抗生素的衍生物。本发明是通过以下技术方案实现的。步骤一，卤代酶基因克隆用针对卤代酶合成基因设计的引物对待选菌株DNA进行PCR扩增，将阳性扩增的 片段进行测序，并提交NCBI数据库进行比对，确证其为卤代酶基因片段。分析结果显示，该 I^f代酶基因与菌株 Actinosynnema pretiosum subsp. auranticum 中 I^f代酶基因 asml2 的 同源性为58.9%。步骤二，安莎类抗生素基因簇筛选用针对安莎类抗生素生物合成前体3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)合成酶和聚酮 合酶PKS基因设计的兼并引物对待选菌株DNA进行PCR扩增，将阳性扩增的片段进行测序， 并提交数据库进行比对，确定该菌株基因组中具有安莎类生物合成基因簇。步骤三，克隆完整的安莎类抗生素基因簇构建菌株基因组的R)smid文库；利用步骤一和二使用的引物对基因组文库进行 筛选，确定外源插入序列携带有安莎类抗生素生物合成基因沈个。对上述R)smid 两端进行测序和酶切分析，确定^C9、26H8、5G2三个质粒的外源插入片段的叠加能够完整 覆盖菌株1-36卤代安莎类抗生素的生物合成基因簇。步骤四，卤代安莎类抗生素生物合成基因簇的注释对步骤三获得的R)smid的全序列进行测序分析，拼接获得完整的卤代安 莎类抗生素生物合成基因簇。利用专门针对高GC微生物设计的在线ORF预测工具 FramePlot3. Obeta对生物合成基因簇进行分析，获得全部阅读框的信息。对基因簇的序列 分析标明，其中含有31个开放阅读框。它们分别编码5个PKS基因，1个酰胺合酶基因，1 个卤代酶基因，8个AHBA合酶基因，其余推测为PKS后修饰和调控基因。通过Blast程序与NCBI数据库中序列进行同源性比较及保守序列分析，ORFl 基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei中的RifA有较高的同源性，一致性为 70%，相似性为78%，推测该基因可能编码一个I型聚酮合酶；0RF2基因产物显示与 Amycolatopsismediterranei中的RifB有较高的同源性，一致性为72%，相似性为79%，推 测该基因可能编码一个I型聚酮合酶；0RF3基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei 中的RifB有较高的同源性，一致性为65%，相似性为75%，推测该基因可能编码一个I型 聚酮合酶；0RF4基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei中的RifD有较高的同源 性，一致性为67%，相似性为77%，推测该基因可能编码一个I型聚酮合酶；0RF5基因产 物显示与Amycolatopsis mediterranei中的RifE有较高的同源性，一致性为70%，相似 性为78%，推测该基因可能编码一个I型聚酮合酶；0RF6基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei中的RifF有较高的同源性，一致性为64%，相似性为75%，推测该基因可能编码一个酉先胺合酶；0RF7基因产物显示与Actinosynnema pretiosum subsp. Auranticum 中的卤代酶有较高的同源性，一致性为61%，相似性为71%，推测该基因可能编码一个卤 代酶；0RF8基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei中的RifG有较高的同源性， 一致性为78%，相似性为84%，推测该基因可能编码一个aminodehydroquinate合成酶； 0RF9基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei中的RifH有较高的同源性，一致性为 62%，相似性为70%，推测该基因可能编码一个aminoDAHP合成酶；ORFlO基因产物显示与 Amycolatopsismediterranei中的Riff有较高的同源性，一致性为70%，相似性为77%，推 测该基因可能编码一个shikimate/quinate脱氢酶；ORFll基因产物显示与Sti^ptomyces sp. 4353中的AHBA合成酶有较高的同源性，一致性为77%，相似性为86%，推测该基因 可能编码一个AHBA合成酶；0RF12基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei中的 RifL有较高的同源性，一致性为68%，相似性为76%，推测该基因可能编码一个氧化还原 酶；0RF13基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei中的RifM有较高的同源性，一 致性为77 %，相似性为83 %，推测该基因可能编码一个磷酸化酶；0RF14基因产物显示与 Amycolatopsismediterranei中的RifN有较高的同源性，一致性为65%，相似性为75%， 推测该基因可能编码一个AHBA激酶；0RF15基因产物显示与Mlinispora arenicola CNS-205中的FAD依赖的单氧化酶有较高的同源性，一致性为69 %，相似性为76 %，推 测该基因可能编码一个FAD依赖的单氧化酶；0RF16基因产物显示与Saccharopolyspom erythraea NRRL 2338中的铁氧还蛋白有较高的同源性，一致性为56%，相似性为71%，推 测该基因可能编码一个铁氧还蛋白；0RF17基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei 中的RifR有较高的同源性，一致性为64%，相似性为80%，推测该基因可能编码一个硫 酯酶；0RF18基因产物显示与Amycolatopsis balhimycina中的反向转运体有较高的同源 性，一致性为65%，相似性为79%，推测该基因可能编码一个反向转运体；0RF19基因产物 显示与Sti^ptomyces griseus subsp. griseus NBRC 13350中的憐酸酉旨醇有较高的同源 性，一致性为69%，相似性为76%，推测该基因可能编码一个磷酸酯酶；0RF20基因产物 显示与Amycolatopsis mediterranei中的调控蛋白有较高的同源性，一致性为44 %，相 似性为55%，推测该基因可能编码一个调控蛋白；0RF21基因产物显示与Amycolatopsis mediterranei中的aminodehydroquinate脱水酶有较高的同源性，一致性为84%，相似性 为92%，推测该基因可能编码一个aminodehydroquinate脱水酶；0RF22基因产物显示与 Streptomycesrochei中的DNA引物酶/解旋酶有较高的同源性，一致性为67%，相似性为 76%，推测该基因可能编码一个DNA引物酶/解旋酶；0RF23基因产物显示与Str印tomyces avermitilisMA-4680中的DNA转化酶/重组酶有较高的同源性，一致性为88%，相似性为 92%，推测该基因可能编码一个DNA转化酶/重组酶；0RF24基因产物显示与Rhodococcus sp. RHAl中的NADHl脱氢酶有较高的同源性，一致性为53%，相似性为67%，推测该基因 可能编码一个NADPH脱氢酶；0RF25基因产物显示与&ilinispora arenicola CNS-205中 的FAD依赖的吡啶二硫核苷酸氧化还原酶有较高的同源性，一致性为59%，相似性为70%， 推测该基因可能编码一个FAD依赖的吡啶二硫核苷酸氧化还原酶；0RF26基因产物显示与 Streptomyces griseus中的转录调控子有较高的同源性，一致性为幻%，相似性为93%，推测 该基因可能编码一个转录调控子；0RF27基因产物显示与Frankia sp. CcI3中的药物抗性转 运蛋白有较高的同源性，一致性为59%，相似性为72%，推测该基因可能编码一个药物抗性转运蛋白；0RI^8基因产物显示与Streptomyces griseus中的甲基转移酶有较高的同源性， 一致性为66 %，相似性为78 %，推测该基因可能编码一个甲基转移酶；0RI^9基因产物显示与 Streptomyces tenjimariensis中的转座酶有较高的同源性，一致性为85%，相似性为90%， 推测该基因可能编码一个转座酶；0RF30基因产物显示与Streptomyces tenjimariensis中 的转座酶有较高的同源性，一致性为82%，相似性为86%，推测该基因可能编码一个转座酶； 0RF31基因产物显示与Streptomyces rochei中的DNA引物酶/解旋酶有较高的同源性，一致 性为85%，相似性为96%，推测该基因可能编码一个DNA引物酶/解旋酶。本发明所提供的包含卤代安莎类抗生素生物合成相关的所有基因和蛋白信息，可 用于生产安莎类抗生素，并有助于阐明与理解安莎类抗生素家族生物合成的分子机理，从 而为进一步利用基因工程手段改造提供理论基础与材料。本发明所提供的基因及其编码的 蛋白质，也可以用来查找和发展可用于医药、工业、农业的化合物或蛋白。


图 1 1-36 卤代酶基因与菌株 Actinosynnema pretiosum subsp. auranticum 中卤 代酶基因asml2的同源性比较。图2覆盖菌株1-36卤代安莎类抗生素生物合成基因簇的重叠R)smid。图中29C9J6H8、5G2三个质粒的外源插入片段的叠加覆盖了 1_36卤代安莎类抗 生素生物合成基因簇的81061碱基对。图3卤代安莎类抗生素生物合成基因簇。图中显示了 1-36卤代安莎类抗生素生物合成基因簇31个开放阅读框的转录方向 及排列方式。其中ORFl 5为聚酮合酶(H(S)基因，6为氨基合成酶基因，7为卤化酶基因， 8 14及17为AHB A合成酶基因，15、16及18 31为调控和修饰基因。
具体实施例方式以下实例将结合

对本发明作进一步说明。本实施例在以本发明技术方案 为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实 施例。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建 议的条件。以下实施例对本发明而言，仅为说明性，而非限制性。实施例步骤一，提取海洋放线菌的DNA用500 μ 1溶菌酶溶液悬浮5mg菌丝体，在37°C温育直至细胞成为半透明状。加入 50%体积的2% SDS，混合振荡约Imin直到溶液的粘度显著下降，然后加入1倍体积的中性 苯酚/氯仿，混合振荡均勻后，12000rpm离心5min，移取上清液，弃去白色中间层。用中性 苯酚/氯仿重复抽提直至看不见(或非常少)中间层为止，最后，加入0. 1倍体积的3mol/ L醋酸钠(自然pH)和1倍体积的异丙醇，上下颠倒混合直至出现白色絮状DNA沉淀团，用 玻棒挑出DNA沉淀团，用70%乙醇洗涤DNA沉淀团两次，最后弃去所有上清液，待乙醇挥发 后，用一定量TE缓冲液溶解DNA沉淀待用。步骤二，卤代酶基因的克隆及测序分析以备选菌株总DNA为PCR模板，禾Ij 用弓|物HalA:5，-TTCCCSCGSTACCASATCGGSGAG-3‘ ；HalB :5，-GSGGGATSWMCCAGffACCASCC-3‘筛选含卤代酶 基因的菌株。20μ L扩增反应体系为包含9μ LddH20、2y L10XPCR Buffer、1 μ LDMS0、引物 HalA/HalB (20 μ Μ)各 1 μ L、4 μ LdNTP (each2. 5mM)、1 μ LTaq 酶(lunit/ μ L)、1 μ L 总 DNA。 PCR扩增条件为95°C预变性:3min，然后94°C变性lmin，55°C退火lmin，72°C延伸Imin共 30个循环，再72°C后延伸lOmin。将阳性扩增的片段进行测序，并提交数据库进行比对，确 证其为卤代酶基因片段。步骤三，PKS基因的克隆及测序分析以备选菌株总DNA为PCR模板，禾Ij用PKS基因检测引物TKSA 5，-GCSATGGAYCCSCARCARCGSVT-3‘ ；PKSB :5，-GTSCCSGTSCCRTGSSCYTCSAC-3，筛选含 PKS 基 因的菌株。20μ L扩增反应体系为包含9μ LddH20、2y L10XPCR Buffer、1 μ LDMS0、引物 PKSA/PKSB (20 μ Μ)各 1 μ L、4 μ LdNTP (each 2. 5mM)、1 μ LTaq 酶(lunit/ μ L)、1 μ L 总 DNA。 PCR扩增条件为95°C预变性3min，然后94°C变性lmin，55°C退火lmin，72°C延伸Imin共 30个循环，再72°C后延伸lOmin。将阳性扩增的片段进行测序，并提交数据库进行比对，确 证其为PKS基因片段。步骤四，AHBA基因的克隆及测序分析以备选菌株总DNA为PCR模板，利用AHBA基因检测引物AHBAF 5，-CCSGCCTTCACCTTCATCTCCTC-3，；AHBARl :5’ -TCATCAGCTTGCCGTTCTGGAAG-3，或AHBAR2 5，-AYCCGGAACATSGCCATGTAGTG-3，筛选含AHBA基因的菌株。20 μ L扩增反应体系为包含 9 μ LddH20、2 μ LlO XPCR Buffer、1 μ LDMSO、弓丨物 AHBAF/AHBAR1 或AHBAR2 (20 μ Μ)各 1 μ L、 4 μ LdNTP (each 2. 5mM)、1 μ L Taq 酶(lunit/ μ L)、1 μ L 总 DNA。PCR 扩增条件为95°C预 变性3min，然后94°C变性lmin，55°C退火lmin，72°C延伸Imin共30个循环，再72°C后延伸 IOmin0将阳性扩增的片段进行测序，并提交数据库进行比对，确证其为AHBA基因片段。步 骤五，从菌株基因组的i^osmid文库中克隆完整的安莎类抗生素基因簇提取了菌株基因组R)smid文库混合质粒(48个克隆混合成一管提取混合质粒)， 以混合质粒为模板，用针对1-36菌株中的AHBA合酶基因和卤代酶基因设计的特异性引物 进行PCR筛选。定位到各个96孔板后，再进行菌落PCR定位到克隆。筛选到阳性克隆后，提 取质粒，并对各个质粒进行酶切，分析其酶切图谱，选取合适的克隆送出测序。测序完成后， 根据已经得到的基因信息，设计引物，继续筛选包含其上下游基因序列的克隆，然后再挑选 合适的克隆送出测序，直至获得的序列信息覆盖完整的安莎类抗生素基因簇。序列表<110>国家海洋局第三海洋研究所<120>含卤素安莎类抗生素生物合成基因簇<130>invention<160>32<170>PatentIn version 3. 3<210>1<211>81061<212>DNA<213> 白浅灰链霉菌 1-36 (Streptomyces albogriseolus sp. 1-36)
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Leu／yr HiS Pro Asp Pro Asp Asn Pro Gly／hr／hr／yr Val Arg Gh[2146]859095[2147] Gly Ala Phe Leu HiS Asp Ala Ala Arg Phe Asp Ala Ala Phe Phe Gly[2148]100105110[2149] Ile Set Pro Arg Gh Ala Leu Ala Met Asp Pro Gin Gin Arg Gin Leu[2150]115120125[215]] Leu Gh Val Set／rp Gh Ala Leu Gh Arg Ala Gly Ile Asp Pro HiS[2152]130135140[2153] Set Val Arg Gly Set Asp Ile Gly Val Phe Ala Gly Met Val HiS Gin[2154] 145150155160[2155] Asp／yr Ala Pro Asp Leu Set Gly HiS Gh Asp Phe Leu Set Leu 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[2261] [2262]
权利要求
1.一种白浅灰链霉菌Mi^ptomyces albogriseolus sp. 1-36，微生物菌种保藏号为 (CGMCCN0. 3406)，其特征在于，其基因组含有一种卤代的安莎类抗生素合成基因簇。
2.一种卤代的安莎类抗生素合成基因簇，其特征在于，其基因序列为SEQ ID NO 1。
3.如权利要求2所述的一种卤代的抗生素合成基因簇，其特征在于，该基因簇全长为 81061碱基对，含有31个开放阅读框，组成包括1)。RFl位于基因簇的核苷酸序列第157一16584碱基处，长度1643l碱基对，编码5476个氨基酸；2)。RF2位于基因簇的核苷酸序列第1662卜27498碱基处，长度1088l碱基对，编码3626个氨基酸；3)。RF3位于基因簇的核苷酸序列第27535—38376碱基处，长度10845碱基对，编码3614个氨基酸；4)。RF4位于基因簇的核苷酸序列第3847卜44089碱基处，长度5622碱基对，编码1873个氨基酸；5)。RF5位于基因簇的核苷酸序列第44143—54915碱基处，长度10776碱基对，编码3591个氨基酸；6)。RF6位于基因簇的核苷酸序列第54953—55729碱基处，长度780碱基对，编码259个氨基酸；7)。RF7位于基因簇的核苷酸序列第55930—57177碱基处，长度125l碱基对，编码416个氨基酸；8)。RF8位于基因簇的核苷酸序列第57190—58257碱基处，长度107l碱基对，编码356个氨基酸；9)。RF9位于基因簇的核苷酸序列第58257—5959l碱基处，长度1338碱基对，编码445个氨基酸；lo)。RFlo位于基因簇的核苷酸序列第5959卜60400碱基处，长度813碱基对，编码270个氨基酸；11)。RFll位于基因簇的核苷酸序列第60432—61682碱基处，长度1254碱基对，编码417个氨基酸；12)。RFl2位于基因簇的核苷酸序列第61682—62767碱基处，长度1089碱基对，编码362个氨基酸；13)。RFl3位于基因簇的核苷酸序列第62．786—63517碱基处，长度735碱基对，编码244个氨基酸；14)。RFl4位于基因簇的核苷酸序列第63513—64412碱基处，长度903碱基对，编码300个氨基酸；15)。RFl5位于基因簇的核苷酸序列第66182—64524碱基处，长度1662碱基对，编码553个氨基酸；16)。RFl6位于基因簇的核苷酸序列第66522—6633l碱基处，长度195碱基对，编码64个氨基酸；17)。RFl7位于基因簇的核苷酸序列第66852—6．7634碱基处，长度786碱基对，编码261个氨基酸；第66852-67634碱基处，长度786碱基对，编码18)0RF18位于基因簇的核苷酸序列第67639-68973碱基处，长度1338碱基对，编码 445个氨基酸；19)ORF19 位于基因簇的核苷酸序列第68997-9836碱基处，长度843碱基对，编码280个氨基酸；20)0RF20位于基因簇的核苷酸序列第71184-69868碱基处，长度1320碱基对，编码 439个氨基酸；21)0RF21位于基因簇的核苷酸序列第71485-71916碱基处，长度435碱基对，编码 144个氨基酸；22)0RF22位于基因簇的核苷酸序列第72276-71935碱基处，长度345碱基对，编码 114个氨基酸；23)0RF23位于基因簇的核苷酸序列第73156-72242碱基处，长度918碱基对，编码 305个氨基酸；24)0RF24位于基因簇的核苷酸序列第74535-73501碱基处，长度1038碱基对，编码 345个氨基酸；25)0RF25位于基因簇的核苷酸序列第76197-74809碱基处，长度1392碱基对，编码 463个氨基酸；26)0RF26位于基因簇的核苷酸序列第77125-76262碱基处，长度867碱基对，编码 288个氨基酸；27)0RF27位于基因簇的核苷酸序列第77030-78448碱基处，长度1422碱基对，编码 473个氨基酸；28)0RF28位于基因簇的核苷酸序列第78477-79106碱基处，长度633碱基对，编码 210个氨基酸；29)0RF29位于基因簇的核苷酸序列第79857-79195碱基处，长度666碱基对，编码 221个氨基酸；30)0RF30位于基因簇的核苷酸序列第80453-79848碱基处，长度609碱基对，编码 202个氨基酸；31)0RF31位于基因簇的核苷酸序列第80974-80558碱基处，长度420碱基对，编码 139个氨基酸。
4. 一种筛选卤代的抗生素合成基因簇的方法，其特征在于，包括以下步骤步骤一，卤代酶基因克隆用针对卤代酶合成基因设计的引物对待选菌株DNA进行PCR 扩增，将阳性扩增的片段进行测序，并提交NCBI数据库进行比对，确证其是否为卤代酶基 因片段；步骤二，安莎类抗生素基因簇筛选用针对安莎类抗生素生物合成前体3-氨基-5-羟 基苯甲酸(AHBA)合成酶和聚酮合酶PKS基因设计的兼并引物对待选菌株DNA进行PCR扩 增，将阳性扩增的片段进行测序，并提交数据库进行比对，确定该菌株基因组中具有安莎类 生物合成基因簇；步骤三，克隆完整的安莎类抗生素基因簇构建菌株基因组的i^osmid文库；利用步骤 一和二使用的引物对基因组文库进行筛选，确定外源插入序列携带有安莎类抗生素生物合 成基因R)smid ；对上述R)smid两端进行测序和酶切分析，确定通过叠加能够完整覆盖菌株1-36卤代安莎类抗生素的生物合成基因簇的质粒外源插入片段；步骤四，卤代安莎类抗生素生物合成基因簇的注释对步骤三获得的R)smid的全序列 进行测序分析，拼接获得完整的卤代安莎类抗生素生物合成基因簇；利用专门针对高GC微 生物设计的在线ORF预测工具FramePlot 3. Obeta对生物合成基因簇进行分析，获得全部 阅读框的信息。
5.如权利要求1所述的一种白浅灰链霉菌的用途，其特征在于，用于生产卤代安莎类 抗生素。
6.如权利要求2所述的卤代安莎类抗生素合成基因簇的用途，其特征在于，用于生产 卤代安莎类抗生素，及通过基因工程手段提高其代谢产物产量。
全文摘要
本发明涉及含卤素安莎类抗生素生物合成基因簇，其综合应用编码催化卤代天然产物生物合成的卤代酶和聚酮合酶等抗生素生物合成基因保守序列为探针，从红树林链霉菌中克隆卤代安莎类抗生素生物合成基因簇。本发明为通过组合生物合成获得新的卤代安莎类抗生素提供酶学和基因操作可能。
文档编号C12N1/20GK102086442SQ200910225769
公开日2011年6月8日 申请日期2009年12月3日 优先权日2009年12月3日
发明者徐俊, 肖静, 许丽 申请人:国家海洋局第三海洋研究所