专利名称：Has-miR-520e的抗肿瘤用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一个与原发性肝癌相关的haS-miR-520e，以及该miRNA在治疗原发性肝细胞癌方面的用途。
背景技术：
原发性肝癌(primary hepaticcaminoma, PHC)是世界最常见且恶性程度最高的肿瘤之一，发病率在恶性肿瘤中位居世界第5位，死亡率位居第3位。我国是肝癌的高发地区之一，其发生率约为30. 3/10万，每年约有14万人死于PHC，占全世界PHC死亡人数的50% 以上，严重威胁着人们的健康及生命。由于不容易早期发现、发展快、容易转移、治疗难度大等原因，肝癌有“癌中之王”之称。目前，肝癌的治疗方法包括手术治疗、肝动脉栓塞化疗、 放射治疗、瘤内无水酒精注射、生物治疗、中医中药治疗等。MicroRNA简称为miRNA，通常长度为19 25个核苷酸，广泛存在于各种动植物甚至单细胞真核生物中，是一类在进化上高度保守的小分子单链RNA。miRNA多位于基因内含子区域，在细胞核内编码miRNA的基因转录成pri-microRNA(pri-miRNA)。Pri_miRNA 在一种Drosha RNase的作用下，剪切为约70个核苷酸长度，具有茎环结构的miRNA前体 (pre-miRNA)。Pre-miRNA在Ran-GTP依赖的核质/细胞质转运蛋白Exportin 5的作用下， 从核内运输到胞质中。在Dicer酶的作用下，pre-miRNA被剪切成21 25个核苷酸长度的双链miRNA:miRNA*。随后双链miRNA:miRNA*解旋，成熟的miRNA进入到胞浆RISC (RNA 诱导的沉默复合物)中发挥基因沉默功能。miRNA与靶基因的信使RNA(mRNA)的3'端非编码区(3' UTR)产生碱基互补配对，引起该mRNA的降解或抑制其翻译。miRNA通过在转录后水平调节靶基因的表达在细胞中行使重要的功能，与胚胎的发育、生长发育、细胞的增殖、分化密切相关，科学家已证实miRNA参与发育、炎症、肿瘤等多种生理、病理过程，miRNA的核苷序列在不同物种间高度保守，突变率极低，其表达有基因簇集现象，时空及组织特异性。据发现，miRNA不仅是细胞增殖、分化和调亡的重要调控因子，50%以上的miRNA定位在肿瘤相关基因组区域，包括LOH区、染色体扩增区及脆性位点等。经鉴定，miRNA在多种血液系统肿瘤和实体瘤中的表达谱发生改变，这为我们从RNA调控的角度揭示肿瘤发生机制提供理论基础，并为肿瘤诊断和治疗提供新的基因靶点和分子标记。根据高通量的miRNA微阵列和qRT_PCR的定量分析，发现在HCC中，miRNA表达谱与正常肝组织存在很大区别，这种区别在低分化和恶性程度高的肿瘤组织表现得更显著些(Jinmai Jiang，Yuriy Gusev，Ileana Aderca，et al. Associaion of MicroRNA Expression in Hepatocellular Carcinomas with Hepatitis Infection， Cirrhosis， and Patient Survival. Clin CancerRes. 2008，15 ；14(2) :419-427.Yannick Ladeiro， Gabrielle Couchy, Charles Balabaud，et al. MicroRNA Profiling in Hepatocellular Tumors Is Associated with Clinical Features and Oncogene/Tumor Suppressor Gene Mutations. Hepatology. 2008，47(6) :1955-63.). Janaiah Kota (Janaiah Kota，Raghu
3R.Chivukula,Kathryn A. O'Donnell,et al. Therapeutic delivery of miR_26a inhibits cancer cell proliferation and induces tumor-specific apoptosis. Cell. 2009,12 ； 137(6) :1005-1017.)的研究显示，miR_26a可用于治疗肝癌。Has-mir-520e位于19ql3. 42，目前尚无关于has-mir_520e与肝癌诊断和治疗的报道。
发明内容
本发明的目的是通过对miRNA的研究，进行肿瘤治疗药物的开发，提供 has-miR-520e及其在制备治疗肿瘤药物中的用途。本发明首先公开了一种能有效抑制肝癌细胞增殖的miRNA，即haS-miR-520e，是 SEQ ID NO 1所示的序列。本发明同时公开了所述的miRNA，即has-miR_520e在制备治疗肿瘤药物中的用途。所述的肿瘤特别是原发性肝细胞癌。本发明的优点和有益效果本发明的miRNA可以有效降低肝癌细胞的增殖、克隆形成及动物成瘤能力，因此是一种全新作用机制的抗肝癌药物，可用于肝癌患者的辅助治疗，在肝癌治疗中有极为重要的应用前景。同时haS-miR-520e可能参与其他类型肿瘤的发生发展过程，本发明对今后深入研究haS-miR-520e与其他肿瘤的关系提供了经验和应用基础。
图1是实时定量PCR检测haS-miR-520e的表达水平。A，hsa-miR-520e在不同细胞株中的表达水平；B，hsa_miR-520e在成对的肝癌与癌旁组织中表达水平的比较。用U6的表达水平作标准化，数据来自三次独立实验(士SD)。 * :P < 0. 05 ；** :P < 0. 01 ；*** :P < 0. 001。图2是MTT实验检测has-miR-520e对肝癌细胞增殖的作用，A，miR_520e对H印G2 细胞的影响；B，miR-520e对H7402细胞的影响；C，miR_520e抑制剂对Chang liver细胞的影响；D，miR-520e抑制剂对L-02细胞的影响。数据来自三次独立实验(士 SD)。* :P < 0. 05 ； ** :P < 0. 01 ；*** :P < 0. 001。图3是平板克隆形成实验检测has-miR_520e对肝癌细胞0fepG2和MHCC-97L细胞)的恶性增殖的作用。图4是动物成瘤实验检测hSa-miR-520e对肝癌细胞H印G2皮下成瘤能力的作用， A，肿瘤体积；B，注射小鼠和肿瘤图片；C，肿瘤质量。为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图及具体实施方式
对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
具体实施例方式实施例1 实时定量PCR分析has-miR_520e表达1.细胞系
权利要求
1.一种miRNA，其特征在于是SEQ ID NO 1所示的序列。
2.根据权利要求1所述的miRNA，其特征在于所述的miRNA是一种能有效抑制肝癌细胞增殖的 miRNA，即 has-miR-520e。
3.如权利要求1所述的miRNA的用途，其特征在于，用于制备治疗肿瘤的药物。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述的肿瘤特别是原发性肝细胞癌。
全文摘要
本发明公开了一种与原发性肝细胞癌相关的has-miR-520e及其在制备治疗肿瘤药物中的用途。本发明发现has-miR-520e在肝癌细胞中低表达并且肝癌患者的肿瘤组织中表达水平远远低于其在癌旁组织中的表达水平，进而发现has-miR-520e能够有效抑制肝癌细胞的增殖并抑制肿瘤的生长。所述的has-miR-520e是SEQIDNO1所示的序列。本发明同时提供了has-miR-520e在制备治疗肿瘤药物中的用途。本发明在医学和生物制药领域有巨大的实际意义和广阔的潜在应用前景。
文档编号C12N15/113GK102358901SQ201110357369
公开日2012年2月22日 申请日期2011年11月11日 优先权日2011年11月11日
发明者叶丽虹, 张帅, 张晓东 申请人:天津托普泰克生物科技有限公司