硫酯酶相关的方法和组合物的制作方法

专利名称：：硫酯酶相关的方法和组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及新的硫酯酶组合物、包含硫酯酶的新的重组宿主细胞、产生脂肪酸衍生物的新方法以及由此产生的脂肪酸衍生物及其用途。本发明的一特定方面涉及工业化学品和燃料的生产。
背景技术：
：随着技术的发展，与之相伴的是对石油化学品来源的燃料和工业化学品的依赖性的增加。这类燃料来源正变得日益有限和难以获得。随着化石燃料以空前的速度被消耗，世界对燃料和石油化学品来源的化学品的需求将很快超过目前的供给。因此，现在致力于利用可再生能源，诸如日光、水、风和生物质。利用生物质产生非石油来源的新的燃料和化学品资源(例如生物燃料)已成为一种可供选择的方案。生物燃料是一种由烷烃和/或酯类组成的可生物降解的、清洁燃烧的燃料。示例性的生物燃料是生物柴油。生物柴油可以以纯的形式(被称为“纯”生物柴油)，或者作为以任何浓度与常规的石化柴油或其它生物柴油的混合物用于大部分内燃柴油发动机中。与石化柴油相比，生物柴油提供了许多有益性质，包括燃烧过程中排放(例如，一氧化碳、硫、芳香烃、烟灰颗粒等)下降。因生物柴油是基于可再生的生物材料，所以其还能维持平衡的二氧化碳循环。生物柴油通常是可完全生物降解的，而且因为燃点相对高、易燃性相对低而因此具有良好的安全性。此外，生物柴油提供良好的润滑性质，从而减少发动机的磨损和破坏。目前生产生物柴油的方法涉及将来自植物油原料的三酰甘油进行酯交换，所述植物油原料例如来自欧洲的油菜籽、北美的大豆和东南亚的棕榈油。因此工业规模的生物柴油生产在地理和季节上局限于植物油原料的产地。酯交换过程产生可以作为生物柴油的脂肪酯混合物，但也会产生不希望的副产品甘油。要作为生物柴油使用，必须从上述异质产物中进一步纯化脂肪酯。这最终会增加生物柴油的产量，但也增加了脂肪酯生产的成本和所需能量。而且，植物油原料是低效能源，因为它们需要广大的种植面积。例如，因为只有菜籽油用于产生生物柴油而油菜籽生物质的其它部分不被使用，所以从油菜籽产生的生物柴油的产量仅有1300L/公顷。此外，诸如油菜籽和大豆的某些植物油原料的种植需要经常进行农作物轮种以防止土地养分耗尽。PCT公开第WO2007/136762号公开了能从脂肪酸合成途径合成产物的重组微生物，所述产物尤其包括脂肪酸酯和脂肪醇。特别是，描述的某些脂肪酸衍生物具有限定的碳链长度、分支水平和饱和度。所述‘762公开描述了在脂肪酸衍生物产生中利用硫酯酶蛋白的内源过表达或异源表达的重组细胞。PCT公开第WO2008/119082号公开了从脂肪酸生物合成途径产生产物的基因工程化的细胞和微生物，所述产物尤其包括脂肪酸酯和脂肪醇。所述‘082公开描述了利用酰基辅酶A合成酶的过表达来更有效地产生脂肪酸衍生物的重组细胞。美国专利第5，955，329号公开了具有改变的底物特异性的基因工程化植物酰基ACP硫酯酶蛋白。具体而言，所述‘3专利公开了如何产生工程化的植物酰基ACP硫酯酶，其中与天然酰基ACP硫酯酶相比，所述工程化的植物酰基ACP硫酯酶表现出对于植物硫酯酶所水解的酰基ACP底物的改变的底物特异性。尽管现有技术公开了与某些脂肪酸衍生物产生相关的某些有用的公开内容，但是本领域内需要更有效和更经济地产生这种脂肪酸衍生物的改善的方法和过程，并且还需要便于产生具有改变的产品规格的组合物的技术。作为具体的实例，需要产生对诸如燃料、去垢剂、润滑剂、工业前体分子的具体应用以及脂肪酸衍生物的其它有价值应用具有预先设计的或“特制的”规格和性质的脂肪酸组合物。发明概述本发明的目的是提供有用的突变硫酯酶和天然存在的硫酯酶、编码这些酶的多核苷酸、包含编码所述有用的硫酯酶的多核苷酸的载体、包含突变内源硫酯酶的重组宿主细胞、用所述载体转化的重组宿主细胞、编码有用的硫酯酶的多核苷酸被整合入染色体中的重组宿主细胞、由所述宿主细胞产生的硫酯酶、体外和/或体内产生的脂肪酸衍生物组合物(例如工业化学品和生物燃料)、在体外和/或体内产生脂肪酸衍生物组合物的方法以及利用产生的脂肪酸衍生物组合物的方法。本发明的目的是提供通过微生物发酵产生脂肪酸衍生物组合物的方法，所述脂肪酸衍生物组合物在碳链长度和收率比例方面具有预定的产物谱。这些组合物非常适用于燃料和化学品工业中的应用，因为可以调整它们的性质使其适应预计的特定应用。例如，可以按本文所述方法调整脂肪酯产物，使其能用作汽车燃料，和/或可以设计组合物使其具有例如改善的燃料特性，如浊点、润滑性、十六烷值、运动粘性、酸值、沸点、氧化稳定性、冷滤点、杂质谱、硫酸盐粉水平和/或引火点。同样，按本文所述方法制备的工业化学品可以替代目前源自石油的化学品，并且可以调整它们使其适应特定的用途，例如，产生最适宜用作表面活性剂和/或去垢剂的脂肪醇。本发明的目的是提供在不存在酯合酶的情况下制备脂肪酯的可选方法。该方法大大优于此前公开的通过微生物发酵过程制备脂肪酯组合物的方法，所述此前的方法至少同时需要一种硫酯酶和一种酯合酶。因而，本发明的新硫酯酶提供其它优势。在本发明的一个实施方案中，提供了源自前体硫酯酶的突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其中与所述前体硫酯酶的性质相比，每个突变体(或天然存在的等同物)在体外和/或体内具有至少一种改变的性质。所述改变的性质可以是例如生物物理性质，如热稳定性(熔点Tm)；溶剂、溶质和/或氧化稳定性；亲油性；亲水性；四级结构；偶极矩；和/或等电点。所述改变的性质也可以是例如生物化学性质，如PH最适度、温度最适度和/或离子强度最适度。所述改变的性质还可以是例如酶催化参数，如产物分布(包括，例如产物混合物中特定产物与其它产物相比的更高或更低的百分比或收率比例)、特异性活性、底物偏好性、底物亲和力、底物抑制、产物亲和力、周转率或催化速率、产物抑制、动力学机制、K>kca0kcat/Kffl和/或VMax。所述改变的性质还可以是例如，对醇解与水解、酰基辅酶A与酰基-酰基载体蛋白底物、酯与硫酯底物、饱和与不饱和底物、直链与支链底物的活性的升高或降低或偏好性的改变；不饱和位置、十六烷值范围、或具体的碳链长度、支链底物、分支位置、羟酰基底物、酮脂酰基底物的改变；和/或产物具有改变范围的或特定的十六烷值、辛烷值、氧化稳定性、润滑性、引火点、粘性、沸点、熔点、倾点、浊点、冷滤点、冷流性、芳香度和/或碘值。改变的性质还可以包括例如，酯水解的活性降低或酯水解的减弱，使得所需产物分子的水解降低或消除。改变的性质还可以包括例如，与前体蛋白对细胞的毒性和/或细胞中的表达水平相比，蛋白对同一种细胞的毒性的减弱和/或同一种细胞中蛋白表达水平的改变。在示例性的实施方案中，改变的性质可以包括在体内或体外直接或间接催化脂酰基衍生物合成的能力的改变。在另一个示例性的实施方案中，改变的性质是特别需要的脂肪酸衍生物的体外和/或体内的收率或收率比例的提高或增加。在本发明的一个实施方案中，突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)来自前体硫酯酶。在本发明具体实施方案中，所述前体硫酯酶是天然存在的硫酯酶、事先修饰过的硫酯酶或合成的硫酯酶。在本发明的一个实施方案中，突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)来自前体硫酯酶，所述前体硫酯酶是天然存在的硫酯酶。天然存在的前体硫酯酶可以获自例如，植物、动物、细菌、真菌、酵母或其它微生物来源。突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)所来自的前体硫酯酶可以来自于食酸菌属(Acidovorax)、不动杆菌属(AcinetcAacter)、气单胞菌属(Aeromonas)、嗜烷菌属(Alcanivorax)、另类弧菌(Aliivibrio)、碱湖生菌属(Alkalilimnicola)、交替单胞菌目(Alteromonadales)、交替单胞菌属(Alteromonas)、橙单胞菌属(Aurantimonas)、固氮弧菌属(Azoarcus)、固氮根瘤菌属(Azorhizobium)、固氮菌属(Azotobacter)、贝氏硫菌属(Beggiatoa)、拜叶林克氏菌属(Beijerinckia)JI^I特氏菌属(Bordetella)、慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)、伯克氏菌属(Burkholderia)、禾丙(Caulobacter),^fMMMM(Cellvibrio)>^!!1^M(Chromobacterium)>柠檬酸杆菌属(CitrcAacter)、丛毛单胞菌属(Comamonas)、贪铜菌属(Cupriavidus)Jj^氯单胞菌属(Dechloromonas)、代夫特菌属(Delftia)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)、肠(Enterobacter)>iK^M(Erwinia)>ft^M(Escherichia)>jftff^M(Geobacter)、河氏菌属(Hahella)、嗜盐红螺菌属(Halorhodospira)、Herminiimonas^源菌属(Idiomarina)、詹森菌属(Janthinobacterium)、克雷白杆菌属(Klebsiella)、钩端螺旋体属(L印tospira)、纤发菌属(L印tothrix)、硫氧化湖沉积杆菌(Limnobacter)、磁螺菌属(Magnetospirillum)、海杆菌属(Marinobacter)、海单胞菌属(Marinomonas)、methylibium、甲基菌属(methylobacillus)、甲基杆菌属(methylobacterium)、甲基细胞菌属(methylocella)、甲基球菌属(methylococcus)、摩替亚氏菌(Moritella)、硝化杆菌属(Nitrobacter)、硝化球菌属(Nitrococcus)、亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)、亚硝化螺菌属(Nitrosospira)、海洋螺菌属(Oceanospirillum)、寡养菌属(Oligotropha)、果胶杆菌属(Pectobacterium)、发光杆菌属(Photobacterium)、光杆状菌属(Photorhabdus)、极单胞菌属(Polaromonas)、变形杆菌属(Proteus)、普罗威登斯菌属(Providencia)、交替假单胞菌属O3Seudoalteromonas)、假单胞菌属(I^seudomonas)、冷单胞菌属(Psychromonas)、雷尔氏菌属(Ralstonia)、Reinekea、红细菌目(Rhodobacterales)、红W^M(Rhodoferax),ΤfxMMM(Rhodopseudomonas)>tl^(Rhodospirillum)>Saccharophagus、沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)、希瓦氏菌属(Shewanella)、志贺氏菌属(Shigella)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、链球菌属(Str印tococcus)、索氏菌属(Thauera)、硫碱弧菌属(Thioalkalivibrio)、硫杆菌属(Thiobacillus)、弧菌属(Vibrio)、黄单胞菌属(Xanthomonas)或耶尔森氏菌属(Yersinia)。在具体的实施方案中，本发明的前体硫酯酶可以来自以下的任何一个燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovoraxavenaesubsp.Citrulli)AAC00-1>^mW-W(Acidovoraxsp.)JS42、鲍氏不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)ACICU、鲍氏不动杆菌ATCC17978、嗜水气单胞菌嗜水亚种(Aeromonashydrophilasubsp.Hydrophila)ATCC7966、杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(Aeromonassalmonicidasubsp.salmonicida)A449、博克岛食烧菌(Alcanivoraxborkumensis)SK2、食烧菌(Alcanivoraxsp.)DG881、杀鲑另类弧菌(Aliivibriosalmonicida)LFI1238、AlkalilimnicolaehrlicheiMLHE-Uα-变形Mlif(alphaproteobacterium)HTCC2255>IfIfilif(Alteromonadalesbacterium)TW-7、麦氏交替单细胞菌深海生态型(Alteromonasmacleodiideepecotype)、橙单胞菌(Aurantimonassp.)SI85-9A1、固氮弧菌(Azoarcussp.)BH72、茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobiumcaulinodans)ORS571、维氏固氮菌(Azotobactervinelandii)AvOP>贝氏硫菌(Beggiatoasp.)PS、印度拜叶林克氏菌印度亚种(Beijerinckiaindicasubsp.Indica)ATCC9039、鸟博德特氏菌属(Bordetellaavium)197N、支气管炎博德特氏菌(Bordetellabronchis印tica)RB50、副百日咳博德特氏菌(Bordetellaparapertussis)12822、百日咳博德特氏菌(Bordetellapertussis)TohamaI、彼得里博德特氏菌(Bordetellapetrii)DSM12804、慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumsp.)BTAil、慢生根瘤菌0RS278、须芒草伯克氏菌(Burkholderiaambifaria)AMMD、须芒草伯克氏菌I0P40-10、须芒草伯克氏菌MC40-6、须芒草伯克氏菌MEX-5、石竹伯克氏菌(Burkholderiacenoc印acia)AU1054、石竹伯克氏菌HIMM、石竹伯克氏菌J2315、石竹伯克氏菌MC0-3、石竹伯克氏菌PC184、洋葱伯克氏菌(Burkholderiadolosa)AU0158、荚壳伯克氏菌(Burkholderiagraminis)C4D1M、鼻疽伯克氏菌(Burkholderiamallei)ATCC23344、鼻疽伯克氏菌GB8马4、鼻疽伯克氏菌NCTC10229、多噬伯克氏菌(Burkholderiamultivorans)ATCC17616、BurkholderiaoklahomensisC6786>BurkholderiaoklahomensisE0147>吩嗪伯克氏菌(Burkholderiaphymatum)STM815、类鼻疽伯克氏菌(Burkholderiapseudomallei)1106a、类鼻疽伯克氏菌1106b、类鼻疽伯克氏菌14、类鼻疽伯克氏菌1655、类鼻疽伯克氏菌1710b、类鼻疽伯克氏菌305、类鼻疽伯克氏菌406e、类鼻疽伯克氏菌668、类鼻疽伯克氏菌7894、类鼻疽伯克氏菌K96243、类鼻疽伯克氏菌NCTC13177、伯克氏菌属(Burkholderiasp.)383、泰国伯克氏菌(Burkholderiathailandensis)Bt4、泰国伯克氏菌E^4、泰国伯克氏菌MSMB43、泰国伯克氏菌T)(D0H、新加坡伯克氏菌(Burkholderiaubonensis)Bu、越南伯克氏菌(Burkholderiavietnamiensis)G4、新月柄杆菌(Caulobactercrescentus)CB15、纤维弧菌(Cellvibriojaponicus)Uedal07、青紫色素杆菌(Chromobacteriumviolaceum)ATCC12472、需盐色盐杆菌(Chromohalobactersalexigens)DSM3043、克氏柠檬酸杆菌(Citrobacterkoseri)ATCCBAA-895、睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonastestosterone)KF_l、台湾贪铜菌(Cupriavidustaiwanensis)、DechloromonasaromaticaRCB、食酸代夫特菌(Delftiaacidovorans)SPH-1、脱硫脱硫脱硫弧菌亚种(Desulfovibriodesulfuricanssubsp.desulfuricans)G20菌株、脱硫链球菌属脱硫脱硫弧菌亚种G20、生癌肠杆菌(Enterobactercancerogenus)ATCC；35316、阪崎肠杆菌(Enterobactersakazakii)ATCCBAA-894、肠杆菌(Enterobactersp.)638、塔斯曼尼亚欧文氏菌(Erwiniatasmaniensis)、艾伯替埃希氏菌(Escherichiaalbertii)TW07627、大肠杆菌(Escherichiacoli)0157:H7EDL933、大肠杆菌0157:H7EC4024菌株、大肠杆菌0157:H7链球菌EC4196、Y-变形细菌(gammaproteobacterium)HTCC5015,γ-变形细菌KT71、地杆菌(Geobactersp.)M21、哈赫拉菌(Hahellachejuensis)KCTC2396、嗜盐嗜盐红螺菌(Halorhodospirahalophila)SLl、Herminiimonasarsenicoxydans、波罗的海海源菌(Idiomarinabaltica)0S145、热液海源菌(Idiomarinaloihiensis)L2TR、Janthinobacteriumsp.Marseille、肺炎克雷白杆菌(Klebsiellapneumoniae)342、肺炎克雷伯菌肺炎亚种(Klebsiellapneumoniaesubsp.Pneumoniae)MGH78578、克雷白杆菌(Klebsiellasp.)ZD414、问号钩端螺旋体(Leptospirainterrogans)哥本哈根血清变种FiocruzL1-130菌株、赖型问号钩端螺旋体(LeptospirainterrogansserovarLai)56601菌株、克洛德氏纤发菌(L印tothrixcholodnii)SP-6、硫氧化湖沉积杆菌MED105、趋磁细菌(Magnetospirillummagneticum)AMB—1、海洋Y—变形细菌(marinegammaproteobacterium)HTCC2080>#Y"^^ffl^HTCC2143>#y-^形细菌HTCC2207、海洋宏基因组(marinemetagenome)、栖藻海杆菌(Marinobacteralgicola)DG893>/K^ff^(Marinobacteraquaeolei)VT8>·ff胃(Marinobactersp.)ELB17>·Ifi胃(Marinomonassp.)MWYLUMethylibiumpetroleiphilumPMUMethylobacillusflagellatusKT>MethylobacteriumchloromethanicumCM4、夕卜链甲基杆菌(Methylobacteriumextorquens)PAl>MethylobacteriumpopuliBJOOKMethylocellasilvestrisBL2、荚膜甲基球菌Bath菌株(Methylococcuscapsulatusstr.Bath)、摩替亚氏菌(Moritellasp.)PE36、消化杆菌(Nitrobactersp.)Nb_311A、NitrobacterwinogradskyiNb-255、运动消化球菌(Nitrococcusmobilis)Nb_231、海洋亚硝化球菌(Nitrosococcusoceani)ATCC19707、海洋亚硝化球菌C-27、欧洲亚硝化单胞菌(Nitrosomonaseuropaea)ATCC19718、欧洲亚硝化单胞菌C91、多形亚硝化螺M(Nitrosospiramultiformis)ATCC25196、海洋螺菌(Oceanospirillumsp.)MED92、^^iM(Oligotrophycarboxidovorans)0M5>H^1ff^(Pectobacteriumatrosepticum)SCRI1043、深海发光杆菌(Photobacteriumprofundum)3TCK、深海发光杆菌SS9、发光杆菌(Photobacteriumsp.)SKA34、发光发光杆菌(Photorhabduslumescens)、R^t^fMlaumondiiTTOlM禾中、PolaromonasnaphthalenivoransCJ2>丰及Ifi胃(Polaromonassp.)JS666>多核杆菌(Polynucleobactersp.)QLff-PlDMWA-UProteusmirabilisHI4320、斯氏普罗威登斯菌(Providenciastuartii)ATCC25827、大西洋假交imfilii(Pseudoalteromonasatlantica)T6c>f|1|(Pseudoalteromonashaloplanktis)TAC125、假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp.)643A、PseudoalteromonastunicataD2、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)PA7、铜绿假单胞菌PACS2、铜绿假单胞菌PA01、铜绿假单胞菌UCBPP-PA14、PseudomonasentomophilaL48、荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)PfO-l、荧光假单胞菌Pf_5、门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)ymp、恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)Fl、恶臭假单胞菌GB-1、恶臭假单胞菌KT2440、恶臭假单胞菌W619、施氏假单胞菌(I^seudomonasstutzeri)A1501、丁香假#-1^^^(Pseudomonassyringaepv.Phaseolicola)1448A>菜豆致病变种B7^a、丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonassyringaepv.Tomato)DC3000菌株、Psychromonasingrahamii37、真养雷尔氏菌(Ralstoniaeutropha)H16、真养雷尔氏菌JMPl34>RalstoniametalliduransCH34、皮氏雷尔氏菌(Ralstoniapickettii)12D、皮氏雷尔氏菌12J、茄科雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)GMI1000、茄科雷尔氏菌IP01609、茄科雷尔氏菌MolK2、茄科雷尔氏菌UW551、Reinekeasp.MED297,RhodobacteralesbacteriumY4I>RhodoferaxferrireducensT118、"召泽红{段单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)BisA53、沼泽红假单胞菌BisB18、沼泽红假单胞菌BisB5、沼泽红假单胞菌CGA009、沼泽红假单胞菌HaA2、沼泽红假单胞菌TIE-1、RhodospirillumcentenumSff>Saccharophagusdegradans2-40^1^Π1liiM^lJ^JPMft(Salmonellaentericasubsp.serovararizonae)62:z4,z23:—，肠道沙门氏菌猪霍乱病毒沙门氏胃亚禾中(Salmonellaentericasubsp.entericaserovarCholeraesuis)SC-B671^肠道沙门氏菌肠道allinarum亚种观7/91、肠道沙门氏菌肠道哈达尔亚种(Salmonellaentericasubsp.entericaserovarHadar)RI_05P066菌株、肠道沙门氏菌肠道爪唾,Mft(Salmonellaentericasubsp.entericaserovarJaviana)GA_MM04042433|if株、肠道沙门氏菌肠道Mintpaul亚种SARA23菌株、肠道沙门氏菌肠道Mintpaul亚种SAR^9菌株、肠道沙门氏菌肠道伤寒亚种(Salmonellaentericasubsp.entericaserovarTyphi)CT18菌株、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)LT2、变形斑沙111(Serratiaproteamaculans)568>ShewanellaamazonensisSB2B、@Pl^JiilH氏菌(Shewanellabaltica)0S155、波罗的海希瓦氏菌0S185、波罗的海希瓦氏菌0S195、波罗的海希瓦氏菌0S223、海底希瓦氏菌(Shewanellabenthica)KT99、反硝化希瓦氏菌(Shewanelladenitrificans)0S217、冷海希瓦氏菌(Shewanellafrigidimarina)NCIMB400、ShewanellahalifaxensisHAW-EB4、光伏希瓦氏菌(Shewanellaloihica)PV-4、奥(Shewanellaoneidensis)MR-UShewanellapealeanaATCC700345^希瓦氏菌(Shewanellaputrefaciens)200、ShewanellasediminisHAW-EB3、希瓦氏菌(Shewanellasp.)ANA_3、希瓦氏菌MR-4、希瓦氏菌MR-7、希瓦氏菌W3_18_l、武氏希瓦氏菌(Shewanellawoodyi)ATCC51908、鲍氏志贺氏菌(Shigellaboydii)Sb227、痢疾志贺氏菌(Shigelladysenteriae)Sdl97、嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)K279a、嗜麦芽糖寡养单胞菌R551-3、链球菌(Streptococcussp.)(附)、合成的构建体、索氏菌(Thauerasp.)MZ1T、硫碱弧菌(Thioalkalivibriosp.)HL_EbGR7、脱氮硫杆菌(Thiobacillusdenitrificans)ATCC25259>ThiomicrospiracrunogenaXCL—2、溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)12G01、VibrioangustumS14、坎氏弧菌(Vibriocampbellii)AND4、霍乱弧菌(Vibriocholerae)2740-80、霍乱弧菌MZ0-2、霍乱弧菌01埃尔托变种N16961菌株、霍乱弧菌V51、费氏弧菌(Vibriofischeri)ES114、费氏弧菌MJ11、哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)ATCCBAA-1116、拟态弧菌(Vibriomimicus)、弧菌细菌(Vibrionalesbacterium)SWAT-3、畐Ij溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)AQ3810、畐Ij溶血弧菌RIMD2210633、VibrioshiloniiAK1、灿烂弧菌(Vibriosplendidus)12B01、弧菌(Vibriosp.)MED222、创伤弧菌(Vibriovulnificus)CMCP6、创伤弧菌YJ016、地毯草黄单胞菌柑橘致病变种(Xanthomonasaxonopodispv.Citri)306菌株、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonascampestrispv.Campestris)ATCC33913菌株、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种BlOO菌株、野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种(Xanthomonascampestrispv.Vesicatoria)85-10菌株、/K稻黄单胞菌水稻致病变种(Xanthomonasoryzaepv.Oryzae)KACC10331、水稻黄单胞菌水稻致病变种PX099A、水稻黄单胞菌栖稻致病变种(Xanthomonasoryzaepv.Oryzicola)BLS256、伯氏耳口尔森氏菌(Yersiniabercovieri)ATCC43970、小肠结肠炎耶尔森氏菌小肠结肠炎亚种(Yersiniaenterocoliticasubsp.enterocolitica)8081、弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)ATCC33641、中间耶尔森氏菌(Yersiniaintermedia)ATCC29909、莫氏耶尔森氏菌(Yersiniamollaretii)ATCC43969、鼠疫耶尔森氏菌Angola、鼠疫耶尔森氏菌东方变种(Yersiniapestisbiovar0rientalis)F1991016菌株、鼠疫耶尔森氏菌C092、鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)KIM或假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)IP31758。在本发明的一个实施方案中，前体硫酯酶是具有与‘TesA类似的序列的硫酯酶(例如没有信号肽的TesA酶)。在优选的实施方案中，前体硫酯酶与‘TesA具有至少约20%，例如，至少约25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。在另一个实例中，前体硫酯酶与获自大肠杆菌(例如大肠杆菌K12)的‘TesA具有至少约20%，例如，至少约25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。在另一个实例中，前体硫酯酶是具有与图58的SEQIDNO31序列类似的序列，且与图58的SEQIDNO31优选具有至少约20%，例如，至少约25%,30%,35%,40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的硫酯酶。所述类似序列可以来自天然存在的蛋白或可以来自事先修饰过的蛋白。在本发明的一个实施方案中，前体硫酯酶是包含以下氨基酸系列的硫酯酶G-D-S-L-X(5)-M(SEQIDN0:28)，其中:“X”是指任何氨基酸残基；如果存在其相邻括号中的数字，则该数字是指氨基酸残基区段中X残基的数量；第3位的S残基是催化残基；第2位的D残基可用N或T取代；第4位的L残基可用C或Q取代；第10位的M残基可用C、D、L、N、T或V取代；和/或V-X(2)-G-X-N-D-X-L(SEQIDN0:29)，其中:每个“X”是指任何氨基酸残基；如果存在其相邻括号中的数字，则该数字是指氨基酸残基区段中X残基的数量；第6位的N残基位于氧离子洞中；第1位的V残基可用L取代；第6位的N残基可用V、L、C、A、G、H、I、T或W取代；第7位的D残基可用E取代；第9位的L残基可用I、W、F、T、M、A、E、N或V取代；和/或D-X(2)-H-P-X(7)-I(SEQIDNO30)，其中:每个“X”是指任何氨基酸残基；如果存在其相邻括号中的数字，则该数字是指各自氨基酸残基区段中X残基的数量；分别在第1位和第4位的D和H残基是催化残基；第5位的P残基可用G、A、F、L、S或V取代；第13位的I残基可用L或V取代。在本发明的一个实施方案中，前体硫酯酶是与获自大肠杆菌的‘TesA具有免疫交叉反应性的硫酯酶。在具体的实施方案中，前体硫酯酶与获自大肠杆菌K-12的‘TesA具有免疫交叉反应性。在具体的实施方案中，前体硫酯酶与包含图58所示的SEQIDN0:31氨基酸序列的硫酯酶具有免疫交叉反应性。在具体的实施方案中，前体硫酯酶与获自大肠杆菌或获自大肠杆菌K-12的任何硫酯酶的片段(或部分)和/或包含图58所示的SEQIDNO31氨基酸序列的任何硫酯酶的片段(或部分)具有交叉反应性。与‘TesA具有免疫交叉反应性的前体酶可以是天然存在的蛋白、事先修饰过的蛋白或合成的蛋白。在另一个具体的实例中，前体硫酯酶是来自大肠杆菌的‘TesA，或者是来自大肠杆菌的‘TesA的同源物、旁系同源物或直系同源物，所述来自大肠杆菌的‘TesA例如来自大肠杆菌K12的‘TesA。本发明的突变体所来源于的硫酯酶前体还可以是上述硫酯酶中任何一种的酶学活性部分或片段。在本发明的一个实施方案中，当与前体硫酯酶比较时，提供的突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)包含的氨基酸序列具有至少一个氨基酸取代，使得突变硫酯酶相对于前体硫酯酶具有至少一种改变的性质。在本发明的示例性的实施方案中，提供的突变硫酯酶的氨基酸序列具有单个取代突变，且当与突变体所来源于的前体硫酯酶比较时，表现出至少一种改变的性质。在本发明的示例性的实施方案中，提供的突变硫酯酶的氨基酸序列具有从其前体硫酯酶序列的两个或更多个取代突变，且当与前体硫酯酶比较时，所述突变硫酯酶表现出至少一种改变的性质。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其是前体硫酯酶的变体，并且相对于这种前体硫酯酶在体外或体内具有至少一种改变的性质，其中所述前体硫酯酶是包含图58的SEQIDNO31的类似序列并因此包含SEQIDNO31对应的氨基酸残基1-182的硫酯酶，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了修饰，所述一个或多个氨基酸位置选自对应于图58的SEQIDNO31的残基1-182中的一个或多个位置。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其是前体硫酯酶的变体，所述前体硫酯酶包含图58的SEQIDNO:31的类似序列，并因此包含SEQIDNO31对应的氨基酸残基1_182，并且所述突变硫酯酶相对于这种前体硫酯酶在体外或体内具有至少一种改变的性质，其中所述前体硫酯酶在一个或多个位置处进行了突变，所述一个或多个位置对应于图58的SEQIDNO:31中选自以下的一个或多个氨基酸位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179,180,181和/或182。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或天然存在的等同物)，其是前体硫酯酶的变体，所述前体硫酯酶包含图58的SEQIDNO31的类似序列，并因此包含SEQIDNO31对应的氨基酸残基1-182，并且所述突变硫酯酶相对于这种前体硫酯酶在体外或体内具有至少一种改变的性质，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变A1C、A1F、AIL、A1Q、AIR、A1S、A1V、A1Y、D2E、D2H、D2K、D2L、D2M、D2P、D2R、D2W、T3E、T3G、T3K、T3L、T3R、T3W、L4A、L4G、L4M、L4N、L4S、L4V、L4Y、L5C、L5E、L5F、L5G、L5H、L5K、L5N、L5Q、L5S、L5W、L5Y、I6A、I6L、I6T、I6V、L7A、L7C、L7E、L7K、L7M、L7N、L7S、L7T、L7V、L7W、L7Y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性(例如催化速率)，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDNO:31的选自5-30、35-60、65-98、102-139和/或140-180的一个或多个残基。可以在体外和/或体内检测对Cltl底物增加的底物特异性和/或活性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其对C10底物具有增加的底物特异性和/或活性(例如催化速率)，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的一个或多个残基1、3、4、7、9、12、13、14、16、17、20、22、24、25、28、32、38、39、40、42、43、46、47、48、49、50、51、52、54、56、59、60、64、68、72、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、89、90、91、92、93、94、95、96、98、99、100、101、102、103、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、130、132、133、134、138、139、140、141、142、144、145、146、147、148、150、151、152、156、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、175、176、177、178、179、180,181和/或182。可以在体外和/或体内检测对Cltl底物增加的底物特异性和/或活性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或天然存在的等同物)，其对C10底物具有增加的底物特异性和/或活性(例如催化速率)，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变A1L、.AlS,'ΠΚ、L4A、L7M、L7V、D9N、S12A、A13D、G14A、G14E、G14P、G14Q、G14R、G14S、G14V、R16G、R16L、R16M、R16N、R16P、R16Q、R16T、M17C、M17L、M17T、M17V、S20A、S20C、S20D、S20G、S20L、S20T、S20W、A22C、A22D,A22E、A22G、A22H、A22I、A22K,A22N、P24A,P24C、P24D、P24F、P24I、P24S,P24T,P24V、P24W、A25E、A25L、A25N、A25Q,A25V、N28A、N28R、Q32V、Q32Y、V38E、V38K、V38R、N39A、N39T、A40D、A40H、I42A、I42E、I42L、I42S、I42T、I42W、I42Y、S43A、S43C、S43D、S43E、S43L、S43N、S43P、T46E,T46F,T46I,T46L,T46V,S47A、S47C、S47F、S47G、S47L、S47M、S47T、S47V、Q48D、Q48E、Q48G、Q48S、Q48T、Q48V、Q48W、Q49A、Q49C、Q49D、Q49G、Q49H、Q49L、Q49M、Q49S、G50A、G50Q、L51A、L51F、L51H、L51Y、A52D,A52M、L54T,A56P、K59R、Q60M、R64D、R64E、R64Q、V68L、G72A、G72C、G72P、G72S、G75A、G75C、G75D、G75E、G75F、G75I、G75K,G75L、G75M、G75N、G75P、G75T、G75V、G75W、G75Y、L76A、L76D、L76G、L76I、L76K、L76M、L76N、L76P、L76Q、L76R、L76W、R77G、R77L、R77Q、G78A、G78C、G78E、G78F、G78M、G78N、G78Q、G78R、G78S、G78T、G78V、G78Y、F79A、F79D、F79E、F79G、F79H、F79N、F79Q、F79W、F79Y、Q80E、P81N、P81T、P81Y、Q82R,Q82S、Q82T、Q83A、Q83C、Q83F、Q83G、Q83K,Q83L、Q83M、Q83N、Q83R、Q83S、Q83T、Q83V、Q83W、Q83Y、T84A、T84F、T84L、T84M、T84N、T84Q、T84V、T84Y、E85A、E85C、E85L、E85Q,E85R、E85S、E85T、E85W、E85Y、Q86A、Q86G、Q86K、Q86T、T87D、T87P、R89A、R89G、Q90E、Q90Y、I91V、L92V、Q93A、Q93E、Q93G、Q93H、Q93I、Q93L、Q93S、Q93W、Q93Y、D94E、D94F、D94G、D94H、D94K、D94N、D94Q、D94R、D94S、D94V、V95L、V95T、K96V、K96Y、A98W、N99G、N99L、N99P、N99Q、N99R、N99Y、A100G、A100V、E101A、E101D、E101G、E101L、E101M、E101S、E101T、E101V、P102S、L103G、M105C、M105I、M105V、Q106A、Q106D、Q106H、Q106W、I107Y、R108A、R108D、R108E、R108F、R108G、R108H、R108I、R108L、R108M、R108S、R108W、R108Y、L109A、L109D、L109E、L109F、L109G、L109K、L109P、L109R、L109S、L109Y、P110C、P110D、P110E、P110F、P110G、P110H、P110K、P110L、P110M、P110N、P110R、P110S、P110V、P110W、A111C、A111E、A111L、A111M、A111P、A111Q、A111R、A111V、A111W、A111Y、N112A、N112F、N112G、N112K,N112R,N112W、Y113A、Y113C、Y113G、Y113I、Y113M、G114K、G114L、G114P、R115A、R115C、R115E、R115G、R115N、R115S、R115W、R115Y、R116D、R116E、R116W、Y117A、Y117C、Y117E、Y117I、Y117L、Y117N、Y117Q、Y117R、Y117S、Y117T、Y117V、N118C、N118G、N118I、N118K、N118S、N118T、N118V、N118W、E119C、E119F、E119G、E119K、E119M、E119R、E119W、E119Y、A120D、A120E、A120G、A120W、F121A、F121D、F121E、F121M、F121P、F121Q、F121R、F121S、F121Y、S122D,S122E、S122F、S122I、S122L、S122M、S122V、S122W、S122Y、A123H、A123L、A123V、I124T、Y125C、Y125F、Y125G、Y125P、Y125S、Y125V、Y125W、P126R、P126T、P126V、P126Y、K127S、L128C、L128T、L128V、K130E、K130I、K130V、F132D、F132E、F132N、F132T、D133K,D133R、D133S、D133T、D133V、D133Y、V134I、V134M,V134S、P138E、P138N、P138R、P138T、P138V、F139A、F139D、F139G、F139H、F139M、F139S、F139W、F140C、F140G、F140M、F140N、F140P、F140S、M141A、M141C、M141D、M141E、M141F、M141G、M141K、M141L、M141P、M141Q,M141R、M141T、M141V、M141W、M141Y、E142A、E142C、E142P、E142Q,E142W、E142Y、V144D、V144E、V144G、V144H、V144N、V144P、V144Q、V144R、V144S、V144W、V144Y、Y145A、Y145C、Y145D、Y145E、Y145G、Y145I、Y145L、Y145M、Y145N、Y145Q,Y145T、Y145W、L146A、L146C、L146D、L146E、L146G、L146H、L146S、L146W、K147G、K147P、K147W、P148D、P148E、W150C、W150D、W150E、W150G、W150L、W150Q,W150T、M151A、M151C、M151E、M151F、M151G、M151I、M151Q、M151S、M151T、M151V、M151W、Q152D,Q152F、Q152I、Q152L、Q152T、I156L、P158A、P158F、P158G、P158H、P158I、P158L、P158Q、P158T、P158V、N159C、N159E、N159G、N159I、N159K、N159L、N159M、N159R、N159T、N159V、R160A、R160C、R160D、R160E、R160G、R160H、R160N、R160Q,R160S、R160W、D161E、D161G、D161I、D161K、D161L、D161M、D161Q,D161R、D161W、A162I、A162L、A162T、A162V、A162Y、Q163G、Q163L、Q163M、Q163S、P164A、P164C、P164D、P164M、P164N、P164R、P164V、P164W、F165D、F165E、F165G、F165H、F165I、F165K、F165L、F165M、F165R、F165S、F165T、F165V、F165Y、I166F、I166L、I166M、I166V、A167C、A167M、A167R、A167T、D168G、D168P、D168R、W169E、W169K、W169Q,M170F、M170H、M170L、M170T、M170V、M170Y、A171E、A171F、A171V、A171W、K172A、K172M、Q173N、Q175I、P176H、P176K、P176N、P176W、L177M、L177T、V178T、V178W、N179G、N179H、N179R、N179T、N179V、N179Y、H180E、H180G、H180R、H180V、H180W、D181A、D181H、D181I、D181L、D181P、D181R、D181W、S182A、S182G、S182K、S182L、S182P和/或S182R，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDNO:31的氨基酸位置。可以在体外和/或体内检测对Cltl底物增加的底物特异性和/或活性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其对C12底物(即碳链长度为12个碳的底物)具有增加的底物特异性和/或活性(例如催化速率)，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDNO:31的残基10-25、35-85、90-103、110-143、146-180。可以在体外和/或体内检测对C12底物增加的底物特异性和/或活性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或天然存在的等同物)，其对C12底物具有增加的底物特异性和/或活性(例如催化速率)，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的一个或多个残基1、2、3、4、5、6、7、9、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、24、25、26、27、28、29、30、31、35、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、57、58、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、76、77、78、79、80、81、82、83、84、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、111、112、113、114、115、116、117、119、120、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、133、134、136、137、140、141、142、145、149、152、153、155、156、158、159、160、161、162、163、164、166、167、168、169、170、172、173、174、175、176、177、179、180、181和/或182。可以在体外和/或体内检测对C12底物增加的底物特异性和/或活性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其对C12底物具有增加的底物特异性和/或活性(例如催化速率)，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变A1Q、A1S、A1V、D2E、D2K、D2P、D2W、T3R、T3W、L4A、L4Y、L5F、L5G、L5S、L5Y、I6T、I6V、L7A、L7C、L7M、L7N、L7S、L7T、L7V、L7Y、D9N、L11M、S12A、S12I、S12V、A13C、A13G、A13H、A13I、A13L、A13N、A13T、A13W、G14F、G14I、G14K、G14M、G14V、Y15A、Y15C、Y15D、Y15E、Y15G、Y15I、Y15L、Y15M、Y15N、Y15Q、Y15R、Y15S、Y15V、R16D、R16E、R16G、R16H、R16I、R16L、R16N、R16P、R16S、R16T、R16V、R16W、M17A、M17C、M17G、M17K、M17N、M17P、M17Q、M17R、M17S、M17T、S18M、S18N、A19L、S20A、S20C、S20D、S20G、S20L、S20T、S20W、A21I、A21L、A21P、A21Y、A22F、A22L、A22M、A22N、A22R、A22Y、P24G、P24V、A25D、A25E、A25L、A25N、A25Q,A25R、A25V、L26D、L26E、L26F、L26G,L26H、L26I,L26K、L26N、L26R、L26S、L26W,L26Y、L27A、L27C、L27F、L27M、L27W、L27Y、N28R、N28W、D29P、K30P、W31E、W31N、T35L、T35Y,V37F、V37S、V37W、V38D、V38F、V38G、V38P、N39A、N39C、N39E、N39G、N39Q、N39W、A40D、A40L、A40M、A40P、A40V、A40Y、S41C、S41T、I42A、I42C、I42D、I42E、I42G、I42K,I42L、I42M、I42P、I42S、I42T、I42W、I42Y、S43A、S43D、S43E、S43F、S43G、S43H、S43L、S43M、S43N、S43R、S43T、S43V、G44C、G44E、G44H、G44K、G44L、G44N、G44Q、G44R、G44S、D45A、D45C、D45E、D45F、D45H、D45I、D45K,D45L、D45M、D45P、D45Q,D45S、D45T、D45V、D45W、T46A,T46C,T46D,T46G,T46K,T46N,T46R,T46S,S47P、S47Q、Q48E、Q48V、Q48W、Q48Y、Q49A、Q49C、Q49D、Q49E、Q49G、Q49H、Q49I、Q49K、Q49L、Q49M、Q49P、Q49R、Q49S、Q49V、Q49W、Q49Y、G50A、G50C、G50F、G50I、G50K、G50L、G50M、G50N、G50P、G50Q、G50R、G50S、G50T、G50Y、L51A、L51D、L51N、L51T、L51V、L51W、A52C、A52M、A52P、A52W、R53A、R53C、R53D、R53E、R53F、R53G、R53I、R53K,R53L、R53N、R53S、R53T、R53V、R53W、R53Y、L54A,L54C,L54E,L54F,L54G,L54M,L54N,L54S、L54W,L54Y,P55Y、L57A、L57C、L57F、L57K、L57P、L57Q、L57R、L57Y、L58A、L58D、L58E、L58G、L58H、L58N、L58R、L58S、L58W、L58Y、Q60P、H61D、H61G、H61P、Q62P、Q62W、P63I、P63L、P63N、P63S、P63T、P63V、P63W、R64F、R64P、R64W、R64Y、W65A、W65E、W65G、W65K,W65M、W65N、W65V、V66M、V66S、L67A、L67T、V68A、V68L、V68M、V68S、V68T、E69A、E69C、E69D、E69G、E69H、E69K、E69L、E69M、E69N、E69P、E69V、E69Y、L70A、L70C、L70E、L70F、L70H、L70I、L70K、L70Q、L70S、L70T、L70V、G71A、G72A、N73G、N73H,N73L、N73R、N73S、N73T、D74E、D74G、L76I、L76M、L76W、R77C、R77D、R77E、R77G、R77K、R77L、R77Q、R77S、R77V、R77W、G78D、F79P、Q80G、Q80M、Q80S、Q80Y、P81A、P81E、P81K、P81L、P81M、P81W、P81Y、Q82F、Q82V、Q82W、Q82Y、Q83A、T84E、T84R、T84W、Q86A、Q86T、T87E、T87G、T87L、L88C、R89L、R89P、Q90N、Q90P、Q90W、I91G、I91M、I91S、I91V、I91Y、L92A、L92C、L92G、L92H、L92N、L92S、L92T、L92V、L92Y、Q93A、Q93G、Q93H、Q93I、Q93P、Q93Y、D94P、V95F、V95G、V95L、V95N、V95Q、V95T、V95W、K96A、K96L、K96P、K96Y、A97K、A97P、A98L、A98P、A98V、A98W、A98Y、N99C、N99D、N99G、N99L、N99M、N99P、N99Q、N99R、N99W、N99Y、A100D、A100E、A100G、A100H、A100I、A100K、A100L、A100Q、A100R、A100V、A100W、A100Y、E101G、E101L、E101M、E101P、E101S、E101T、E101V、P102E、P102F、P102H、P102L、P102Q,P102R,P102S、P102W、P102Y、L103E、L103K,L103N、L103Q、L103R、L104C、L104P、L104S、L104W、M105C、M105E、M105G、M105V、Q106A、Q106C、Q106G、Q106K、Q106R、Q106S、Q106T、I107C、I107E、I107K、I107L、I107M、I107S、I107V、R108F、R108W、L109M、A111C、A111Q、A111W、N112A、N112G、N112W、Y113A、Y113D、Y113G、Y113I、G114K、G114L、G114M、G114Y、R115A、R115C、R115E、R115G、R115N、R115S、R115Y、R116H、R116W、Y117C、Y117H、Y117I、Y117L、Y117M、Y117N、Y117S、Y117T、Y117V、E119C、E119F、E119K、E119M、E119R、E119W、E119Y、A120D、A120G、A120I、A120T、A120W、S122F、S122I、S122L、S122M、S122V、S122W、S122Y、A123C、A123F、A123H、A123L、A123R、A123T、A123V、A123W、A123Y、I124G、I124H、I124K、I124L、I124R、I124S、I124Y、Y125F、Y125R、P126C、P126F、P126H、P126Y、K127I、K127P、L128A、L128S、L128T、A129H、A129I、A129K、A129N、A129W、A129Y、K130P、E131A、E131C、E131F、E131G、E131K、E131L、E131N、E131V、E131W、D133K,V134D、V134E、V134K、V134N、V134Q、V134R、V134W,V134Y、L136A、L136D、L136E、L136F、L136G、L136H、L136K、L136N、L136P、L136Q、L136R、L136S、L136T、L137E、L137G、L137H、L137P、L137Q、L137S、L137Y、F140M、M141A、M141C、M141L、M141P、E142C、Y145E、Q149L、Q152A、Q152D,Q152E、Q152H、Q152K,Q152R,Q152Y、D153K,G155F、G155W、G155Y、I156C、I156F、I156M、I156V、P158A、P158G、N159G、N159Q,N159T、N159V、R160A、R160D、R160E、R160G、R160H、R160N、R160Q,R160S、R160W、D161I、D161K、D161L、D161M、D161N、D161Q,D161W、A162G、Q163A、Q163C、Q163G、Q163L、Q163M、Q163S、Q163T、P164C、P164M、I166L、I166V、A167C、A167E、A167F、A167G、A167K、A167L、A167N、A167Q、A167R、A167T、A167V、A167Y、D168G、D168H、D168L、D168R、D168V、D168W、W169A、W169D、W169E、W169G、W169K、W169Q,W169S、M170F、M170G、M170N、M170Q,M170S、M170V、M170W、K172M、K172P、Q173N、L174A、L174F、L174G、L174T、L174W、Q175I、P176H、P176K、P176L、P176N、P176W、L177D、L177G、N179H、N179R、N179Y、H180A、H180G、D181H、D181I、D181L、D181R、D181W、S182K、S182L、S182P和/或S182R，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDNO:31的氨基酸位置。可以在体外和/或体内检测对C12底物增加的底物特异性和/或活性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其对C14底物(即碳链长度为14个碳的底物)具有增加的底物特异性和/或活性(例如催化速率)，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDNO31的残基5-20、35-58、65-80、83_90、110-130、140-145、155-160、165-180。可以在体外和/或体内检测对C14底物增加的底物特异性和/或活性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其对C14底物具有增加的底物特异性和/或活性(例如催化速率)，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的一个或多个残基1、4、5、7、8、9、11、12、13、14、15、16、17、20、21、22、23、25、26、28、29、33、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、56、57、58、66、68、69、70、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、89、91、92、93、95、96、97、98、99、100、101、102、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、131、133、134、136、137、138、139、140、141、142、143、147、148、151、152、153、155、156、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、173、174、175、176、178、179、180、181和/或182。可以在体外和/或体内检测对C14底物增加的底物特异性和/或活性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其对C14底物具有增加的底物特异性和/或活性(例如催化速率)，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变A1S、L4S、L4Y、L5H、L5Y、L7C、L7M、L7N、L7S、L7T、L7Y、G8S、D9N、D9T、L11C、L11I、L11M、L11Q、L11V、S12I、S12L、S12M、S12T、S12V、A13H、A13I、A13L、A13T、A13V、G14F、G14I、G14R、G14T、G14V、Υ15Α、Y15C、Y15D、Y15E、Y15G、Y15I、Y15L、Y15M、Y15N、Y15Q,Y15R、Y15S、Y15V、R16G、R16N、R16P、R16W、M17C、M17D、M17G、M17K、M17N、M17P、M17R、M17S、M17T、S20A、S20D、S20G、S20L、S20T、S20W、A21G、A22L、A22N、A22Y、W23Y、A25E、A25N、A25Q,A25V、L26C、L26F、L26H、L26Q,L26V、L26Y,Ν28Κ、N28P,D29V、S33F、S36H、V37H、V37Q、V38F、N39F、N39M、N39Q、N39V、N39W、Ν39Υ、A40G、Α40Ρ、A40T、A40V、S41P、S41T、I42A、I42D、I42E、I42G、I42L、Ι42Μ、Ι42Ρ、I42S、Ι42Τ、I42W、Ι42Υ、S43A、S43D、S43E、S43F、S43G、S43H、S43L、S43M、S43N、S43T、S43V、S43W、G44A、G44C、G44E、G44F、G44H、G44K、G44L、G44M、G44N、G44Q、G44R、G44S、G44W、G44Y、D45A、D45C、D45E、D45F、D45G、D45H、D45M、D45P、D45Q,D45S、D45T、D45V、D45W、Τ46Α,T46C,T46D,T46G,Τ46Κ,Τ46Ν,T46S,T46W,S47E、S47P、S47Q、S47W、S47Y、Q48C、Q48F、Q48I、Q48M、Q48V、Q48W、Q48Y、Q49A、Q49C、Q49D、Q49E、Q49G、Q49H、Q49I、Q49K、Q49L、Q49M、Q49P、Q49R、Q49S、Q49V、Q49W、Q49Y、G50A、G50C、G50E、G50F、G50I、G50K、G50L、G50M、G50N、G50P、G50Q、G50R、G50S、G50T、G50W、G50Y、L51A、L51C、L51D、L51S、L51V、A52H、A52I、A52L、Α52Μ、Α52Ρ、A52R、A52V、A52W、Α52Υ、R53A、R53C、R53D、R53E、R53F、R53G、R53I、R53K,R53L、R53N、R53S、R53T、R53V、R53W、R53Y、L54W,L54Y,A56R、A56W、A56Y、L57F、L58F、L58I、L58Y、V66I、V68L、Ε69Α、E69C、E69D、E69F、E69G、E69H、E69K、E69L、E69M、E69N、E69Q、E69S、E69V、Ε69Υ、L70A、L70C、L70E、L70F、L70H、L70Q、L70S、L70T、L70V、L70W、G72A、G72C、G72P、G72S、Ν73Α、N73C、N73G、Ν73Η,Ν73Ι、N73L、N73P、N73R、N73S、N73T、N73V、N73W、D74E、D74G、G75A、G75C、G75D、G75E、G75F、G75I、G75K,G75L、G75M、G75N、G75P、G75T、G75W、G75Y、L76A、L76C、L76D、L76E、L76F、L76G、L76I、L76K、L76M、L76N、L76P、L76Q、L76R、L76T、L76V、L76W、R77A、R77C、R77D、R77E、R77F、R77G、R77H、R77K、R77L、R77N、R77Q、R77S、R77V、R77W、G78P、F79M、F79P、F79V、Q80A、Q80G、Q80L、Q80M、Q80S、Q80W、Q80Y、P81A、P81E、P81K、P81L、P81M、P81W、Ρ81Υ、Q82F、Q82I、Q82N、Q82P、Q82V、Q82W、Q82Y、Q83A、T84S、E85D、Q86A、Q86T、Q86V、Q86W、Τ87Α、T87C、Τ87Ε、T87F、T87G、Τ87Η、T87L、T87M、T87S、T87V、T87W、R89H、R89T、R89V、R89W、I91L、I91V、Ι91Υ、L92V、Q93A、Q93G、Q93H、Q93I、Q93P、Q93Y、V95L、V95M、V95T、V95W、K96A、K96L、Κ96Ρ、Κ96Υ、A97W、Α98Κ、A98L、A98W、N99G、N99L、N99P、N99Q、N99R、N99Y、A100G、Α100Η、Α100Ι、Α100Κ、Α100Ι^MOOM、A100R、A100T、A100V、A100Y、E101G、E101L、E101M、E101S、E101T、E101V、P102S、M105V、Q106A、Q106C、Q106D、Q106G、Q106H、Q106V、Q106W、Q106Y、I107C、I107E、I107G、R108D、R108F、R108I、R108L、R108S、R108V、L109V、L109Y、P110A、P110E、P110H、P110N、A111V、A111W、N112A、N112F、N112G、N112I、Y113D、Y113G、Y113I、Y113M、Y113W、G114F、R115C、R115E、R115G、R115I、R115N、R115P、R116H、R116T、R116V、R116W、Y117C、Y117H、N118A、N118C、N118E、N118G、N118H、N118I、N118W、E119C、E119D、E119F、E119K、E119M、A120G、A120I、A120L、A120T、A120W、F121A、F121P、F121Q、F121R、F121S、F121V、F121Y、S122I、S122L、S122M、S122P、S122V、S122W、A123T、A123V、A123W、A123Y、I124A,I124C、Y125I、Y125L、Y125P、Y125Q,Y125R、Y125S、E131L、D133K,D133Y、V134S、L136C、L136M、F139M、F140M、M141A、M141C、M141L、M141P、E142Q,E142S、E142Y、E143I、E143P、K147R、Q152S、D153I、D153K,D153M、D153W、G155F、I156Q、I156R、I156S、I156V、P158A、P158G、R160N、R160W、D161G、D161I、D161K、D161L、D161W、A162G、Q163G、Q163L、Q163M、Q163S、P164R、P164T、P164W、F165G、F165H、F165S、D168G、D168H、D168P、D168R、D168T、W169A、W169T、W169V、M170A、M170F、M170V、A171I、Q175Y、P176H、P176K、P176L、P176R、P176W、M105A、M105C、M105E、M105G、M105I、M105L、Q106K、Q106L、Q106M、Q106R、Q106S、Q106T、I107L、I107M、I107Q、I107V、R108A、R108C、R108W、R108Y、L109C、L109M、L109Q、L109T、P110R、P110V、A111C、A111L、A111Q、A111R、N112L、N112P、N112V、N112W、N112Y、Y113A、G114K、G114L、G114M、G114W、G114Y、R115A、R115Q,R115S、R115V、R115W、R115Y、R116C、Y117I、Y117L、Y117M、Y117N、Y117S、Y117W、N118L、N118M、N118P、N118Q,N118T、N118V、E119P、E119R、E119T、E119W、E119Y、A120D、F121C、F121D、F121E、F121K、F121L、F121M、S122A、S122C、S122D,S122E、S122F、S122G、S122Y、A123C、A123E、A123F、A123H、A123L、I124G、I124L、I124Y、Y125C、Y125F、Y125G、Y125T、Y125V、P126C、P126H、P126Y、E131I、L136Q、L136S、L137P、P138E、P138R、P138T、E142A、E142C、E142L、E142M、E142N、E142P、P148W、M151I、M151Q、M151V、Q152A、Q152K,G155H、G155W、G155Y、I156C、I156F、I156M、P158S、N159G、N159T、R160A、R160G、R160H、D161M、D161N、D161Q,D161R、D161S、D161V、P164A、P164C、P164K、P164L、P164M、P164N、F165W、F165Y、I166L、I166V、A167T、D168A、W169E、W169K、W169M、W169Q,W169R、W169S、Q173N、Q173W、Q173Y、L174Q、L174W、Q175I、P176Y、V178A、V178T、V178W、N179H、N179R、N179T、N179V、N179Y、H180G、H180R、H180S、H180W、D181A、D181H、D181I、D181L、D181Q、D181R、D181S、D181W、S182A、S182E、S182G、S182I、S182K、S182L、S182P、S182Q、S182R和/或S182T，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDNO:31的氨基酸位置。可以在体外和/或体内检测对C14底物增加的底物特异性和/或活性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其具有对酯底物(例如酰基PNP)超过对硫酯底物(例如酰基辅酶A)的偏好性，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于选自SEQIDNO31中95、96、97、98、99、100、101、102、104、105、106、107、108、109和/或110的残基。可以在体外和/或体内检测对酯底物超过对硫酯底物的偏好性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其具有对酯底物(例如酰基PNP)超过对硫酯底物(例如酰基辅酶A)的偏好性，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变V95L、V95M、V95T、K96A、K96L、K96W、K96Y、A97F、A97K、A97S、A97T、A97W、A98E、A98F、A98K、A98L、A98Q、A98W、N99Y、A100K、A100V、E101L、P102S、L104C、M105F、Q106A、Q106C、Q106T、Q106Y、I107A、I107C、I107G、I107L、I107M、I107Q、I107V、R108A、R108C、R108D、R108F、R108I、R108L、R108S、R108V、R108W、R108Y、L109M、L109V、P110A、P110F、P110H、P110N、PllOV和/或P110W，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDNO:31的氨基酸位置。可以在体外和/或体内检测对酯底物超过对硫酯底物的偏好性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其具有对硫酯底物(例如酰基辅酶A)超过对酯底物(例如酰基PNP)的偏好性，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于选自SEQIDNO31的95、96、97、101、102、103、104、105、107、109和/或110的残基。可以在体外和/或体内检测对硫酯底物超过对酯底物的偏好性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其具有对硫酯底物(例如酰基辅酶A)超过对酯底物(例如酰基PNP)的偏好性，并且所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变V95E、V95I、V95W、V95Y、K96P、A97E、A97M、E101P、P102D、P102K、P102Y、L103E、L103K、L103N、L104A、L104D、L104E、L104N、L104Q、L104W、L104Y、M105W、I107E、I107K、I107P、L109A、L109C,L109D、L109E、L109G、L109K、L109N、L109P、L109Q、L109S、L109T、L109Y和/或Pl10R，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDNO:31的氨基酸位置。可以在体外和/或体内检测对硫酯底物超过对酯底物的偏好性。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其产生的脂肪酯与其它非脂肪酯产物(例如脂肪酯之外的游离脂肪酸和/或脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比增加，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDN0:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于选自SEQIDNO31的1-14、22-四、33-58、65_100、103-109、114-117、119-121、127-136、139-144、150-151、155-170和/或173-174的残基。可以在体外和/或体内观察或测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的增加。优选体内测定脂肪酯与其它产物相比的收率比例或收率百分比的增加。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其产生的脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的游离脂肪酸和/或脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比增力卩，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDNO:31中选自以下的残基1、2、4、5、6、7、8、12、13、14、22、23、24、25、26、28、29、33、34、35、36、37、38、39、40、41、44、45、46、47、49、50、53、58、65、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、79、81、84、86、87、88、89、90、91、92、93、95、96、99、100103、104、105、106、107、108、109、114、115、117、119、120、121、127、128、129、131、132、134、135、136、139、141、142、143、144、150、151、155、156、158、159、160、161、162、163、164、165、166、169、170、173和/或174。可以在体外和/或体内观察或测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的增加。优选体内测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的增加。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其产生的脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的游离脂肪酸和/或脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比增力卩，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变:A1R、D2H、D2R、L4G、L4M、L5Q、I6A、I6L、L7E、G8A、S12N、A13I、A13L、A13S、A13T、A13W、A13Y、G14K、G14R、G14S、G14T、A22D、A22E、A22H、A22Y、W23Y、P24C、P24G、P24T、A25P、L26C、L26D、L26E、L26G、L26N、N28A、N28M、D29V、S33G、S33M、K34A、K34H、K34M、T35G、T35M、S36A、V37A、V37G、V37H、V37S、V38D、V38G、V38P、N39E、N39Q、N39R、A40M、A40P、S41T、G44F、G44Y、D45P、D45Q、T46W、S47F、Q49I、G50A、G50K、G50M、G50S、R53S、L58D、L58M、L58R、W65L、L67G、V68G、V68M、V68N、E69P、E69Q、L70A、L70E、L70H、G71C、G72A、N73C、N73G、N73L、N73R、N73T、N73V、D74C、D74S、D74W、G75A、G75K、G75L、G75M、L76A、L76F、L76G、L76I、L76M、L76N、L76T、L76W、R77G、F79A、F79M、F79P、P81E、P81W、T84F、T84H、T84Y、Q86P、Q86W、T87M、T87S、T87W、L88C、L88F、L88G、L88H、L88Y、R89G、Q90P、Q90W、I91M、I91S、L92C、L92G、Q93F、Q93P、V95A、V95D、V95E、V95L、V95M、K96P、N99L、N99M、N99S、A100D、A100K、A100L、A100M、A100V、A100Y、L103A、L104A、L104C、L104P、L104Q、L104W、M105A、Q106A、Q106C、Q106T、Q106W、I107C、I107M、R108E、L109F、L109M、G114F、R115W、Y117P、E119D、E119P、A120P、F121A、F121C、F121W、K127P、L128F、A129L、A129Y、E131A、F132P、V134P、P135A、L136A、F139M、M141A、M141P、E142A、E143P、V144A、W150D、W150E、M151S、G155V、I156K、I156M、P158A、P158G、P158Q、P158S、N159E、N159I、R160H、R160I、R160K、D161G、A162T、A162Y、Q163A、Q163C、Q163E、Q163G、Q163I、Q163M、Q163S、Q163T、Q163V、P164C、F165D、F165S、I166A、I166L、W169M、M170E、M170G、M170N、M170S、Q173P和/或L174A，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDN0:31的氨基酸位置。可以在体外和/或体内观察或测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的增加。优选体内测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的增加。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，当不需要产生脂肪酯时，所述突变硫酯酶产生的脂肪酯与其它非脂肪酯产物(例如脂肪酯之外的游离脂肪酸和/或脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比降低，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的残基:3、5、15-18、27-42、46、57-68、77-78、95-106、121-123、152-巧4、167和/或175-182。可以在体外和/或体内观察或测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的降低。优选体内测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的降低。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，当不需要产生脂肪酯时，所述突变硫酯酶产生的脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的游离脂肪酸和/或脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比降低，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的残基3、5、15、16、18、27、沘、33、；34、35、36、37、38、40、42、46、57、59、60、62、65、68、77、78、95、96、97、98、99、100、102、103、105、106、121、123、152、153、154、167、175、176、178、179、180,181和/或182。可以在体外和/或体内观察或测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的降低。优选体内测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的降低。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，当不需要产生脂肪酯时，所述突变硫酯酶产生的脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的游离脂肪酸和/或脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比降低，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变T3E、T3G、T3K、T3L、L5C、L5G、Y15A、Y15L、Y15Q、Y15R、Y15V、R16D、R16E、R16G、R16I、R16V、S18E、L27V、N28G、N28I、S33I、S33R、K34R、T35F、T35K、T35L、T35Q、T35V、S36F、S36I、S36L、S36W、V37L、V38E、V38F、V38K、V38L、A40D、A40G、I42T、T46L、L57A、L57F、L57G、L57H、L57K、L57N、L57P、L57R、L57S、L57T、L57V、L57W、L57Y、K59V、Q60E、Q60P、Q62G、W65V、V68L、R77L、G78M、V95F、V95N、K96C、K96L、K96N、K96Q、K96R、K96Y、A97E、A97F、A97R、A97W、A98E、N99A、N99D、A100S、P102I、L103Q、L103W、M105L、Q106G、Q106H、Q106K、Q106S、Q106V、F121P、A123E、Q152D、Q152E、Q152F、Q152H、Q152I、Q152K、Q152L、Q152S、Q152T、Q152Y、D153P、D153V、D154E、A167V、Q175L、P176D、V178K、N179H、N179W、H180E、H180L、H180P、H180R、D181C、D181E、S182K、S182L、S182N、S182R、S182T和/或S182V，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDNO:31的氨基酸位置。可以在体外和/或体内观察或测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的降低。优选体内测定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)相比的收率比例或收率百分比的降低。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其能增加和/或提高一种或多种脂肪酸衍生物的收率，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的残基2、4、11-22、25-31、37-45、49-58、63-80、84-130、136-146和/或150-174。由此产生的示例性的脂肪酸衍生物是游离脂肪酸。可以在体外和/或体内检测脂肪酸衍生物增加和/或提高的收率。优选在体内检测脂肪酸衍生物增加和/或提高的收率。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其能增加和/或提高一种或多种脂肪酸衍生物的收率，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDN0:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的残基2、4、11、12、13、14、15、16、17、19、21、22、25、26、27、28、29、30、31、37、39、41、42、43、44、45、49、50、51、53、54、58、63、65、66、67、68、69、70、71、73、74、75、76、77、78、79、80、84、87、88、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、115、117、118、119、120、121、122、124、127、128、129、130、136、137、138、139、140、141、143、144、145、146、150、151、152、154、155、156、158、162、163、166、167、169、170、173和/或174。由此产生的示例性的脂肪酸衍生物是游离脂肪酸。可以在体外和/或体内检测脂肪酸衍生物增加和/或提高的收率。优选在体内检测脂肪酸衍生物增加和/或提高的收率。在本发明的一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其能增加和/或提高一种或多种脂肪酸衍生物的收率，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDN0:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变D2L、D2P、D2R、L5G、L11I、S12N、S12T、A13N、G14C、G14P、G14S、G14T、G14V、Y15C、Y15I、Y15V、R16T、M17D、M17E、M17N、M17R、M17S、M17V、A19C、A21G、A22L、A22R、A22T、A25P、L26D、L26G、L26W、L27C、L27F、L27W、L27Y、N28I、N28P、D29P、K30P、W31D、W31G、W31N、W31P、W31R、W31S、W31T、V37Y、N39P、S41C、I42D、I42G、S43E、G44K、G44R、G44W、D45G、Q49E、G50A、G50K、G50M、G50Q、L51D、L51T、R53A、R53G、R53L、R53N、R53S、R53V、L54E、L54F、L54G、L54N、L54S、L54W、L58R、P63G、P63M、P63N、P63T、P63W、W65E、W65G、V66G、V66S、L67T、V68S、E69F、E69V、L70C、L70F、L70Q、L70S、L70T、L70V、G71A、N73G、N73L、D74A、D74C、G75A、G75C、G75F、G75R、G75W、L76I、R77A、R77C、R77D、R77F、R77G、R77H、R77K、R77L、R77N、R77Q、R77S、R77W、G78D、G78E、F79K、Q80G、T84H、T84N、T84Q、T87A、T87F、T87H、T87W、L88A、L88C、L88H、Q90N、Q90W、I91G、I91L、I91M、I91S、L92G、L92N、L92Q、L92S、L92T、L92Y、Q93P、D94P、V95F、V95N、V95Q、K96P、A97C、A97P、A98P、A98V、A100D、A100E、A100Q、A100Y、P102L、P102Q、P102R、L103E、L103K、L104A、L104Q,L104W、L104Y、M105C、M105E、M105F、M105L、Q106D,Q106G,Q106L、Q106V、Q106W、Q106Y、I107A、I107C、I107E、I107G、I107K、I107L、I107Q、I107S、I107T、R108G、L109F、L109V、L109Y、P110A、P110E、P110F、P110G、P110H、P110N、P110S、P110V、A111Y、N112F、N112P、Y113D、Y113E、Y113P、R115W、Y117A、Y117D、Y117E、Y117G、Y117P、Y117Q、N118F、E119P、A120P、F121C、F121L、F121M、F121N、F121Q、F121R、F121V、F121W、F121Y、I124R、K127P、L136N、L136P、S122D、S122F、L128S、A129I、L136Q、L136S、S122L、S122P、S122W、S122Y、I124A,I124G、I124H、I124K、L136G、L136K、L137S、L137Y、A129W、A129Y、K130P、L136A、L136D、L136E、L136T、L137A、L137C、L137H、L137K、L137Q、P138F、F139L、F139M、F140C、F140I、F140L、F140M、F140V、M141T、E143P、V144H、Y145I、L146G、L146P、W150G、W150I、W150V、M151F、M151L、M151R、M151S、M151T、M151W、Q152N、Q152V、Q152Y、D154C、D154E、G155I、I156C、I156K、I156T、I156V、P158G、P158T、A162T、Q163A、Q163C、Q163E、Q163I、Q163S、Q163T、Q163V、I166C、A167E、A167F、A167L、A167N、A167R、A167V、A167Y、W169K、M170N、M170S、Q173D、L174A、L174T和/或L174W，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDNO:31的氨基酸位置。由此产生的示例性的脂肪酸衍生物是游离脂肪酸。可以在体外和/或体内检测脂肪酸衍生物增加和/或提高的收率。优选在体内检测脂肪酸衍生物增加和/或提高的收率。在一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其产生的短链(例如c8、c9、c1(l、cn、c12、c13、c14)脂肪酸衍生物(例如短链脂肪酸、短链脂肪酯、短链脂肪醇等)其它产物(例如非短链脂肪酸衍生物，包括例如，长链(例如c15、c16、c17、c18、c19、C20)脂肪酸、长链脂肪酯、长链脂肪醇等)相比的收率比例或收率百分比增加，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的残基13、16-17、25-38、55-67、78-98、105-119、122、U6、132-145、153和/或161-182。示例性的短链脂肪酸衍生物是C12脂肪酸衍生物。可选的短链脂肪酸衍生物是C14脂肪酸衍生物。在某些情况下，短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的增加可与长链脂肪酸衍生物收率比例的降低有关。可以在体外或体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的增加和/或长链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的相应降低。优选在体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例的增加或长链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的相应降低。在一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其产生的短链(例如C8、C9、C1(l、Cn、C12、C13、C14)脂肪酸衍生物(例如短链脂肪酸、短链脂肪酯、短链脂肪醇等)与其它产物(例如非短链脂肪酸衍生物，包括例如，长链(例如C15、C16、C17、C18、C19、C2Q)脂肪酸、长链脂肪酯、长链脂肪醇等)相比的收率比例或收率百分比增加，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的一个或多个残基13、16、17、25、29、31、35、36、38、55、57、58、59、61、62、63、64、65、66、67、78、79、82、83、84、85、86、87、89、90、93、94、95、96、97、98、105、106、108、111、113、114、117、119、122、126、132、135、136、139、142、144、145、153、161、162、165、168、173、175、176、178、179、180、181和/或182。示例性的短链脂肪酸衍生物是C12脂肪酸衍生物。可选的短链脂肪酸衍生物是C14脂肪酸衍生物。在某些情况下，短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的增加可与长链脂肪酸衍生物收率比例的降低有关。可以在体外或体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的增加和/或长链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的相应降低。优选在体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例的增加或长链脂肪酸衍生物收率比例的相应降低。在一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其产生的短链(例如C8、C9、C10,C11,C12,C13、C14)脂肪酸衍生物(例如短链脂肪酸、短链脂肪酯、短链脂肪醇等)与其它产物(例如非短链脂肪酸衍生物，包括例如，长链(例如C15、C16、C17、C18、C19、C20)脂肪酸、长链脂肪酯、长链脂肪醇等)相比的收率比例或收率百分比增加，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变A13V、R16A、M17T、A25S、D29M、W31L、T35Y、S36W、V38S、P55A、P55G、L57I、L58M、L58V、K59E、H61W、Q62M、P63V、R64M、W65L、V66C、L67C、L67M、G78F、G78M、G78R、G78T、G78V、F79K、F79Y、Q82A、Q82M、Q82R、Q83G、Q83K、T84M、T84V、E85A、E85C、E85G、E85Q、E85S、E85T、E85V、E85W、E85Y、Q86H、Q86Y、T87R、R89V、Q90L、Q93M、Q93N、Q93V、D94C、D94L、V95G、K96C、A97N、A97V、A98G、A98Y、M105I、Q106K、Q106R、R108W、Al1IE、A111N、A111S、A111W、A111Y、Y113A、Y113S、Y113V、G114K、G114Y、Y117R、E119M、E119Q、E119R、S122F、S122I、S122M、S122R、P126K、F132C、F132D、F132K、F132L、F132N、F132V、P135A、P135E、P135K、P135Q、L136H、F139L、E142W、V144Y、Y145A、Y145C、Y145D、Y145E、Y145G、Y145I、Y145L、Y145M、Y145N、Y145R、Y145S、Y145T、D153K、D153Q、D161K、A162I、F165K、D168W、Q173I,Q175M,P176Q,P176R、P176V、V178F、V178G、V178L、V178R、V178S、V178T、N179H、H180E、H180P、H180R、H180S，H180V、H180W、D181R、D181T、S182C，S182D、S182G和/或S182R，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDNO:31的氨基酸位置。示例性的短链脂肪酸衍生物是C12脂肪酸衍生物。可选的短链脂肪酸衍生物是C14脂肪酸衍生物。在某些情况下，短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的增加可与长链脂肪酸衍生物收率比例的降低有关。可以在体外或体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的增加和/或长链脂肪酸衍生物收率比例的相应降低。优选在体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例的增加或长链脂肪酸衍生物收率比例的相应降低。在一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其产生的短链(例如c8、C9、C10,C11,C12,C13、C14)脂肪酸衍生物(例如短链脂肪酸、短链脂肪酯、短链脂肪醇等)与其它产物(例如非短链脂肪酸衍生物，包括例如，长链(例如c15、c16、c17、c18、c19、C20)脂肪酸、长链脂肪酯、长链脂肪醇等)相比的收率比例或收率百分比降低，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO:31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDN0:31中选自以下的一个或多个残基1-31、36-81、84-159、162-177和/或181。示例性的短链脂肪酸衍生物是C12脂肪酸衍生物。可选的短链脂肪酸衍生物是C14脂肪酸衍生物。在某些情况下，短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的降低可与长链脂肪酸衍生物收率比例的增加有关。可以在体外或体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的降低和/或长链脂肪酸衍生物收率比例的相应增加。优选在体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例的降低或长链脂肪酸衍生物收率比例的相应增加。在一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其产生的短链(例如C8、C9、C10,C11,C12,C13、C14)脂肪酸衍生物(例如短链脂肪酸、短链脂肪酯、短链脂肪醇等)与其它产物(例如非短链脂肪酸衍生物，包括例如，长链脂肪酸、长链脂肪酯、长链脂肪醇等)相比的收率比例或收率百分比降低，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶在一个或多个氨基酸位置处进行了突变，所述一个或多个氨基酸位置对应于SEQIDNO31中选自以下的一个或多个残基1、2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、13、14、15、16、17、18、19、21、22、23、24、26、27、30、31、36、37、38、42、44、45、46、47、48、50、51、52、53、54、55、57、61、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、81、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、99、100、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、117、118、119、120、121、122、124、125、127、128、129、130、131、132、133、134、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、162、163、165、166、167、168、170、171、173、174、175、176、177和/或181。示例性的短链脂肪酸衍生物是C12脂肪酸衍生物。可选的短链脂肪酸衍生物是C14脂肪酸衍生物。在某些情况下，短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的降低可与长链脂肪酸衍生物收率比例的增加有关。可以在体外或体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的降低和/或长链脂肪酸衍生物收率比例的相应增加。优选在体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例的降低或长链脂肪酸衍生物收率比例的相应增加。在一个实施方案中，提供了突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)，其产生的短链(例如c8、C9、C10,C11,C12,C13、C14)脂肪酸衍生物(例如短链脂肪酸、短链脂肪酯、短链脂肪醇等)与其它产物(例如非短链脂肪酸衍生物，包括例如，长链脂肪酸、长链脂肪酯、长链脂肪醇等相比的收率比例或收率百分比降低，所述突变硫酯酶是包含图58的SEQIDNO31的类似序列的前体硫酯酶的变体，其中所述前体硫酯酶用选自以下的一个或多个取代进行了突变A1C、A1F、AIL、A1Y、D2L、D2M、D2P、D2W、T3R、L4A、L4M、L4N、L4S、L4V、L4Y、L5E、L5F、L5G、L5K、L5N、L5S、L5W、I6T、L7A、L7E、L7K、L7M、L7W、G8K、D9N、D9T、LlΙΑ、Ll1C、Ll11、L11M、L11Q、L11V、S12I、S12L、S12M、S12N、S12T、S12V、S12Y、A13C、G14C、G14E、G14I、G14M、G14N、G14P、G14S、G14T、G14V、Y15C、Y15E、Y15G、Y15I、Y15N、Y15V、R16T、M17D、M17E、M17G、M17L、M17N、M17P、M17R、M17S、M17V、S18M、S18N、S18T、A19E、A19L、A19V、A21P、A22D、A22E、A22F、A22H、A22I、A22K、A22L、A22P、A22R、A22S、A22T、A22Y、W23A、W23H、W23N、W23P、P24A、P24C、P24D、P24E、P24F、P24G、P24I、P24M、P24N、P24S、P24T、P24V、P24W、L26P、L27A、L27C、L27F、L27H、L27R、L27S、L27T、L27W、L27Y、K30P、W31D、W31P、W31R、S36F、S36L、V37G、V37H、V37N、V37Q、V37W、V37Y、V38P、N39E、N39G、N39K、N39M、N39P、N39Q、N39Y、I42D、I42G、I42P、G44A、G44E、G44K、G44M、G44N、G44R、G44S、G44W、G44Y、D45G、D45M、T46D、S47E、S47P、S47Q,S47R、S47Y、Q48Y,G50C、G50E、G50F、G50I、G50K、G50L、G50M、G50N、G50P、G50Q,G50R、G50S、G50T、G50W、G50Y、L51D、L51P、L51T、A52P、R53A、R53C、R53D、R53E、R53F、R53G、R53I、R53K、R53L、R53N、R53S、R53T、R53V、R53W、R53Y、L54C、L54E、L54G、L54N、L54Y、P55Y、L57P、H61A、H61D、H61E、P63D、P63E、P63G、P63K、P63M、P63N、P63Q、P63R、R64L、W65G、W65P、W65R、V66N、V66Q,V66S、V66W、V66Y、L67E、L67G、L67Q,L67R、L67S、L67W、V68E、V68G、V68N、V68P、V68Q,E69A、E69C、E69D、E69F、E69G、E69H、E69K、E69L、E69M、E69N、E69P、E69Q、E69S、E69V、E69W、E69Y、L70A、L70C、L70E、L70F、L70G、L70H、L70K、L70Q、L70S、L70T、L70W、G71C、G71S、G72A、G72M、G72P、N73A、N73G、N73H、N73I、N73L、N73P、N73R、N73S、N73T、N73W、D74A、D74C、D74F、D74G、D74Q、D74S、D74W、D74Y、G75A、G75C、G75D、G75E、G75F、G75I、G75K、G75L、G75M、G75N、G75P、G75R、G75T、G75V、G75W、G75Y、L76A、L76C、L76D、L76E、L76F、L76G、L76I、L76K、L76M、L76N、L76P、L76Q、L76R、L76T、L76V、L76W、R77A、R77C、R77D、R77E、R77F、R77G、R77H、R77N、R77S、R77V、R77W、G78A、G78C、G78D、G78E、G78N、G78P、G78Q、G78Y、F79P、F79Q、F79S、F79V、P81E、P81W、T84D、T84E、T84G、T84H、T84K、T84L、T84N、T84Q、T84R、T84W、T84Y、E85F、E85P、Q86A、T87F、L88A、L88E、L88G、L88H、L88Q、L88S、L88W、L88Y、R89P、Q90P、Q90W、I91E、I91L、I91M、I91N、I91Q、I91S、I91Y、L92C、L92E、L92G、L92H、L92N、L92Q、L92R、L92S、L92Y、Q93P、D94P、D94V、V95A、V95C、V95D、V95E、V95F、V95I、V95P、V95Q、V95W、V95Y、K96P、A97C、A97P、N99D、A100Q、A100Y、P102E、P102G、P102H、P102L、P102R、P102V、P102W、L103C、L103E、L103I、L103K,L103N、L103R、L103S、L103T、L103V、L104A、L104C、L104E、L104G、L104I、L104N、L104P、L104Q、L104S、L104W、L104Y、M105A、M105C、M105E、M105F、M105G、M105K、M105L、M105P、M105T、M105W、Q106D、Q106G、Q106H、Q106L、Q106W、I107A、I107E、I107F、I107G、I107K、I107L、I107Q、I107S、I107T、I107Y、R108A、R108C、R108D、R108E、R108F、R108G、R108H、R108I、R108L、R108M、R108S、R108V、R108Y、L109C、L109F、L109G、L109K、L109Q、L109R、L109T、L109V、L109Y、P110A、P110C、P110D、P110E、P110F、P110G、P110H、P110K、P110L、P110M、P110N、P110R、P110S、P110V、P110W、A111C、A111L、A111P、A111Q、A111R、A111V、N112I、N112L、N112P、N112Y、Y113D、Y113E、Y113Q、G114A、R115W、Y117D、Y117G、Y117P、N118F、E119C、E119L、A120P、F121A、F121C、F121D、F121E、F121G、F121K、F121L、F121N、F121P、F121Q、F121R、F121S、F121V、F121W、F121Y、S122D,S122E、S122L、S122P、I124D、I124E、I124G、I124H、I124K、I124R、I124W,I124Y、Y125C、Y125G、Y125H、Y125I、Y125L、Y125P、Y125Q,Y125R、Y125S、Y125T、Y125V、K127A、L128E、L128F、L128G、L128K、L128Q、L128R、L128S、L128W、A129D、A129F、A129L、A129W、A129Y、K130P、K130V、E131A、E131C、E131D、E131P、E131V、F132P、D133C、V134C、V134D、V134N、V134P、V134W、L136A、L136D、L136E、L136G、L136N、L136P、L136T、L137D、L137E、L137G、L137H、L137K、L137P、L137Q、L137R、L137S、P138G、P138N、P138V、F139A、F139C、F139D、F139E、F139G、F139H、F139M、F139N、F139S、F139T、F139V、F139W、F140A、F140C、F140G、F140I、F140L、F140M、F140N、F140P、F140S、F140T、F140V、F140W、M141C、M141D、M141E、M141F、M141G、M141K、M141L、M141P、M141Q,M141R、M141T、M141W、M141Y、E142A、E142C、E142G、E142I、E142L、E142M、E142P、E142Q,E142R、E142T、E142V、E143A、E143D、E143F、E143G、E143I、E143M、E143P、E143W、V144A、V144D、V144E、V144G、V144H、V144N、V144P、V144Q、V144R、V144S、Y145Q,Y145W、L146C、L146P、W150P、W150R、M151A、M151C、M151D、M151E、M151F、M151G、M151I、M151L、M151Q、M151R、M151S、M151T、M151V、M151W、Q152P、D153A、D153E、D153F、D154A,D154C、D154E、D154F、D154G、D154H、D154I、D154K、D154L、D154M,D154N、D154P、D154R、D154S、D154T、D154V、D154W,G155A、G155P、G155V、I156A、I156C、I156E、I156F、I156G、I156K、I156M、I156Q、I156R、I156S、I156T、I156Y、H157C、H157E、P158F、P158H、P158I、P158L、P158Q、P158V、P158W、N159P、N159W、A162K,A162L、A162N、A162R,A162Y、Q163A、Q163D、Q163E、Q163F、Q163I、Q163V、Q163W、Q163Y、F165L、I166A、I166F、I166M、I166S、I166Y、A167C、A167D、A167E、A167F、A167L、A167N、A167R、A167V、A167W、A167Y、D168M、D168R、M170E、M170F、M170G、M170N、M170S、M170T、A171S、Q173D、Q173P、L174A、L174G、L174S、L174T、L174W、L174Y、Q175F、P176L、P176Y、L177F、L177M、L177S、D181C、D181E和/或D181G，其中取代突变命名中的数字是指SEQIDNO:31的氨基酸位置。示例性的短链脂肪酸衍生物是C12脂肪酸衍生物。可选的短链脂肪酸衍生物是C14脂肪酸衍生物。在某些情况下，短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的降低可与长链脂肪酸衍生物收率比例的增加有关。可以在体外或体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例或收率百分比的降低和/或长链脂肪酸衍生物收率比例的相应增加。优选在体内检测短链脂肪酸衍生物收率比例的降低或长链脂肪酸衍生物收率比例的相应增加。在本发明的一个实施方案中，提供了编码本发明突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的多核苷酸(或基因)。在本发明的另一个实施方案中，提供了包含本发明多核苷酸(或基因)的载体。在本发明的一个实施方案中，编码前体硫酯酶的基因可与‘tesA或其直系同源物、旁系同源物或同源物的多核苷酸序列选择性地杂交。图56列出了与‘TesA具有至少40%的氨基酸序列同一性的‘TesA蛋白同源物的GenBank登录号。前体硫酯酶可以由在中等严紧性、高严紧性或最大严紧性条件下进行选择性地杂交的多核苷酸编码。在本发明的一个实施方案中，提供了编码前体硫酯酶的多核苷酸，其中所述前体硫酯酶包含‘TesA的氨基酸序列、其直系同源物、旁系同源物或同源物。例如，前体硫酯酶包含获自大肠杆菌(例如大肠杆菌KU)的‘TesA的氨基酸序列。在具体的实施方案中，提供了编码前体硫酯酶的多核苷酸，其中所述前体硫酯酶包含图58的SEQIDN0:31的氨基酸序列、变体或片段。在具体的实施方案中，编码前体硫酯酶的基因包含图59的SEQIDNO32的多核苷酸序列或其片段。在本发明的一个实施方案中，提供了编码前体硫酯酶的多核苷酸，其中所述前体硫酯酶包含与图58的SEQIDNO31序列具有至少约20%，例如，至少约25%、30%、35%、40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95^^96^^97^^98^^99%或100%的同一性的蛋白。在一个实施方案中，提供了编码前体硫酯酶的多核苷酸，其中所述前体硫酯酶包含与大肠杆菌K12iTesA的序列具有至少约20%，例如，至少约25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%^；100%的同一性的蛋白。在本发明的一个实施方案中，提供了多核苷酸，所述多核苷酸包含与图59的SEQIDN0:32具有至少约20%，例如，至少约25%、30%、；35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%^；100%的同一性的序列。在本发明的一个实施方案中，提供了包含编码突变硫酯酶或其天然存在的等同物的基因(或多核苷酸)的载体。可以将本发明的载体转化入合适的宿主细胞从而产生重组宿主细胞。在本发明的一个实施方案中，提供了包含长度为约4-约150个核苷酸的多核苷酸的探针，其与图59的SEQIDNO:32的对应片段基本相同，其中所述探针用于检测和/或鉴定编码具有硫酯酶活性的酶的多核苷酸序列。本发明的探针可用于从不了解是否产生前体硫酯酶的来源检测和分离潜在的前体硫酯酶或检测和分离氨基酸或核酸序列未知的潜在的前体硫酯酶。在本发明的某些实施方案中，提供了重组宿主细胞，其包含编码突变硫酯酶或其天然存在的等同物的多核苷酸。在一个实施方案中，已知的基因组改变或修饰技术可以用于改变或修饰宿主细胞的内源硫酯酶，实现一个或多个上述突变，使得至少一种突变内源硫酯酶具有至少一种改变的性质。在另一个实施方案中，将重组宿主细胞进行工程化使其包含质粒，所述质粒含有编码突变硫酯酶或其天然存在的等同物的多核苷酸。在另一个实施方案中，在将编码硫酯酶的多核苷酸整合进宿主细胞的染色体中之后，重组宿主细胞表达硫酯酶。在本发明的一个实施方案中，本发明的重组宿主细胞可以选自能表达重组基因构建体的任何细胞，并且可以选自微生物、植物或动物细胞。在具体的实施方案中，宿主细胞是细菌、蓝细菌、真菌、酵母、藻类、人或哺乳动物来源。在具体的实施方案中，宿主细胞选自任何革兰氏阳性细菌，例如放线菌属(Actinomycetes)；芽孢杆菌科(Bacillaceae)，包括嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalkalophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、迟缓枯草芽孢杆菌(Bacilluslentus)、短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)、嗜热月旨肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌、角军淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、凝固芽孢杆菌(BacillusCoagulans)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、灿烂芽孢杆菌(Bacilluslautus)、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)、苏云金芽子包杆菌(B.thuringiensis)；失显杆菌(Brevibacteriasp.),包括黄色短杆菌(Brevibacteriumflavum)、乳发酵短杆菌(Brevibacteriumlactofermentum)、产MfeiIf菌(Brevibacteriumammoniagenes)、Brevibacteriumbutanicum、叉开短杆菌(Brevibacteriumdivaricatum)、希氏短杆菌(Brevibacteriumhealii)>1二Sl失豆ff胃(Brevibacteriumketoglutamicum)>失豆ff胃(Brevibacteriumketosoreductum)、季L发酵feilflii(Brevibacteriumlactofermentum)>扩展feiIf菌(Brevibacteriumlinens)>(Brevibacteriumparaffino1yticum)；棒杆菌(Corynebacteriumspp.)，例如谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)和栖糖蜜棒杆菌(C.melassecola)、力士棒杆菌(Corynebacteriumherculis)、百合花棒杆菌(Corynebacteriumlilium)、口誉乙酉先乙酸棒杆菌(Corynebactertiumacetoacidophilum)>St谷棒!f菌(Corynebacteriumacetoglutamicum)、口誉乙酉先棒！f菌(Corynebacteriumacetophilum)>产M棒杆菌(Corynebacteriumammoniagenes)>Corynebacteriumfujiokense、Corynebacteriumnitrilophilus；或者乳酸菌包括i者如乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)的乳球菌(Lactococcusspp.)；乳杆菌(Lactobacillusspp.)包括路氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)；明串珠菌(Leuconostocspp.)；片球菌(Pediococcusspp.)；沙雷氏菌(Serratiaspp.),例如粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)；链霉菌(Streptomyces)，例如浅青紫链霉菌(Streptomyceslividans)>鼠灰链霉菌(Streptomycesmurinus)、天蓝色链霉菌(S.coelicolor)禾口链球菌(Streptococcusspp·)。可选地，属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的革兰氏阴性细菌菌株包括大肠杆菌、纤维单胞菌；或者属于假单胞菌科O^eudomonadaceae)的革兰氏阴性细菌菌株包括铜绿假单胞菌、产碱假单胞菌O^eudomonasalcaligenes)、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、丁香假单胞菌和洋葱伯克氏菌Burliholderiac印acia、沙门氏菌(Salmonellasp.)、寡养单胞菌(Stenotrophomonasspp.)和嗜麦芽糖寡养单胞菌。也可以使用产油微生物，诸如混浊红球菌(Rhodococcusopacus)的红球菌(Rhodococcusspp)、雷尔氏菌(Ralstoniaspp.)和(Acetinobacterspp·)。此外，酵母和和丝状真菌菌株可以是可用的宿主细胞，包括犁头霉菌(Absidiaspp.)；支顶孢(Acremoniumspp.)；落叶松蕈(Agaricusspp.)；厌氧真菌(Anaeromycesspp.)；曲霉菌(Aspergillusspp·),包括棘孢曲霉(A.aculeatus)、泡盛曲霉(A.awamori)、黄曲霉(A.flavus)、臭曲霉(A.foetidus)、丁稀二酸青霉(A.fumaricus)、烟曲霉(A.fumigatus)、构巢曲霉(A.nidulans)、黑曲霉(A.niger)、米曲霉(A.oryzae)、土曲霉(A.terreus)；塔宾曲霉(A.tubingensis)禾口杂色曲霉(A.versicolor)；Aeurobasidiumspp.；顶抱头抱霉(Cephalosporumspp.)；毛壳霄(Chaetomiumspp.)；鬼伞菌(Coprinusspp.)；Dactyllumspp.；键刀菌(Fusariumspp.)，包括(F.conglomerans)、多隔键刀菌(F.decemcellulare)、爪唾镰刀菌(F.javanicum)、亚麻镰刀菌(F.Iini)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和茄病镰刀胃(F.solani)；βGliocladiumspp.)；3#Sl#^(Kluyveromycessp.)；U逊酵母(Hansenulasp.)；腐质霉(Humicolaspp.)，包括特异腐质霉(H.insolens)和绵毛状腐质菌(H.Ianuginose)；肉座菌(Hypocreaspp.)；毛霉菌(Mucorspp.)；脉胞菌(Neurosporaspp.)，包括粗糙脉孢菌(N.crassa)和好食脉孢菌(N.sitophila)；Neocallimastixspp.；瘤胃真菌(Orpinomycesspp.)；青霉菌(Penicilliumspp.)；平革菌(Phanerochaetespp.)；Phlebiaspp.；毕赤酵母(Pichiasp.)；Piromycesspp.；根霉菌(Rhizopusspp.)；根毛菌(Rhizomucor)例如米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)；裂褶菌(Schizophyllumspp.)；裂殖酵母(Schizosaccharomyces)例如粟酒裂殖酵母(S.pombe)；chytalidiumsp.>Sulpholobussp.、热源体(Thermoplasmasp.)>Milmβ(Thermomycessp.)；栓菌(Trametesspp.)；木霉(Trichodermaspp.)，包括里氏木霉(T.reesei)、长枝木霄(Iongibrachiatum)禾口绿色木霄(T.viride)；Yarrowiniasp.禾口接霉(Zygorhynchusspp.)，并且特别包括产油酵母如法夫酵母(Phafiaspp.)、圆红冬孢酵母菌(Rhorosporidiumtoruloides)Y4、粘红酵母(RhodotorulaGlutinis)和假丝酵母(Candida)107。在本发明的一个实施方案中，提供了重组宿主细胞，其表达或过表达编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因，并且其还表达(或过表达)编码一种或多种酶的一种或多种基因，所述一种或多种酶利用突变硫酯酶的反应产物(例如脂肪酸、脂酰辅酶A、脂酰磷酸酯、脂肪醛、脂肪酯或脂肪醇)或新陈代谢途径的部分中的一种或多种其它酶的反应产物作为底物，包括利用突变硫酯酶的反应产物(例如脂肪酸)作为前体和/或底物。在本发明的一个实施方案中，提供了重组宿主细胞，其表达或过表达编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因，并且其还表达(或过表达)编码一种或多种酶的一种或多种基因，所述一种或多种酶与在脂肪酸生物合成途径中必需作为反应前体的底物发生反应。在具体的实施方案中，重组宿主细胞包含编码硫酯酶的基因和编码与在脂肪酸生物合成途径中必需作为反应前体的底物发生反应的酶的基因，包括选自pdh、panK、aceEF,fabH、fabD、fabG、acpP和/或fabF的基因的过表达或修饰。在本发明的一个实施方案中，重组宿主细胞包含编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因(或多核苷酸)，并且还包含降低碳流通的基因的减弱或缺失、或与脂肪酸生物合成途径中的底物、辅助因子或能量需求竞争的基因。在具体的实施方案中，减弱的基因包括fadE、gpsA、ldhA、pflB、adhE、pta、poxB、ackA、ackB、plsB禾口/或sfa中的至少一个。在本发明的一个实施方案中，重组宿主细胞包含编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因(或多核苷酸)和编码至少一种脂肪酸衍生物酶的异源引入的外源基因。在某些实施方案中，外源基因或多核苷酸编码例如酰基辅酶A合酶、酯合酶、醇酰基转移酶、醇脱氢酶、酰基辅酶A还原酶、脂肪醇形成酰基辅酶A还原酶、羧酸还原酶、脱羧酶、醛还原酶、脂肪醇乙酰转移酶、酰基缩合酶、氨基转移酶或脱羰基酶。在本发明的一个实施方案中，重组宿主细胞包含编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因和至少两种编码脂肪酸衍生物酶的异源引入的外源基因。在某些实施方案中，外源基因或多核苷酸编码例如酰基辅酶A合酶、酯合酶、醇酰基转移酶、醇脱氢酶、脂酰辅酶A还原酶、脂肪醇形成酰基辅酶A还原酶、羧酸还原酶、脱羧酶、醛还原酶、脂肪醇乙酰转移酶、酰基缩合酶、氨基转移酶或脱羰基酶。在本发明优选的实施方案中，过表达了编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)和/或脂肪酸衍生物酶的基因，所述脂肪酸衍生物酶例如酰基辅酶A合酶、酯合酶、醇酰基转移酶、醇脱氢酶、脂酰辅酶A还原酶、脂肪醇形成酰基辅酶A还原酶、羧酸还原酶、脱羧酶、醛还原酶、脂肪醇乙酰转移酶、酰基缩合酶、醇酰基转移酶、氨基转移酶、其它硫酯酶或脱羰基酶。在本发明的一个实施方案中，将重组宿主细胞中编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因、编码脂肪酸衍生物酶的基因和/或其它重组表达的基因进行修饰，从而优化重组宿主细胞中至少一种密码子的表达。在本发明的一个实施方案中，重组宿主细胞包含至少一种编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因和编码酰基辅酶A合酶的基因。酰基辅酶A合酶可以是fadD、fadK、BH3103、yhfL、Pfl-4354、EAV15023、fadDUfadD2、RPC_4074、fadDD35、fadDD22、faa3p或编码蛋白ZP_01644857的基因中的任何一个。酰基辅酶A合酶基因的其它实例包括来自结核分枝杆菌(M.tuberculosis)HR7Rv的fadDD35[NP_217021]、来自枯草芽孢杆菌(B.subtilis)的yhfL[NP_388908]、来自铜绿假单胞杆菌(P.aeruginosa)PAOl的fadDl[NP_251989]、编码来自嗜麦芽糖寡养单胞菌R551-3的蛋白ZP_01644857的基因或来自酿酒酵母的faa3p[ΝΡ_012257]。在本发明的一个实施方案中，提供了重组宿主细胞，其包含至少一种编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因或多核苷酸和编码酯合酶的基因或多核苷酸，所述编码酯合酶的基因或多核苷酸例如获自不动杆菌(AcinetcAacterspp.)、博克岛食烷菌(Alcanivoraxborkumensis)、拟南芥(Arabidopsisthaliana)、酉良酒酵母、智人(Homosapiens)、加州希蒙得木(Simmondsiachinensis)、高山被抱霉(Mortierellaalpine)、弯曲求菌(Cryptococcuscurvatus)>Alcanivoraxjadensis、博克岛·#@!、不动杆菌HOl-N或混浊红球菌(Iihodococcusopacus)的酯合酶基因。酯合酶基因的实例包括wax/dgat，其编码来自加州希蒙得木、不动杆菌菌株ADP1、博克岛食烷菌、铜绿假单胞菌、Fundibacterjadensis、拟南芥或真养产碱杆菌(Alkaligeneseutrophus)的双功能酯合酶/酰基辅酶A:二酰甘油酰基转移酶。在优选的实施方案中，将编码酯合酶的基因过表达。在本发明的一个实施方案中，重组宿主细胞包含至少一种编码脂肪醛生物合成酶的基因。脂肪醛生物合成基因可以是，例如具有图32和33中列出的多核苷酸序列和/或多肽基序的羧酸还原酶基因(例如car基因)或其变体。在某些情况下，脂肪醛生物合成基因编码图33所示氨基酸基序中的一种或多种。在本发明的一个实施方案中，重组宿主细胞包含至少一种脂肪醇产生基因。脂肪醇产生基因包括例如acrl。脂肪醇生成基因在例如PCT公开第2008/119082号和第2007/136762号中描述，通过引用将上述公开并入本文。在本发明的一个实施方案中，重组宿主细胞包含编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因和编码至少一种烯烃产生基因的基因。所述基因可以是端烯烃产生基因或内烯烃产生基因。作为端烯烃产生基因的实例，在PCT公开第2009/085278号中描述的那些基因(包括orf880)是合适的。作为内烯烃产生基因的实例，在PCT公开第2008/147781A2号中描述的那些基因是合适的。通过引用将PCT公开第2009/085278号和第2008/147781A2号的公开内容并入本文。在本发明的一个实施方案中，提供了重组宿主细胞，其包含至少一种编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因或多核苷酸，以及下述中的至少一种(a)减弱的编码脂肪酸衍生物酶的基因或多核苷酸和(b)减弱的编码酰基辅酶A脱氢酶的基因或多核苷酸。优选地，减弱的或缺失的编码脂肪酸衍生物酶的基因对宿主细胞是内源性的，例如，编码酰基辅酶A合酶、酯合酶、醇酰基转移酶、醇脱氢酶、脂酰辅酶A还原酶、羧酸还原酶、脱羰基酶、脂肪醇乙酰转移酶、脂肪酸脱羧酶或脂肪醇形成酰基辅酶A还原酶。在一个实施方案中，减弱的基因编码酰基辅酶A合酶或酯合酶。在本发明的一个实施方案中，提供了重组宿主细胞，其在一定条件下表达或优选过表达硫酯酶，使得能通过该硫酯酶从酰基ACP或酰基辅酶A直接合成脂肪酯，例如脂肪酸甲酯(FAME)和脂肪酸乙酯(FAEE)。在该实施方案中，硫酯酶将酰基ACP或酰基辅酶A直接转化为脂肪酯，而无需表达脂酰辅酶A合酶或酯合酶来产生脂肪酯。然而，尽管不必要表达或过表达脂酰辅酶A合酶或酯合酶，但是这些酶可用于增加产物收率。在该实施方案中，硫酯酶可以是任何的内源硫酯酶、异源表达的硫酯酶、突变硫酯酶或其天然存在的等同物。在本发明的一个实施方案中，重组宿主细胞具有缺失的或减弱的编码酰基辅酶A脱氢酶的内源基因。在本发明的一个实施方案中，提供了在允许一种或多种硫酯酶表达或过表达的条件下培养本发明的重组宿主细胞的方法，所述一种或多种硫酯酶可以选自内源硫酯酶、异源表达的硫酯酶、突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)或这些硫酯酶的组合。在具体的实施方案中，在收获和/或裂解宿主细胞之后，可以回收表达或过表达的硫酯酶，且更优选地所述硫酯酶是基本上纯化的。在本发明的一个实施方案中，提供了在允许产生脂肪酸衍生物的条件下培养本发明的重组宿主细胞的方法。在优选的实施方案中，可以回收脂肪酸衍生物，且更优选地脂肪酸衍生物是基本上纯化的。在特别优选的实施方案中，通过离心将脂肪酸衍生物组合物从培养过程中产生的其它组分中基本上纯化出来。在本发明的一方面中，提供了产生脂肪酸衍生物的方法，所述方法包括在适于确保突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的表达或过表达的条件下培养本发明的重组宿主细胞并回收产生的脂肪酸衍生物。在一个实施方案中，提供了在细胞外产生脂肪酸衍生物的体外方法，所述方法包括在适于硫酯酶(包括例如，内源硫酯酶、异源表达的硫酯酶、突变硫酯酶或其天然存在的等同物)的表达或过表达的条件下培养重组宿主细胞、收获细胞以及裂解细胞，以便可以回收产生的硫酯酶并将其用于体外产生脂肪酸衍生物。在示例性的实施方案中，硫酯酶是基本上纯化的。在另一个示例性的实施方案中，没有从细胞裂解物中纯化硫酯酶。然后，在允许脂肪酸衍生物的细胞外产生的条件下将纯化的硫酯酶或包含这种酶的细胞裂解物置于合适的硫酯酶底物。将底物引向酶的技术是本领域内公知的。非限制性实例是将溶液形式的底物加至酶溶液或细胞裂解物，并允许混合物进行孵育。另一个非限制性实例涉及通过以下方式孵育底物和酶溶液或细胞裂解物将底物或酶附着于固体介质(例如珠、树脂、板等)，并以允许底物和酶充分接触的速度分别使酶溶液/裂解物或底物通过所述固体介质。在本发明的另一个实施方案中，提供了产生脂肪酸衍生物的方法，所述方法包括在适于确保硫酯酶(包括例如，内源硫酯酶、异源表达的硫酯酶、突变硫酯酶或其天然存在的等同物)的表达的条件下培养重组宿主细胞，并回收分泌的或释放到细胞外的脂肪酸衍生物。因此，例如从培养宿主细胞的发酵液的上清液中回收脂肪酸衍生物产物。在本发明的一个实施方案中，提供了细胞外获得脂肪酸衍生物组合物的方法，所述方法是通过在允许产生脂肪酸衍生物的条件下，培养已用编码硫酯酶(包括例如，内源硫酯酶、异源硫酯酶、突变硫酯酶或其天然存在的等同物)的多核苷酸转化的重组宿主细胞，所述脂肪酸衍生物的大部分或少部分被分泌出或释放到细胞外，以及回收产生的脂肪酸衍生物。在示例性的实施方案中，脂肪酸衍生物是在细胞内产生的，但是其一部分被宿主细胞释放出来。因此，所述方法还包括收获细胞、裂解细胞和回收脂肪酸衍生物。在本发明的一个实施方案中，提供了产生脂肪酸衍生物的方法，其中重组宿主细胞在允许通过硫酯酶从酰基ACP或酰基辅酶A合成脂肪酯的条件下表达或优选过表达硫酯酶，在允许这种脂肪酯直接产生的条件下培养所述重组宿主细胞。在本发明的一个实施方案中，提供了产生脂肪酸衍生物的方法，所述方法包括利用合适的基因组改变技术来修饰宿主细胞的一种或多种内源硫酯酶，使得所述内源硫酯酶与内源硫酯酶前体相比包含一个或多个突变并具有一种或多种改变的性质；在适于所述宿主细胞表达或过表达所述突变硫酯酶的条件下培养所述宿主细胞；以及回收脂肪酸衍生物。在示例性的实施方案中，产生的脂肪酸衍生物可以分泌到或释放到细胞外，以便可从例如培养宿主细胞的发酵液的上清液中回收脂肪酸衍生物。在本发明的一个实施方案中，提供了产生脂肪酸衍生物的方法，所述方法包括用编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的多核苷酸序列转化宿主细胞，使得所述宿主细胞中脂肪酸衍生物的产生相对于未用突变硫酯酶基因(或其天然存在的等同物)转化的细胞发生了改变。在本发明的一个实施方案中，提供了产生脂肪酸衍生物的方法，所述方法包括提供包含编码突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)的基因的多核苷酸序列；在允许所述多核苷酸序列被合并入所述细胞的染色体中并允许所述基因在所述宿主细胞中表达的条件下，用所述多核苷酸序列转化合适的宿主细胞；在适于所述宿主细胞表达所述基因并产生突变硫酯酶蛋白(或其天然存在的等同物)的条件下，培养所述转化的宿主细胞；以及回收脂肪酸衍生物。在任何上述实施方案中，与不存在突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)时同一宿主细胞中某碳链长度的脂肪酸衍生物的收率相比，可以回收到更高的收率比例的该碳链长度的衍生物。在具体的实施方案中，以升高的或降低的收率回收的脂肪酸衍生物包括主链长度为C6、C7ΛC8ΛC9ΛC10ΛCn、Cl2、Cl3、C14ΛCl5、Cl6、Cl7、Cl8、C19ΛC20、C21ΛC22、C23ΛC24ΛC25ΛC26ΛC28>C29,C3Q、C31>C32>C33>C34>C35>C36>C37、C38或C39的脂酰链。以组合物中升高的或降低的收率回收的脂肪酸衍生物可以选自所有类型的脂肪酸衍生物，包括例如，烃、脂肪酸、脂肪酯、脂肪醛、脂肪醇端烯烃、内烯烃、烷、二醇、脂肪胺、二羧酸或酮或以上的组合。可选地，在任何上述实施方案中，与不存在突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)时同一宿主细胞中特定脂肪酸衍生物的收率比例或收率百分比相比，所产生的这种特定脂肪酸衍生物相对于其它脂肪酸衍生物的收率比例或收率百分比可以升高或降低。在具体的实施方案中，以升高的收率比例或收率百分比产生的脂肪酸衍生物是脂肪酯。在另一个实施方案中，以降低的收率比例或收率百分比产生的脂肪酸衍生物是脂肪酯。可选地，在任何上述实施方案中，产生的脂肪酸衍生物中短链(例如C8、C9、C1(1、Cn、C12、C13或C14)产物的收率或收率比例可以提高。相反，在任何上述实施方案中，产生的脂肪酸衍生物中短链(例如C8、C9、C1(1、Cn、C12、C13或C14)产物的收率或收率比例可以降低。在本发明的一个实施方案中，提供了产生脂肪酸衍生物的方法，其中由本发明方法产生的脂肪酸衍生物的收率为每克碳源至少约0.OOlg脂肪酸衍生物产物，例如，每克碳源至少约0.Olg脂肪酸衍生物产物、每克碳源约0.Ig脂肪酸衍生物产物、每克碳源约0.2g脂肪酸衍生物产物、每克碳源约约0.3g脂肪酸衍生物产物、每克碳源约0.4g脂肪酸衍生物产物或每克碳源约0.45g脂肪酸衍生物产物。在本发明的一个实施方案中，提供了产生脂肪酸衍生物的方法，其中所述方法产生的滴度为至少约0.5g/L，例如，至少约lg/L、2g/L、5g/L、10g/L、20g/L、30g/L、40g/L、50g/L、75g/L、100g/L、150g/L或200g/L。在本发明的一个实施方案中，提供了产生脂肪酸衍生物的方法，其中所述方法的生产率是至少约0.lg/L.h，例如，至少约0.5g/L.h、lg/L.h、2g/L.h、3g/L.h、4g/L.h、5g/L.h、6g/L.h、7g/L.h或8g/L.h。在本发明的一个实施方案中，提供了由本发明的宿主细胞产生的脂肪酸衍生物组合物。这类组合物可以包括烃、酯、醇、酮、醛、脂肪酸、二羧酸、内烯烃、端烯烃和/或以上的组合。这类组合物可用于化工产业中，例如用于生产表面活性剂和去垢剂，或用作生物燃料和用作石油、民用燃料油、煤油、柴油、喷气燃料(jetfuel)或汽油的替代品。在本发明的一个实施方案中，提供的脂肪酸衍生物组合物包含小于或等于约50ppm的砷，约30ppm、约25ppm或约10-约50ppm的砷；小于或等于约200ppm的钙，约150ppm的钙、约119ppm的钙或约50-约200ppm的钙；小于或等于约200ppm的氯，约150ppm的氯、约119ppm的氯或约50-约200ppm的氯；小于或等于约50ppm的铜，约30ppm的铜、约23ppm的铜或约10-约50ppm的铜；小于或等于约300ppm的铁，约200ppm的铁、约136ppm的铁或约50-约250ppm的铁；小于或等于约50ppm的铅，约30ppm的铅、约25ppm的铅或约10-约50ppm的铅；小于或等于约50ppm的锰，约30ppm的锰、约23ppm的锰或约10-约50ppm的锰；小于或等于约50ppm的镁，约30ppm的镁、约23ppm的镁或约10-约50ppm的镁；小于或等于约0.5ppm的汞，约0.Ippm的汞、约0.06ppm的汞或约0.01-约0.2ppm的汞；小于或等于约50ppm的钼，约30ppm的钼、约23ppm的钼或约10-约50ppm的钼；小于或等于约2%的氮，约1%的氮、约0.5%的氮或约0.1-1%的氮；小于或等于约200ppm的钾，约150ppm的钾、约103ppm的钾或约50-约200ppm的钾；小于或等于约300ppm的钠，200ppm的钠、约140ppm的钠或约50-约300ppm的钠；小于或等于约Ippm的硫、小于或等于约的硫、约0.14%的硫或约0.05-约0.3%的硫；小于或等于约50ppm的锌，约30ppm的锌、约23ppm的锌或约10-约50ppm的锌；或小于或等于约700ppm的磷，约500ppm的磷、约350ppm的磷或约100-约700ppm的磷。在本发明的一个实施方案中，提供了现代碳分数(fractionofmoderncarbon)为约1.003到约1.5的脂肪酸衍生物。在本发明的一个实施方案中，提供了脂肪酸衍生物组合物，其中所述组合物包括包含酰基基团的组分，所述酰基基团在碳链中从其还原末端的7位处(碳链上第7号碳和碳链上第8号碳之间)具有双键。在具体的实施方案中，脂肪酸衍生物组合物包括C5-C25(即5-25个碳的碳链长度)脂肪酯、C5-Cm脂肪酸、C5-Cm脂肪醛、C5-Cm脂肪醇；或Cici-C2tl(即10-20个碳的碳链长度)脂肪酯、Cltl-C2tl脂肪酸、Cltl-C2tl脂肪醛、Cltl-C^l脂肪醇；或C12-C18(即12-18个碳的碳链长度)脂肪酯、C12-C18脂肪酸、C12-C18脂肪醛、C12-C18脂肪醇。在具体的实施方案中，本发明的脂肪酸衍生物包括直链脂肪酸衍生物、支链脂肪酸衍生物和/或环状部分。在具体的实施方案中，脂肪酸衍生物是不饱和的(例如单不饱和的)或饱和的。在本发明的一个实施方案中，组合物包含由醇和酰基辅酶A产生的脂肪酯，其中所述醇的长度为至少约1个碳，例如，至少约2个、约3个、约4个、约5个、约6个、约7个、约8个、约10个、约12个、约14个、约16个或约18个碳，酰基辅酶A的长度为至少约2个碳，例如，至少约4个、约6个、约8个、约10个、约12个、约14个、约16个、约18个、约20个、约22个、约M个或约沈个碳。在某些实施方案中，产生脂肪酯的醇和酰基辅酶A相差约2个、约4个、约6个、约8个、约10个、约12个或约14个碳原子。在另一个实施方案中，脂肪酸衍生物组合物包含由醇和酰基ACP产生的脂肪酯，其中所述醇的长度为至少约1个，例如，至少约2个、约3个、约4个、约5个、约6个、约7个、约8个、约10个、约12个、约14个、约16个或约18个碳，所述酰基ACP的长度为至少约2个，例如，约4个、约6个、约8个、约10个、约12个、约14个、约16个、约18个、约20个、约22个、约M个或约沈个碳。在某些实施方案中，产生脂肪酯的醇和酰基ACP相差约2、约4、约6、约8、约10、约12或约14个碳原子。在本发明的一个实施方案中，脂肪酸衍生物组合物包含衍生物的混合物，所述衍生物包括游离脂肪酸。在一个实施方案中，游离脂肪酸以重量计的百分比为至少约0.5%,例如，至少约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约15%、约20%或约25%。在某个实施方案中，产生的脂肪酯以重量计的百分比为至少约50%，例如，至少约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%或约90%。在另一个实施方案中，游离脂肪酸之外的脂肪酸衍生物与游离脂肪酸的重量比为大于约901，例如，大于约801、约501、约201、约101、约91、约81、约71、约51、约21或约11。在一个实施方案中，脂肪酸衍生物组合物包含衍生物的混合物，所述衍生物包括游离脂肪酸。在一个实施方案中，游离脂肪酸以重量计的百分比为至少约50%，例如，至少约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%或约90%。在某个实施方案中，产生的脂肪酯以重量计的百分比为至少约0.5%，例如，至少约1^342^343^344^约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约；35%、约40%、约45%或约50%。在另一个实施方案中，游离脂肪酸之外的脂肪酸衍生物与游离脂肪酸的重量比为小于约601，例如，小于约501、约401、约301、约201、约101、约11、约12、约13、约15或约110。在本发明的一个实施方案中，脂肪酸衍生物组合物包括选自以下的一种或多种脂肪酯癸酸乙酯、十二烷酸乙酯、十三烷酸乙酯、十四烷酸乙酯、十五烷酸乙酯、顺式-9-十六烯酸乙酯、十六烷酸乙酯、十七烷酸乙酯、顺式-11-十八烯酸乙酯、十八烷酸乙酯、癸酸甲酯、十二烷酸甲酯、十三烷酸甲酯、十四烷酸甲酯、十五烷酸甲酯、顺式-9-十六烯酸甲酯，十六烷酸甲酯、十七烷酸甲酯、顺式-11-十八烯酸甲酯、十八烷酸甲酯或以上的组合。在本发明的一个实施方案中，脂肪酸衍生物组合物包括选自以下的一种或多种游离脂肪酸辛酸、癸酸、十二烷酸、十四烷酸、十五烷酸、顺式-9-十六烯酸、十六烷酸、顺式-11-十八烯酸或以上的组合。包含本发明脂肪酸衍生物的组合物可用作燃料。例如，脂肪酸衍生物可用作生物柴油、脂肪醇、脂肪酯、三酸甘油脂、汽油、柴油或喷气燃料或用作以上的组分。汽油或生物柴油组合物可用在内燃发动机中。喷气燃料可用在喷气发动机中。因此，本文提供了包含按本公开制备的脂肪酸衍生物的燃料组合物。包含本发明脂肪酸衍生物的组合物可用作燃料添加剂。例如，可以将它们加到基于石油的柴油或生物柴油中，从而提高其可再生的燃料含量、润滑性、运动粘性、酸值、沸点、氧化稳定性、冷滤点、杂质谱、硫酸盐粉水平、十六烷值、浊点或倾点。因此，还提供了包含按本公开制备的脂肪酸衍生物的燃料添加剂组合物。包含本发明脂肪酸衍生物的组合物还可用作生物原油组合物，该生物原油组合物可作为制备其它石油衍生化合物的原料。例如，可将按本发明制备的长链烃、内烯烃或端烯烃、烷、脂肪醛和脂肪酯进一步加工以产生燃料、燃料添加剂、燃料混合物和/或化学品。因此，提供了包含按本公开制备的脂肪酸衍生物的生物原油组合物。包含本发明脂肪酸衍生物的组合物可用作生产去垢剂和表面活性剂、营养补充剂、聚合物、石蜡替代品、润滑剂、溶剂、个人护理品、橡胶加工添加剂、腐蚀抑制剂、乳化剂、塑料、纺织品、美容用品、纸产品、涂料、金属加工液、电介质、润滑油和/或软化剂的原料。因此，还提供了包含按本公开制备的脂肪酸衍生物的原料组合物。附图简要说明图1是鉴定了可以被过表达或减弱而增加脂肪酸衍生物产生的各种基因的表格。这个表格还鉴定了可以被进行调节而改变脂肪酸衍生物产物结构的各种基因。这些基因中的某些用于改变脂肪酸衍生物结构的基因也能增加脂肪酸衍生物的产生。图2是说明β氧化途径的图示，包括由以下酶催化的步骤(1)酰基辅酶A合酶(EC6.2.1-)；⑵酰基辅酶A脱氢酶(EC1.3.99.3)；⑶烯酰辅酶A水合酶(EC4.2.1.17)；(4)3-羟丁酰辅酶A表异构酶(EC5.1.2.3)；和(5)3-酮脂酰-辅酶A硫解酶(EC2.3.1.16)。β氧化循环的最后反应释放乙酰辅酶A和缩短了两个碳的酰基辅酶A脂肪酸，然后可以再进行β氧化反应。图3是说明FAS生物合成途径的图示。图4是说明依靠所提供的底物产生脂肪酯的生物合成途径的图示。图5是说明产生脂肪醇的生物合成途径的图示。图6描述了用pCDFDuet-1-fadD-acrl和含有各种硫酯酶基因的质粒共转化的菌株的脂肪醇产生。鉴定了饱和的C1(1、C12,C14,C16和C18脂肪醇。图7描述了实施例3所述的菌株的脂肪醇产生，所述菌株是用pCDFDuet-1-fadD-acrl和含有各种硫酯酶基因的质粒进行了共转化。所述菌株在25°C或37°C下、在含0.4%葡萄糖的M9矿质培养基的烧瓶中有氧生长。检测细胞沉淀和上清液中的脂肪醇，表明这些醇在细胞外的大量产生。25°C下的培养导致约25%的产物从细胞释放，而37°C下的培养导致约50%的产物从细胞释放。图8A-D描述了表达醇乙酰基转移酶(AATs，EC2.3.1.84)的生产宿主和表达酯合酶(EC2.3.1.20,2.3.1.75)的生产宿主产生的辛酸辛酯(C8C8)的GS-MS谱。图8A显示菌株C41(DE3，AfadE/pHZl.43)/pRSETB+pAS004.114B)的乙酸乙酯提取物的GC-MS谱，其中pHZl.43质粒表达ADPl酯合酶(EC2.3.1.20、EC2.3.1.75)。图8B显示菌株C41(DE3,ΔfadE/pHZl.43)/pRSETB+pAS004.114B)的乙酸乙酯提取物的GC-MS谱，其中pHZl.43质粒表达SAAT。图8C显示菌株C41(DE3，ΔfadE/pHZl.43)/pRSETB+pAS004.114B)的乙酰乙酸酯提取物的GC-MS谱，其中pHZl.43质粒不含有ADPl(酯合酶)或者SAAT。图8D显示C41(DE3，AfadE/pHZl.43)/pRSETB+pAS004.114B)所产生的C8C8的质谱和裂分模式(fragmentationpattern)的GC-MS谱，其中pHZl.43质粒表达SAAT。图9显示当来自贝氏不动杆菌(A.baylyi)ADPl(WMdpl)的酯合酶与来自萼距花(Cupheahookeriana)的硫酯酶在生产宿主中共表达时，产生的乙酯的分布(按照实施例9)。图10描述了各种酯合酶在25°C下乙酯的产生。所述乙酯由携带各种酯合酶基因的重组大肠杆菌菌株产生。重组菌株是(1)C41(DE3，AfadEAfabR)/pETDuet-1-'TesA+pCDFDuet-1-fadD带有lpHZl.43；(2)ρΗΖ1.97_377；(3)pHZl.97_atfA2；(4)ρΗΖ1·97_376；(5)pHZl.97_atfAl；以及(6)没有质粒(对照)。图11描述了各种大肠杆菌菌株产生的脂肪酸乙酯(FAEE)的酰基组成。所述重组菌株是(1)C41(DE3，AfadEAfabRVpETDuet-l-lesA+pCDFDuet-l-fadD带有1pHZl.43；(2)ρΗΖ1.97_377；(3)pHZl.97_atfA2；(4)pHZl.97_376；(5)pHZl.97_atfAl；以及(6)没有质粒(对照)。图12描述了各种酯合酶在37°C下乙酯的产生。乙酯由携带各种酯合酶基因的重组大肠杆菌菌株产生。所述重组菌株是(1)C41(DE3，AfadEAfabR)/pETDuet-1-，TesA+pCDFDuet-1-fadD带有1pHZl.43；(2)ρΗΖ1·97_377；(3)ρΗΖ1·97_atfA2；(4)ρΗΖ1·97_376；(5)pHZl.97_atfAl；以及(6)没有质粒(对照)。图13描述了转化体C41(DE3,ΔfadEΔfabR)/pETDuet-l-，TesA+pCDFDuet-l-fadD+pHZl.97_atfA2的三个单菌落产生的游离脂肪酸(FFA)和脂肪酸乙酯(FAEE)的浓度。FFA被转化为脂肪酸乙酯(FAEE)，并通过GC/MS定量。图14描述了FabA(SEQIDNO33)禾口FabB(SEQIDNO34)的控制区。FadR禾口FabR共有结合位点用黑底白字显示。垂直箭头指示可以进行突变从而改变fabA表达的位置。括号还指出了每个位置所建议的碱基。构成典型大肠杆菌启动子的-35和-10区的两个区如括号所示。还显示了使启动子更接近于共有启动子序列的建议突变。图15A-B是GC/MS分析的色谱图。图15A描述用质粒pCDFDuet-l-fadD-W&idpl，pETDuet-1-’TesA转化的大肠杆菌菌株LS9001的培养物的乙酸乙酯提取物组分的色谱图。图15B显示用作参照的十六烷酸乙酯和油酸乙酯的色谱图。图16是pOP-80质粒的图谱。图17是pOP-80质粒的全DNA序列(SEQIDNO:1)。图18是大肠杆菌密码子优化的fadD35基因(GenBank登录号NP_217021)的DNA序列(SEQIDNO:2)。图19是大肠杆菌密码子优化的fadDl基因(GenBank登录号NP_251989)的DNA序列(SEQIDNO:3)。图20是基于以NCBIGenBank登录号NC_000964存有的DNA序列的BsyhfLBspHIF引物(SEQIDNO4)。图21是基于以NCBIGenBank登录号NC_000964存有的DNA序列的BsyhfLEcoR引物(SEQIDNO:5)。图22是来自枯草芽孢杆菌的yhfL基因的DNA序列(SEQIDNO:6)。图23是基于以NCBIGenBank登录号NC_001141存有的DNA序列的kfaa3pPciF引物(SEQIDNO7)。图24是基于以NCBIGenBank登录号NC_001141存有的DNA序列的kfaa3pPciI引物(SEQIDNO8)。图25是来自酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的faa3基因(GenBank登录号NP_012257)的DNA序列(SEQIDNO:9)。图洸是基于以NCBIGenBank登录号NZ_AAVZ01000044存有的DNA序列的Smprk59BspF引物(SEQIDNO10)。图27是基于以NCBIGenBank登录号NZ_AAVZ01000044存有的DNA序列的Smprk59HindR引物(SEQIDNO:11)。图28是PrkBsp引物(SEQIDNO:12)。图四是编码来自嗜麦芽糖寡养单胞菌R551-3的蛋白ZP_01644857的DNA序列(SEQIDNO13)。图30是来自嗜麦芽糖寡养单胞菌ATCC17679的ZP_01644857的蛋白序列(SEQIDNO14)。图31是脂肪醛产生的新途径的示意图。图32是诺卡氏菌NRRL5646car基因的核苷酸序列(SEQIDNO15)和对应的氨基酸序列(SEQIDNO:16)的列表。图33是CAR同源物的氨基酸序列基序的列表。图34A-B是分别由咸海鲜球菌(Jeotgalicoccussp.)ATCC8456细胞和耐盐咸海鲜球菌(Jeotgalicoccushalotolerans)DSMZ17274细胞所产生的烯烃的GC/MS追踪。图!35A-B是分别由鳍型咸海鲜球菌(Jeotgalicoccuspinnipedalis)DSMZ17030细胞和嗜冷咸海鲜球菌(Jeotgalicoccuspsychrophilus)DSMZ19085细胞所产生的烯烃的GC/MS追踪。图36A-B是咸海鲜球菌ATCC8456细胞所产生的两种α-烯烃的质谱裂分模式。化合物A被鉴定为1-十九烯，化合物B被鉴定为18-甲基-1-十九烯。图37是咸海鲜球菌ATCC8456的16srRNA的系统发生分析图。图38A-B是给予二十烷酸(图38A)或硬脂酸(图38B)时咸海鲜球菌ATCC8456细胞所产生的α-烯烃的GC/MS追踪。图39是咸海鲜球菌ATCC8456细胞的无细胞裂解物所产生的α-烯烃(1-十七烯)的GC/MS追踪，其中与没有C18脂肪酸底物的无细胞裂解物的追踪和C18脂肪酸底物本身的追踪进行比较。图40是来自咸海鲜球菌ATCC8456细胞的最终纯化的产α-烯烃的蛋白组分的SDS-PAGE凝胶电子图。图41Α-Β分别是orf880的核苷酸序列(SEQIDNO:25)和氨基酸序列(SEQIDNO26)。图41C是咸海鲜球菌ATCC8456的部分16srRNA序列(SEQIDNO27)。图42是表达咸海鲜球菌8456_orf880并给予硬脂酸时大肠杆菌所产生的α-烯烃的GC/MS追踪。图43是利用ClustalW对8456_orf880同源物进行的自展系统发生分析的示意图。图44描述了鉴定本发明中有用的前体硫酯酶的氨基酸基序。图45A-B的表格列出了鉴定具有改变的性质的突变硫酯酶的测定结果。具体而言，图45A列出了对指定底物的活性(即催化速率)或对指定底物的特异性的Z评分至少为3的突变体；图45B的表格列举了脂肪酸衍生物的收率/产生增加和/或提高且Z评分至少为3的突变体。图46A-E的表格列出了鉴定脂肪酯与其它产物(例如脂肪酯之外的脂肪酸衍生物)的收率比例改变的突变硫酯酶的测定结果。具体而言，图46A的表格显示对于脂肪酯与游离脂肪酸的收率比例或收率百分比的Z评分至少为3的突变体。图46B的表格显示对于脂肪酯与游离脂肪酸的收率比例或收率百分比的Z评分小于-3的突变体。图46C的表格显示对于脂肪酸衍生物的体内收率的Z评分至少为3的突变体。图46D的表格显示对于短链(例如C8、C9、C10,C11,C12,C13和/或C14)脂肪酸衍生物与其它脂肪酸衍生物(例如短链脂肪酸衍生物之外的脂肪酸衍生物，包括例如，长链(例如C15、C16、C17、C18、C19和/或CJ脂肪酸衍生物)的收率比例的Z评分至少为3的突变体。图46E的表格显示对于短链(例如C8、C9、C10,C11,C12,C13和/或C14)脂肪酸衍生物与其它脂肪酸衍生物(例如短链脂肪酸衍生物之外的脂肪酸衍生物，包括例如，长链(例如C15、C16,C17,C18,C19和/或CJ脂肪酸衍生物)的收率比例的Z评分小于-3的突变体。图47是利用大肠杆菌‘TesA(即没有信号肽的TesA)的氨基酸残基作为参考序列用于编号目的，对‘TesA同源物进行的序列比对。图48描述了MG1655(ΔfadE)pTrc_，TesA_fadD菌株的FAME滴度和组成。图49描述了在25小时的发酵运行过程中，表达质粒上的fadD和‘tesA的MG1655(ΔfadE)和C41(ΔfadE)菌株的FAME滴度和组成。图50描述了MG1655(ΔfadE)pTrc_，TesA_fadD菌株的FAME滴度和组成。图51描述了在25小时的发酵运行过程中，表达质粒上的fadD和‘tesA的MG1655(ΔfadE)和C41(ΔfadE)菌株的FAME滴度和组成。图52描述了在25小时的发酵运行过程中，表达质粒上的fadD和‘tesA的MG1655(ΔfadE)和C41(ΔfadE)菌株的FFA滴度和组成。图53描述了在M小时的发酵运行过程中，表达质粒上的大肠杆菌‘tesA、发光发光杆菌(P.luminescens)‘tesA、哈维氏弧菌(V.harveyi)‘tesA和深海发光杆菌(P.profundum)tesB的MG1655(ΔfadE)菌株的FAME滴度。用mg/L和mg/L/OD来表示滴度。图M是在M小时的发酵运行过程中，表达质粒上的大肠杆菌‘tesA、发光发光杆菌‘tesA、哈维氏弧菌‘tesA和深海发光杆菌tesB的MG1655(AfadE)菌株的FFA滴度。用mg/L(柱形)和mg/L/OD(三角形)来表示滴度。图55对天然存在的硫酯酶的相关序列区进行比较，所述天然存在的硫酯酶含有对应于引入改变的性质的‘TesA中的突变的位置处的残基。用黑色来突出相关残基，并与天然存在的硫酯酶的对应残基对准。图56列出了‘TesA同源物的GenBank登录号。图57A-C描述了底物特异性(Z评分)与对应于SEQIDNO:31的‘TesA序列的氨基酸残基位置的关系，符号是代表对Cltl特异性(图57A)、C12特异性(图57B)和C14特异性(图57C)的cons70比对中的保守水平。图58显示大肠杆菌‘TesA的氨基酸序列(SEQIDNO:31)。图59显示编码大肠杆菌‘TesA的核苷酸序列(SEQIDNO32)。图60是大肠杆菌MG1655ΔfadE细胞培养物中游离脂肪酸(FFA)和脂酰甲酯(FAME)滴度的图，所述大肠杆菌MG1655ΔfadE细胞是用含有来自大肠杆菌(EcolA)、黑腐果胶杆菌(Pectobacteriumatrosepticum)(PatrA)、恶臭假单胞菌(PputA)、哈维氏弧菌(VharA)、发光发光杆菌(PlumA)的‘tesA同源物的pACYC进行了转化或用不含插入物的PACYC进行了转化(阴性对照)。图61是大肠杆菌MG1655ΔfadE细胞培养物中FFA和FAME滴度的图，所述MG1655ΔfadE细胞过表达fadD和来自大肠杆菌(Ecoli)、黑腐果胶杆菌(I^tr)、发光发光杆菌(Plum)、深海发光杆菌(Ppro)、哈维氏弧菌(VhA)、恶臭假单胞菌(Pput)的‘tesA、或者不表达‘tesA(阴性对照)。(用星号(*)标出的数据来自不同的实验)图62显示表达野生型大肠杆菌‘tesA(WT)、SlOC突变体(SlOC)或不表达‘tesA(阴性对照)的大肠杆菌MG1655ΔfadE培养物中的FFA和FAME滴度。图63显示在不存在外源酯合酶的情况下，表达硫酯酶的重组宿主细胞随发酵运行时间产生的FAME。图64显示在不存在外源酯合酶情况下，表达硫酯酶的重组宿主细胞随发酵运行时间产生的FFA。发明的详细描述除非另外指出，本文使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域的技术人员通常的理解具有相同的含义。尽管与本文描述的类似或者等同的方法和材料可用于本发明的实施或者试验，但下文描述了适合的方法和材料。通过引用将包括GenBank数据库序列在内的本文提到的所有公开、专利申请、专利和其它参考文献以其整体并入本文。如果有冲突，本说明书，包括定义在内，将提供参考。所述材料、方法和实例只是说明性的，而不是用于限制。下面的详细描述和权利要求书将使本发明的其它特征和优势显而易见。定义贯穿本说明书，可以参考基因名称或多肽名称的缩写，但是应当理解为这种缩写的基因或多肽名称分别代表基因或多肽的种类。这些基因名称包括编码相同多肽和具有相同生理功能的同源多肽的所有基因。多肽名称包括具有相同活性的所有多肽(例如催化相同基本化学反应的多肽)。除非另外指出，本文所参考的登录号来源于美国国立卫生研究院维护的NCBI数据库(国立生物技术信息中心)。除非另外指出，所述登录号为该数据库截止2008年3月所提供的登录号。EC编号由国际生物化学与分子生物学联合会命名委员会(NC-IUBMB，http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/)建立。本文所参考的EC编号来自京都基因与基因组百科全书(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomics)维护的KEGG配体数据库，该数据库由东京大学部分资助。除非另外指出，所述EC编号是该数据库截止2008年3月所提供的编号。本文所用的冠词“a”和“an”是指一个或多于一个(即，是指至少一个)该冠词的语法对象。作为举例，“元件(anelement)”表示一个元件或多于一个元件。本文所用的术语“约”是指给定数值的士20%值。因此，“约60%”是指60士(60的20%)的值(即48-70)。如本文所用，术语“醇脱氢酶”(EC1.1.1.*)是能催化脂肪醛转化为醇(例如脂肪醇)的多肽。此外，本领域技术人员应当理解，某些醇脱氢酶还催化其它反应。例如，某些醇脱氢酶允许除脂肪醛之外的其它底物。因此，这种非特异性醇脱氢酶也包括在本定义内。编码醇脱氢酶的多核苷酸序列在本领域内是已知的，且这些脱氢酶是可为公众所获得的。术语“改变的性质”是指与前体多核苷酸或前体蛋白相比，突变多核苷酸或突变蛋白的一个或多个性质的改变。按照本发明，可以对蛋白进行有利改变的性质包括氧化稳定性、底物特异性、底物选择性、催化活性、热稳定性、PH稳定性、pH活性谱、对蛋白水解降解的抗性、Kffl,k。at、k。at/Km比、蛋白折叠、诱导免疫应答、与配体结合的能力、与受体结合的能力、分泌能力、以活性方式转运至膜的能力、出现在细胞表面上的能力、寡聚能力、信号转导能力、刺激细胞增殖的能力、抑制细胞增殖的能力、诱导凋亡的的能力、被磷酸化或糖基化修饰的能力、治疗疾病的能力。在本发明的一个实施方案中，提供的突变硫酯酶来自前体硫酯酶，其中与所述前体硫酯酶的性质相比，所述突变体在体外或体内具有至少一种改变的性质。在一个实施方案中，所述改变的性质可以是生物物理性质，如热稳定性(熔点Tm)、溶剂稳定性、溶质稳定性、氧化稳定性、亲油性、亲水性、四级结构、偶极矩或等电点。在一个实施方案中，所述改变的性质可以是生物化学性质，如PH最适度、温度最适度、离子强度最适度和/或酶催化参数(例如，产物分布、产物收率比例或收率百分比、特异活性、底物偏好性、底物亲和力、底物抑制、产物亲和力、周转率、产物抑制、动力学机制、Kffl,k。at、k。at/Km和/或VMax)。在一个实施方案中，所述改变的性质是对特定底物的偏好性的改变，例如，对醇解或水解、酰基辅酶A或酰基-酰基载体蛋白底物、酯或硫酯底物、饱和或不饱和底物、不饱和位置、宽或窄的特异性(例如催化多种底物或仅催化特定碳链长度的底物的能力)的偏好性的改变。在一个实施方案中，所述改变的性质可以是对以下底物的偏好性或活性的增加支链底物、具有特定分支位置的底物、羟酰基底物、酮脂酰基底物、产生具有所需燃料特性(即十六烷值、辛烷值、氧化稳定性、润滑性、引火点、粘性、沸点、熔点、倾点、浊点、冷滤点、冷流性、芳香度和/或碘值)的产物的底物。改变的性质还包括酯水解(例如所需产物分子的水解)的活性降低或减弱、或蛋白对细胞毒性的降低、和/或细胞中蛋白表达水平的改变。在具体的实施方案中，至少一种改变的性质是例如硫酯酶催化脂酰酯的直接或间接、体内或体外合成(例如通过酯交换)能力的改变。如本文所用，“类似序列”是基因功能与参考基因(例如来自大肠杆菌的‘tesA基因)基本相同的序列。此外，类似基因与参考基因或多核苷酸(例如‘tesA基因或‘TesA硫酯酶的多核苷酸或多肽序列)的序列具有至少约20%，例如至少约25%、30%、35%、40%、45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%.97^^98^^99%或100%的序列同一性。在其它的实施方案中，对序列应用多于一种上述性质。通过已知的序列比对法来确定类似序列。术语“比对”是指比较两条或更多条多核苷酸或多肽序列而确定彼此的相互关系的方法。通常通过应用多种算法的计算机程序来进行比对，然而，也可以进行手动比对。比对程序通常在序列的可能比对中反复演算并用取代表进行比对评分，利用多种策略达到可能的最佳比对评分。常用的比对算法包括但不限于CLUSTALW(参见ThompsonJ.D.，HigginsD.G.,GibsonT.J·,CLUSTALWimprovingthesensitivityofprogressivemultiplesequencealignmentthroughsequenceweighting,position-specificgappenaltiesandweightmatrixchoice(CLUSTALW:通过序列权重、位置特异性空位罚分或权重矩阵选择来提高渐进多序列比对的敏感度)，NucleicAcidsResearch22:4673-4680,1994)；CLUSTALV(参见LarkinΜ.Α.,etal.，CLUSTALW2，ClustalW和ClustalX第二版，Bioinformatics23(21):2947-2948,2007)Jotun-Hein,Muscleetal.,MUSCLEamultiplesequencealignmentmethodwithreducedtimeandspacecomplexity(MUSCLE:减少时间和空间复杂性的多序列比对方法)，BMCBioinformatics5:113，2004)；Mafft,Kalign,ProbCons,andT-Coffee(参见Notredameetal.，T-CoffeeAnovelmethodformultiplesequencealignments(T-Coffee:用于多序列比对的新方法)，JournalofMolecularBiology302:205_217，2000)。实施一个或多个上述算法的示例性程序包括但不限于来自DNAMar(DNAMar，Inc.3801RegentSt.Madison,WI53705)的MegAlign、MUSCLE、T-Coffee、CLUSTALX、CLUSTALV、JalView、Phylip以及来自Accelrys(Accelrys，Inc.,10188TelesisCt,Suite100，SanDiego,CA92121)的DiscoveryStudio。在非限制性实例中，用MegAlign按以下参数来实施CLUSTALW比对算法空位罚分10、空位长度罚分0.20、延迟分散序列(30%)DNA转换权重0.50，蛋白质权重矩阵Gonnet系列、DNA权重矩阵IUB。术语“抗体”是指免疫球蛋白。抗体包括但不限于从需要产生抗体的任何物种直接获得的免疫球蛋白。此外，本发明包括修饰的抗体。该术语还指保留了与相同表位(完整抗体也与该表位结合)的结合能力的抗体片段，该术语包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、抗个体基因型(抗ID)抗体。抗体片段包括但不限于互补决定区(CDR)、单链片段可变区(scFv)、重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)。本发明还包括多克隆抗体和单克隆抗体。优选地，所述抗体是单克隆抗体。术语“减弱”表示弱化、减少或消除。在一个实例中，具体的酶对反馈抑制或者非产物或者反应物的组分引起的抑制(非途径特异性反馈)的灵敏度降低，使得所述酶活性不受化合物存在的影响。在具体的实例中，fabH基因的表达是温度敏感性的，可以改变其序列从而降低对温度波动的敏感性。此外，当需要支链氨基酸时，可以减弱fabH基因的表达。在另一个实例中，经过修饰而活性更低的酶可以称作减弱的。对编码酶的序列进行功能性修饰可以用来减弱酶的表达。序列修饰可以包括例如基因序列或控制基因序列的转录或翻译的序列中一个或多个核苷酸的突变、缺失或插入，所述修饰减少或者抑制基因产物的产生，或者导致基因产物没有功能。例如，大肠杆菌中fabR的功能性缺失减轻了脂肪酸生物合成途径的抑制，允许大肠杆菌产生更多的不饱和脂肪酸(UFA)。在某些情况下，功能性缺失被描述为敲除突变。还有其它方法可以减弱酶的表达。例如，可以通过以下实现减弱如上文所述修饰编码基因的序列；将基因置于活性较低的启动子的控制下；表达靶向于目的基因的干扰RNA、核酶或反义序列；通过改变物理或化学环境，比如温度、pH或溶质浓度，使得不能达到基因或基因产物的最佳活性；或者通过本领域已知的任何其它技术。术语“生物原油”是指可以作为基于石油的燃料的替代品的生物燃料。此外，生物原油和石油原油一样，均可以转化为其它燃料，例如汽油、柴油、喷气燃料或燃料油(民用燃料油)。而且，生物原油与石油原油一样，可以转化为其它工业上有用的化学品，用于例如制药、美容用品、消费品、工业加工等。生物原油组合物可以包括例如烃、烃产品、脂肪酯和/或脂肪酮或以上的组合。在优选的实施方案中，生物原油组合物由烃，例如脂肪烃(例如，烷、烯、炔)或芳香烃组成。术语“生物柴油”是指可以在柴油发动机中使用的特定类型的生物燃料。生物柴油可以替代通常来自石油的常规柴油。生物柴油可以采用纯的形式(被称为“纯”生物柴油)，或者作为以任何浓度与基于石油的柴油的混合物用于内燃柴油发动机中。生物柴油组合物还可以包含各种合适的添加剂。生物柴油可以由烃或酯组成。在一个实施方案中，生物柴油由诸如脂肪酸甲酯(FAME)或脂肪酸乙酯(FAEE)的脂肪酯组成。在优选的实施方案中，这些FAME和FAEE由碳链长度为约8_20、10-18或12-16的脂酰基部分组成。用作生物柴油的脂肪酯可以包含直链碳链、支链碳链、饱和碳链或不饱和碳链。术语“生物燃料”是指来自生物质的任何燃料。生物质是可以被转化成生物燃料的生物材料。生物质的一个示例性来源是植物质。例如，玉米、甘蔗和柳枝稷可以用作生物质。生物质的另一个非限制性实例是动物质，如牛粪。生物质还包括来自工业、农业、林业和日常生活的废弃物。这类废弃物的实例包括而不限于发酵废料、稻草、木料、污物、垃圾与食物残余物以及甘油。生物质还包括碳源，如碳水化合物(例如糖)。生物燃料可以替代基于石油的燃料。例如，生物燃料包括交通工具燃料(例如汽油、柴油、喷气燃料等)、民用燃料和发电燃料。生物燃料是可再生的能源。生物燃料的非限制性实例包括生物柴油、烃(例如烷、烯、炔或芳香烃)和来自生物质的醇。本文将术语“碳链长度”定义为硫酯酶底物或脂肪酸衍生物的碳链中的碳原子数。具体分子的碳链长度标记为Cx，其中下标“X”是指碳链中碳的数量。如本文所用，术语“长链”是指碳链长为约15至约20个碳的那些分子(例如C15X16X17X18X19或C20)。术语“短链”是指链长为约8至约14个碳的那些分子(例如C8,C9,C10,C11或C12)。术语“碳源”表示适合作为原核或者简单真核细胞生长的碳源的底物或者化合物。碳源可以是各种形式的，包括但不限于多聚体、碳水化合物、酸、醇、醛、酮、氨基酸、肽、气体(例如CO和CO2)等。这些包括，例如，各种单糖，例如葡萄糖、果糖、甘露糖和半乳糖；寡糖，例如寡聚果糖和寡聚半乳糖；多糖，例如木糖和阿拉伯糖；二糖，例如蔗糖、麦芽糖和松二糖；纤维素物质，如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠；饱和或者不饱和的脂肪酸酯，如琥珀酸酯、乳酸酯和乙酸酯；醇，如乙醇等，或者以上的混合物。此外，碳源还可以是光合作用产物，包括但不限于葡萄糖。甘油也可以是有效的碳源。合适的碳源可以从任何天然和可再生的来源产生，尤其包括来自农业、市政和工业废料的生物质，只要该材料可以作为发酵成分来提供碳源。生物质来源包括玉米杆、甘蔗、柳枝稷、动物质或废料。术语“染色体整合”表示进入的序列被引入宿主细胞染色体中的过程。转化DNA的同源区与染色体的的同源区对齐。然后，同源性盒之间的序列可以以双交叉由进入的序列所替换(即同源重组)。在本发明的某些实施方案中，DNA构建体的失活染色体区段的同源部分与微生物染色体的固有染色体区的侧翼同源区对齐。随后，DNA构建体以双交叉使所述固有染色体区缺失。术语“浊点”是指下述液体温度在该温度下，溶解的固体不再完全可溶，沉淀为第二相，使流体具有浑浊的外观。这个术语与诸多应用有关并具有一定程度不同或完全不同的重要性。在石油工业中，浊点指的是这样的温度在该温度以下，蜡或其它重烃在原油、提炼油或燃料中结晶，形成浑浊的外观。固化蜡的存在会影响流体的流动性质、增加燃料滤器/喷嘴及其它机器部件堵塞的倾向、造成蜡在冷表面(例如管道表面或热交换器表面)上的积累，甚至改变与水的乳化特性。浊点表明在冷的操作温度下，油堵塞滤器或小孔的倾向。非离子表面活性剂或乙二醇溶液的浊点是混合物开始分成两个相或更多个相，因此变得浑浊时的温度。这一行为是含有聚氧乙烯链的非离子表面活性剂的特性，该非离子表面活性剂可以表现出与水中温度行为相反的溶解度，因此随着温度提高可以在某个点“变清澈”。表现这一行为的乙二醇被称为“浊点乙二醇”，并被用作页岩抑制剂。浊点通常还受盐度影响，通常在盐分越高的流体中浊点越低。术语“降低浊点的添加剂”是指可以加入组合物使如上所述的组合物的浊点降低或下降的添加剂。术语“允许产物产生的条件”是指允许生产宿主产生需要的产物的任何发酵条件，所述需要的产物例如酰基辅酶A或脂肪酸衍生物，所述脂肪酸衍生物包括例如脂肪酸、烃、脂肪醇、蜡或脂肪酯。发酵条件通常包括多个参数。示例性的条件包括但不限于，温度范围、通风水平、PH范围和培养基组成(例如溶剂和溶质)。这些条件中的每一个单独地和联合地允许生产宿主生长。示例性的培养基包括培养液或凝胶。通常，合适的培养基包括可以被微生物直接代谢的碳源，如葡萄糖、果糖、纤维素等。此外，可以在培养基中使用酶来促进动员(例如淀粉或纤维素解聚成可发酵的糖)和随后的碳源代谢。为了确定培养条件是否适合产物的产生，可以培养生产宿主约4、8、12、M、36、48或72小时。在培养的过程中或培养后，可以获取样品并进行分析，从而确定培养条件是否允许产物产生。例如，可以检测样品中的生产宿主或生产宿主生长的培养基中所需产物的存在。当检测产物的存在时，可以使用诸如但不限于TLC、HPLC、GC/FID、GC/MS、LC/MS、MS的测定以及本文实例所提供的那些测定。术语“共有序列，，或“规范序列，，是指原型氨基酸序列，具体的目的蛋白或序列的所有变体与所述原型氨基酸序列进行比较。这两个术语还指展示出目的多核苷酸序列中最普遍存在的核苷酸的序列。对蛋白的每个位置，共有序列给出了序列比对中该位置处最多的氨基酸。如本文所用，术语“共有突变”是指起始基因和共有序列的序列差异。通过在序列比对中比较起始基因与共有序列的序列来鉴定共有突变。在某些实施方案中，将共有突变引入起始基因，使得起始基因与共有序列更相似。共有突变还包括将起始基因中的氨基酸变成另一个氨基酸的氨基酸改变，所述另一个氨基酸在多重序列比对(MSA)中该位置处出现的频率高于在起始基因中该位置处的氨基酸出现的频率。因此，术语“共有突变”是指用在MSA中比在天然氨基酸中更丰富的氨基酸取代起始基因中的氨基酸的任何氨基酸改变。术语“保守型取代(conservativesubstitutions)”或“保守型取代(conservedsubstitutions)”所指的取代是例如一个或多个下述氨基酸取代诸如甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的脂肪族氨基酸被另一个脂肪族氨基酸替代；丝氨酸被苏氨酸替代；苏氨酸被丝氨酸替代；诸如天冬氨酸和谷氨酸的酸性残基被另一个酸性残基替代；诸如天冬酰胺和谷氨酰胺的携带酰胺基的残基被另一个携带酰胺基的残基替代；诸如组氨酸、赖氨酸和精氨酸的碱性残基被另一个碱性残基替代；以及诸如色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的芳香族残基被另一个芳香族残基替代；或者诸如甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和蛋氨酸的小氨基酸被另一个小氨基酸替代。通常不改变特定活性的氨基酸取代在本领域内是已知的，且例如在H.NeurathandR.L.Hill,Proteins,AcademicPress,NewYork，1979中有描述。有用的保守型修饰包括丙氨酸至半胱氨酸、甘氨酸或丝氨酸；精氨酸至异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸或鸟氨酸；天冬酰胺至天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸或组氨酸；天冬氨酸至天冬酰胺、谷氨酰胺或谷氨酸；半胱氨酸至蛋氨酸、丝氨酸或苏氨酸；谷氨酰胺至天冬酰胺、天冬氨酸或谷氨酸；谷氨酸至天冬酰胺、天冬氨酸或谷氨酰胺；甘氨酸至天冬氨酸、丙氨酸或脯氨酸；组氨酸至天冬酰胺或谷氨酰胺；异亮氨酸至亮氨酸、蛋氨酸或缬氨酸；亮氨酸至异亮氨酸、蛋氨酸或缬氨酸；赖氨酸至精氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸或鸟氨酸；蛋氨酸至半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸；苯丙氨酸至组氨酸、左旋多巴、亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、3-苯脯氨酸、4-苯脯氨酸或5-苯脯氨酸；脯氨酸至L-I-噻唑烷-4-羧酸或D-I-噁唑烷-4-羧酸或L-I-噁唑烷-4-羧酸；丝氨酸至半胱氨酸、蛋氨酸或苏氨酸；苏氨酸至蛋氨酸、丝氨酸或缬氨酸；色氨酸至酪氨酸；酪氨酸至左旋多巴、组氨酸或苯丙氨酸；以及缬氨酸至异亮氨酸、亮氨酸或蛋氨酸。术语“对应于”是指第一蛋白序列中的氨基酸残基与第二参考蛋白序列中的氨基酸残基在位置上相同，这是根据使用生物信息学技术(例如利用本文所述的方法进行序列比对)时，第一蛋白序列中的残基与参考序列中的残基对准。然后将第一蛋白序列中的对应残基被指定为第二参考蛋白序列中的残基编号。第一蛋白序列可以与第二蛋白序列类似或者与第二蛋白序列不类似，但是优选地，两个蛋白序列是类似序列。例如，当将图58中SEQIDNO:31的大肠杆菌‘TesA的氨基酸序列用作参考序列时，可以为另一个比对目的蛋白或类似蛋白中的每个氨基酸残基都指定对应于SEQIDN0:31的残基编号1-182的残基编号。例如，在图47中，比对的氨基酸序列参照或对应于大肠杆菌‘TesA的序列。因此，利用诸如本文所述的已知生物信息学技术，可以为另一个目的硫酯酶(前体硫酯酶或突变硫酯酶)中的给定位置指定‘TesA序列中的对应位置。对于氨基酸序列，术语“缺失”表示从前体蛋白的氨基酸序列缺失或去除残基，这产生了与前体蛋白相比少了一个氨基酸残基的突变蛋白。该术语也可以应用于核苷酸序列，这表示从前体多核苷酸的多核苷酸序列缺失或去除残基。对与前体硫酯酶，术语“来自”和“获自”指的是目的生物菌株产生的或可产生的硫酯酶，还指从该菌株分离的多核苷酸序列所编码的并在包含该多核苷酸序列的宿主生物中产生的硫酯酶。此外，该术语指由合成来源和/或cDNA来源的多核苷酸序列所编码的并具有目的硫酯酶的识别特征的硫酯酶。举例来说，“来自肠杆菌科(Enterobacteriacaea)的硫酯酶”是指具有肠杆菌科天然产生的硫酯酶活性的那些酶以及与肠杆菌科来源所产生的那些硫酯酶类似，但是是通过利用基因工程技术，由用编码所述硫酯酶的多核苷酸转化的非肠杆菌科生物所产生的硫酯酶。术语“DNA构建体”和“转化DNA”在本文可互换使用，指的是用于将序列引入宿主细胞或生物中的DNA。通常，通过PCR或本领域技术人员已知的其它合适的技术在体外产生DNA构建体。在某些实施方案中，DNA构建体包含目的序列(例如进入的序列)。在某些实施方案中，序列与其它元件可操作地连接，所述其它元件例如控制元件(例如启动子等)。DNA构建体还可以包含选择标记。DNA构建体还可以包含侧翼为同源性盒的进入的序列。在另一个实施方案中，DNA构建体包含被添加到末端(例如填充序列或侧翼序列)的非同源序列。在某些实施方案中，将进入的序列的末端闭合，使得DNA构建体形成封闭的环。转化序列可以是野生型的、突变的或经修饰的。在某些实施方案中，DNA构建体包含与宿主细胞染色体同源的序列。在其它实施方案中，DNA构建体包含非同源的序列。一旦DNA构建体在体外组装好，其就可以用于1)将异源序列插入宿主细胞所需的靶序列中；幻诱变宿主细胞染色体的区(即用异源序列替代内源序列)；3)缺失靶基因；和/或⑷将复制质粒引入宿主中。如果在多核苷酸的天然状态下或当用本领域技术人员已知的方法操孔多核苷酸时，所述多核苷酸可被转录和/或翻译产生RNA、多肽或以上的片段，则认为该多核苷酸“编码”RNA或多肽。这种多核苷酸的反义链也被认为编码RNA或多肽序列。正如本领域所已知的，DNA可以由RNA聚合酶转录产生RNA，并且RNA可以由逆转录酶逆转录产生DNA。因此，DNA可以编码RNA，且反之亦然。在本文中，术语“等同物”是指由下述多核苷酸编码的硫酯酶所述多核苷酸能在中度至最大严紧性的条件下与具有图58的SEQIDNO:31序列的多核苷酸杂交。例如，等同物表示与图58中SEQIDNO:31的氨基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%和/或至少99%的序列同一性的等同的成熟硫酯酶。“酯合酶”是能催化生化反应产生酯的肽。例如，酯合酶是能够参与将硫酯转化为脂肪酯的肽。在某些实施方案中，酯合酶将硫酯、酰基辅酶A转化为脂肪酯。在可选的实施方案中，酯合酶利用硫酯和醇作为底物产生脂肪酯。酯合酶能够利用短链和长链酰基辅酶A作为底物。此外，酯合酶能够利用短链和长链醇作为底物。酯合酶的非限制性实例是蜡合酶、蜡-酯合酶、酰基辅酶A:醇转酰基酶、酰基转移酶、脂酰辅酶A:脂肪醇酰基转移酶、脂酰基ACP转酰基酶以及醇乙酰基转移酶。将酰基辅酶A硫酯转化为蜡的酯合酶称为蜡合酶。示例性的酯合酶包括分类到酶分类号EC2.3.1.75中的那些酯合酶。术语“酯合酶”不包括还具有硫酯酶活性的酶。本文将同时具有酯合酶活性和硫酯酶活性的酶归为硫酯酶。术语“表达的基因”是指被转录为信使RNA(mRNA)并然后被翻译为蛋白的基因，以及被转录为各种RNA的基因，所述各种RNA例如不被翻译为蛋白的转运RNA(tRNA)、核醣体RNA(rRNA)和调节RNA)。术语“表达盒”或“表达载体”是指重组或合成产生的多核苷酸构建体，其具有一系列允许特定多核苷酸在靶细胞中转录的指定元件。可以将重组表达盒合并入质粒、染色体、线粒体DNA、质粒DNA、病毒或多核苷酸片段。通常，表达载体的重组表达盒部分包括待转录的多核苷酸序列和启动子以及其它序列。在具体的实施方案中，表达载体能在宿主细胞中并入和表达异源多核苷酸片段。多种原核和真核表达载体均可以购买到。合适的表达载体的选择属于本领域技术人员的公知常识。在本文中，术语“表达盒”还与“DNA构建体”及其语法上的等同物互换使用。如本文所用，术语“脂肪酸衍生物”是指来自代谢途径的组合物，该途径包括硫酯酶反应。因此，脂肪酸衍生物产物可以是脂肪酸或脂肪酯产物或可以是脂肪酸或脂肪酯衍生的产物，所述脂肪酸或脂肪酯是硫酯酶反应的产物。因此，脂肪酸衍生物包括例如脂肪酸和/或脂肪酯产物或脂肪酸和/或脂肪酯衍生的产物，所述脂肪酸和脂肪酯是硫酯酶的直接反应产物。示例性的脂肪酸衍生物包括例如，短链和长链醇、烃、脂肪醇和酯，包括蜡、脂肪酸酯和/或脂肪酯。脂肪酸衍生物的具体非限制性实例包括脂肪酸、脂肪酸甲酯、脂肪酸乙酯、脂肪醇、脂肪烷基醋酸酯、脂肪醛、脂肪胺、脂酰胺、脂肪硫酸酯、脂肪醚、酮、烷、内烯烃、端烯烃、二羧酸、ω-二羧酸、二醇和端脂肪酸和/或内脂肪酸。术语“脂肪酸衍生物酶”共同地或分别地指脂肪酸衍生物产生中可以表达或过表达的酶。这些酶可以是脂肪酸生物合成途径的一部分。脂肪酸衍生物合酶的非限制性实例包括脂肪酸合酶、硫酯酶、酰基辅酶A合酶、酰基辅酶A还原酶、醇脱氢酶、醇酰基转移酶、脂肪醇形成酰基辅酶A还原酶、脂肪酸脱羰基酶、羧酸还原酶、脂肪醇乙酰转移酶和酯合酶。脂肪酸衍生物酶将底物转化为脂肪酸衍生物。在某些情况下，合适的底物可以是第一脂肪酸衍生物，其被脂肪酸衍生物酶转化为不同的第二脂肪酸衍生物。术语“脂肪醇”是指具有式ROH的醇。在某些实施方案中，脂肪醇是由脂肪酸或脂肪酸衍生物产生的醇。在一个实施方案中，R基的长度为至少约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碳。R可以为直链或者支链。支链可以有一个或多个分支点。此外，支链可以包括环状分支，如环丙烷或环氧化物部分。而且，R可以是饱和的或不饱和的。如果是不饱和的，R可以有一个或多个不饱和点。在一个实施方案中，脂肪醇通过生物合成产生。脂肪醇可以具有多种用途。例如，脂肪醇可用来产生特种化学品。尤其是，脂肪醇可被用作生物燃料；用作脂肪、蜡、胶和树脂的溶剂；用在药膏、润肤剂和洗液中；用作润滑油添加剂；用在去垢剂和乳化剂中；用作纺织品抗静电剂和整理剂；用作增塑剂；用作非离子表面活性剂；以及用在美容用品中，例如作为增稠剂。术语“脂肪醇形成肽”是指能催化酰基辅酶A转化为脂肪醇的肽，包括脂肪醇形成酰基辅酶A还原酶(FAR，ECl.1.1.*)、酰基辅酶A还原酶(EC1.2.1.50)或醇脱氢酶(EC1.1.1.1)。此外，本领域技术人员应当理解，某些脂肪醇形成肽还催化其它反应。例如，某些酰基辅酶A还原酶肽允许脂肪酸以外的底物。因此，也包括这些非特异性的肽。编码脂肪醇形成肽的多核苷酸序列是本领域内已知的，并且这些肽可为公众所获得。术语“脂肪醛”是指具有式RCH0、特征为不饱和羰基(C=0)的醛。在某些实施方案中，脂肪醛由脂肪酸或脂肪酸衍生物产生的醛。在一个实施方案中，R基的长度为至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碳。1可以为直链或者支链。支链可以有一个或多个分支点。此外，支链可以是环状分支。而且，R可以是饱和的或不饱和的。如果是不饱和的，R可以有一个或多个不饱和点。在一个实施方案中，脂肪醛是通过生物合成产生。脂肪醛可以具有多种用途。例如，脂肪醛可用来产生特种化学品。尤其是，脂肪醛可用来生产聚合物、树脂、染料、调味剂、增塑剂、香水、药品和其它化学品。某些脂肪醛用作溶剂、防腐剂或消毒剂。诸如维生素和激素的某些天然的和合成的化合物也是醛类。术语“脂肪醛生物合成多肽”、“羧酸还原酶”和“CAR”在本文中可互换使用。术语“脂肪酯”是指具有大于5个碳原子的酯。在某些实施方案中，脂肪酯是由脂肪酸产生的酯，例如脂肪酸酯。在一个实施方案中，脂肪酯含有A侧(即连接于羧酸酯的氧的碳链)和B侧(即包含母体羧酸酯的碳链)。在具体的实施方案中，当脂肪酯来源于脂肪酸生物合成途径时，A侧来自醇，B侧来自脂肪酸。任何醇都可以用于形成脂肪酯的A侧。例如，醇可以来源于脂肪酸生物合成途径。可选地，可以通过非脂肪酸生物合成途径来产生醇。而且，醇可以是外源提供的。例如，当脂肪酯是由生物产生时，可以将醇提供在发酵液中。可选地，当脂肪酯是由也能产生醇的生物产生时，可以外源提供羧酸，诸如脂肪酸或乙酸。包含A侧或B侧的碳链可以是任意长度。在一个实施方案中，酯的A侧的长度为至少约1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、14、16、18或20个碳。酯的B侧的长度为至少约4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、对或沈个碳。A侧和/或B侧可以是直链或支链。支链可以有一个或多个分支点。此外，支链可以包括诸如环丙烷或环氧化物部分的环形分支。此外，A侧和/或B侧可以是饱和或不饱和的。如果是不饱和的，A侧和/或B侧可以有一个或多个不饱和点。在一个实施方案中，脂肪酯是通过生物合成产生。在这个实施方案中，首先脂肪酸被“活化”。“活化的”脂肪酸的非限制性实例是酰基辅酶A、酰基ACP、酰基AMP和酰基磷酸酯。酰基辅酶A可以是脂肪酸生物合成或降解的直接产物。此外，可以从游离脂肪酸、辅酶A和三磷酸腺苷(ATP)合成酰基辅酶A。产生酰基辅酶A的酶的实例是酰基辅酶A合酶。脂肪酸被活化后，可以容易地将其转移到接受亲核体。示例性的亲核体是醇、巯醇、胺或磷酸酯。在另一个实施方案中，所述脂肪酯可以来源于脂酰基硫酯和醇。在一个实施方案中，所述脂肪酯是蜡。蜡可以来源于长链脂肪醇和长链脂肪酸。在另一个实施方案中，脂肪酯是脂肪酸硫酯，例如脂酰辅酶A(酰基辅酶A)。在其它实施方案中，所述脂肪酯是脂酰基泛酸酯、酰基酰基载体蛋白(酰基ACP)、脂酰基酶酯或者脂肪磷酸酯。可以由酰基酶酯中间体产生酯，这是通过酯键的醇解形成新的酯和游离酶。脂肪酯有很多用途。例如，脂肪酯可以用作生物燃料或表面活性剂或用作生物燃料或表面活性剂的组分。本文所用的术语“脂肪酯与其它脂肪酸衍生物相比”是指脂肪酯与不是脂肪酯的其它脂肪酸衍生物总量相比的收率比例。换而言之，将脂肪酯的量与脂肪酯之外的脂肪酸衍生物进行比较。术语“发酵生产率”或“生产率”是指产物产生的速率，表示为gΓ1^1.比生产率是用催化剂浓度标准化的生产率，表示为g/gI^tT1g(催化剂)Λ术语“发酵滴度，，或“滴度，，是指反应产物的浓度，通常表示为g/L，但是也可以用其它单位(即摩尔、质量/质量、质量/体积或体积/体积)。术语“发酵收率”或“收率”是指从给定量的原材料产生的产物的量，通常表示为产生的产物的质量除以所消耗的原材料的质量的比值(g产物/g原材料)。还可以表示为摩尔收率(产物摩尔数/原材料摩尔数)。术语“现代碳分数”是指由国家标准和技术研究院(NIST)标准参考物质(SRM)4990B和4990C(分别称为草酸标准品HOxI和HOxII)所定义的参数fM。基本定义涉及14C/12C同位素比率HOxI(参考AD1950)的0.95倍。这粗略等于衰变校正的工业革命前的树木。对于现今的生物圈(植物材料)而言，fM约为1.1。术语“功能测定”是指提供蛋白活性指示的测定。在特别优选的实施方案中，该术语是指用于分析蛋白在其天然角色中的功能性的测定系统。例如，就酶而言，功能测定涉及测定酶在催化反应中的作用。“基因”是指编码多肽的多核苷酸(例如DNA片段)，并且包括编码区上游和下游的区以及各个编码片段(外显子)之间的插入序列(内含子)。术语“同源基因”是指来自不同但相关的物种、彼此对应且彼此相同或相似的基因对。该术语包括在新物种的发育过程中，由物种形成过程分出的基因(例如直系同源基因)，以及由基因复制分出的基因(例如旁系同源基因)。术语“内源蛋白”是指细胞中固有的或天然存在的蛋白。“内源多核苷酸”是指位于细胞中且不是利用重组工程技术被引入细胞中的多核苷酸。例如，当细胞被最初从自然界分离时，存在于所述细胞中的基因。即使已通过重组技术改变了诸如激活转录或翻译的启动子或增强子序列的控制序列，仍认为该基因是内源性的。相反，本文所用的术语“异源”是指不是在宿主细胞中天然存在的蛋白或多核苷酸。术语“同源重组”是指两个DNA分子间或配对染色体间在相同或几乎相同的核苷酸序列位点处的DNA片段的交换。在某些实施方案中，染色体整合是同源重组。本文所用的术语“同源序列”是指这样的多核苷酸或多肽序列例如，当为了比较进行最佳比对时，所述多核苷酸或多肽序列与另一个多核苷酸或多肽序列具有约100%、约99%或更高、约98%或更高、约97%或更高、约96%或更高、约95%或更高、约94%或更高、约93%或更高、约92%或更高、约91%或更高、约90%或更高、约88%或更高、约85%或更高、约80%或更高、约75%或更高、约70%或更高、约65%或更高、约60%或更高、约55%或更高、约50%或更高、约45%或更高、或约40%或更高的序列同一性。在具体的实施方案中，同源序列可以保留相同类型和/或相同水平的特定目的活性。在某些实施方案中，同源序列具有85%-100%的序列同一性，而在其它的实施方案中，具有90%-100%的序列同一性。在具体的实施方案中，具有95%-100%的序列同一性。“同源性”是指序列相似性或序列同一性。利用本领域内已知的标准技术来测定同源性(参见例如SmithandWaterman,Adv.App1.Math.，2:482,1981；Needlemanandffunsch,J.Mol.Biol.,48:443,1970；PearsonandLipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:2444,1988!Wisconsin遗传学软件包(GeneticsComputerGroup,Madison,WI)中的程序，如GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA；禾口Devereuxetal.，Nuc1.AcidRes.，12387-395，1984)。非限制性实例包括使用BLAST程序(Altschuletal.,GappedBLASTandPSI-BLAST:anewgenerationofproteindatabasesearchprograms(空^立BLAST禾口PSI-BLAST:新一代蛋白数据库搜索程序)，NucleicAcidsRes.25:3389-3402,1997)来鉴定认为是“同源”的序列。以下程序可以是合适的近期的版本如2.2.16版、2.2.17版、2.2.18版、2.2.19版或最近的版本，其包括子程序，例如用于蛋白-蛋白比较的blastp、用于核苷酸-核苷酸比较的blastn、用于蛋白-核苷酸比较的tblastn或用于核苷酸-蛋白比较的blastx,并且使用如下的参数返回序列的最大数是10，000或100,000、E-值(期望值)为le-2或le-5、字长为3、评分矩阵BL0SUM62、空位存在罚分11、空位延伸罚分1。例如，le-5的E-值指示随机发生的同源匹配的几率是约1/10，000，进而为真实同源性提供高可信度。术语“宿主菌株”或“宿主细胞”是指对包含本发明DNA的表达载体合适的宿主。正如本领域已知的，术语“杂交”是指多核苷酸的链与互补链通过碱基配对连接的过程。如果多核苷酸序列与参考多核苷酸序列在中等至高严紧性杂交和洗涤条件下彼此特异性地杂交，则认为这两段序列是“选择性地杂交”。杂交条件是基于多核苷酸结合复合物或探针的熔点(Tm)。例如，“最大严紧性”通常发生在约Tm-5°C(低于探针Tm5°C)；“高严紧性”发生在低于1约5-101；“中等严紧性”发生在低于探针1约10-20°C；“低严紧性”发生在低于1约20-251。在功能上，最大严紧性条件可以用来鉴定与杂交探针具有严格同一性或接近严格同一性的序列；而中等或低严紧性杂交可以用来鉴定或检测多核苷酸序列同源物。中等和高严紧性杂交条件是本领域内公知的。高严紧性条件的实例包括:在约42°C下、在50%甲酰胺、5XSSC、5XDenhardt's溶液、0.5%SDS和100pg/mL变性载体DNA中杂交，然后是在室温下、2XSSC和0.5%SDS中洗涤两次，然后在42°C下、0.1XSSC和0.5%SDS中再洗涤两次。中等严紧性条件的实例包括在37°C下、在含20%甲酰胺、5XSSC(150mMNaCl，15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH7.6),5XDenhardt's溶液、10%硫酸葡聚糖和20mg/mL变性剪切的鲑鱼精DNA的溶液中孵育过夜，然后是在约37°C-约50°C下、1XSSC中洗涤滤器。本领域技术人员知道如何视情况调整温度、离子强度和其它条件来适应于诸如探针长度等因素。术语“烃”是指含有碳(C)元素和氢(H)元素的化合物。所有烃均由碳骨架以及该骨架上连接的氢原子构成。有时，该术语被用作术语“脂肪烃”的简称。主要存在3种类型的烃(1)芳香烃，其具有至少约一个芳香环；(饱和烃，亦称为烷，其缺少双键、三键或者芳香键；和C3)不饱和烃，其在碳原子之间具有一个或者多个双键或者三键，并且包括例如烯烃(例如二烯)和炔。对于两条多核苷酸或多肽序列，术语“同一的”表示利用序列比较或分析算法(例如本文所述的那些算法)进行测定为最大一致性进行比对时，两段序列中的残基是相同的。例如，如果进行合适的比对时，两段序列中的对应片段在10个位置中的5个位置具有相同残基，则认为这两个序列具有50%的同一性。大多数生物信息学程序报道在比对序列区上的同一性百分比，所述比对序列区通常不是完整的分子。如果比对足够长且包含足够的相同残基，则可以计算期望值，所述期望值表示比对中的同一性不可能是由于随机几率发生的水平。术语“改进性突变”或“性质增强性突变”是指蛋白中导致性质改变的突变，该性质的改变在蛋白的目的性质和/或所需性质方面赋予超过前体蛋白的表现。当用于多肽序列时，术语“插入”是指前体多肽氨基酸序列中的插入，这产生了突变多肽，该突变多肽具有在两个已有连续氨基酸之间(即前体多肽中存在的邻近的氨基酸残基之间)插入的氨基酸。当用于多核苷酸序列时，术语“插入”是指在前体多核苷酸中两个已有连续核苷酸之间(即前体多核苷酸中存在的邻近核苷酸之间)插入一个或多个核苷酸。对于将多核苷酸序列引入细胞中，术语“引入”是指适于将多核苷酸序列转移进细胞中的任何方法。所述引入方法包括但不限于，原生质体融合、转染、转化、接合和转导(参见例如Ferrarietal.,Genetics,inHardwoodetal,(eds.),Bacillus,PlenumPublishingCorp.，pp.57—72，1989)。术语“分离的”或“纯化的”表示物质是从其初始环境中分出的，例如，如果该物质是天然存在的，则所述初始环境可以是天然环境，或者如果该物质是在重组宿主细胞发酵培养基中产生的，则所述初始环境可以是发酵液。如果具体组合物中某物质的浓度高于或低于纯化步骤之前该物质的浓度，则认为该物质是“纯化的”。例如，对于天然存在的或野生型的生物中发现的组合物，当最终组合物不含来自初始母体中的某些物质时，该组合物是“纯化的”。作为另一个实例，当组合物与重组宿主细胞发酵培养基中的其它成分组合时，如果当通过诸如离心或蒸馏的去除发酵中的某些成分(例如细胞碎片或其它发酵产物)的方式处理发酵培养基，则该组合物是“纯化的”。作为另一个实例，存在于活体动物中的天然存在的多核苷酸或多肽不是分离的，但是从天然系统中的某些或全部共存物质分出的相同的多核苷酸或多肽是分离的，不管这些过程是通过基因工程还是通过机械分离。这些多核苷酸可以是载体的一部分。可选地，这些多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分。这些多核苷酸或多肽可以被认为是“分离的”，因为包含它们的载体或组合物不是其天然环境的一部分。在另一个实例中，如果多核苷酸或蛋白在电泳凝胶或印迹中基本上产生一条条带，则认为它是纯化的。对于蛋白，术语“成熟的”表示蛋白或肽处于其最终功能形式的形式。举例来说，本发明硫酯酶的成熟形式包括图58中SEQIDNO31的氨基酸残基1_182。术语“修饰的脂肪酸衍生物”是指至少部分地从重组宿主细胞脂肪酸生物合成途径的一部分产生的产物，其中所述产物与该宿主细胞在不存在本发明的突变硫酯酶的情况下产生的产物不同。因此，如果将突变硫酯酶(或其天然存在的等同物)引入重组宿主细胞中，导致具有不同的产物谱的脂肪酸衍生物的产生，则在本发明的背景下脂肪酸物质是被“修饰的”，所述不同的产物谱例如具有特定链长的某些脂肪酸衍生物的浓度更高或更低，或者某类脂肪酸衍生物的浓度更高或更低。术语“突变硫酯酶”或“变体硫酯酶”是指与前体硫酯酶相比包含突变的硫酯酶。对于多核苷酸，术语“突变”是指对所述多核苷酸序列进行的改动，该改动能导致多核苷酸序列相对前体多核苷酸序列的变化。突变多核苷酸序列可以指未改变编码的氨基酸序列的改变，例如为了表达目的而进行的密码子优化，或突变多核苷酸序列还可以指以能产生编码的氨基酸序列的改动的形式修改密码子的改变。可以通过本领域技术人员已知的多种方法将突变引入多核苷酸中，包括随机诱变、位点特异性诱变、寡核苷酸定向诱变、基因混排、定向衍化技术、组合诱变、位点饱和诱变等。对于蛋白，“突变(mutation)”或“突变(mutated)”表示对氨基酸序列的改动，该改动能导致蛋白序列相对前体蛋白序列的变化。突变可以指一个氨基酸被另一个氨基酸取代、一个或多个氨基酸残基的插入或缺失。尤其是，突变还可以是用非天然的氨基酸、化学修饰的氨基酸或类似残基取代氨基酸。突变还可以是序列的截短(例如缺失或切断)或来自前体序列的子序列。突变还可以是在蛋白中或在蛋白的任一末端添加子序列(例如将两个或更多个氨基酸的区段插入前体蛋白序列中两个连续氨基酸之间)，从而使所述蛋白的长度增加(或延长)。可以通过修饰对应于前体蛋白的DNA序列来进行突变。可以通过本领域内已知的方法将突变引入蛋白序列中，例如，通过产生编码相对于前体蛋白的突变的合成DNA序列、或通过化学法改变蛋白本身。本文所用的“突变体”是包含突变的蛋白。例如，还可以通过用野生型序列替换硫酯酶的一部分来产生突变体，所述野生型序列对应于所述硫酯酶的部分，但是在野生型序列中天然存在的特定位置处包含所需的改变。在本发明背景下，“天然存在的等同物”是指包含天然存在的残基的天然存在的硫酯酶或其一部分，其中所述天然存在的残基对应于‘TesA中的突变(例如图58中SEQIDN0:31的突变)，所述‘TesA中的突变为‘TesA带来所需的改变的性质。图55提供了具有这种修饰的天然存在的等同硫酯酶的实例。对于多核苷酸序列，术语“可操作地连接”是指一段多核苷酸序列与另一段多核苷酸序列建立起功能性关联。例如，如果多肽作为参与多肽分泌的前蛋白表达，则编码分泌前导子的DNA(例如信号肽)与编码多肽的DNA可操作地连接。如果启动子或增强子能影响编码序列的转录，则其与所述编码序列可操作地连接。如果核糖体结合位点的位置促进翻译，则其与编码序列可操作地连接。通常，“可操作地连接”表示被连接的DNA序列是相邻的，并且对于分泌前导子，被连接的DNA序列是相邻的且在同一个读码框中。术语“操纵子区”是指这样一组相邻的基因它们从共同的启动子转录为单个转录单元，并进而受共同调控。在某些实施方案中，操纵子包括调控基因。术语“最佳比对”是指给出最高总体比对评分的比对。术语“直系同源物”或“直系同源基因”是指不同物种中通过物种形成从共同的祖先基因演变而来的基因。通常，直系同源物在演变过程中保留了相同的功能。直系同源物的鉴定可用于在新测序的基因组中可靠地预测基因功能。如果细胞中酶的表达水平高于其在对应的野生型细胞中的表达水平，则所述宿主细胞中发生“过表达(overexpressed)，，或“过表达(overexpression)，，。术语“旁系同源物”或“旁系同源基因”是指由于基因组中复制而相关的基因。直系同源物在演变过程中保留了相同的功能，而旁系同源物演变出新的功能，尽管某些功能通常与最初的功能相关。旁系同源基因的实例包括但不限于，编码肌红蛋白的基因与编码血红蛋白的基因，这两个基因起源于同一祖先，但是演变出不同的功能。术语“分配系数”表示化合物在有机相中的平衡浓度除以平衡时水相(例如在发酵液中)中的浓度。在本文描述的两相系统的一个实施方案中，有机相由生产过程中的脂肪酸衍生物形成。在某些情况下，还可以提供有机相，例如，可以向发酵液提供辛烷层来促进产物的分离。描述两相系统时，分配系数P通常以IogP来表示。IogP为1的化合物将以101分配到有机相中。IogP为-1的化合物将以110分配到有机相中。通过选择合适的发酵液和有机相，具有高IogP值的脂肪酸衍生物即使在发酵罐中的浓度非常低时也会分离到有机相中。对于两个多肽、多核苷酸和/或基因序列(按需要)，术语“序列同一性百分比”、“氨基酸序列同一性百分比”、“基因序列同一性百分比”和/或“多核苷酸序列同一性百分比”是指当将序列进行最佳比对时，两个序列中相同残基的百分比。因此，80%氨基酸序列同一性表示两个最佳比对的多肽序列中的80%的氨基酸是相同的。术语“质粒”是指用作克隆载体的环状双链(ds)DNA构建体，其在某些真核生物或原核生物中形成染色体外的自主复制的遗传元件或者整合入宿主染色体中。术语“前体硫酯酶”是指例如通过重组或化学方法可以衍生出本发明突变硫酯酶的硫酯酶蛋白。前体硫酯酶的实例是来自植物、动物或微生物来源的天然存在的或野生型的硫酯酶。前体硫酯酶也可以是非天然存在的硫酯酶。非天然存在的硫酯酶的实例是通过例如随机突变、化学合成、分子演变或定点诱变产生的硫酯酶，其可以作为设计和/或制备本发明突变硫酯酶的有用的起点。“引物”是当置于能引发与参考多核苷酸链互补的引物延伸产物的合成的条件下，能作为合成起点的寡核苷酸，无论它是纯化的限制性消化样品中天然存在的还是合成产生的。合适的条件包括例如，存在核苷酸和诸如DNA聚合酶的引发剂，以及合适的温度和pH。为了扩增的最大效率，引物优选是单链的，但是可选地，也可以是双链的。如果引物是双链的，则在用来制备延伸产物之前，可以首先对引物进行处理使其链分开。在具体的实施方案中，引物是寡脱氧核苷酸。在某些优选的实施方案中，引物的长度足以在引发剂的存在下引发延伸产物的合成。引物的精确长度取决于多个因素，包括温度、引物来源和扩增方法。术语“探针”是指能与另一目的寡核苷酸杂交的寡核苷酸，无论它是纯化的限制性消化物中天然存在的还是通过合成、重组或PCR扩增产生的。探针可以是单链的或者双链的。探针可用于检测、鉴定和分离特定的基因序列。考虑到本发明所用的任何探针都可以用任何“报告分子”进行标记，以便可在任何检测系统中进行检测，所述检测系统包括但不限于酶系统(例如ELISA或其它基于酶的组织化学测定)、荧光系统、放射性系统和冷光系统。本发明并非意图受任何特定检测系统或标记所限制。“生产宿主”是用于产生产物的细胞。正如本文所公开的，将生产宿主进行修饰使其表达或过表达所选基因，或者使其具有所选基因的减弱表达。生产宿主的非限制性实例包括植物、动物、人、细菌、酵母、蓝细菌、藻类和/或丝状真菌细胞。“启动子”是功能为指导下游基因转录的多核苷酸序列。在优选的实施方案中，启动子适合于所表达的靶基因位于的宿主细胞。启动子以及其它转录和翻译调控多核苷酸序列(也成为“控制序列”)对于表达给定基因是必需的。通常，转录和翻译调控序列包括但不限于启动子序列、核糖体结合位点、转录起始和终止序列、翻译起始和终止序列和增强子或激活子序列。术语“启动子”或“增强子”是指真核生物中的转录控制信号。启动子和增强子由DNA序列的短列构成，其与参与转录的细胞蛋白特异性地相互作用(Maniatisetal.,Science,236:1237，1987)。已经从包括酵母、昆虫、哺乳动物和植物细胞的基因在内的大量真核生物来源分离到启动子和增强子元件。还从病毒中分离到启动子和增强子元件。在原核生物中也发现了诸如启动子和增强子的类似的控制元件。特定启动子和增强子的选择取决于用于表达目的蛋白的细胞类型。某些真核和原核启动子和增强子具有宽的生产宿主细胞范围，而其它的仅在有限的生产宿主细胞亚类中有功能(参见例如，Vossetal.,TrendsBiochem.Sci.,11287,1986；Maniatisetal.，1987，同前)。术语“启动子元件”、“启动子”或者“启动子序列”是指作为开关激活基因的表达的DNA序列。如果基因被激活，就认为它被转录或者参与转录。转录涉及从基因合成mRNA。因此，启动子作为转录调节元件，并且还提供了基因转录为mRNA的起始位点。对于多核苷酸，术语“性质”是指多核苷酸的可以选择或检测的任何特征或特性。这些性质包括但不限于，影响与多肽结合的性质、赋予包含特定多核苷酸的细胞的性质、影响基因转录的性质(例如启动子强度、启动子识别、启动子调控、增强子功能)、影响RNA加工的性质(例如RNA剪接、RNA稳定性、RNA构象和转录后修饰)、影响翻译的性质(例如水平、调控、mRNA与核糖体蛋白的结合、翻译后修饰)。例如，可以改变多核苷酸的转录因子结合位点、聚合酶、调控因子等，从而产生所需的性质或鉴定出不需要的性质。对于蛋白质，术语“性质”是指蛋白质的可以选择或检测的任何特征或特性。在本文中，术语“蛋白”和“多肽”可互换使用。本公开中使用依照IUPAC-IUB生物化学命名联合委员会(JCBN)所定义的氨基酸残基的3字母代码和1字母代码。还应当理解，由于遗传密码具有简并性，一个多肽可以由多于一个多核苷酸序列编码。酶是蛋白质。在本文中，术语“收率比例和“收率百分比，，可互换使用。它是指本发明的重组宿主所产生的相同混合物中，所需产物相对于其它产物的量。例如，可以提高所需产物的收率比例，使得在产物混合物中所需产物多于其它成分，从而降低纯化的负担。在另一个实例中，可以降低不需要的产物(即需要从所需产物中去除的组分)的收率比例，使得在产物混合物中不需要的产物少于需要的组分，从而达到相同的目的。本文将收率比例表示为“X与其它脂肪酸衍生物相比”的形式，将X的量与其它脂肪酸衍生物的量进行比较，X是一类脂肪酸衍生物(例如脂肪酯、特定链长的脂肪酸衍生物)，术语“其它脂肪酸衍生物”表示在相同的实验、培养或发酵运行中所产生的除了X之外的所有其它脂肪酸衍生物的总量。术语“前序列”是指位于信号序列和成熟蛋白之间的氨基酸序列，其是蛋白分泌所必需的。在某些环境和合适的条件下，前序列的切割可以产生成熟的有活性的蛋白质/酶。在本文中，当用来修饰术语“细胞”或“载体”时，术语“重组”是指通过引入异源多核苷酸序列而修饰的细胞或载体，或者是指细胞来自进行这种修饰的细胞。因此，例如，重组细胞表达的基因与天然形式的(非重组的)细胞中所见的形式不同，或者由于有意的人为干预，重组细胞表达非正常表达的、低表达的或根本不表达的天然基因。术语“重组(recombination)”、“重组(recombining)”和产生“重组(recombined)”多核苷酸通常是指将两个或更多个多核苷酸片段组装在一起，其中所述组装产生由组装部分形成的嵌合多核苷酸。术语“调控片段”、“调控序列”或“表达控制序列”是指这样的多核苷酸序列其与编码多肽链的氨基酸序列的另一段多核苷酸序列可操作地连接，从而影响该编码氨基酸序列的表达。调控序列可以阻止、抑制、促进或者甚至驱动可操作地连接的、编码氨基酸序列的多核苷酸序列的表达。术语“选择标记(selectablemarker)”或“选择标记(selectivemarker)”是指能在宿主细胞中表达的、便于选择含有载体的那些宿主的多核苷酸(例如基因)。选择标记的实例包括但不限于抗生素标记。因此，术语“选择标记”是指当宿主细胞摄入进入的目的序列时或当某些其它反应发生时，能提供指示的基因。通常，选择标记是赋予宿主细胞抗生素抗性或代谢优势的基因，允许含有外源序列的细胞与未摄入所述外源序列的细胞相区别。“驻留(residing)选择标记”是位于待转化的微生物的染色体上的基因。驻留选择标记编码与转化构建体上的选择标记不同的基因。选择标记是本领域技术人员已知的。如上文所指出的，合适的标记是抗生素抗性标记，包括例如，amp\phleo\spec\kan\ery\tet\cmpR禾口neoR。参见例如Guerot-Fleury,Gene,167:335-337,1995；Palmerosetal.,Gene,247:255-264,2000；和Trieu-Cuotetal.，Gene，23:331-341,1983。可用于本发明的其它标记包括但不限于，诸如色氨酸的营养缺陷型标记和诸如6-半乳糖苷酶的检测标记。术语“编码选择标记的核苷酸序列”是指能在宿主细胞中表达的多核苷酸序列，其中所述选择标记的表达使得含有表达基因的细胞能在存在相应的选择剂的条件下或者在缺失一种或多种必需营养素的条件下生长。“信号序列，，或“信号肽”是指参与蛋白的成熟或前体形式的分泌的多核苷酸或氨基酸序列。信号序列的这种定义是功能定义，表示包括由蛋白基因的N-末端部分所编码的、参与完成蛋白质的分泌的所有氨基酸序列。通常，它们与蛋白的N-末端部分或前体蛋白的N-末端部分结合，但这不是一定的。信号序列可以是内源的或者外源的。信号序列可以通常与蛋白质(例如硫酯酶)相联，或者可以源自或来自编码另一分泌蛋白的基因。示例性的外源信号序列包括来自枯草芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶信号序列的前七个氨基酸残基与来自迟缓芽孢杆菌(ATCC21536)的枯草杆菌蛋白酶信号序列的余下部分的融合。另一个示例性的信号序列包括TesA的信号序列，去除TesA的信号序列后则产生‘TesA。对于两个多核苷酸或两个多肽，术语“基本上同一的”是指利用程序或算法(例如BLAST、ALIGN、CLUSTAL)并使用标准参数，多核苷酸或多肽与参考序列相比具有至少70%的序列同一性，例如，至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列同一性。两个多肽基本上同一的一种指示可以是第一多肽与第二多肽发生免疫学交叉反应。通常，由于保守型氨基酸取代而不同的多肽可发生免疫学交叉反应。因此，例如，当两个肽的差别仅在于保守型取代时，一个多肽与另一多肽基本上是同一的。两个多核苷酸序列基本上同一的另一种指示是两个分子在严紧条件(例如在中等至最大严紧性的范围内)下彼此杂、-父。“基本上纯化的”表示分子至少约60%不含、优选至少约75%不含、约80%不含、约85%不含，更优选至少约90%不含与其天然相关联的其它成分。本文中使用的术语“纯化的”或者“纯化”也指从样品中去除污染物。例如，去除污染物可以使样品中目的脂肪酸衍生物的百分比提高。例如，在植物、细菌、酵母或哺乳动物生产宿主细胞中表达脂肪酸衍生物之后，通过例如去除生产宿主细胞蛋白使脂肪酸衍生物得以纯化。该步骤也称为回收，其涉及分离和加工脂肪酸衍生物组合物，使得所述组合物在工业应用中是有用的，例如作为燃料或化学品。纯化后，样品中脂肪酸衍生物的百分比提高。术语“纯化的”并不要求绝对的纯，而是意图作为相对的名词。因此，例如，纯化的脂肪酸衍生物制剂是指其中的产物比细胞内环境中的产物浓度更高的制剂。例如，纯化的脂肪酯是指与伴随其的细胞组分(例如，多核苷酸、脂质、糖和其它肽)基本上分离的脂肪酯。在另一个实例中，纯化的脂肪酯制剂是指其中的脂肪酯基本上不含污染物(诸如发酵后可能存在的那些污染物)的制剂。例如，当样品重量的至少约50%由脂肪酯组成时，认为脂肪酯是“纯化的”。在另一个实例中，当样品重量的至少约60%,70%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%、98%或者99%或者更高百分比由脂肪酯组成时，认为脂肪酯是“纯化的”。“取代”表示在特定位置处用另一个氨基酸替换前体蛋白序列中的氨基酸，从而产生前体蛋白的突变体。用作取代物的氨基酸可以是天然存在的氨基酸或者可以是合成的或非天然存在的氨基酸。术语“表面活性剂”是指能够降低其溶解于的液体的表面张力的物质。它们通常由水溶性的头部和烃链或尾部组成。水溶性头部是亲水性的，并且可以是离子性的或者非离子性的。烃链是疏水性的。表面活性剂被用于大量产品，包括去污剂和清洁剂，还可用作纺织品、皮革和纸的辅剂，用于化工工艺、化妆品和药物、食品业、农业以及油回收。此外，它们还可以用于辅助提取和分离难以接近的环境或者水乳胶中的原油。根据用途的不同有4类表面活性剂。阴离子表面活性剂具有去污剂样活性，通常用于清洁用途。阳离子表面活性剂包含长链烃，通常被用于处理蛋白和合成的多聚体或者作为织物柔软剂和护发素的成分。两性表面活性剂也包含长链烃，一般用于洗发剂。非离子型表面活性剂通常用于清洁女口广BFIο术语“合酶”是指催化合成过程的酶。本文所用的术语“合酶”包括合酶和合成酶。术语“目的性质”是指起始基因的意图改变的性质。术语“硫酯酶”是指具有硫酯酶活性的酶。硫酯酶包括硫酯水解酶，其被鉴定为酶类别E.C.3.1.2的成员，且可从多种来源获得。例如，VoelkerandDavies，J.Bact.，Vol.，176，No.23，pp.7320-27，1994、美国专利第5，667，997号和美国专利第5，455，167号中描述了植物硫酯酶。也可以从微生物来源获得硫酯酶，例如Akohetal.,Prog.LipidRes.,vol.43,no.6,pp.534-52,2004；DiczfalusyandAlexson,Arch.Biochem.Biophys.,vol.334,no.1,pp.104-12,1996；LarsonandKolattukudy,Arch.Biochem.Biophys.,vol.237,no.1,pp.27-37,1985；Lawsonetal.,Biochemistry,vol.33,no.32,pp.9382-88，1994；Leeetal.，Eur.J.Biochem.，vol.184，no.1，pp.21—28，1989；Naggertetal.,J.Biol.Chem.,vol.266,no.17,pp.11044-50,1991；Nieetal.,Biochemistry,vol.47,no.29,pp.7744-51,2008；SeayandLueking,Biochemistry,vol.25,no.9,pp.2480-85，1986；Spenceretal.，J.Biol.Chem.，vol.253，no.17，pp.5922—26，1978；禾口Zhuangetal.，Biochemistry，vol.47，no.9，pp.2789-96，2008中所述。例如，还可从蓝细菌、藻类、哺乳动物、昆虫和真菌来源获得硫酯酶。硫酯酶可以具有硫酯酶活性之外的活性，例如蛋白水解活性或氧酯水解活性。特别有用的硫酯酶是来自大肠杆菌的‘TesA(或硫酯酶I)酶，其是ChoandCronan,J.Biol.Chem.，vol.，268,no.13，pp.9238-45，1992中描述的全长TesA丝氨酸硫酯酶的截短形式。大肠杆菌‘TesA多肽包含182个氨基酸，其是切割的反应产物，其中去除了大肠杆菌TesAm^f氨基酸的前导序列。例如，大肠杆菌‘TesA具有图58的SEQIDNO31的氨基酸序列。术语“硫酯酶活性”是指催化硫酯切割反应的能力，硫酯切割反应通常涉及在巯基处将硫酯水解成酸和硫醇，但是也包括酯交换步骤，在酯交换中硫酯键被切割并形成新的酯键。通常，酰基ACP硫酯酶能催化酰基-酰基载体蛋白硫酯和/或脂酰辅酶A硫酯的水解切割。具有硫酯酶活性的酶的实例包括乙酰辅酶A水解酶、棕榈酰辅酶A水解酶、琥珀酰辅酶A水解酶、甲酰辅酶A水解酶、酰基辅酶A水解酶、棕榈酰蛋白硫酯酶和泛素硫酯酶。可以通过任何以下测定来确定硫酯酶活性酰基辅酶A水解测定将0.IM的Tris-HCl缓冲液(pH8.0),5μM的棕榈酰辅酶A、pH7.O的0.IM磷酸钾缓冲液(含0.OlM的DTNB)用于配制完全测定混合物。因此，该测定混合物中终浓度为10μmol的Tris-HCl缓冲液(pH8.0)、0·05μmol的DTNB和0.01μmol的棕榈酰辅酶A。然后将该完全测定混合物与硫酯酶混合，终体积为2.OmL。利用13，eOOM^cm"1的摩尔消光系数，通过监测405nm处的吸光值变化来检验对酰基辅酶A底物的切割率。体内测定在诸如大肠杆菌的合适的宿主中表达目的硫酯酶。蛋白表达之后，用INHCl将培养物酸化至约2.5的终pH，然后用等体积的乙酸乙酯提取。用羟化四甲铵(TMAH)将有机相中的游离脂肪酸衍生为各自的甲酯，然后在配备火焰电离检测器的气相色谱仪上分析产生的甲酯。硫代内酯水解测定首先在0.IMHEPES缓冲液(pH7.3)中配制含25mML-高半胱氨酸硫代内酯(L-HcyT)和0.5mM5，5-二硫-双-2-硝基苯甲酸(DTNB)的试剂溶液。然后将酶加入该试剂溶液，通过在412nm处检测具有DTNB的自由巯基来监测L-HcyT水解(对于5-硫代-2-硝基苯甲酸ε=13，ΘΟΟΜ^αιΓ1)。4-MU-6S-棕榈-βGlc测定首先制备含IOyL硫酯酶和20yL底物溶液的反应混合物。底物溶液为含有0.64mMMU-6S-棕榈-β-Glc、15mM二硫苏糖醇(DTT)、0.375%(w/v)TritonX-100和0.IU来自杏仁的β-葡萄糖苷酶的Mcllvain’s磷酸盐/柠檬酸盐缓冲液(pH4.0)。反应混合物于37°C孵育1小时。添加外源杏仁β-葡萄糖苷酶来定量水解反应中间体MU-6-硫代-β-葡萄糖苷。通过添加含0.025%TritonX_10(^200yL0.5M碳酸钠(ρΗΙΟ.7)来终止水解反应，用荧光计测定释放的4-甲基伞形酮(MU)的荧光(λεχ=372，Xem=445nm)。溶血磷脂酶测定将IOyL硫酯酶与IOyL3mM的1-油酰基-磷脂酰乙醇胺、25μL的IOOmMTris-HCl(ρΗ7.0)禾Π5μL的5mMEDTA混合来配制反应混合物。添力卩1.5mL的CHCl3CH3OHd2)来终止反应，随后加水至总的水体积为0.9mL。然后利用40g悬浮于95mLImM四硼酸钠中的SilicaGelH制备的板，通过薄层色谱法和合适的标准物来分析有机相。溶剂系统由CHCl3CH3OHH2O(95355)组成。蛋白酶底物测定将含IOyL酶与800μL含0.25%TritonX-100的12.5mM的Tris-HCl(pH8.0)和10μL溶于DMSO中的CbZ-Phe-ONp混合来配制反应混合物。通过监测405nm处的吸光值来测定经由底物切割释放的对硝基酚。脂酰PNP水解测定首先配制含2%TritonX_100(溶于50mM磷酸钠(ρΗ7.0)中)和IOmMC12-对硝基苯(酰基PNP)(溶于丙酮中)的试剂溶液。然后通过将600μLIOmMC12-PNP混于9.4_mL磷酸盐缓冲液中来配制C12-PNP工作液。通过向96孔板的每孔加入40μL的酰基PNP工作液，随后快速加入40μL的酶来进行测定。使溶液混合15秒，在酶标仪中于25°C读取405nm处的吸光值改变。从硫酯形成酯配制含1.5μΜ硫酯酶、ΙΟΟμΜ豆蔻酰辅酶Α、10%(ν/ν)甲醇和50mM磷酸钠(pH7.0)的反应混合物。将该反应混合物于20°C孵育1小时，并添加INHClHpH降至约2.5来终止。用等体积的乙酸乙酯对该混合物进行提取，通过GC-MS或诸如GC-FID、LC-MS或薄层色谱法的其它标准方法来测定产生的脂肪酯的量。从酯形成酯配制含1.5μΜ硫酯酶、300μΜ月桂酰辅酶Α、10%(ν/ν)甲醇和50mM磷酸钠(pH7.0)的反应混合物。将该反应混合物于20°C孵育1小时，并添加INHClHpH降至约2.5来终止。用等体积的乙酸乙酯对该混合物进行提取，通过GC-MS或诸如GC-FID、LC-MS或薄层色谱法的其它标准方法来测定产生的月桂酯的量。术语“转化的”或“稳定转化的”细胞是指具有整合进基因组中的或能维持至少两代的游离质粒形式的非天然(异源)多核苷酸序列的细胞。术语“转运蛋白”是指协助一种或多种化合物进入和/或输出生物或者细胞器的蛋白。在某些实施方案中，生产宿主功能性地表达编码ATP结合盒(ABC)转运蛋白的外源DNA序列，从而所述生产宿主将脂肪酸衍生物输出到培养基中。许多生物中都发现了ABC转运蛋白，诸如秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans)、拟南芥、真养产碱杆菌(Alcaligeneseutrophns)(后来重新命名为Ralstoniaeutropha)或红串红球菌(Rhodococcuserythropolis)。ABC转运蛋白的非限制性实例包括CER5、AtMRP5、AmiS2和AtPGPl0在优选实施方案中，ABC转运蛋白是CER5(例如AY734542)。在其它实施方案中，所述转运蛋白是选自下述的外排蛋白来自大肠杆菌的AcrAB、TolC、或AcrEF或者来自细长嗜热聚球蓝细菌(Thermosynechococcuselongates)BP-I的tlll618、tlll619和tll0139。在其它实施方案中，转运蛋白是选自黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)、秀丽隐杆线虫、结核分枝杆菌或酿酒酵母的脂肪酸转运蛋白(FATP)或任何一种本领域已知的哺乳动物FATP。例如，转运蛋白可用于提高不能自发分泌的产物的分泌或释放。当工程改造的宿主细胞能自发分泌或释放产物，但是释放缓慢或者不完全时，转运蛋白也是有用的。在那些情况下，转运蛋白可以通过使分泌步骤加速或者通过驱动分泌完成来提高分泌。在本文中，“变体”与“突变体”可互换使用。“载体”是指被设计成能将多核苷酸引入一种或多种细胞类型中的多核苷酸构建体。载体包括克隆载体、表达载体、穿梭载体、质粒、盒等。在某些实施方案中，多核苷酸构建体包含编码硫酯酶(例如前体硫酯酶或成熟硫酯酶)的多核苷酸序列，该多核苷酸序列可操作地与能影响多核苷酸或基因在合适的宿主中表达的合适的前序列(例如分泌前序列)连接。“蜡”是至少部分地包含脂肪酯的物质。在某些实施方案中，脂肪酯具有A侧和B侧，每侧都由中到长碳链构成。除了脂肪酯以外，蜡可以包含其它成分。例如，蜡可以包含烃、甾醇酯、脂肪醛、醇、酮、β-二酮、三酰甘油等。通常，在室温时，例如，在20°C时，蜡是固体。对于基因或蛋白，“野生型”表示天然存在的多核苷酸或蛋白序列。在某些实施方案中，野生型序列指的是蛋白工程改造起点的目的序列。脂肪酸衍生物的产生按照本发明的实施方案，在能将碳源转化为脂肪酸衍生物的宿主细胞中表达本发明的新的硫酯酶。本发明涉及两个不同的实施方案(1)发现突变硫酯酶能用来优化和/或“设计”脂肪酸衍生物组合物，以使这些组合物更有用，以及发现不同的突变能提供不同的目标性质；和(发现在不存在蜡合酶或酯合酶的情形下，硫酯酶在重组宿主细胞中发挥作用而直接产生脂肪酯产物。按照本发明的实施方案，按本文方法、载体和细胞产生的脂肪酸衍生物组合物与用不含本发明硫酯酶变体的宿主细胞所产生的脂肪酸衍生物相比具有改动的或改变的性质。例如，还如本文所描述，利用本发明的硫酯酶能够开发出产生脂肪酸衍生物的生产工艺，与涉及野生型硫酯酶的相似工艺相比，该生产工艺具有改变的组成谱，例如，以下改变的性质多种特定碳链长度的酰基基团的百分比、饱和或不饱和的酰基基团、不饱和位置、支链酰基基团、分支位置、羟酰基基团、酮酰基基团、产物中酯或游离脂肪酸的比例、短链(例如C8、C9、C10,Cn、C12、C13和/或C14)与长链(例如C15、C16,C17,C18,C19和/或CJ脂肪酸衍生物的比例或脂肪酸衍生物的收率。因此，可以将具有各种所需的性质的产物工程化，使得它们具有优化的十六烷值、辛烷值、氧化稳定性、润滑性、引火点、粘性、沸点、熔点、倾点、浊点、冷滤点、冷流性、芳香度和/或碘值。脂肪酸衍生物可用作生物燃料和特种化学品或作为生物燃料和特种化学品的成分。脂肪酸衍生物以及从它们制备的产物包括燃料、燃料添加剂、燃料混合物、去垢剂和表面活性剂、营养补剂、聚合物、石蜡替代品、润滑剂、溶剂、个人护理品、橡胶加工添加剂、腐蚀抑制剂、乳化剂、塑料、纺织品、美容用品、纸产品、涂料、金属加工液、电介质、润滑油和软化剂。本文公开的方法和组合物允许产生具有特定的分支点、饱和度和碳链长度的脂肪酸衍生物。根据是需要较高收率比例或收率百分比的脂肪酯还是需要较低收率比例或收率百分比的脂肪酯，本文的方法和组合物还允许产生的脂肪酯的比例高于其它产物，或者脂肪酯的比例低于其它产物。例如，特别地，本文的方法和组合物允许产生的脂肪酸酯的比例大于游离脂肪酸，或者换而言之，允许脂肪酸酯的收率比例或收率百分比高于游离脂肪酸。可选地，例如，当不需要大量的脂肪酸酯时，本文的方法和组合物允许产生的脂肪酸酯的比例小于游离脂肪酸。此外，本文的方法和组合物允许产生的脂肪酸衍生物的收率提高。可以用作生产宿主来产生脂肪酸衍生物的微生物的非限制性实例包括蓝细菌、藻类、细菌、酵母或丝状真菌。合适的生产宿主的其它非限制性实例包括植物、动物或人细胞。可以由本文所述的生产宿主来产生醇(短链、长链、支链或不饱和的)。这些醇可以直接作为燃料或者可以用于产生脂肪酯。单独的脂肪酯或者脂肪酯与本文描述的其它脂肪酸衍生物的组合也可作为燃料或作为燃料成分。同样，由本文所述的生产宿主产生的烃可以作为生物燃料或作为生物燃料成分。利用本文提供的教导，可以将这些基于烃的燃料设计成含有分支点、限定的饱和度和特定的碳链长度。当单独用作生物燃料或者与其它脂肪酸衍生物组合时，烃可以与合适的添加剂或其它常规燃料(例如，醇、来源于三甘油酯的柴油和基于石油的燃料)组合。Knothe,FuelProcessingTechnology861059—1070，2005中表征了各种月旨肪酯的十六烷值(CN)、粘度、熔点和燃烧热，通过引用将该文献全文并入本文。利用本文提供的教导，可以将生产宿主工程化，使其产生Knothe所述的任何脂肪酯。I.脂肪酸衍生物的产生和提高生产/收率的修饰可以将用于产生酰基辅酶A和/或脂肪酸衍生物的生产宿主进行重组修饰，使其包含过表达肽的多核苷酸序列。例如，可以修饰生产宿主来提高酰基辅酶A的产生，减少脂肪酸衍生物和脂肪酸生物合成途径中的中间体的分解代谢，或者减少脂肪酸生物合成途径中特定点的反馈抑制。除了修饰本文描述的基因外，也可以将其它细胞资源转为过量产生脂肪酸。例如可以减弱乳酸酯、琥珀酸酯和/或乙酸酯途径，并且过表达乙酰辅酶A羧化酶(acc)。对本文描述的生产宿主的修饰可以通过基因组改变、添加重组表达系统或者其组合。例如，可以利用合适的技术来修饰具体生产宿主中的一种或多种内源硫酯酶，使得突变硫酯与内源硫酯酶前体相比具有至少一种改变的性质，或者使得宿主细胞与进行基因组改变步骤之前的同一宿主细胞相比表现出至少一种改变的性质。图2-5展示了所涉及的脂肪酸生物合成途径。以下A-G部分描述了这些途径中的步骤。不同酶催化途径中的不同步骤。因此，每个步骤都是过表达基因来产生更多酶，从而驱使产生更多脂肪酸和脂肪酸衍生物的潜在位点。也可以将编码该途径所需的酶的基因重组加入缺乏这些酶的生产宿主。最后，为了增加所需产生物的产生，可以减弱或阻断会与产生脂肪酸和脂肪酸衍生物的途径竞争的步骤。按照本公开，本领域技术人员可以利用本发明的硫酯酶来制备产生脂肪酸衍生物的微生物，以及利用这些微生物来产生各种脂肪酸衍生物，其中这些脂肪酸衍生物具有改变的性质。还可以制备能更有效地产生这些脂肪酸衍生物的微生物，使得收率、生产率或发酵过程中的滴度达到所需的水平。A.乙酰辅酶A-丙二酰辅酶A至酰基ACP脂肪酸合酶(FAQ是催化酰基链起始和延长的一组肽(Marrakchietal.,BiochemicalSociety，301050-1055，2002)。酰基载体蛋白(ACP)与FAS途径中的酶一起控制所产生的脂肪酸的长度、饱和度和分支水平。该途径中的步骤由脂肪酸生物合成(fab)和乙酰辅酶A羧化酶(acc)基因家族的酶催化。根据所需的产物，可以减弱或者过表达这些基因中的一个或多个。I.脂肪酸生物合成途径乙酰辅酶A或丙二酰辅酶A至酰基ACP生产宿主中的脂肪酸生物合成途径使用前体乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A。该途径中的步骤由脂肪酸生物合成(fab)和乙酰辅酶A羧化酶(acc)基因家族的酶催化。Heathetal.，Prog.LipidRes.40(6)=467-97,2001中描述了这个途径，通过引用将该文献并入本文。乙酰辅酶A被乙酰辅酶A羧化酶(Acc，由四个单独的基因accAB⑶编码的多亚基酶)羧化，形成丙二酰辅酶A。丙二酸基团由丙二酰辅酶A:ACP转酰基酶(FabD)转移给ACP，形成丙二酰ACP。然后发生缩合反应，丙二酰ACP与乙酰辅酶A合并，形成β-酮脂酰ACP。β-酮脂酰ACP合酶III(FabH)启动FAS循环，而β-酮脂酰ACP合酶I(FabB)和β-酮脂酰ACP合酶II(FabF)参与随后的循环。然后，重复步骤循环，直到产生具有合适长度的饱和脂肪酸。首先，β-酮脂酰ACP被NADPH还原，形成β-羟酰ACP。这个步骤由β-酮脂酰ACP还原酶(FabG)催化。然后，β-羟酰ACP脱水，形成反式-2-烯酰-ACP。β-羟酰ACP脱水酶/异构酶(FabA)或β-羟酰ACP脱水酶(FabZ)催化这个步骤。NADPH依赖性反式_2_烯酰-ACP还原酶I、II或III(分别为FabI、FabK或FabL)还原反式_2_烯酰-ACP，形成酰基ACP。由β-酮脂酰-ACP合酶I或β-酮脂酰-ACP合酶II(分别为FabB或FabF)介导的丙二酰-ACP和酰基ACP的缩合起始随后的循环。II.修饰脂肪酸生物合成途径来增加酰基ACP产生可以将生产宿主生物进行工程化，使其过量产生乙酰辅酶A和丙二酰辅酶Α。这些生产宿主生物包括植物、动物或人细胞。诸如蓝细菌、藻类、细菌、酵母或丝状真菌的微生物可以用作生产宿主。可以作为生产宿主的微生物的非限制性实例包括大肠杆菌、酿酒酵母、解脂假丝酵母(Candidalipolytica)、聚球蓝细菌(Synechococcus)、集胞蓝细菌(Synechocystis)、衣藻(Clamydomonas)、节杆菌(Arthrobacter)AK19、粘红酵母、不动杆菌菌株M-1、解脂假丝酵母和其它产油微生物。可以对生产宿主联合地或者单独地进行几种不同的修饰，以实现乙酰辅酶A/丙二酰辅酶A/脂肪酸和脂肪酸衍生物产生的增加。例如，为了增加乙酰辅酶A产生，可以在生产宿主中表达以下基因中的一个或多个pdh、panK、aCeEF(编码丙酮酸盐和2-酮戊二酸脱氢酶复合物的Elp脱氢酶组分和E2p二氢硫辛酰胺酰基转移酶组分)、fabH、fabD、fabG、aCpP和fabF。在其它实例中，可以在生产宿主中表达编码脂酰辅酶A还原酶和醛脱羰酶的其它基因。本领域已知的是，可以构建含有一个或多个上述基因的质粒，其中所有基因受组成型启动子或者可控启动子的控制。这些基因的示例性GenBank登录号列在圆括号中pdh(BAB!M380，AAC73227，AAC73226),panK(又称为coaA，AAC76952)、aceEF(AAC73227,AAC73226)、fabH(AAC74175)、fabD(AAC74176)、fabG(AAC74177)、acpP(AAC74178)和fabF(AAC74179)。此外，可以通过以下方式减弱或者敲除工程微生物中fadE、gpsA、ldhA、pflb、adhE、pta、poxB、ackA和/或ackB的表达水平用含有相应基因的无效突变或者缺失突变的条件性复制质粒或者非复制质粒进行转化，或者替换启动子或增强子序列。这些基因的示例性GenBank登录号列在圆括号中:fadE(AAC73325)、gspA(AAC76632)、IdhA(AAC74462)、pflb(AAC73989)、adhE(AAC74323)、pta(AAC75357)、poxB(AAC73958)、ackA(AAC75356)和ackB(BAB81430)。所得到的工程化生产宿主在合适的环境下生长时具有增加的乙酰辅酶A产生水平。而且，可以通过用从头合成的质粒中包括的accAB⑶(例如GenBank登录号AAC73296，EC6.4.1.2)将上述生产宿主进行基因工程从而实现丙二酰辅酶A的过量产生。可以通过在重新合成的质粒中再包含编码脂肪酶(例如，GenBank登录号CAA89087和CAA98876)的基因实现脂肪酸的过量产生。因此，在某些实例中，将乙酰辅酶A羧化酶过表达使其胞内浓度相对天然表达水平提高至少约2倍、至少约5倍或至少约10倍。此外，可以利用PlsB(例如，GenBank登录号AAC77011)D31IE突变体来增加可用的酰基辅酶A的量。此外，可以在生产宿主中包含sfa基因(FabA的抑制基因，例如登录号AAN79592)的过表达来增加单不饱和脂肪酸的产生(Rocketal.，J.Bacteriology178:5382-5387，1996)。B.利用硫酯酶使酰基ACP和/或酰基辅酶A转变为脂肪酯在脂肪酸合成的典型微生物过程模型中，乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A通过一系列步骤被转化形成酰基ACP链。然后经由一系列可选的酶学步骤使酰基ACP转化为各种终产物，包括脂肪酸衍生物。例如，通常，通过硫酯酶、酰基辅酶A连接酶/合成酶和酯合酶的联合连续反应使酰基ACP转化为脂肪酯。这些酶在代谢途径中的商业用途的限制是需要从脂酰基ACP前体产生脂酰辅酶A底物，这需要至少两个酶学步骤和两个磷酸酐键耗费的代谢能量。用硫酯酶直接产生脂肪酯减轻了由这两个酶学步骤造成的ATP损失。最近得到证实，脂肪酶(其天然“醇”底物是水)也可以用来体外催化制备生物柴油的酯交换反应(即将三酰甘油和甲醇转化成脂肪酸甲酯和甘油)。然而，脂肪酶在胞内产生时通常对细胞有毒。尽管已经公布了硫酯酶对水具有特异性，但本发明发现，在存在足量的醇的条件下，醇可以成为硫酯酶可接受的底物。在这种情况下，硫酯酶可以催化脂酰基酶中间体的醇解，就如同脂肪酶在体外进行的一样。因此，在正确的条件下，如果提供充足水平的合适的醇来驱动醇解反应，则能接受脂肪酯作为底物来形成脂肪酶中间体的酶可以用来合成所需的脂肪酸酯，所述脂肪酶中间体随后通过水解或酯交换被切割。具有可从酰基ACP直接产生酯这种能力的酶的实例除硫酯酶以外包括酰基转移酶、脂肪酶、酯酶和蛋白酶。可用的硫酯酶可以是如本文所定义的天然存在的硫酯酶和/或前体硫酯酶，或者可以是按照本公开制备的突变硫酯酶。本领域技术人员能确定利用特定酶从酰基ACP直接产生脂肪酯的适用度。例如，实施例32所提供的测定可用于测定直接的酯产生。按照本发明的该方面，在存在或不存在酯合酶和/或脂酰辅酶A连接酶/合成酶的情况下，可以利用硫酯酶来直接产生脂肪酯。例如，可催化重组宿主菌株中脂肪酯直接产生的硫酯酶的表达可用来增补还表达酯合酶的菌株中的脂肪酯产生。此外，可催化重组宿主细胞中脂肪酯直接产生的硫酯酶的表达可用在没有酯合酶表达或酯合酶表达较低的情况中。可以利用已进行修饰而具有与前体硫酯酶相比改变的性质的突变硫酯酶C.酰基ACP至脂肪酸I脂肪酸生物合成途径酰基ACP至脂肪酸如上文所述，乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A经过几个步骤的加工形成酰基ACP链。酶sn-甘油-3-磷酸酰基转移酶(PlsB)催化酰基基团从酰基ACP或酰基辅酶A转移到甘油-3-磷酸的sn-Ι位置。因此，PlsB是磷脂合成中的关键调节酶，磷脂合成是脂肪酸途径的一部分。抑制PlsB会导致长链酰基ACP水平增加，该反馈将抑制该途径中的早期步骤，这涉及诸如accAB⑶、fabH和fabl的基因。通过例如硫酯酶过表达将该调控解偶联导致脂肪酸产生增加。II.修饰脂肪酸生物合成途径而产生所需类型或比例的脂肪酸按照本发明，表达的硫酯酶与宿主菌株中的天然或内源硫酯酶相比具有改变的性质。为了将生产宿主工程化使其产生脂肪酸衍生物的同质群体，可以将一个或多个内源基因减弱或功能上缺失，并因此，可以表达本发明的一种或多种硫酯酶。例如，可以通过减弱利用C18:1-ACP的硫酯酶C18(例如GenBank登录号AAC73596和P0ADA1)并表达对Cltl底物(即每个底物均含10个碳长的碳链)具有增加的特异性和/或活性(例如催化速率)的改变的硫酯酶来产生Cltl脂肪酸衍生物(即每个脂肪酸衍生物均含10个碳长的碳链)。这产生了更加同质的脂肪酸衍生物群体，该脂肪酸衍生物群体中碳链长度为10的脂肪酸增多。在另一个实例中，通过减弱产生非C12脂肪酸的内源硫酯酶并表达对C12底物具有增加的特异性和/或活性(例如催化速率)的改变的硫酯酶来产生C12脂肪酸衍生物。在另一个实例中，通过减弱产生非C14脂肪酸的内源硫酯酶并表达对C14底物具有增加的特异性和/或活性(例如催化速率)的改变的硫酯酶来产生C14脂肪酸衍生物。在另一个实例中，产物混合物中短链(例如C8、C9、C10,C11,C12,C13和/或C14)脂肪酸衍生物与其它非短链脂肪酸衍生物相比的收率比例增加。在另一个实例中，还可以实现产物混合物中短链(例如C8、C9、C1Q、Cn、C12、C13和/或C14)脂肪酸衍生物与其它非短链脂肪酸衍生物相比的收率比例降低。在另一个实例中，通过表达具有提高的催化速率和/或体内产生与收率的改变的硫酯酶可以产生收率更高和/或改善的游离脂肪酸衍生物。在另一个实例中，通过应用一种或多种特定的硫酯酶突变体可以使产生的脂肪酯与其它产物(例如游离脂肪酸)相比的收率比例或收率百分比增加或降低。利用本领域内已知的方法，例如通过细胞裂解之后进行放射性方法、HPLC、LC-MS和GC-MS可以证实乙酰辅酶A、丙二酰辅酶A和脂肪酸的过量产生。在可选的实施方案中，本发明的硫酯酶可以与内源硫酯酶在宿主菌株中联合表达。在另一个可选的实施方案中，利用本领域技术人员已知的合适的基因组改变技术可以对一种或多种内源硫酯酶进行修饰，使得突变硫酯酶与内源硫酯酶前体相比具有至少一种改变的性质，和/或使得宿主细胞与应用所述基因组改变技术之前的宿主细胞相比表现出至少一种改变的性质。D.脂肪酸至酰基辅酶AI.脂肪酸转化为酰基辅酶A酰基辅酶A合酶(ACQ通过两步机制将游离脂肪酸酯化成酰基辅酶Α。游离脂肪酸首先通过ATP焦磷酸解作用转化成酰基AMP中间体(腺苷酸)。然后，腺苷酸中活化的羰基碳与辅酶A的巯基偶合，释放出AMP和酰基辅酶A终产物。参见Siockeyetal,Plant.Physiol.1291710-1722，2002。大肠杆菌ACS酶!^adD和脂肪酸转运蛋白！^dL通常是脂肪酸摄取系统的重要部分。！^dL介导脂肪酸向细菌细胞内的转运，！^adD介导酰基辅酶A酯的形成。当没有其它碳源可以利用时，细菌摄取外源脂肪酸，将其转化为酰基辅酶A酯，酰基辅酶A酯与转录因子!^adR结合并抑制fad基因的表达，fad基因编码的蛋白负责脂肪酸转运(FabL)、活化(FadD)和β氧化(i^dA、FadB、FadE*i^dH)。当有备选碳源可以利用时，细菌将脂肪酸合成为酰基ACP，然后酰基ACP被用于磷脂合成，而不是作为β氧化的底物。因此，酰基辅酶A和酰基ACP是脂肪酸的独立来源，会产生不同的终产物。参见Cavigliaetal.,J.Biol.Chem.279(12):1163-1169，2004。II.修饰脂肪酸生物合成途径而增加脂肪酸至酰基辅酶A的转化可以利用已知的肽将生产宿主进行工程化，使其产生不同长度的脂肪酸，脂肪酸可以转化为酰基辅酶A。一种制备脂肪酸的方法涉及增加一种或者多种酰基辅酶A合酶肽(EC6.2.1.-)的表达或者表达所述这些酶的更有活性的形式。表1列出了能够被表达从而产生酰基辅酶A和脂肪酸衍生物的酰基辅酶A合酶。可以测试这些酰基辅酶A合酶来优化使用脂酰辅酶A作为底物的任何途径。利用生物信息学和合成基因，可以在生产菌株中表达异源fadD基因，并评价它们产生生物柴油和可能的生物原油的能力。表1:酰基辅酶A合酶权利要求1.来自前体硫酯酶的突变硫酯酶，其中与所述前体硫酯酶相比，所述突变体在体外和/或体内具有至少一种改变的性质。2.如权利要求1所述的突变硫酯酶，其中所述前体硫酯酶包含一个或多个选自以下的序列(a)G-D-S-L-X(5)-M(SEQIDNO:28)，其中“X”是指任何氨基酸残基，如果存在其相邻括号中的数字，则该数字是指该氨基酸残基区段中X残基的数量，第2位的D残基可用N或T取代，第4位的L残基可用C或Q取代，以及第10位的M残基可用C、D、L、N、T或V取代；和/或(b)V-X(2)-G-X-N-D-X-L(SEQIDN0:29)，其中:每个“X”是指任何氨基酸残基，如果存在其相邻括号中的数字，则该数字是指该氨基酸残基区段中X残基的数量，第1位的V残基可用L取代，第6位的N残基可用V、L、C、A、G、H、I、T或W取代，第7位的D残基可用E取代，第9位的L残基可用I、W、F、Τ、Μ、A、Ε、N或V取代；和/或(c)D-X(-H-P-X(7)-I(SEQIDN0:30)，其中:每个“X”是指任何氨基酸残基，如果存在其相邻括号中的数字，则该数字是指该氨基酸残基区段中X残基的数量，第5位的P残基可用G、A、F、L、S或V取代，第13位的I残基可用L或V取代。3.如权利要求1所述的突变硫酯酶，其中所述前体硫酯酶(a与SEQIDNO31具有至少约30%的序列同一-性；(b与SEQIDNO31具有至少约40%的序列同一-性；(C与SEQIDNO31具有至少约55%的序列同一-性；(d与SEQIDNO31具有至少约70%的序列同一-性；(e与SEQIDNO31具有至少约85%的序列同一-性；(f与SEQIDNO31具有至少约90%的序列同一-性；或(g与SEQIDNO31具有至少约95%的序列同一-性。4.如权利要求1所述的突变硫酯酶，其中编码所述前体硫酯酶的多核苷酸(a与SEQIDNO32具有至少约30%的序列同一-性；(b与SEQIDNO32具有至少约40%的序列同一-性；(c与SEQIDNO32具有至少约55%的序列同一-性；(d与SEQIDNO32具有至少约70%的序列同一-性；(e与SEQIDNO32具有至少约85%的序列同一-性；(f与SEQIDNO32具有至少约90%的序列同一-性；或(g与SEQIDNO32具有至少约95%的序列同一-性；5.如权利要求1所述的突变硫酯酶，其中所述至少一种改变的性质是改变的体外和或体内底物特异性。6.如权利要求5所述的突变硫酯酶，其中所述改变的体外和/或体内底物特异性是对于C1(1、C12或C14底物或对于酯底物或硫酯底物的增加的活性。7.如权利要求1所述的突变硫酯酶，其中所述至少一种改变的性质是脂肪酯与其它脂肪酸衍生物相比的体外和/或体内的收率比例的改变。8.如权利要求7所述的突变硫酯酶，其中所述脂肪酯与其它脂肪酸衍生物相比的收率比例的改变是脂肪酯与游离脂肪酸相比的体外和/或体内的收率比例的增加。9.如权利要求7所述的突变硫酯酶，其中所述脂肪酯与其它脂肪酸衍生物相比的收率比例的改变是脂肪酯与游离脂肪酸相比的体外和/或体内的收率比例的降低。10.如权利要求1所述的突变硫酯酶，其中所述至少一种改变的性质是体外和/或体内的脂肪酸衍生物的增加的收率。11.如权利要求1所述的突变硫酯酶，其中所述至少一种改变的性质是短链脂肪酸衍生物与其它脂肪酸衍生物相比的体外和/或体内的收率比例的增加。12.如权利要求1所述的突变硫酯酶，其中所述至少一种改变的性质是短链脂肪酸衍生物与其它脂肪酸衍生物相比的体外和/或体内的收率比例的降低。13.如权利要求11或12所述的突变硫酯酶，其中所述短链脂肪酸衍生物选自C8、C9、C10>C11,C12,C13和/或C14脂肪酸衍生物。14.如权利要求11或12所述的突变硫酯酶，其中所述其它脂肪酸衍生物选自C15、C16、C17、C18,C19和/或C2tl脂肪酸衍生物。15.如权利要求13或14所述的突变硫酯酶，其中所述脂肪酸衍生物选自游离脂肪酸、脂肪酯、脂肪醛和脂肪醇。16.编码权利要求1-15中任一项所述的突变硫酯酶或其天然存在的等同物的多核苷酸。17.包含权利要求16所述的多核苷酸的载体。18.包含权利要求16所述的多核苷酸的重组宿主细胞。19.包含权利要求17所述的载体的重组宿主细胞。20.如权利要求18或19所述的重组宿主细胞，其中编码硫酯酶突变体或其天然存在的等同物的多核苷酸被整合入所述宿主细胞的染色体中。21.包含权利要求16所述的多核苷酸或权利要求17所述的载体的重组细胞，其中fadE、gpsA、IdhA、pflB、pta、poxB、ackA、ackB、plB禾口/或sfa中的一个或多个被减弱。22.包含权利要求16所述的多核苷酸或权利要求17所述的载体的重组细胞，所述重组细胞还包含一种或多种编码一种或多种脂肪酸衍生酶的多核苷酸。23.如权利要求22所述的重组细胞，其中所述一种或多种脂肪酸衍生酶选自酰基辅酶A合酶、酯合酶、醇酰基转移酶、醇脱氢酶、酰基辅酶A还原酶、脂肪酸脱羧酶、羧酸还原酶、脂肪醇乙酰转移酶、脱羰酶和/或脂肪醇形成酰基辅酶A还原酶。24.包含权利要求16所述的多核苷酸或权利要求17所述的载体的重组细胞，所述重组细胞还包含一种或多种编码一种或多种酰基辅酶A合酶的多肽，所述酰基辅酶A合酶选自fadD、fadK、BH3102、yhfL、Pfl-4354、EAV15023、fadDl、fadD2、RPC_4074、fadDD35、fadDD22、faa3和/或编码GenBank登录号ΖΡ_01644857蛋白的基因。25.包含权利要求16所述的多核苷酸或权利要求17所述的载体的重组细胞，所述重组细胞还包含一种或多种编码以下的多核苷酸(a)一种或多种酯合酶；(b)一种或多种脂肪醛生物合成酶；(c)一种或多种脂肪醇产生基因；或(d)一种或多种烯烃产生基因。26.包含权利要求16所述的多核苷酸或权利要求17所述的载体的重组细胞，其中一种或多种编码酰基辅酶A脱氢酶的基因被减弱或缺失。27.产生脂肪酸衍生物的方法，包括在允许脂肪酸衍生物产生的条件下培养权利要求18-26中任一项所述的重组细胞。28.细胞外产生脂肪酸衍生物的方法，包括在允许表达突变硫酯酶或其天然存在的等同物的条件下培养权利要求18-26中任一项所述的重组细胞，收获所述细胞，裂解所述细胞，以及在允许脂肪酸衍生物产生的条件下向所述细胞裂解物提供底物。29.如权利要求27或观所述的方法，其中所述脂肪酸衍生物是修饰过的脂肪酸衍生物。30.按照权利要求27-29中任一项所述的方法产生的脂肪酸衍生物。31.如权利要求30所述的脂肪酸衍生物，其中所述脂肪酸衍生物是下述产品或者下述产品的组分燃料、燃料添加剂、混合燃料、去垢剂、表面活性剂、营养补剂、聚合物、石蜡替代品、润滑齐、溶齐、个人护理品、橡胶加工添加齐、腐蚀抑制剂、乳化齐、塑料、纺织品、美容用品、纸产品、涂料、金属加工液、电介质、润滑油或软化剂。32.包含一种或多种权利要求30所述的脂肪酸衍生物的生物燃料组合物。33.包含权利要求32所述的生物燃料组合物的燃料组合物。34.如权利要求33所述的燃料组合物，还包含基于石油的燃料。35.如权利要求34所述的燃料组合物，还包含合成的燃料。36.如权利要求35所述的燃料组合物，还包含十六烷值改良剂、降低浊点的添加剂、去垢剂、分散剂、抗磨剂、润滑性改良剂、稳定剂、抗氧化剂、腐蚀抑制剂、杀生物剂、金属减活化剂、粘性改良剂、摩擦改良剂、消泡剂和密封固定剂中的一种或多种。全文摘要本发明涉及新的突变硫酯酶及其天然存在的等同物、由所述酶制备的组合物以及硫酯酶的用途。具体而言，本发明提供了具有改变的性质的突变硫酯酶，例如，改变的底物特异性、改变的活性、改变的选择性和/或产物混合物中改变的收率比例。本发明还提供了编码所述突变硫酯酶的多核苷酸以及包含所述多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明还提供了硫酯酶在生产各种脂肪酸衍生物中的新用途，所述各种脂肪酸衍生物可用作工业化学品和燃料或用作工业化学品和燃料的成分。文档编号C12N9/16GK102325864SQ200980157397公开日2012年1月18日申请日期2009年12月23日优先权日2008年12月23日发明者穆尔塔扎·阿里比海,纳·瑞恩,路易斯·侯姆申请人:Ls9公司