专利名称：仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种复合化合物溶液的制备方法，特别是涉及一种仿生酶型水溶性亚 硝酸盐复合降解剂的制备方法。
背景技术：
亚硝酸盐是肉类加工时常用的腌制剂，不仅能使肉制品呈良好色泽，而且还具有 防腐和增强风味的作用。但是，过量亚硝酸盐具有致癌作用，还会使血红蛋白失去携氧功 能，因此研究食物中的亚硝酸盐残留及其降解情况，对食品工业及人类健康都具有十分重 要的意义。植物界亚硝酸还原酶(nitrite reductase，NiR)存在绿色组织的叶绿体中， 它可有效催化降解亚硝酸盐。然而天然亚硝酸还原酶提取较繁琐、价高、影响其活性的影响 因子也较多。
发明内容
本发明的目的在于提供一种安全无毒的具有亚硝酸还原酶催化降解亚硝酸盐、阻 断N-亚硝胺生成活性的水溶性绿色的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法。为实现上述目的，本发明的技术解决方案是
本发明是一种仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，它包括以下步骤
(1)复合色素溶液的制备(11)将板栗壳在35-65°C烘干、粉碎，用5-60%(V/V)乙醇 溶液作为提取剂，用微波萃取仪进行微波萃取，设定微波萃取条件为温度40-65°C，压 力为1-5标准大气压，功率为300-5001;(12)待反应结束后冷却至20-381，过滤，经旋转 蒸发仪减压浓缩成暗红色浸膏，真空干燥后得板栗壳色素，称重；(13)分别在不锈钢或搪 瓷等稳定材料制成的容器中，加入蒸馏水、离子交换水、纯净水、凉开水中的一种，在5-45 搅拌下依次加入0. 01-10% (W/V)板栗壳色素或其它具有光稳定性、含量为0. 01-10% (W/V) 具有抗氧化性的天然食用色素，和水溶性防腐剂制成复合色素溶液；
(2)复合聚阳离子溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的容 器中加入1-3%醋酸水溶液，搅拌下依次加入含量为0. 01-3%(W/V)的天然聚阳离子、含量为 0.01-0.5mg/100g的活性型维生素B2、含量为0. 1- 136g/100g的Vc溶液制成复合聚阳离 子溶液；
(3)复合型香辛料溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的容 器中加入蒸馏水，依次加入含量为0. 01-30 mg/kg的水溶性单一或由复合天然香辛料的提 取物、含量为0. 1-1. 5%(ff/ff)的磷酸盐制成复合型香辛料溶液；
(4)将复合型香辛料溶液加热至45-100°C，搅拌l-45min，过滤，滤液在15-100 保温 0.5- 后室温静置10-60min，搅拌下依次加入复合聚阳离子溶液与复合色素溶液，充分 搅拌均勻。步骤(13)中所述的抗氧化性的天然食用色素为多酚类衍生物色素、酮类衍生物色 素、醌类衍生物色素中的一种。
所述的多酚类衍生物为花青素或儿茶素。所述的酮类衍生物为姜黄或红曲。所述的醌类衍生物为虫胶或胭脂虫红。步骤(13)中所述的水溶性防腐剂为山梨酸钾，含量为0. 02%—10% ( W/V)。步骤(3)中所述的复合天然香辛料为0. 005mg^25mg/kg的麦芽酚或乙基麦芽酚。步骤(3)中所述的复合天然香辛料为花椒、八角、桂皮、果皮中的一种。步骤(3)中所述的单一或复合天然香辛料提取物为香精或酊剂，或以上两种或多 种香料的复合物。步骤(3)中所述的磷酸盐为三聚磷酸钠、六偏磷酸钠、焦磷酸钠、磷酸三钠、磷酸氢 二钠、磷酸二氢钠、酸式焦磷酸钠、焦磷酸二氢二钠中的一种。采用上述方案后，由于本发明以水溶性天然无毒色素为基料，纯净水为载体，辅以 (配以)麦芽酚、聚阳离子、复合磷酸盐。按以上配方配制的绿色仿生酶型亚硝酸盐复合降 解剂，不仅对亚硝酸盐具有很好的清除作用，而且对有毒亚硝胺的合成也具有明显的阻断 作用。添加于加工食品中，不仅可有效降解亚硝酸盐，而且具有上色、调味及一定的抗氧化、 抗菌活性。丰富食品的保健功能，有益人体健康。下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
具体实施例方式一、实施例
本发明是一种仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，它包括以下步骤
(1)复合色素溶液的制备(11)将板栗壳在35-65°C烘干、粉碎，用5-60%(V/V)乙醇 溶液作为提取剂，用微波萃取仪进行微波萃取，设定微波萃取条件为温度40-65°C，压 力为1-5标准大气压，功率为300-5001;(12)待反应结束后冷却至20-381，过滤，经旋转 蒸发仪减压浓缩成暗红色浸膏，真空干燥后得板栗壳色素，称重；(13)分别在不锈钢或搪 瓷等稳定材料制成的容器中，加入蒸馏水、离子交换水、纯净水、凉开水中的一种，在5-45 搅拌下依次加入0. 01-10% (W/V)板栗壳色素或其它具有光稳定性、含量为0. 01-10% (W/V) 具有抗氧化性的天然食用色素，和水溶性防腐剂制成复合色素溶液；
(2)复合聚阳离子溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的容 器中加入1-3%醋酸水溶液，搅拌下依次加入含量为0. 01-3%(W/V)的天然聚阳离子、含量为 0.01-0.5mg/100g的活性型维生素B2、含量为0. 1- 136g/100g的Vc溶液制成复合聚阳离 子溶液；
(3)复合型香辛料溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的容 器中加入蒸馏水，依次加入含量为0. 01-30 mg/kg的水溶性单一或由复合天然香辛料提取 物、含量为0. 1-1. 5%(ff/ff)的磷酸盐制成复合型香辛料溶液；
(4)将复合型香辛料溶液加热至45-100 ,搅拌l-45min，过滤，滤液在15-100 保温 0.5- 后室温静置10-60min，搅拌下依次加入复合聚阳离子溶液与复合色素溶液，充分 搅拌均勻。在上述实施例中，步骤(13)中所述的抗氧化性的天然食用色素为多酚类衍生物色 素、酮类衍生物色素、醌类衍生物色素中的一种。所述的多酚类衍生物为花青素或儿茶素。所述的酮类衍生物为姜黄或红曲。所述的醌类衍生物为虫胶或胭脂虫红。步骤(13)中所述的水溶性防腐剂为山梨酸钾，含量为0. 02%—10% ( W/V)。步骤(3)中所述的复合天然香辛料为0. 005mg^25mg/kg的麦芽酚或乙基麦芽酚。步骤(3)中所述的复合天然香辛料为花椒、八角、桂皮、果皮(为柚子皮、橘皮)中的一种。步骤(3)中所述的单一或复合天然香辛料提取物为香精或酊剂，或以上两种或多 种香料的复合物。步骤(3)中所述的磷酸盐为三聚磷酸钠、六偏磷酸钠、焦磷酸钠、磷酸三钠、磷酸氢 二钠、磷酸二氢钠、酸式焦磷酸钠、焦磷酸二氢二钠中的一种。在本实施例中，各成分功能为
抗氧化天然食用色素、维生素亚硝酸盐及亚硝胺生成阻断。聚阳离子亚硝酸盐及亚硝胺生成阻断、抗菌。磷酸盐品质改良剂；持水剂、金属离子络合剂。活性型维生素转递氢离子的辅酶。天然香辛料风味剂、抗氧化剂。实施例1
本发明是一种仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，它包括以下步骤
(1)复合色素溶液的制备(11)将板栗壳在35°c烘干、粉碎，用5%(V/V)乙醇溶液作 为提取剂，用微波萃取仪进行微波萃取，设定微波萃取条件为温度40°C，压力为1标准 大气压，功率为300W ； (12)待反应结束后冷却至20°C，过滤，经旋转蒸发仪减压浓缩成暗 红色浸膏，真空干燥后得板栗壳色素，称重；(13)分别在不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的 容器中，加入蒸馏水、离子交换水、纯净水、凉开水中的一种，在5 搅拌下依次加入0.01% (W/V)板栗壳色素或含量为0. 01% (W/V)具有抗氧化性的花青素、姜黄、虫胶和含量为0. 02% W/V)的山梨酸钾，制成复合色素溶液；
(2)复合聚阳离子溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的 容器中加入1%醋酸水溶液，搅拌下依次加入含量为0.01%(W/V)的天然聚阳离子、含量为 0.01mg/100g的活性型维生素B2、含量为0. lg/100g的Vc溶液制成复合聚阳离子溶液；
(3)复合型香辛料溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的容 器中加入蒸馏水，依次加入含量为0. 01mg/kg的水溶性单一或由0. 005mg/kg花椒的提取的 香精或酊剂、含量为0. 1%(W/W)的三聚磷酸钠制成复合型香辛料溶液；
(4)将复合型香辛料溶液加热至45 ,搅拌lmin，过滤，滤液在15 保温0.证后室温 静置lOmin，搅拌下依次加入复合聚阳离子溶液与复合色素溶液，充分搅拌均勻。实施例2
本发明是一种仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，它包括以下步骤 (1)复合色素溶液的制备(11)将板栗壳在65°c烘干、粉碎，用60% (V/V)乙醇溶液作 为提取剂，用微波萃取仪进行微波萃取，设定微波萃取条件为温度65°C，压力为5标准 大气压，功率为500W ； (12)待反应结束后冷却至38°C，过滤，经旋转蒸发仪减压浓缩成暗红 色浸膏，真空干燥后得板栗壳色素，称重；(13)分别在不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的容 器中，加入蒸馏水、离子交换水、纯净水、凉开水中的一种，在45 搅拌下依次加入10%(W/V)板栗壳色素或含量为10% (W/V)的抗氧化性的天然食用色素儿茶素、红曲胭脂虫红和含 量为10% ( w/ν)的山梨酸钾，制成复合色素溶液；
(2)复合聚阳离子溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成 的容器中加入3%醋酸水溶液，搅拌下依次加入含量为3%(W/V)的天然聚阳离子、含量为
0.5mg/100g的活性型维生素B2、含量为136g/100g的Vc溶液制成复合聚阳离子溶液；
(3)复合型香辛料溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的 容器中加入蒸馏水，依次加入含量为30 mg/kg的水溶性单一或由八角提取的酊剂、含量为
1.5%(ff/ff)的六偏磷酸钠，制成复合型香辛料溶液；
(4)将复合型香辛料溶液加热至100°C，搅拌45min，过滤，滤液在IOOtlC保温池后室温 静置60min，搅拌下依次加入复合聚阳离子溶液与复合色素溶液，充分搅拌均勻。实施例3
本发明是一种仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，它包括以下步骤
(1)复合色素溶液的制备(11)将板栗壳在50°c烘干、粉碎，用30%(V/V)乙醇溶液 作为提取剂，用微波萃取仪进行微波萃取，设定微波萃取条件为温度48°C，压力为3标 准大气压，功率为400W ； (12)待反应结束后冷却至30°C，过滤，经旋转蒸发仪减压浓缩成 暗红色浸膏，真空干燥后得板栗壳色素，称重；(13)分别在不锈钢或搪瓷等稳定材料制成 的容器中，加入蒸馏水、离子交换水、纯净水、凉开水中的一种，在25 搅拌下依次加入5% (W/V)板栗壳色素或含量为5% (W/V)的抗氧化性的花青素、红曲、虫胶和含量为5% ( W/ V)为山梨酸钾，制成复合色素溶液；
(2)复合聚阳离子溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成 的容器中加入洲醋酸水溶液，搅拌下依次加入含量为观⑶八)的天然聚阳离子、含量为 O.ang/lOOg的活性型维生素B2、含量为80g/100g的Vc溶液制成复合聚阳离子溶液；
(3)复合型香辛料溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的容 器中加入蒸馏水，依次加入含量为20 mg/kg的水溶性单一或16mg/kg的桂皮提取的香精、 含量为1%(W/W)磷酸氢二钠，制成复合型香辛料溶液；
(4)将复合型香辛料溶液加热至70 ,搅拌30min，过滤，滤液在60 保温Ih后室温静 置40min，搅拌下依次加入复合聚阳离子溶液与复合色素溶液，充分搅拌均勻。二、本发明亚硝酸盐清除率的测定 盐酸萘乙二胺法
取6支2 5-50 mL比色管，均加入模拟胃液A或B(模拟胃液A:称取2. OgNaCl (AR) 加去离子水溶解，加入7mL浓HC1，加去离子水定容至1000 mL ；模拟胃液B 分别称取2 .OgNaCl(AR)与3. 2g胃蛋白酶，加去离子水分别溶解，加入7mL浓HC1，去离子水定容 至 1000mL。)1 0 mL，在 3 7°C水浴 1 0 mi η取出，分别加入 0.01%，0.05 % , 0. 1 %，0.396，0.5 %, 1 %的样品水溶液2mL，再加入5 g / m L的亚硝酸钠标液2m L， 分别在3 7°C水浴1 0、3 0、6 Omi η取出，立即加入0.4 %对氨基苯磺酸2 mL,混 勻，静置5 mi η后，各加1.0 mL 0. 2%盐酸萘乙二胺溶液，静置IOmi η,加水至 刻度混勻，在523n m下测定吸光度Al，同时做以去离子水代替亚硝酸钠标液的空白 对照实验测定吸光度Atll与以去离子水作为空白对照实验测定吸光度Atl2t5 亚硝酸盐清除率 ％ =[ (A02 + A01 -A1 ) / A02 1X10 0实验结果随着浓度的提高与处理时间的延长，样品液对亚硝酸盐的清除率提 高，且在模拟胃液A中清除效果优于模拟胃液B。在浓度为1 %，模拟胃液A中处理 6 0 mi η时对亚硝酸盐的清除率最高，达到97. 3 %。
亚硝胺阻断率测定(采用分光光度法)结果
取6支2 5 mL比色管中加入模拟胃酸1 0 mL，在3 7°C水浴5_10 mi η取出 ，力口入 0.01 %，0.40 %，0. 15%,0. 5 % ,0. 65%, 1 % 的样品水溶液 2 mL，再 加入1匪ο 1 / L的二甲胺溶液1 mL，1匪ο 1 / L的Na N0，溶液1 mL，用蒸 馏水稀释至刻度，在3 7°C下恒温1 h。用移液管吸取1 mL上述溶液加到试管中， 加人质量分数0.5% N a2 C 0溶液0.5m L，于紫外分析仪上斜放照射1 5 mi n(254nm)。取出后加入质量分数1 %对氨基苯磺酸1. 5mL，再加入质量分数 0. 15 %. 萘胺1.5 mL,去离子水0.5 mL，摇勻静置5min在520n m下测定吸光度A1， 同时做以去离子水代替亚硝酸钠标液的空白对照实验测定吸光度Atll与以去离子水代替 样品溶液的空白对照实验测定吸光度A020
阻断率 / % =[(A02 + A01 -A1 ) / A02 ] X 1 0 0
实验结果亚硝胺的阻断率与样品液的浓度成线性关系且差异极显著，阻断率随着样 品液浓度提高而迅速提高。在3 7°C、样品浓度为1 %，pH=3、反应20- 6 0 mi η条件下 对亚硝胺合成的阻断率最高可达63%。
权利要求
1.一种仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征在于它包括以下步骤(1)复合色素溶液的制备(11)将板栗壳在35-65°C烘干、粉碎，用5-60%(V/V)乙醇 溶液作为提取剂，用微波萃取仪进行微波萃取，设定微波萃取条件为温度40-65°C，压 力为1-5标准大气压，功率为300-5001;(12)待反应结束后冷却至20-381，过滤，经旋转 蒸发仪减压浓缩成暗红色浸膏，真空干燥后得板栗壳色素，称重；(13)分别在不锈钢或搪 瓷等稳定材料制成的容器中，加入蒸馏水、离子交换水、纯净水、凉开水中的一种，在5-45 搅拌下依次加入0. 01-10% (W/V)板栗壳色素或其它具有光稳定性、含量为0. 01-10% (W/V) 具有抗氧化性的天然食用色素，和水溶性防腐剂制成复合色素溶液；(2)复合聚阳离子溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的容 器中加入1-3%醋酸水溶液，搅拌下依次加入含量为0. 01-3%(W/V)的天然聚阳离子、含量为 0.01-0.5mg/100g的活性型维生素B2、含量为0. 1- 136g/100g的Vc溶液制成复合聚阳离 子溶液；(3)复合型香辛料溶液的制备分别在用合成树脂、不锈钢或搪瓷等稳定材料制成的容 器中加入蒸馏水，依次加入含量为0. 01-30 mg/kg的水溶性单一或由复合天然香辛料的提 取物、含量为0. 1-1. 5%(ff/ff)的磷酸盐制成复合型香辛料溶液；(4)将复合型香辛料溶液加热至45-100°C，搅拌l-45min，过滤，滤液在15-100 保温 0.5- 后室温静置10-60min，搅拌下依次加入复合聚阳离子溶液与复合色素溶液，充分 搅拌均勻。
2.根据权利要求1所述的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征在 于步骤(13)中所述的抗氧化性的天然食用色素为多酚类衍生物色素、酮类衍生物色素、 醌类衍生物色素中的一种。
3.根据权利要求2所述的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征在 于所述的多酚类衍生物为花青素或儿茶素。
4.根据权利要求2所述的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征在 于所述的酮类衍生物为姜黄或红曲。
5.根据权利要求2所述的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征在 于所述的醌类衍生物为虫胶或胭脂虫红。
6.根据权利要求1所述的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征在 于步骤(13)中所述的水溶性防腐剂为山梨酸钾，含量为0. 02%—10% ( W/V)。
7.根据权利要求1所述的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征在 于步骤(3)中所述的复合天然香辛料为0. 005mg^25mg/kg的麦芽酚或乙基麦芽酚。
8.根据权利要求1所述的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征在 于步骤(3)中所述的复合天然香辛料为花椒、八角、桂皮、果皮中的一种。
9.根据权利要求1所述的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征在 于步骤(3)中所述的单一或复合天然香辛料提取物为香精或酊剂，或以上两种或多种香 料的复合物。
10.根据权利要求1所述的仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其特征 在于步骤(3)中所述的磷酸盐为三聚磷酸钠、六偏磷酸钠、焦磷酸钠、磷酸三钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、酸式焦磷酸钠、焦磷酸二氢二钠中的一种。
全文摘要
本发明公开了一种仿生酶型水溶性亚硝酸盐复合降解剂的制备方法，其步骤包括复合色素溶液的制备、复合聚阳离子溶液的制备、复合型香辛料溶液的制备，将复合型香辛料溶液加热、搅拌、过滤、静置后，搅拌下依次加入复合聚阳离子溶液与复合色素溶液,充分搅拌均匀等。由于本发明以水溶性天然无毒色素为基料，纯净水为载体，辅以麦芽酚、聚阳离子、复合磷酸盐，按以上配方配制的绿色仿生酶型亚硝酸盐复合降解剂，不仅对亚硝酸盐具有很好的清除作用，而且对有毒亚硝胺的合成也具有明显的阻断作用。添加于加工食品中，不仅可有效降解亚硝酸盐，而且具有上色、调味及一定的抗氧化、抗菌活性。丰富食品的保健功能，有益人体健康。
文档编号A23L1/29GK102077931SQ20101059100
公开日2011年6月1日 申请日期2010年12月16日 优先权日2010年12月16日
发明者马建华, 黄丽萍 申请人:集美大学