专利名称：微生物混菌发酵制备11α-OH-ADD的方法
技术领域：
本发明涉及留体类药物的生产方法，具体来说是利用微生物混菌发酵4-AD制备11 a -OH-ADD 的方法。
背景技术：
甾体类药物具有抗炎、避孕、利尿、抗毒、抗过敏、抗体克作用，广泛用于湿疹、哮喘、风湿疾病。近年来，留体药物在医疗领域的应用范围不断扩大，广泛应用于治疗风湿、心血管病、胶原性病症、淋巴白血病、人体器官移植、抗肿瘤、细菌性脑炎、皮肤病、内分泌失调、老年性疾病等，留体类药物还对某些癌症，尤其是激素依赖性肿瘤具有一定的疗效。甾体类药物作用范围广、产量高，是医药行业中仅次于抗生素的第二大类药物。甾体激素药物生产中，甾体母核的多个基团需要进行修饰，C11a -羟基化反应是重 要的甾体转化反应之一。甾体的C11 a -羟基化对于甾体药物的合成及结构改造具有重要意义，通过C11 a -羟基化反应可以引入高生理活性基团，从而大大增加疗效，減少副作用，并能改变作用的专属性。甾体的C11 a -羟基化反应可以由具有甾体C11 a -羟基化能力的微生物完成。目前，用于甾体C11a -羟基化反应的微生物主要有黑根霉(主要为葡枝根霉)Rhizopus nigri cans、参求 ffi; 1 Me tanrrh tzi um^ It ( % Aspergi I Ius ochraceus、胃曲Aspergillus /Vara1S 、青霉、诺卡氏菌等。文献报道了ー些具有较高C11 a -轻基化反应活性的微生物，曲霉、绿僵菌是近年国内研究较多的留体C11 a -羟基化微生物。但是赭曲霉在转化后期产生与产物难以分离的砖红色色素，绿僵菌也存在活性不稳定、转化不专ー的缺点，限制了其エ业化应用。エ业生产上，国内普遍使用黑根霉进行C11 a-羟基化反应，但是现有エ艺转化率不高。当抗炎甾体激素药物的母核Q2位置导入双键后，都能成倍的增加抗炎作用，如醋酸可的松Cu位上导入双键后成醋酸脱氢可的松，抗炎作用提高3 4倍，但Cu位脱氢甾体激素化合物在动物体内不能被转化得到，采用化学方法进行脱氢一般是用ニ氧化硒法，常使产品中带有少量难以除尽对人体有害的硒，所以微生物脱氢成为留体抗炎激素药物合成中不可缺少的一歩。应用于甾体母核A环脱氢的主要微生物有简单节杆菌ClrtAroAacter印.)、棒状杆菌(CbrjffleAacsp.)、分支杆菌應 5/7.)、芽抱杆菌CfeciBw1S)、诺卡氏菌OVocartZia sp.)、耻垢杆菌一般来说细菌的脱氢能力比真菌大，研究中发现对留体母核有脱氢活力的微生物，较多伴生边链降解和C26位羰基还原以及C9羟基引起B环打开等作用。从4-AD制备11 a -OH-ADD,现有技术是分两步进行的，即Q2位脱氢和C11位羟基化反应，前一步反应完成后需要进行后处理，加大了产品后处理成本及发酵能耗，而且降低了产品收率。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种发酵能耗较小，节约成本并提高产品收率的微生物混菌发酵制备11 a -OH-ADD的方法。本发明的11 a-OH-ADD的化学名称为11 a -羟基-雄甾-1，4_ ニ烯_3，17-ニ酮，
4-AD的化学名称为雄烯ニ酮，本发明的反应路线如下
权利要求
1.ー种微生物混菌发酵制备11 a -OH-ADD的方法，以4-AD为原料，其特征是，经赭曲霉Aspergillus ochraceus ATCC 18500 和节杆菌 Arthrobacter simplex ATCC 6946 混合发酵制备 11 a -OH-ADD。
2.根据权利要求I所述的微生物混菌发酵制备11a -OH-ADD的方法，其特征是，赭曲霉Aspergillus ochraceus ATCC 18500 的接种量为 18-22%,节杆菌 Arthrobacter simplexATCC 6946的接种量为8_12%。
3.根据权利要求2所述的微生物混菌发酵制备11a -OH-ADD的方法，其特征是，赭曲霉Aspergillus ochraceus ATCC 18500 和节杆菌 Arthrobacter simplex ATCC 6946 的接种量的比例为1.8-2. 2:1。
4.根据权利要求I所述的微生物混菌发酵制备11a -OH-ADD的方法，其特征是，赭曲霉Aspergillus ochraceus ATCC 18500 的接种量为 20%,节杆菌Arthrobacter simplex ATCC6946的接种量为10%。
5.根据权利要求1-4任一项所述的微生物混菌发酵制备Ila-OH-ADD的方法，其特征是，IL水中，发酵培养基的组分和重量为甲醇19-21g，TW80 1.9-2. lg，酵母膏或酵母粉9. 5-10. 5g，糖蜜9. 5-10. 5g，硝酸钠或硝酸钾4. 75-5. 25g，磷酸氢ニ钠或磷酸氢ニ钾I.9-2. lg，磷酸ニ氢钠或磷酸ニ氢钾I. 9-2. lg。
6.根据权利要求5所述的微生物混菌发酵制备11a -OH-ADD的方法，其特征是，IL水中，发酵培养基的组分和重量为甲醇20g，TW80 2g，酵母膏或酵母粉10g，糖蜜10g，硝酸钠或硝酸钾5g，磷酸氢ニ钠或磷酸氢ニ钾2g，磷酸ニ氢钠或磷酸ニ氢钾2g。
7.根据权利要求1-4任一项所述的微生物混菌发酵制备11a -OH-ADD的方法，其特征是，罐压为 0. 045-0. 055 MPa。
8.根据权利要求1-4任一项所述的微生物混菌发酵制备11a -OH-ADD的方法，其特征是，空气流量为0. 45-0. 55 VVM0
9.根据权利要求I所述的微生物混菌发酵制备11a -OH-ADD的方法，其特征是，发酵培养基的pH值为6. 8-7.2。
全文摘要
本发明涉及甾体类药物的生产方法，具体来说是同时利用两种微生物混菌发酵转化4-AD生产11α-OH-ADD的方法，以4-AD为原料，经赭曲霉AspergillusochraceusATCC18500和节杆菌ArthrobactersimplexATCC6946混合发酵，相对于单独使用上述的两种菌进行上羟基以及脱氢反应，本发明通过混菌发酵4-AD得到11α-OH-ADD，两种菌体在发酵转化上存在有协同效应，有如下优点总收率较高，转化更完全，减少了一步后处理，能耗减少，本发明的混菌发酵使得其生产成本大幅度降低，不仅提高了转化率，而且降低了转化时间，相应的减少了后处理，减少了能耗。
文档编号C12P39/00GK102827913SQ201210316179
公开日2012年12月19日 申请日期2012年8月31日 优先权日2012年8月31日
发明者刘喜荣, 孟浩 申请人:湖南诺凯生物医药有限公司