一种具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于食品保鲜领域，具体涉及一种具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂及其应用。本发明所解决的技术问题是一种新的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，以益生菌为主要活性物质；采用本发明生物保鲜剂后可显著延长食品货架期。本发明生物保鲜剂其特征在于包括乳酸杆菌，乳酸球菌中的至少一种益生菌菌种。本发明生物保鲜剂制备食品，制备过程未添加化学防腐剂，避免了化学防腐剂影响人体健康；制备过程不采用辐照处理，彻底解除辐照对残留担忧，同时也避免风味和质地破坏，并降低成本；不改变组织状态，保持肉类食品原有鲜度，显著提升品质；货架期能超过6个月；去除肉类食品的腥膻味，改善其口味；长期食用，可增加人体益生菌数量。
【专利说明】一种具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于食品保鲜领域，具体涉及一种具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂及其应用。
【背景技术】
[0002]目前，食品加工后均需要加入食品化学防腐剂，以确保货架期、保持原有风味和品质。特别是泡椒凤爪、鸡翅、猪蹄、猪皮、猪耳朵和竹笋等加工食品，除了需要加入脱氢乙酸钠、双乙酸钠、山梨酸钾和乳酸链球菌素等化学食品防腐剂外，还必须经过辐照，才能确保6个月货架期。食品化学防腐剂和辐照残留的安全担忧已经引起社会普遍关注，国家食品新标准出台，更严格控制使用一些加工助剂后，泡椒凤爪生产形势变得十分严峻，常常因防腐保鲜不合格导致制厂家停产。
[0003]已有报道的食品保鲜剂有，中国专利申请CN102138668A公开了一种泡椒凤爪食品保鲜剂，所述的保鲜剂由肉桂酸钾、乳酸链球菌素、D-异抗坏血酸钠、双乙酸钠和山梨酸钾组成。《江苏农业学报》，2010，26 (4)报道了复合生物保鲜剂对南美白对虾的保鲜效果，所述的复合生物保鲜剂由壳聚糖、茶多酚和乳酸链球菌素组成。食品科学2008，29，(11)报道了一种复合型生物保鲜剂在牡蛎保鲜中的应用研究，所述的复合生物保鲜剂由壳聚糖、茶多酚、溶菌酶组成。上述生物保鲜剂本质上虽然是天然化学防腐剂，但仍属化学防腐保鲜齐U。而中国专利申请中CN1802937公开了一种含有酵母活菌与枯草芽孢杆菌活菌重量比为I: I的混合微生物活菌防腐保鲜剂及生产方法，但所菌种、制备方法、应用方式和对象与本发明也完全不一样。特别是酵母活菌与枯草芽孢杆菌恰好正是泡椒凤爪食品等加工食品的主要危害菌，因此，该专利在泡椒类肉食品没有应价值。该行业尽管已经投入大量物力、人力和财力进行食品生物保鲜剂研究，目前也侧重于筛选具有抗微生物作用的菌株，提取分离抗菌成分，研制成天然化学防腐剂，如乳酸链球菌素和纳他霉素，该方法存在的主要缺陷是成本高和防腐效果差，还需要结合辐照才能达到保鲜，成为目前制约行业品质提升主要技术瓶颈。
[0004]本发明的发明人经过4年多的筛选、研究、试制，最终优选出活力强的植物乳杆菌，能主动地在熟肉加工食品表面形成一道强有力的生物屏障，抵御和防止腐败细菌的侵染和繁殖，确保食品在不加化学防腐剂和辐照条件下的安全性，延长了货架期，并保持原有风味和品质。
【发明内容】
[0005]本发明所解决的技术问题是一种新的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，以益生菌为主要活性物质；采用本发明生物保鲜剂后可显著延长食品货架期。
[0006]本发明具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于包括乳酸杆菌，乳酸球菌中的至少一种益生菌菌种。
[0007]本发明生物保鲜剂中，每Iml或Ig生物保鲜剂含IO2?IO14个菌细胞。当混合使用乳酸杆菌和乳酸球菌时:凤爪中乳酸杆菌和乳酸球菌的菌细胞数量比为IO2?IO7:1O2?107。
[0008]本发明生物保鲜剂中，所述的乳酸杆菌采用副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei),植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),嗜酸乳杆菌(actobacillusacidophilus)中的任意一种菌株或其组合；所述的乳酸球菌采用嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus),戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus),幾肠球菌(Enterococcus faecals)中的任意一种菌株或其组合。
[0009]上述菌种可以从自然环境分离纯化得到，亦可购买市售菌种，或购自中国微生物囷种保减中心。
[0010]择一使用乳酸杆菌或乳酸球菌时:每Iml或Ig生物保鲜剂含乳酸杆菌与乳酸球菌分别为IO2?IO14个菌细胞。
[0011]进一步地，当择一使用乳酸杆菌中某一种菌株，如择一使用副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌时，每Iml或Ig生物保鲜剂含IO2?IO14个菌细胞；当混合使用乳酸杆菌中至少两种菌株时，每Iml或Ig生物保鲜剂共计含IO2?IO14个菌细胞。采用乳酸球菌的某一菌株或混合使用菌株时，亦然。
[0012]混合使用乳酸杆菌和乳酸球菌时:每Iml或Ig生物保鲜剂中乳酸杆菌和乳酸球菌的菌细胞数量比为IO2?IO7:1O2?107。
[0013]进一步地，当乳酸杆菌采用副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的至少2种，与乳酸球菌混合使用时，乳酸杆菌的菌细胞总数与乳酸球菌的菌细胞数量比为IO2?IO7IlO2?IO7 ;当乳酸球菌采用嗜热链球菌、戊糖片球菌、粪肠球菌中的至少2种，与乳酸杆菌混合使用时，乳酸杆菌的菌细胞数量与乳酸球菌的菌细胞总数量比为IO2?IO7:1O2?IO7;当乳酸球菌、乳酸杆菌分别采用至少2种菌株混合使用时，乳酸杆菌的菌细胞总数与乳酸球菌的菌细胞总数量比为IO2?IO7:1O2?107。
[0014]以下为益生菌配伍使用时，不同配伍与用量说明。
[0015]I)当本发明生物保鲜剂中，采用乳酸杆菌或乳酸球菌单一菌种、混合菌株时，如可以是含二种乳酸杆菌活菌株，包括:副干酪乳杆菌与植物乳杆菌，副干酪乳杆菌与嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌与嗜酸乳杆菌的活菌细胞，共计3种组合物。也以是由三种乳酸杆菌活菌，即副干酪乳杆菌、植物乳杆菌与嗜酸乳杆菌，共计I种组合物。上述乳酸杆菌菌株组合物，可以是体积或重量任意比例。
[0016]两种菌株比例如10:1至1:10，三种菌株混合比例为10:1:1至1:1:10等，但优选
地，无论液体复方制剂或固体复方制剂，以等比例混合最佳。
[0017]同理，采用二种以上的乳酸球菌活菌株混合规则同上。
[0018]2)当本发明生物保鲜剂中，采用乳酸杆菌与乳酸球菌两种菌种混合使用时，如可以是制品中含有一种乳酸杆菌和一种乳酸球菌，包括副干酪乳杆菌与嗜热链球菌，副干酪乳杆菌与戊糖片球菌，副干酪乳杆菌与粪肠球菌，植物乳杆菌与嗜热链球菌，植物乳杆菌与戊糖片球菌，植物乳杆菌与粪肠球菌，嗜酸乳杆菌与嗜热链球菌，嗜酸乳杆菌与戊糖片球菌，嗜酸乳杆菌与粪肠球菌，共计9种组合。
[0019]也可以是含二种乳酸杆菌和一种乳酸球菌，即含副干酪乳杆菌、植物乳杆菌与嗜热链球菌，副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌与嗜热链球菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌与嗜热链球菌，副干酪乳杆菌、植物乳杆菌与戊糖片球菌，副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌与戊糖片球菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌与戊糖片球菌，副干酪乳杆菌、植物乳杆菌与粪肠球菌，副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌与粪肠球菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌与粪肠球菌，共计9种组合。
[0020]也可以是含一种乳酸杆菌与二种乳酸球菌，即含副干酪乳杆菌、嗜热链球菌与戊糖片球菌，副干酪乳杆菌、嗜热链球菌与粪肠球菌，副干酪乳杆菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，植物乳杆菌、嗜热链球菌与戊糖片球菌，植物乳杆菌、嗜热链球菌与粪肠球菌，植物乳杆菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌与戊糖片球菌，嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌与粪肠球菌，共计9种组合。
[0021]也可以是含三种乳酸杆菌与一种乳酸球菌，即含副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌与嗜热链球菌，副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌与戊糖片球菌，副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌与粪肠球菌，共计3种组合。
[0022]也可以是含二种乳酸杆菌与二种乳酸球菌，即含副干酪乳杆菌、植物乳杆菌，嗜热链球菌与戊糖片球菌，副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌，嗜热链球菌与戊糖片球菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌与戊糖片球菌，副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌与粪肠球菌，副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌与粪肠球菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌与粪肠球菌，副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、戍糖片球菌与粪肠球菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌戍糖片球菌与粪肠球菌，共计9种组合。
[0023]也可以是一种乳酸杆菌与三种乳酸球菌，即含副干酪乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，植物乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，共计3种组合。
[0024]也可以是二种乳酸杆菌与三种乳酸球菌，即含副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，共计3种组合。
[0025]也可以是三种乳酸杆菌与二种乳酸球菌，即含副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌与戊糖片球菌，副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、嗜热链球菌与粪肠球菌，副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，共计3种组合。
[0026]也可以是三种乳酸杆菌与三种乳酸球菌，即副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌与粪肠球菌，共计I种组合。
[0027]乳酸杆菌与乳酸球菌构成的组合物中，可以是任意体积或重量比，如10:1至1:10,或10:1:1:1:1:1至1:1:1:1:1:10,优选地,无论液体复方制剂或固体复方制剂，以菌种等比例混合最佳。乳酸杆菌与乳酸球菌的菌细胞数量为102?107:102?107。
[0028]通过优化组合，发明人发现，益生菌的组合物还可以产生协同增效作用。
[0029]本发明具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂可以制成液体形式或固体形式。
[0030]I)制成液体形式时，其制备方法包括如下步骤:
[0031]1.经过24小时活化培养的菌种种子菌接种于常规液体培养基中，在28_40°C下培养16-18小时；
[0032]2.1-5%接种量接种到该常规液体发酵培养基中，在28_40°C，发酵罐发酵培养20-36小时，获菌细胞悬液；
[0033]3.在无菌条件下，取步骤2菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂。
[0034]2)制成固体形式时，其制备方法包括如下步骤:
[0035]1.经过24小时活化培养的菌种种子菌接种于液体培养基中，在28_40°C下培养16-18小时；
[0036]2.1-5%接种量接种到液体发酵培养基中，在28_40°C，发酵罐发酵培养20_36小时，获菌细胞悬液；
[0037]3.在无菌条件下，6000-8000转/分钟下离心收集菌细胞；
[0038]4.取菌细胞，加辅料混合，干燥，分装，即得固体生物保鲜剂。
[0039]所述的辅料可以是糊精、可溶性淀粉、多孔淀粉和多糖等本领域的常用辅料。用量以能够分散菌细胞，利用保存为准，菌细胞与辅料的用量配比可采用菌细胞10克、辅料20-40克混合使用，优选菌细胞10克、辅料30克。
[0040]其中，培养上述菌种时，采用的常规液体培养基以能够提供蛋白质、碳源、氮源、磷源、无机盐、生产素等能够满足菌种正常生产为准。发明人在实施例中所采用的液体培养基含:蛋白提取物5-15克/升，牛肉膏2.5-10克/升、酵母膏5-15克/升、糖10-30克/升，磷酸二氢钾0.05-1克/升，硫酸镁0.01-0.10克/升。优选蛋白提取物10克/升，牛肉膏5克/升、酵母膏10克/升、糖20克/升，磷酸二氢钾0.5克/升，硫酸镁0.05克/升。所述的蛋白提取物可以植物蛋白提取物，如大?蛋白、玉米蛋白和小麦蛋白等，也可以动物蛋白，如鱼蛋白胨、胰蛋白胨或鲜骨蛋白胨等。
[0041]本发明具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂的应用，将本发明生物保鲜剂用于食品保鲜，如肉类食品或蔬菜类食品，尤其是肉类食品保鲜，如鸡爪、鸡翅、猪蹄、猪皮、猪耳朵等食品。在应用食品中可检出本发明生物保鲜剂中的菌细胞数量为IO2~IO14个cfu/g。
[0042]应用本发明生物保鲜剂时，制备方法包括如下步骤:
[0043](1)预处理及清洗；
[0044](2)沸水烫漂:沸水中煮至3-7成熟，滤过，冷却，备用；
[0045](3)配制泡制母液:按常规用量将调味辅料加水配制成泡制母液，煮沸后，冷却至45°C以下；
[0046]所述的调味辅料可以有盐、味精、鸡精、香精、酵母膏、鸡膏和糖等。调味辅料只是用于调整口味，满足食品的咸度、甜度、辣度、香味等调味要求，对于产品的保鲜没有影响，用量按照食品领域常规用量添加即可。
[0047]进一步的，步骤(3)中如果采用泡椒调整风味，则在配制泡制母液时，取泡椒适量，按常规用量将调味辅料加水配制泡制母液，煮沸后，冷却至45°C以下。其中，泡椒用量以风味设定为准，用量无特别要求，可按常规用量添加。
[0048]进一步的，步骤(3)中煮沸时间优选15-30分钟。
[0049](4)泡制:取步骤(3)所得泡制母液，加入本发明生物保鲜剂和步骤(2)处理后的肉类食品，在温度15-45°C下浸泡，即得。
[0050]进一步的，步骤(4)中浸泡是指让食品入味，促进益生菌繁殖，实现抑制腐败菌生长。
[0051]进一步的，步骤(4)中益生菌为前述乳酸杆菌，乳酸球菌中的至少一种，。进一步的，乳酸杆菌采用副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的任意一种或其组合。乳酸球菌采用嗜热链球菌、戊糖片球菌、粪肠球菌中的任意一种或其组合。添加量以固体益生菌计算，每100升泡制母液加入200-1200克益生菌，或以含2%鲜菌细胞的液体益生菌计算，每100升泡制母液加入5-30升。
[0052]下面更进一步地描述本发明。
[0053]如本文使用的术语“生物防腐保鲜”具有其一般含义，并且在本文特别地是指采用本发明的生物保鲜剂在腌制加工品表面形成一道强有力的生物屏障，抑制和防止腐败细菌的侵染和繁殖，增加保鲜期和货架寿命。
[0054]如本文使用的术语“食品学可接受的”通常是指食品领域可使用，对产品或者对哺乳动物无害，或具有合理的或可接受的利益/风险比。
[0055]如本文使用的术语“载体”和“赋形剂”可以是食品领域中任何常规的载体和赋形齐U。具体的载体和赋形剂的选择将取决于用于使用方式。用于特定保鲜模式的合适生物保鲜剂组合物的制备方法完全在食品领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为食品学上可接受的载体或赋形剂包括食品领域常规的载体、赋形剂、稀释剂、填充剂、溶剂、支持剂、崩解剂、表面活性剂和吸附载体等。必要时，还可以包括香味剂和甜味剂等。
[0056]本发明生物保鲜剂的有益效果:
[0057]1、采用本发明菌剂制备食品，制备过程未添加化学防腐剂，避免了化学防腐剂影响人体健康。
[0058]2、采用本发明菌剂制备食品，制备过程不采用辐照处理，彻底解除辐照对残留担忧，同时也避免风味和质地破坏,并降低成本。
[0059]3、不改变组织状态，保持肉类食品原有鲜度，显著提升品质。
[0060]4、货架期能超过6个月。
[0061 ] 5、去除肉类食品的腥膻味，改善其口味。
[0062]6、长期食用，可增加人体益生菌数量。
【具体实施方式】
[0063]本发明具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于包括乳酸杆菌，乳酸球菌中的至少一种益生菌菌种。
[0064]本发明生物保鲜剂中，每Iml或Ig生物保鲜剂含IO2?IO14个菌细胞。当混合使用乳酸杆菌和乳酸球菌时:凤爪中乳酸杆菌和乳酸球菌的菌细胞数量比为IO2?IO7:1O2?107。
[0065]本发明生物保鲜剂中，所述的乳酸杆菌采用副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei),植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),嗜酸乳杆菌(actobacillusacidophilus)中的任意一种菌株或其组合；所述的乳酸球菌采用嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus),戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus),幾肠球菌(Enterococcus faecals)中的任意一种菌株或其组合。
[0066]择一使用乳酸杆菌或乳酸球菌时:每Iml或Ig生物保鲜剂含乳酸杆菌与乳酸球菌分别为IO2?IO14个菌细胞。
[0067]进一步地，当择一使用乳酸杆菌中某一种菌株，如择一使用副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌时，每Iml或Ig生物保鲜剂含IO2?IO14个菌细胞；当混合使用乳酸杆菌中至少两种菌株时，每Iml或Ig生物保鲜剂共计含IO2?IO14个菌细胞。采用乳酸球菌的某一菌株或混合使用菌株时，亦然。
[0068]混合使用乳酸杆菌和乳酸球菌时:每Iml或Ig生物保鲜剂中乳酸杆菌和乳酸球菌的菌细胞数量比为IO2?IO7:1O2?107。
[0069]进一步地，当乳酸杆菌采用副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的至少2种，与乳酸球菌混合使用时，乳酸杆菌的菌细胞总数与乳酸球菌的菌细胞数量比为IO2?IO7IlO2?IO7 ;当乳酸球菌采用嗜热链球菌、戊糖片球菌、粪肠球菌中的至少2种，与乳酸杆菌混合使用时，乳酸杆菌的菌细胞数量与乳酸球菌的菌细胞总数量比为IO2?IO7:1O2?IO7;当乳酸球菌、乳酸杆菌分别采用至少2种菌株混合使用时，乳酸杆菌的菌细胞总数与乳酸球菌的菌细胞总数量比为IO2?IO7:1O2?107。
[0070]以下为本发明生物保鲜剂的制备实例及有益效果。
[0071]牛物保鮮剂制各实施例1
[0072]取植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)斜面,接种于蛋白粉10克,牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。
[0073]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0074]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0075]在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每Iml菌细胞数量为1012。
[0076]牛物保鮮剂制各实施例2
[0077]取植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)斜面,接种于由蛋白粉10克,牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的斜面上，在28_35°C下培养24小时活化菌株。
[0078]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0079]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0080]在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10克，加糊精30克混合，干燥，粉碎，分装，即得固体生物保鲜剂，其中每I克菌细胞数量为3.3X IO130
[0081]牛物保鮮剂制备实施例3[0082]取副干酪乳杆菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。
[0083]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0084]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0085]在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每Iml菌细胞数量为?ο11。
[0086]牛物保鮮剂制各实施例4
[0087]取副干酪乳杆菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的斜面上，在28_35°C下培养24小时活化菌株。
[0088]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40 °C下培养16-18小时，作为种子液。
[0089]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0090]在无菌条件下，离心菌细胞悬，液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10克，加淀粉30克混合，干燥，粉碎，分装，即得固体生物保鲜剂，其中每I克菌细胞数量为2.5 X IO11。
[0091]牛物保鮮剂制各实施例5
[0092]取嗜酸乳杆菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121。。灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。
[0093]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0094]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0095]在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每Iml菌细胞数量为10'
[0096]牛物保鮮剂制各实施例6
[0097]取嗜酸乳杆菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2~6.4，用高压锅在121。。灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。[0098]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾
0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0099]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0100]在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10克，加淀粉30克混合，干燥，粉碎，分装，即得固体生物保鲜剂，其中每I克菌细胞数量比为2.5X1011。
[0101]牛物保鮮剂制各实施例7
[0102]取嗜热链球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121。。灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。
[0103]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾
0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0104]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0105]在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每Iml菌细胞数量为109。
[0106]牛物保鮮剂制各实施例8
[0107]取嗜热链球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121。。灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。
[0108]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾
0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0109]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0110]在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10克，加辅料30克混合，干燥，粉碎，分装，即得固体生物保鲜剂，其中每I克菌细胞数量为3.3X10'
[0111]牛物保鮮剂制各实施例9
[0112]取戊糖片球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121。。灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。
[0113]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾
0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。[0114]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0115]在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每Iml菌细胞数量为108。
[0116]牛物保鮮剂制各实施例10
[0117]取戊糖片球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121。。灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。
[0118]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0119]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0120]在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10克，加淀粉30克混合，干燥，粉碎，分装，即得固体生物保鲜剂，其中每I克菌细胞数量为3.3X109。
[0121]牛物保鮮剂制各实施例11
[0122]取粪肠球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121。。灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。
[0123]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾
0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0124]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
[0125]在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每Iml菌细胞数量为10'
[0126]牛物保鮮剂制各实施例12
[0127]取粪肠球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节ρΗ6.2?6.4，用高压锅在121。。灭菌15min后制成的斜面上，在28-35°C下培养24小时活化菌株。
[0128]活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾
0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的液体培养基中，在28-40°C下培养16-18小时，作为种子液。
[0129]按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2?6.4，用高压锅在121°C灭菌15min后制成的发酵培养基中，在28-40°C，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。[0130]在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10克，加淀粉30克混合，干燥，粉碎，分装，即得固体生物保鲜剂，其中每I克菌细胞数量为2.5 X IO11。
[0131]复方生物保鲜剂制备实施例13
[0132]分别取生物保鲜剂制备实施例1与生物保鲜剂制备实施例3制备的植物乳杆菌与副干酪乳杆菌菌细胞菌悬液，在无菌条件下等体积混合，分装，即得植物乳杆菌与副干酪乳杆菌复方液体生物保鲜 剂，其中每Iml菌细胞数量为5.5 X IO11个。
[0133]复方生物保鲜剂制备实施例14
[0134]分别取生物保鲜剂制备实施例2与生物保鲜剂制备实施例4制备的植物乳杆菌与副干酪乳杆菌菌细胞干粉，在无菌条件下等重量混匀，分装，即得植物乳杆菌与副干酪乳杆菌复方固体生物保鲜剂，其中每I克菌细胞数量为2.5 X IOltl个。
[0135]本发明复合生物保鲜剂均系在单方生物保鲜剂基础上，液体制剂按体积比，固体制剂按重量比配制。发明人在试制时发现采用任意体积或重量比均可实现防腐保鲜的作用，如 10:1 至 1:10，或 10:1:1:1:1:1 至 1:1:1:1:1:10,30:1，1:30，优选地，液体复方生物保鲜剂或固体生物保鲜剂以菌种或菌株等比例混合最佳。因此，本发明生物保鲜剂还包括由下述组成的固体或液体制剂制备实施例,见表1:
[0136]表1生物保鲜剂实施例
[0137]
【权利要求】
1.具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于:包括乳酸杆菌，乳酸球菌中的至少一种益生菌菌种。
2.根据权利要求1所述的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于:每Iml或Ig生物保鲜剂含IO2~IO14个菌细胞。
3.根据权利要求1或2所述的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于:当混合使用乳酸杆菌和乳酸球菌时:凤爪中乳酸杆菌和乳酸球菌的菌细胞数量比为IO2~IO7:1O2 ~107。
4.根据权利要求1或2所述的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于:所述的乳酸杆菌米用副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei,植物乳杆菌Lactobacillusplantarum,嗜酸乳杆菌actobacillus acidophilus中的任意一种菌株或其组合； 所述的乳酸球菌采用嗜热链球菌Streptococcus thermophilus,戍糖片球菌Pediococcus pentosaceus,幾肠球菌 Enterococcus faecalis 中的任意一种菌株或其组入口 ο
5.根据权利要求4所述的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于:当混合使用乳酸杆菌和乳酸球菌时:乳酸杆菌、乳酸球菌的菌细胞数量比为IO2~IO7:1O2~107。
6.根据权利要求4所述的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于:当混合使用乳酸杆菌中的副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei,植物乳杆菌Lactobacillus plantarum,嗜酸乳杆菌 actobacillus acidophilus 或乳酸球菌中的嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus,戍糖片球菌 Pediococcus pentosaceus,幾肠球菌Enterococcus faecals时，乳 酸杆菌的菌细胞总数与乳酸球菌的菌细胞总数比为IO2~IO7:1O2 ~107。
7.根据权利要求1-6任一项所述的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于: 当混合使用菌种或菌株时，任意比例混合； 进一步优选，菌种之间重量配比为1-10:1-10 ； 进一步优选，菌株之间重量配比为1-10:1-10 ； 更进一步优选，菌种之间重量配比采用等比混合； 更进一步优选，菌株之间重量配比采用等比混合。
8.根据权利要求1-7任一项所述的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂，其特征在于:制成液体形式或固体形式。
9.权利要求1-8任一项所述的生物防腐保鲜制剂的应用，其特征在于:用于肉类食品或蔬菜类食品保鲜。
10.根据权利要求9所述的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂的应用，其特征在于:所述肉类食品为鸡脚、鸡翅、猪蹄、猪皮、猪耳朵；所述蔬菜类食品为竹笋。
11.根据权利要求9或10所述的具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂的应用，其特征在于:在肉类食品中，权利要求1-8任一项所述的生物保鲜剂中的菌细胞数量为IO2~IO14个 cfu/go
12.保鲜肉类食品和蔬菜类食品，其特征在于:以肉类食品或蔬菜类食品、权利要求1-8任一项所述的生物保鲜剂为主要原料，辅以食品领域可接受的辅料制成保鲜食品。
13.保鲜肉类食品或植物类食品的制备方法，其特征在于:包括如下步骤: (1)预处理、清洗； (2)沸水烫漂:沸水中煮至3-7成熟，滤过，冷却，备用； (3)配制泡制母液:按常规用量将调味辅料加水配制成泡制母液，煮沸后，冷却至45°C以下； (4)泡制:取步骤(3)所得泡制母液，加入权利要求1-8任一项所述的生物保鲜剂和步骤(2 )处理后的食品，在温度15-45 °C下浸泡，即得。
14.保鲜肉类和蔬菜类食品的制备方法，其特征在于:包括如下步骤: (1)预处理、清洗肉类食品或植物类食品； (2)沸水烫漂:沸水中煮至3-7成熟，滤过，冷却，备用； (3)配制泡制母液:取适量泡椒，按常规用量将调味辅料加水配制成泡制母液，煮沸后，冷却至45°C以下； (4)泡制:取步骤(3)所得泡制母液，加入权利要求1-9任一项所述的生物保鲜剂和步骤(2)处理后的肉类食品或蔬菜类食品，在温度15-45°C下浸泡，即得。
15.根据权利要求13或14所述的保鲜肉类食品或植物类食品的制备方法，其特征在于:步骤(3)中煮沸时间15-30分钟。
16.根据权利要求13或14所述的保鲜肉类食品或植物类食品的制备方法，其特征在于:步骤(4)中所述生物保鲜剂中益生菌添加量以固体益生菌计算，每100升泡制母液加入200-1200克益生菌，或以含2%鲜菌细胞的液体益生菌计算，每100升泡制母液加入5_30升。
【文档编号】A23B7/155GK103651742SQ201210349847
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年9月19日 优先权日:2012年9月19日
【发明者】郑一敏, 曾雁鸣, 胥秀英, 王琳琳 申请人:成都与康科技有限公司