专利名称：：(r)-选择性胺化的制作方法(R)-选择性胺化本发明涉及酮的(R)-选择性胺化的方法和在该方法中使用的酶。相当多的(现有的以及开发中的)药物活性化合物含有不能通过合成直接从天然氨基酸衍生的手性胺官能团。根据药物制造商，从酮不对称合成胺是将来最为人们所期望的反应之一(Constableetal.,GreenChem.2007,9,411)。此外，在药物活性化合物的合成中尽可能多地依赖“绿色”途径是药物制造商的目标。生物催化转化因此是优选的。用于手性胺的生物催化生产的吸引人的途径是根据反应[I]从酮和胺供体开始的立体选择性转氨作用(transamination):权利要求1.通过使用选自由下述蛋白组成的组中的转氨酶，从通式[I][a]的酮和合适的氨基供体酶促合成对应的通式[l][c]对映异构体富集的(R)-胺的方法，2.根据权利要求1所述的方法，其中R1和R2不同并且R1和R2独立地含有I至30个碳原子并且R1和R2独立地为取代或未取代脂肪族结构；取代或未取代支链脂肪族结构；取代或未取代环状脂肪族结构；含有至少一个氧原子、硫原子或氮原子的取代或未取代杂环脂肪族结构；取代或未取代芳香族结构；含有至少一个硫原子或氮原子的取代或未取代杂-芳香族结构；或R1和R2—起形成含有至少一个氧原子、硫原子或氮原子的取代或未取代环状结构或杂环结构；其中取代基选自但不限于由下述基团组成的组:卤素原子、羟基、甲氧基、单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基基团和具有I至6个碳原子的烷基基团。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述对映异构体富集的(R)-胺产物的终浓度在反应混合物的I和50重量％之间。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述转氨酶是与SEQIDN0.1的氨基酸序列具有至少90%同一性的蛋白。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述氨基供体是α-甲基苄胺。6.根据权利要求4所述的方法，其中所述氨供体是仲丁胺。7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述对映异构体富集的(R)-胺产物的终浓度在反应混合物的5和35重量％之间。8.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述反应混合物包含水相和第二有机相。9.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述反应混合物包含水相和第二有机相并且水相:有机相的体积比在100和0.01之间。10.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述反应混合物包含水相和第二有机相并且水相:有机相的体积比在20和0.1之间。11.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中反应混合物包含水相和第二有机相并且水相:有机相的体积比在20和I之间。12.微生物，其包含具有来自由下述生物体组成的生物体组的(R)-转氨酶活性的酶:Rahnellaaquatilis(保藏为DSM23797)、Ochrobactrumanthropi(保藏为DSM23793)、Ochrobactrumtritici(保藏为DSM23786)、Sinorhizobiummorelense(保藏为DSM23794)、Curtobacteriumpusilllum(保藏为DSM23787)、Paecilomyceslilacinus(保藏为DSM23771)、Microbacteriumginsengisol1、Microbacteriumtrichothecenolyticum(保藏为DSM23788)、Pseudomonascitronellolis(保藏为DSM23795)、Yersiniakristensenii(保藏为DSM23792)、Achromobacterspanius(保藏为DSM23791)、Achromobacterinsolitus(保藏为DSM23790)、Mycobacteriumfortuitum(保藏为DSM23789)、Mycobacteriumfrederiksbergense(保藏为DSM23798)、Mycobacteriumsacrum(保藏为DSM23785)、Mycobacteriumfluoranthenivorans(保藏为DSM23796)、Burkholderiasp.、Burkholderiatropica(保藏为DSM23799)、Cosmosporaepisphaeria(保藏为DSM23772)和Fusariumoxysporum(保藏为DSM23770)。13.根据权利要求12所述的微生物，其中具有(R)-转氨酶活性的所述酶选自由下述蛋白组成的组:Cpu-TAI[SEQIDN0.30]、Cpu_TA2[SEQIDN0.33]、Cpu_TA3[SEQIDN0.35]、Raq-TA2[SEQIDN0.38]、Raq_TA3[SEQIDN0.40],Asp-TAl[SEQIDN0.43]和Mg1-TAl[SEQIDN0.46]，或所述酶是与这些氨基酸序列的任一条具有至少90%、优选地至少91%、优选地至少92%、优选地至少93%、优选地至少94%、优选地至少95%、优选地至少96%、优选地至少97%、优选地至少98%、优选地至少99%同一性的蛋白。14.多肽，其具有(R)-转氨酶活性并且可从选自由下述生物体组成的生物体组的生物体获得:Rahnellaaquatilis(保藏为DSM23797)、Ochrobactrumanthropi(保藏为DSM23793)、Ochrobactrumtritici(保藏为DSM23786)、Sinorhizobiummorelense(保藏为DSM23794)、Curtobacteriumpusilllum(保藏为DSM23787)、Paecilomyceslilacinus(保藏为DSM23771)、Microbacteriumginsengisol1、Microbacteriumtrichothecenolyticum(保藏为DSM23788)、Pseudomonascitronellolis(保藏为DSM23795)、Yersiniakristensenii(保藏为DSM23792)、Achromobacterspanius(保藏为DSM23791)、Achromobacterinsolitus(保藏为DSM23790)、Mycobacteriumfortuitum(保藏为DSM23789)、Mycobacteriumfrederiksbergense(保藏为DSM23798)、Mycobacteriumsacrum(保藏为DSM23785)、Mycobacteriumfluoranthenivorans(保藏为DSM23796)、Burkholderiasp.、Burkholderiatropica(保藏为DSM23799)、Cosmosporaepisphaeria(保藏为DSM23772)和Fusariumoxysporum(保藏为DSM23770)。15.多肽，其具有(R)-转氨酶活性并且与具有(R)-转氨酶活性并且可从选自下述生物体组的生物体中获得的多肽具有至少90%、优选地至少91%、优选地至少92%、优选地至少93%、优选地至少94%、优选地至少95%、优选地至少96%、优选地至少97%、优选地至少98%、优选地至少99%序列同一性，所述生物体组由下述生物体组成:Rahnellaaquatilis(保藏为DSM23797)、Ochrobactrumanthropi(保藏为DSM23793)、Ochrobactrumtritici(保藏为DSM23786)、Sinorhizobiummorelense(保藏为DSM23794)ΛCurtobacteriumpusilllum(保藏为DSM23787)、Paecilomyceslilacinus(保藏为DSM23771)、Microbacteriumginsengisol1、Microbacteriumtrichothecenolyticum(保藏为DSM23788)、Pseudomonascitronellolis(保藏为DSM23795)、Yersiniakristensenii(保藏为DSM23792)、Achromobacterspanius(保藏为DSM23791)、Achromobacterinsolitus(保藏为DSM23790)、Mycobacteriumfortuitum(保藏为DSM23789)、Mycobacteriumfrederiksbergense(保藏为DSM23798)、Mycobacteriumsacrum(保藏为DSM23785)、Mycobacteriumfluoranthenivorans(保藏为DSM23796)、Burkholderiasp.、Burkholderiatropica(保藏为DSM23799)ΛCosmosporaepisphaeria(保藏为DSM23772)和Fusariumoxysporum(保藏为DSM2377O)。16.根据权利要求14或15所述的多肽，所述多肽具有(R)-转氨酶活性，其选自由下述蛋白组成的组:Cpu-TAl[SEQIDN0.30]、Cpu_TA2[SEQIDN0.33]、Cpu_TA3[SEQIDN0.35]、Raq-TA2[SEQIDN0.38]、Raq_TA3[SEQIDN0.40]、Asp-TAl[SEQIDN0.43]和Mg1-TA1[SEQIDN0.46]，所述多肽是与这些氨基酸序列的任一条具有至少90%、优选地至少91%、优选地至少92%、优选地至少93%、优选地至少94%、优选地至少95%、优选地至少96%、优选地至少97%、优选地至少98%、优选地至少99%同一性的蛋白。17.核酸，其编码根据权利要求14至16任一项所述的多肽。全文摘要本发明涉及通过使用新颖转氨酶从通式[1][a]的酮酶促合成相应的通式[1][c]的对映异构体富集的(R)-胺的方法这些新颖转氨酶选自两个不同的组或者选自具有如本文所指定的序列的一些20种蛋白的组，或选自具有转氨酶活性并且分离自选自由下述生物体组成的生物体组的微生物的蛋白Rahnellaaquatilis、Ochrobactrumanthropi、Ochrobactrumtritici、Sinorhizobiummorelense、Curtobacteriumpusilllum、Paecilomyceslilacinus、Microbacteriumginsengisoli、Microbacteriumtrichothecenolyticum、Pseudomonascitronellolis、Yersiniakristensenii、Achromobacterspanius、Achromobacterinsolitus、Mycobacteriumfortuitum、Mycobacteriumfrederiksbergense、Mycobacteriumsacrum、Mycobacteriumfluoranthenivorans、Burkholderiasp.、Burkholderiatropica、Cosmosporaepisphaeria和Fusariumoxysporum。文档编号C12P13/00GK103189519SQ201180034658公开日2013年7月3日申请日期2011年7月14日优先权日2010年7月14日发明者马丁·斯库尔曼,韦南德·彼得·赫勒纳·派特斯,纳特斯卡·赫伯蒂娜·约翰尼斯·斯梅茨,赫尔马特·施瓦布,克斯廷·斯坦纳,卡捷琳娜·尼古拉耶夫娜·里帕斯卡,诺特·施特罗迈尔申请人:帝斯曼知识产权资产管理有限公司