荧光假单胞菌CB113 QS系统comQ基因缺失突变菌株及应用的制作方法
【专利摘要】荧光假单胞菌CB113?QS系统comQ基因缺失突变菌株及应用属于微生物【技术领域】，本发明提供的一株荧光假单胞菌突变菌株M2由荧光假单胞菌CB113中的comQ基因编码区675bp缺失获得，一种突变菌株M2的应用，在于与野生型菌株相比显著提高对病原真菌的抑制活性,所述病原真菌为玉米大斑病菌和人参锈腐病菌；本发明的菌株具有较好的抑制真菌的特性，为现有技术提供了一种更好的抑制真菌的途径。
【专利说明】荧光假单胞菌CB113 QS系统comQ基因缺失突变菌株及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一株荧光假单胞菌，特别涉及comQ基因缺失的荧光假单胞菌突变菌株，属于微生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]细菌的群体感应(quorum sensing, QS),是细菌根据种群密度大小进行细胞内或细胞间相互交流、协调群体行为的一种重要机制。虽然每种革兰氏阴性菌所产生的群体感应机制不同，但其调控蛋白具有高度同源性，目前研究的大多数革兰氏阴性菌都存在相似的 QS 系统。在 Pseudomonas fIuorescens 中，comX-comQ-comP-comA 是 QS 系统中主要的信号途径，调控细菌感受态细胞的形成、芽孢的产生、生物膜的形成以及抗生素的产生等。comX基因编码55氨基酸的comX信息素前体，comQ负责将没有活性的信号分子comX转变为有活性的信号分子，为10氨基多肽(ADPITRQWGD)。信号分子comX被分泌到胞外并在胞外积累，当胞外介质中的信号分子达到一定浓度时可激发细胞膜受体蛋白组氨酸激酶comP的活性，comP自磷酸化并将自身携带的-P转移到调控因子comA上，磷酸化的comA具有了转录调控因子的活性并调控下游一系列基因的表达，可见comQ对整个QS系统的启动具有重要的功能。基于该基因在细菌中的重要地位，发明人研究了荧光假单胞菌中comQ基因的作用，出乎意料的发现，突变后的荧光假单胞菌对真菌有更强的抑制作用。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一株comQ基因缺失的荧光假单胞菌突变菌株。
[0004]一株荧光假单胞菌`突变菌株M2由荧光假单胞菌CB113中的comQ基因编码区675bp缺失获得。
[0005]一种突变菌株M2的应用，在于与野生型菌株相比显著提高对病原真菌的抑制活性，所述病原真菌为玉米大斑病菌和人参锈腐病菌。
[0006]本发明实现过程如下:
[0007]CB113是从长白山土壤中分离纯化得到，首先在PDA上进行分离初筛，然后进行拮抗效果鉴定，并采用牛津杯扩散实验进行复筛，确定了 CB113对多种菌株具有很好的拮抗能力。通过对该菌进行形态特征和培养特征观察，生理生化的鉴定以及16SrDNA的序列分析，初步鉴定该菌株为突光假单胞菌，命名为Pseudomonas fluorescens CB113。相关的研究结果已经以硕士论文的形式收录在中国期刊网中，硕士论文题目为“玉米大斑病菌拮抗细菌的筛选鉴定及发酵条件的研究”，本领域技术人员可以随意获得该菌株，而且 申请人:可以随时提供给需要该菌株的科研机构或院所。
[0008]根据已公布的与CB113菌株近缘的细菌中的comQ保守序列设计两对引物Q_L_F/Q-L-R和Q-R-F/Q-R-R，以CB113基因组DNA为模板，利用设计的引物，通过PCR方法获得产物Q-L、Q-R,大小分别为1268bp和1432bp。引物序列如表1所示:[0009]表1 本试验使用的 PCR 引物 TablelPCRprimers used in this study
[0010]
【权利要求】
1.一株荧光假单胞菌突变菌株M2，其特征在于所述荧光假单胞菌突变菌株由荧光假单胞菌CBl 13中的comQ基因编码区675bp缺失获得。
2.—种权利要求1所述突变菌株M2的应用，其特征在于与野生型菌株相比显著提高对病原真菌的抑制活性。
3.按权利要求2所述突变菌株M2的应用，其特征在于所述病原真菌为玉米大斑病菌和人参锈腐病菌。
【文档编号】C12R1/39GK103805550SQ201410035661
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2014年1月25日 优先权日:2014年1月25日
【发明者】张祥辉, 王璐, 潘洪玉, 赵玉海, 王秀明 申请人:吉林大学