专利名称：细胞培养装置Opticell的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种细胞培养装置Opticell的新用途，尤其涉及其在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用。
背景技术：
细菌生物被膜(Biofilm，BF)是细菌在生长过程中为适应生存环境而形成的一种与浮游细菌相对应的生长方式，由细菌和自身分泌的胞外基质组成，具有三维立体结构。BF被认为是人体内置医疗设备如血管内置导管、人工关节等相关感染的重要原因。大量研究发现，细菌以BF形式存在可有效逃避人体免疫系统和抗生素的清除，增加细菌群体的耐药性，其耐药性可达浮游细菌的1000倍。这使得感染呈现慢性、持续性和反复性的特点。传统平板法培养细菌BF是在培养皿的孔洞中放入玻璃片或塑料片(面积约l-2cm2)作为BF的载体，然后接种适量细菌悬液，在适当的环境条件下培养一定时间后细菌即可黏附在载体上形成面积与载体相当的BF，要提高BF的产量需增加接种的孔洞或次数。超声微泡是内含气体的微小球体，微泡在超声波作用下可发生振荡或破裂，由此产生的“声孔效应”及“机械效应”被广泛用于被广泛用于溶栓、肿瘤等领域的研究。超声微泡技术在医学技术中的安全性及有效性已得到了大量研究的支持。采用超声微泡技术抑制微生物感染属全新的研究领域，目前相关报道很少。如果超声微泡技术对细菌BF的作用在体外实验中被充分证实，将会为抑制细菌BF感染提供新的途径。现有文献报道的采用超声相关技术对BF进行干预的措施是先用传统平板培养法在培养皿孔洞或细胞培养池的底部制备细菌BF，然后吸去培养液，换入药物或药物与微泡的混悬液，超声探头从培养皿底部向上发射超声或浸入液体中向下发射超声，以研究超声+药物及超声+微泡+药物对BF的影响。但是，现有的方法存在超声衰减程度大以及超声微泡与BF作用距离过大的缺点，对超声干预细菌BF的效果存在显著影响。目前Opticell装置为新型的全封闭式细胞培养装置，用于细胞培养。
发明内容
本发明的目的在于提供Opticell装置在细菌生物被膜培养中的应用。本发明的另一目的在于提供Opticell装置在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案Opticell装置在细菌生物被膜培养中的应用。Opticell装置为赛默飞世尔科技(thermofisher)公司生产的细胞培养装置，其容积为10ml，顶部和底部各有一张面积为50cm2的聚苯乙烯薄膜，目前均用于对细胞的培养；发明人在研发中偶然发现，I次接种细菌悬液后在同样的培养时间下得到较传统平板法多出50-100倍的BF，且污染率几乎为零。采用Opticell培养法制备的细菌BF数量大，可提取出足量的DNA或RNA来进行分子生物学研究而不用进行细菌数量的扩增；同时，BF还可以从Opticell上剪切下来分割成不同的部分以同时满足数种不同的实验操作的需求。Opticell装置在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用，所述Opticell装置内注入有微泡层，其底部有细菌生物被膜层。Opticell装置在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用，所述Opticell装置为倒置设置。上述Opticell装置在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用，具体地说，所述超声微泡干预细菌生物被膜实验装置包括容器、含微泡层和细菌生物被膜层的细菌生物被膜培养装置Opticell、两支架以及超声治疗头；所述容器内部具有脱气水；所述Opticell装置为倒置，由所述两支架支持固定，Opticell装置、两支架均浸在脱气水内；所述容器内设置有所述超声治疗头。
为了简化制造，所述容器可设计为立方体状。为了达到更好的超声传递效果，所述超声治疗头设置在容器底部对应Opticell装置中心的位置。本发明具体如下有益效果本发明将Opticell装置在细菌生物被膜培养中应用，有效提高了生物被膜的体外培养效率。本发明Opticell装置在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用，发现Opticell装置独特的结构有利于超声微泡干预细菌BF体外实验的开展，Opticell装置为全封闭系统，在注入超声微泡后将装置倒置从而可使微泡与BF充分接触，提高了实验的有效性；0ptiCell上的聚苯乙烯薄膜对超声几乎没有衰减，将Opticell装置放入装有脱气水的容器中，超声由容器底部向上发射，经脱气水和Opticell薄膜作用于BF和微泡，超声的能量衰减程度可以大幅度减少，使超声干预BF的效果大大提高。经过比较试验现有文献报道的超声+抗生素使BF中的活细菌减少至1/10，超声+微泡+抗生素使BF中的活菌减少至1/100 ;将Opticell装置在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中应用，减少了超声的衰减及微泡与BF的作用距离，在同样的抗生素浓度下将干预的效果提高了一倍，即以上数值分别变为1/20及1/200。
图I为Opticell装置在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用中，超声微泡干预细菌生物被膜实验装置的结构示意图。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是以下实施例只用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员可以根据上述内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。实施例0pticell装置在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用，具体地说，如图I所示，所述超声微泡干预细菌生物被膜实验装置包括容器I、细菌生物被膜培养装置Opticell装置2、两支架以及超声治疗头7 ;所述容器I内部具有脱气水；所述Opticell装置2为倒置，由所述两支架支持固定，Opticell装置2、两支架均浸在脱气水内；所述容器I内设置有所述超声治疗头7。
为了简化制造，本实施例中的容器I为立方体状。为了达到更好的超声传递效果，本实施例中超声治疗头7设置在容器I底部对应Opticell装置2中心的位置。如图I所示，本实施例中所述两支架为支架5和6。实验开始时，首先用Opticell装置2建立细菌BF体外模型。将IOml接种菌液从Opticell装置2侧孔注入腔室，将Opticell装置2静置于37°C孵箱，培养适当时间后即可得到细菌BF。若用剪刀切割下Opticell装置2下方的聚苯乙烯膜，即可用扫描电镜鉴定细菌生物被膜的形成。细菌BF体外模型建立完成后，将微泡混悬液经Opticell装置2侧孔注入内腔，倒置Opticell装置2使其中的微泡层4上浮与细菌生物被膜层3充分接触。将倒置的Opticell装置2放置入内部具有脱气水的容器1，用支架5和6支持固定，浸入在脱气水内。、容器I底部对应Opticell装置2中心的位置设置有超声治疗头7。这样细菌生物被膜3被支架5和支架6固定在超声波的区域内，以利于实验的实施。聚苯乙烯膜几乎可以完全透过超声波，大大减小了超声波的衰减。
权利要求
1.Opticell装置(2)在细菌生物被膜培养中的应用。
2.Opticell装置(2)在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用，所述Opticell装置(2)内注入有微泡层(4)，其底部有细菌生物被膜层(3)。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述Opticell装置(2)为倒置设置。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述超声微泡干预细菌生物被膜实验装置包括容器(I)、含微泡层(4)和细菌生物被膜层(3)的细菌生物被膜培养装置Opticell装置(2)、支架(5)、支架(6)以及超声治疗头(7);所述容器(I)内部具有脱气水；所述Opticell装置(2)为倒置，由所述支架(5)和支架(6)支持固定，Opticell装置(2)、支架(5)和支架(6)均浸在脱气水内；所述容器(I)内设置有所述超声治疗头(7)。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述容器(I)设计为立方体状。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述超声治疗头(7)设置在容器(I)底部对应Opticell装置(2)中心的位置。
全文摘要
本发明公开了Opticell装置(2)在超声微泡干预细菌生物被膜实验装置中的应用，所述超声微泡干预细菌生物被膜实验装置包括容器(1)、含微泡层(4)和细菌生物被膜层(3)的细菌生物被膜培养装置Opticell装置(2)、支架(5)、支架(6)以及超声治疗头(7)；所述容器(1)内部具有脱气水；所述Opticell装置(2)为倒置，由所述支架(5)和支架(6)支持固定，Opticell装置(2)、支架(5)和支架(6)均浸在脱气水内；所述容器(1)内设置有所述超声治疗头(7)。其大大减小了超声波的衰减，使超声能量有效地传递给了微泡，满足了使微泡与细菌生物被膜充分接触的要求，提高了实验的有效性。
文档编号C12M1/00GK102719385SQ20121024126
公开日2012年10月10日 申请日期2012年7月12日 优先权日2012年7月12日
发明者余加林, 董莹, 陈少杰 申请人:重庆医科大学附属儿童医院