一种水产养殖用混合微生物制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种水产养殖用混合微生物制剂及其制备方法，所述混合微生物制剂包括以下重量份菌种：枯草芽孢杆菌30～35份、地衣芽孢杆菌20～30份、巨大芽孢杆菌20～25份、沼泽红假单胞菌15～20份、啤酒酵母30～50份、光合细菌18～20份、硝化细菌10～13份、粪链球菌1～5份、纳豆菌5～10份和双歧杆菌10～15份；该混合微生物制剂通过扩大培养、常温分离、低温分离和低温干燥等步骤制得。本发明的制备方法简便易行，可批量生产，所制备的混合微生物制剂可明显降低水体内氨氮、亚硝酸盐的含量、抑制有害细菌的繁殖，提高水质质量和鱼虾蟹的抗病能力，减少了药物和抗生素的使用量，有效提高了水产养殖产品的质量和数量。
【专利说明】一种水产养殖用混合微生物制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及水产养殖【技术领域】，特别是涉及一种水产养殖用混合微生物制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]近年来，随着水产养殖业的迅猛发展，养殖的高密度化和集约化程度不断提高，水产品的供给数量也迅速增长。但这种高密度、集约化的养殖不仅给水体环境带来了严重污染，且使水产品的质量逐渐下降，水产养殖的发展受到了一定的限制。这主要是由于以下因素导致的:其一，集约式养殖中，鱼、虾、蟹类集中度较高，其排泄的大量废物囤积在水体底部，这些排泄废物含有大量的有机质，其分解消耗大量的氧气，使水体因缺氧恶化；其二，长期使用抗生素后，鱼虾蟹产生抗药性，继续使用抗生素进行鱼虾蟹疾病防治不仅效果不明显，而且杀死了水体中的大量有益细菌，使水体进一步恶化。
【发明内容】
[0003]本发明主要解决的技术问题是提供一种水产养殖用混合微生物制剂及其制备方法，能够解决上述水体恶化的难题，同时可提高鱼虾蟹的抗病能力，提高食用安全性。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是:提供一种水产养殖用混合微生物制剂，包括:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、光合细菌、硝化细菌、粪链球菌、纳豆菌和双歧杆菌；所述各菌种的重量份为:枯草芽孢杆菌30~35份、地衣芽孢杆菌20~30份、巨大芽孢杆菌20~25份、沼泽红假单胞菌15~20份、啤酒酵母30~50份、光合细菌18~20份、硝化细菌10~13份、粪链球菌I~5份、纳豆菌5~10份和双歧杆菌10~15份。
`[0005]在本发明一个较佳实施例中，所述菌种的重量百分数为:枯草芽孢杆菌30份、地衣芽孢杆菌25份、巨大芽孢杆菌20份、沼泽红假单胞菌20份、啤酒酵母40份、光合细菌20份、硝化细菌13份、粪链球菌3份、纳豆菌5份和双歧杆菌10份。
[0006]为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是:提供一种水产养殖用混合微生物制剂的制备方法，制备步骤包括:
(1)扩大培养:按配方将权利要求1或2所述的各菌种在无菌条件下接种在带电动搅拌器的培养基中，接种量为培养基总量的5~8%，在40°C恒温条件下，以250~300转/min的转速搅拌，同时用氧气发生泵向培养基中通入氧气，发酵48h后，得到活菌数分别为枯草芽孢杆菌4.2X 109cfu/mL、地衣芽孢杆菌2.5X 109cfu/mL、巨大芽孢杆菌2.2 X 109cfu/mL、沼泽红假单胞菌1.8X 109cfu/mL、啤酒酵母4.0 X 109cfu/mL、光合细菌2.1X 109cfu/mL、硝化细菌1.5X 109cfu/mL、粪链球菌1.0 X 109cfu/mL、纳豆菌0.5 X 109cfu/mL和双歧杆菌1.0X109cfu/mL 的发酵液；
(2)常温菌种分离:在发酵温度下，将步骤(1)中得到的发酵液经5000转/min的转速高速离心15min,去除上清液；(3)低温菌种分离:在I~3°C的低温环境下，将步骤(2)中得到的高浓度菌液经5000转/min的转速高速离心15min,去除上清液；
(4)低温干燥:向步骤(3)中经低温离心的菌种中加入15%的脱脂乳粉和10%甘油的生理盐水并搅拌均匀，然后将其置入_70°C的冷肼中低温干燥6~10h，至菌种成干燥块状；
(5)将步骤(4)中经低温干燥的菌种用研磨研碎，装入密封袋内低温保存。
[0007]在本发明一个较佳实施例中，所述步骤(1)中，所述氧气的通入量为0.5~lm3/h。
[0008]在本发明一个较佳实施例中，所述步骤(1)中，培养基的培养液的成分为:蛋白胨5g、酵母膏3g、玉米粉10g、葡萄糖10g、麦芽糖10g，NaCl 3g、FeCl 0.002g、氯化铵2g、KH2P04lg、MgSO4.7H20 0.5g、水 800 mL ；
在本发明一个较佳实施例中，所述培养液的pH值为7.0，经150°C灭菌45 min。
[0009]本发明的有益效果是:本发明一种水产养殖用混合微生物制剂的制备方法简便易行，可批量生产，所制备的混合微生物制剂可明显降低水体内氨氮、亚硝酸盐的含量、抑制有害细菌的繁殖，提高水质质量和鱼虾蟹的抗病能力，减少了药物和抗生素的使用量，有效提高了水产养殖产品的质量和数量。
【具体实施方式】
[0010]下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
[0011]本发明实施例包括:
一种水产养殖用混合微生物制剂，包括:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、光合细菌、硝化细菌、粪链球菌、纳豆菌和双歧杆菌；所述各菌种的重量份为:枯草芽孢杆菌30~35份、地衣芽孢杆菌20~30份、巨大芽孢杆菌20~25份、沼泽红假单胞菌15~20份、啤酒酵母30~50份、光合细菌18~20份、硝化细菌10~13份、粪链球菌I~5份、纳豆菌5~10份和双歧杆菌10~15份。
[0012]实施例1
(1)菌种扩大培养:按30g枯草芽孢杆菌、25g地衣芽孢杆菌、20g巨大芽孢杆菌、20g沼泽红假单胞菌、40g啤酒酵母、20g光合细菌、13g硝化细菌、3g粪链球菌、5g纳豆菌和IOg双歧杆菌在无菌条件下接种在带电动搅拌器的培养基中，培养基中培养液的成分为:蛋白胨5g、酵母膏3g、玉米粉10g、葡萄糖10g、麦芽糖10g, NaCl 3g、FeCl 0.002g、氯化铵2g、KH2PO4 lg、MgSO4.7H20 0.5g、水 800 mL, pH 值为 7.0，经 150°C灭菌 45 min ;接种量为该培养液总量的5~8%，在40°C恒温条件下，以250~300转/min的转速搅拌，同时用氧气发生泵向培养基中以0.5~lm3/h的气体流量通入氧气，发酵48h后，得到活菌数分别为枯草芽孢杆菌4.2X 109cfu/mL、地衣芽孢杆菌2.5X 109cfu/mL、巨大芽孢杆菌2.2X 109cfu/mL、沼泽红假单胞菌1.8X 109cfu/mL、啤酒酵母4.0X 109cfu/mL、光合细菌2.1X 109cfu/mL、硝化细菌1.5X 109cfu/mL、粪链球菌1.0 X 109cfu/mL、纳豆菌0.5 X 109cfu/mL和双歧杆菌1.0X109cfu/mL 的发酵液；
(2)常温菌种分离:在发酵温度下40°C下，将步骤(1)中得到的发酵液经5000转/min的转速高速离心15min,去除上清液；
(3)低温菌种分离:在I~3°·C的低温环境下，将步骤(2)中得到的高浓度菌液经5000转/min的转速高速离心15min,去除上清液；
(4)低温干燥:向步骤(3)中经低温离心的菌种中加入15%的脱脂乳粉和10%甘油的生理盐水并搅拌均匀，然后将其置入_70°C的冷肼中低温干燥6~10h，至菌种成干燥块状；
(5)将步骤(4)中经低温干燥的菌种用研磨研碎，装入密封袋内低温保存。
[0013]将上述方法得到的混合微生物制剂以5mg/L的比例均匀投入养殖塘，每10天测试一次养殖塘的水质特性，10个周期后，得到结果为:氨氮含量平均降低了 70%，亚硝酸盐降低了 75%，总收益与去年同期相比，每亩增收2000~3000元。
[0014]以上所述仅为本 发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的【技术领域】，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【权利要求】
1.一种水产养殖用混合微生物制剂，其特征在于，包括:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、光合细菌、硝化细菌、粪链球菌、纳豆菌和双歧杆菌；所述各菌种的重量份为:枯草芽孢杆菌30~35份、地衣芽孢杆菌20~30份、巨大芽孢杆菌20~25份、沼泽红假单胞菌15~20份、啤酒酵母30~50份、光合细菌18~20份、硝化细菌10~13份、粪链球菌I~5份、纳豆菌5~10份和双歧杆菌10~15份。
2.根据权利要求1所述的水产养殖用混合微生物制剂，其特征在于，所述个菌种的重量百分数为:枯草芽孢杆菌30份、地衣芽孢杆菌25份、巨大芽孢杆菌20份、沼泽红假单胞菌20份、啤酒酵母40份、光合细菌20份、硝化细菌13份、粪链球菌3份、纳豆菌5份和双歧杆菌10份。
3.—种如权利要求1或2所述的水产养殖用混合微生物制剂的制备方法，其特征在于，制备步骤包括: (1)扩大培养:按配方将权利要求1或2所述的各菌种在无菌条件下接种在带电动搅拌器的培养基中，接种量为培养基总量的5~8%，在40°C恒温条件下，以250~300转/min的转速搅拌，同时用氧气发生泵向培养基中通入氧气，发酵48h后，得到活菌数分别为枯草芽孢杆菌4.2X 109cfu/mL、地衣芽孢杆菌2.5X 109cfu/mL、巨大芽孢杆菌2.2X 109cfu/mL、沼泽红假单胞菌1.8X 109cfu/mL、啤酒酵母4.0X 109cfu/mL、光合细菌2.1X 109cfu/mL、硝化细菌1.5X 109cfu/mL、粪链球菌1.0 X 109cfu/mL、纳豆菌0.5X109cfu/mL和双歧杆菌1.0X109cfu/mL 的发酵液； (2)常温菌种分离:在发酵温度下，将步骤(1)中得到的发酵液经5000转/min的转速高速离心15min,去除上清液； (3)低温菌种分离:在I~3°C的低温环境下，将步骤(2)中得到的高浓度菌液经5000转/min的转速高速离心15min,去除上清液； (4)低温干燥:向步骤(3)中经低温离心的菌种中加入15%的脱脂乳粉和10%甘油的生理盐水并搅拌均匀，然后将其置入_70°C的冷肼中低温干燥6~10h，至菌种成干燥块状； (5)将步骤(4)中经低温干燥的菌种用研磨研碎，装入密封袋内低温保存。
4.根据权利要求3所述的水产养殖用混合微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述氧气的通入量为0.5~lm3/h。
5.根据权利要求3所述的水产养殖用混合微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，培养基的培养液的成分为:蛋白胨5g、酵母膏3g、玉米粉10g、葡萄糖10g、麦芽糖 10g, NaCl 3g、FeCl 0.002g、氯化铵 2g、KH2PO4 lg、MgSO4.7H20 0.5g、水 800 mL ； 根据权利要求5所述的水产养殖用混合微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述培养液的pH值为7.0，经150°C灭菌45 min。
【文档编号】C12R1/865GK103667133SQ201310660118
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月9日 优先权日:2013年12月9日
【发明者】杜伟林 申请人:苏州市相城区新时代特种水产养殖场