专利名称：同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的方法
技术领域：
本发明涉及转基因植物检测领域，具体涉及同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的方法。
背景技术：
除常规的抗虫抗病转基因品系外，随着基因工程技术的发展，针对饲用的功能性转基因作物新品种培育已成为研究热点，如已经获得安全认证的转植酸酶基因玉米在绿色饲料生产中具有良好的应用前景。转甘露聚糖酶基因、转葡聚糖酶基因、转木聚糖酶基因和转半乳糖苷酶基因玉米是针对减少饲料中抗营养因子，提高饲喂动物营养性能开发的新型饲用功能性转基因玉米品种，由于目标酶能够在玉米籽粒中特异表达，因此作为原料进行饲料生产时可以减少微生物发酵来源酶制剂的添加过程，从而大量节约酶制剂的使用成本。转基因生物及其产物使用的前提是保证其安全性，目前国内转基因作物大量用于饲料生产，这些饲料饲喂的畜禽及产品的食物链终端是人，所以转基因作物成分检测是整个转基因安全性评价体系中重要一环。PCR技术作为常规经典的分子生物学技术可以在分子水平上快速有效的检测极少量样品的目标成分。多重PCR (multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一 PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应。尽管多重PCR拥有较多的优点，它也有许多不容忽视的缺点，包括多对引物之间的相互作用、低扩增效率，以及不同的模板对引物的影响。这些缺点抑制了多`重PCR的应用。研究表明，对于成功进行多重PCR尤为重要的因素是用于扩增不同基因的不同引物对设计、引物对之间的相对浓度、PCR缓冲液的浓度、延伸温度、延伸时间、退火时间、退火温度、PCR循环数、氯化镁和dNTP浓度间的平衡等等。其中最重要的设计合理的引物，使其在多重PCR反应中，可以高效地扩增目的基因片段。随着转基因作物的快速发展，越来越多的研究已经利用多重PCR的方法快速、简捷地进行转基因作物的筛选。目前，已开发了利用多重PCR方法检测转基因大豆及玉米的方法(Forte, V. T.，et al. , Food Control, 16, 535-539, 2005 ;Germini, A. , et al., Journalof Agricultural and Food Chemistry, 52，3275 - 3280，2004)。转基因植物作为饲料，利用多重PCR反应可以进行饲料中多种基因同步鉴定，同时从饲料中扩增出目的条带，通过减少反应次数，节省了时间、人力、和物力(Mafra,1.，et al. , European Food Research andTechnology, 227, 649 - 665, 2008)。本发明以甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因序列设计特异引物并优化PCR体系及条件，能从混合基因组模板中有效扩增目的基因片段，为今后饲用酶转基因玉米原料成分的鉴定检测提供方法。
发明内容
本发明的发明人为了克服上述问题提出并完成了本发明。因此，本发明的目的是提供同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的方法。本发明的再一目的是提供同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的试剂盒。本发明的另一目的是提供能够同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的引物组合。根据本发明的同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的方法包括使用以下引物进行PCR扩增的步骤
权利要求
1.同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的方法，其特征在于，所述方法包括使用以下引物进行PCR扩增的步骤
2.根据权利要求1所述的同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的方法，其特征在于，所述半乳糖苷酶基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示；所述葡聚糖酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示；所述甘露聚糖酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示；所述木聚糖酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示。
3.同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下引物组合
4.用于同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括以下引物
全文摘要
本发明涉及转基因植物检测领域，具体涉及同时鉴定转甘露聚糖酶基因、葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因和半乳糖苷酶基因植物的方法。本发明中设计的针对转入的半乳糖苷酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶及木聚糖酶的外源基因的引物可以同时鉴定转基因玉米饲料中的该四种外源基因，这为今后饲用酶转基因玉米原料成分的快速鉴定检测提供了方法。
文档编号C12Q1/68GK103045744SQ20121059103
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月29日 优先权日2012年12月29日
发明者姚斌, 徐晓露, 孟昆, 杨培龙, 罗会颖, 王亚茹 申请人:中国农业科学院饲料研究所