专利名称：一种高木质素降解力多功能菌株的构建方法
技术领域：
本发明属于生物工程中微生物育种的方法，特别涉及一种高木质素降解力多功能
菌株的构建方法。
背景技术：
木质素是植物细胞壁主要成分，畜禽消化道内几乎没有降解木质素的酶，食草动 物靠消化道寄生的微生物能够部分降解木质素，但单胃动物不具有这种能力。木质素是动 物消化植物性饲料的最大障碍，微生物发酵是克服这一难题的最理想方法。选育木质素降 解率高，且在饲料上易于发酵的微生物菌株，是养殖业实现〃 节粮〃 的关键技术。白腐真菌 是降解木质素最有效的微生物，也是经常用于木质素降解研究的模式菌株。但在自然状态 下，由于白腐真菌的定植缓慢，很难形成优势种群，其要求的发酵条件较严格，为了选育出 更高木质素降解力的变异菌株，加强木质素的降解，提高其发酵性能，本项技术利用原生质 体化学融合技术构建具有白腐真菌高木质素降解力且兼具酵母菌的发酵性能好、产酸能力 强、菌体蛋白质含量高等特征的多功能新菌株。为显著提高饲料的可消化性和利用率，减少 人畜争粮的矛盾提供一种有效的技术支持。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种高木质素降解力多功能菌株的构建 方法，(也称白腐真菌与酵母菌原生质体化学融合方法)，使其原生质体的融合率达到 5X10—6，构建出兼具白腐真菌高木质素降解力和酵母菌的发酵性能好、产酸能力强、菌体蛋 白质含量高等特征的多功能新菌株。
本发明的技术方案是 —种高木质素降解力多功能菌株的构建方法是分别取标记后、浓度调至106个/ mL的白腐真菌与酵母菌原生质体各0. 5mL，以1 : 1混合，以p朋-9的25-40%的PEG6000 与20mmol/L CaCl2的混合溶液进行助融，26-32 °C融合10-40min，原生质体融合率达到 2-5X10—6。 所述的高木质素降解力多功能菌株的构建方法，也称之为白腐真菌和酵母菌的原 生质体化学融合的方法，最佳工艺参数是 分别取浓度调至106个/mL、标记后的白腐真菌与酵母菌原生质体液各0. 5mL，
1 : l混合，以pH8的30X的PEG6000与20mmol/L CaCl2的混合溶液进行助融，30。C融合
30min，原生质体融合率达到5X 10一6。 本发明效果是 1.融合方法简单，易操作。 2.原生质体的融合率达到10一6。 3.融合后的新菌种兼具白腐真菌高木质素降解力和酵母菌的发酵性能好、产酸能 力强、菌体蛋白质含量高等多功能特征。
具体实施例方式
白腐真菌与酵母菌的原生质体化学融合方法提供了一种适合构建出兼具白腐真 菌高木质素降解力和酵母菌的发酵性能好、产酸能力强、菌体蛋白质含量高等特征的多功 能新菌株的方法。
实例一 分别取浓度调至10s个/mL、标记后的白腐真菌与酵母菌原生质体液各0.5mL， 1 : l混合，以pH6的25X的PEG6000与20mmol/L CaCl2的混合溶液进行助融，26。C融合 20min，原生质体融合率达到2X 10一6。
实例二 分别取浓度调至10s个/mL、标记后的白腐真菌与酵母菌原生质体液各0.5mL， 1 : l混合，以pH9的30X的PEG6000与20mmol/L CaCl2的混合溶液进行助融，32。C融合 40min，原生质体融合率达到2. 7X 10—6。
实例三 分别取浓度调至10s个/mL、标记后的白腐真菌与酵母菌原生质体液各0.5mL， 1 : l混合，以pH8的30X的PEG6000与20mmol/L CaCl2的混合溶液进行助融，30。C融合 30min，原生质体融合率达到5X 10一6。 本白腐真菌和酵母菌的原生质体化学融合方法，操作简单，融合率较高，可达10—6。
权利要求
一种高木质素降解力多功能菌株的构建方法，其特征在于分别取浓度调至106个/mL、标记后的白腐真菌与酵母菌原生质体液各0.5mL，以1∶1混合，以pH6-9的25-40％的PEG6000与20mmol/L CaCl2的混合溶液进行助融，26-32℃融合10-40min，原生质体融合率达到2-5×10-6。
2. 根据权利要求1所述的高木质素降解力多功能菌株的构建方法，其特征在于其白腐真菌和酵母菌的原生质体化学融合的方法是分别取浓度调至10s个/mL、标记后的白腐真菌与酵母菌原生质体液各0.5mL，1 : l混合，以pH8的30%的PEG6000与20mmol/L CaCl2的混合溶液进行助融，30。C融合30min，原生质体融合率达到5X10—6。
全文摘要
一种高木质素降解力多功能菌株的构建方法是分别取浓度调至106个/mL、标记后的白腐真菌与酵母菌原生质体液各0.5mL，以1∶1混合，以pH6-9的25-40％的PEG6000与20mmol/L CaCl2的混合溶液进行助融，26-32℃融合10-40min，原生质体融合率达到2-5×10-6。本发明效果是融合方法简单，易操作。原生质体的融合率达到10-6。融合后的新菌种兼具白腐真菌高木质素降解力和酵母菌的发酵性能好、产酸能力强、菌体蛋白质含量高等多功能特征。
文档编号C12N15/04GK101712952SQ20091022848
公开日2010年5月26日 申请日期2009年11月18日 优先权日2009年11月18日
发明者廖伟, 范寰 申请人:天津市畜牧兽医研究所