液体海洋右旋糖苷酶复合稳定剂及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明是一种液体右旋糖苷酶复合稳定剂，它由以下重量比的原料混合制成：乙酸钠3-24、柠檬酸钠10-26、甘油6-16、对羟基苯甲酸复合酯钠0.02-0.07。本发明稳定剂加入液体右旋糖苷酶后可在4℃下保存4个月后其相对酶活力保持在85%以上。本发明液体右旋糖苷酶复合稳定剂配伍科学，稳定效果明显，成本低廉，维持液体右旋糖苷酶酶活高且稳定性强，是一种高效的液体右旋糖苷酶稳定剂，对海洋右旋糖苷酶液体制剂的产业化发展具有重要意义。
【专利说明】液体海洋右旋糖苷酶复合稳定剂及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种液体的右旋糖苷酶复合稳定剂，属于生物工程领域；本发明还涉及稳定剂的应用。
【背景技术】
[0002]右旋糖苷酶(EC3.2.1.11)是一种可以水解右旋糖苷链内及链端α -1, 6糖苷键的糖苷水解酶，因而常被应用于制糖工业、血浆代用品的生产及牙菌斑的预防及治疗等。从海洋环境出发，筛选得到一株高产右旋糖苷酶的海洋节杆菌，与陆源酶相比，海洋酶的耐盐、耐碱、耐低温等特性更利于工业化应用，因此该酶有望成为制糖工业、血浆代用品、牙膏、漱口液生产工业用右旋糖苷酶。
[0003]在酶制剂工业化应用过程中，酶不可避免需要在一定条件下进行长时间的运输和储存等环节，作为一种生物催化剂，特别是在常温条件下，液体酶的活性在长时间的运输和储存过程中极易受到环境因素变化及微生物污染的影响，严重限制了液体右旋糖苷酶制剂的广泛应用。因此，研究开发一种优质高效且成本低廉的液体右旋糖苷酶稳定剂，对高活性、高稳定性右旋糖苷酶制剂的产业化发展具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种海洋液体右旋糖苷酶复合稳定剂，以使添加了该复合稳定剂的海洋右旋糖苷酶在较长时间的运输和存储后仍具有较好的酶活力。
[0005]本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种液体海洋右旋糖苷酶复合稳定剂，其特点是，该稳定剂由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸钠3-24 ；柠檬酸钠10-26 ；
甘油6-16; 对羟基苯甲酸复合酯钠0.02-0.07。
[0006]本发明所述的液体右旋糖苷酶复合稳定剂中:各原料的重量百分比优选为: 乙酸钠18 ； 柠檬酸钠20 ；
甘油16 ； 对羟基苯甲酸复合酯钠0.05。
[0007]本发明所述的液体右旋糖苷酶复合稳定剂可以在增强液体右旋糖苷酶稳定性中的应用。在该应用中，所述的液体右旋糖苷酶优选由海洋细菌节杆菌发酵获得。
[0008]与现有技术相比，本发明的优点和积极效果如下:
1.本发明液体右旋糖苷酶复合稳定剂配伍科学，稳定效果明显，成本低廉，稳定剂加入液体右旋糖苷酶后可在4°C下保存4个月后其相对酶活力保持在85%以上。25°C下保存13周，比不加复合稳定剂的右旋糖苷酶活力残留率由O提高到70.8%，且能较好抑制微生物的生长。不加稳定剂的酶液在60°C下处理5min时残余酶活是未处理的20.5%，而加了稳定剂的酶液在60°C下处理720min时残余酶活是未处理的73.5%。不加稳定剂的酶液25°C放置4周，37°C放置I周后，酶活完全丧失。加稳定剂的酶液25°C放置13周，37°C放置4周，残余酶活仍在65%以上。
[0009]2.本发明稳定剂构成成分简单，制备方法容易，成本低廉，维持液体右旋糖苷酶酶活高且稳定性强，是一种高效的液体右旋糖苷酶稳定剂，对海洋右旋糖苷酶液体制剂的产业化发展具有重要意义。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1为加有本发明复合稳定剂的液体海洋右旋糖苷酶的热稳定性图；
图2为未加本发明复合稳定剂的液体海洋右旋糖苷酶热稳定性图；
图3为本发明稳定剂对右旋糖苷酶25°C储存的影响图；
图4为本发明稳定剂对右旋糖苷酶37°C储存的影响图。
【具体实施方式】
[0011]下面结合实施例，对本发明进一步说明。下述实施例是说明的，不能以以下述实施例来限定本发明的保护范围。
[0012]实施例1，一种液体海洋右旋糖苷酶复合稳定剂，该稳定剂由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸钠3 ；柠檬酸钠10 ；
甘油6 ；对羟基苯甲酸复合酯钠0.02。
[0013]实施例2，一种液体海洋右旋`糖苷酶复合稳定剂，该稳定剂由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸钠24 ；柠檬酸钠26 ；
甘油16 ；对羟基苯甲酸复合酯钠0.07。
[0014]实施例3，一种液体海洋右旋糖苷酶复合稳定剂，该稳定剂由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸钠10 ； 柠檬酸钠20 ；
甘油12 ；对羟基苯甲酸复合酯钠0.04。
[0015]实施例4，一种液体海洋右旋糖苷酶复合稳定剂，该稳定剂由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸钠18 ；柠檬酸钠20 ；
甘油16 ；对羟基苯甲酸复合酯钠0.05。
[0016]为了考察稳定剂对酶液保藏的效果，发明人利用本实施例的复合稳定剂做了以下实验。
[0017]实验一:加和不加本实施例复合稳定剂对右旋糖苷酶的热稳定性的影响实验。结果见图1和图2,稳定剂添加后,酶的稳定性提高,不加稳定剂的酶液在60°C下处理5min时残余酶活是未处理的20.5%，而加了稳定剂的酶液在60°C下处理720min时残余酶活是未处理的73.5%ο
[0018]实验二:将不加稳定剂的酶液(I号)和加稳定剂的酶液(2号)分别置于25°C和37°C培养箱中，每隔一定时间取样进行酶活力测定和微生物的镜检和计数，以Oh的酶活为对照组测定残余酶活，结果见图3 (25°C)和图4 (37°C)，不加稳定剂的酶液25°C放置4周，37°C放置I周后，酶活完全丧失。加稳定剂的酶液25°C放置13周，37°C放置4周，残余酶活仍在70%以上。[0019]将本发明复合稳定剂分别添加到100ml液体右旋糖苷酶中，25 1:和37°C保存，进行酶活力测定，测定步骤如下:
右旋糖苷酶发酵液(由海洋的节杆菌发酵制备)。
[0020]酶活力测定方法:将50 μ L酶液与150 μ L、3%的右旋糖苷20 000 (50mmol/L,pH 5.5乙酸钠缓冲液配制)45 ° C水浴15 min后，DNS法测定还原糖含量。酶活力单位定义(U/ml):上述反应条件下，每分钟催化释放IymoL麦芽糖所需的酶量为一个活力单位。
【权利要求】
1.一种液体海洋右旋糖苷酶复合稳定剂，其特征在于，该稳定剂由以下重量配比的原料混合溶解制成: 乙酸钠3-24 ；柠檬酸钠10-26 ； 甘油6-16; 对羟基苯甲酸复合酯钠0.02-0.07。
2.根据权利要求1所述的液体右旋糖苷酶复合稳定剂，其特征在于:各原料的重量百分比为: 乙酸钠18 ； 柠檬酸钠20 ； 甘油16 ； 对羟基苯甲酸复合酯钠0.05。
3.权利要求1或2所述的液体右旋糖苷酶复合稳定剂在增强液体右旋糖苷酶稳定性中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的液体右旋糖苷酶由海洋细菌节杆菌发酵获得。`
【文档编号】C12N9/96GK103497945SQ201310494423
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年10月21日 优先权日:2013年10月21日
【发明者】王淑军, 吕明生, 王德龙, 王小贝, 焦豫良, 房耀维, 刘姝 申请人:淮海工学院