一种应用南极假丝酵母脂肪酶b生产替卡格雷手性药物中间体的方法
【专利摘要】一种应用南极假丝酵母脂肪酶B生产替卡格雷手性药物中间体的方法，属于酶工程【技术领域】。将南极假丝酵母脂肪酶B（简称CALB）用于转化具有（a）所示结构式的外消旋替卡格雷中间体为单一构型中间体（b），其中R=CnH2n+1CO或CnH2n-1CO(n=2～6)，R’=Cbz或Boc，R=CnH2n+1CO或CnH2n-1CO(n=2～6)，R’=Cbz或BocR’=Cbz或Boc，用CALB对所述的外消旋药物中间体进行拆分后得到产物（b）构型为（1S，4R）。本发明中，利用CALB对所述的底物进行拆分，催化效率高，得到的产物（b）纯度高。
【专利说明】一种应用南极假丝酵母脂肪酶B生产替卡格雷手性药物中间体的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于酶工程【技术领域】，具体涉及一种应用CALB拆分具有(a)所示结构式的外消旋替卡格雷中间体，其中R=CnH2n+1C0或CnH2lriCO (n=2~6)，R’ =Cbz或Boc，经转化后获得单一构型的中间体(b)的方法。
[0002]
【权利要求】
1.一种将南极假丝酵母脂肪酶B (简称CALB)用于拆分具有(a)所示结构式的外消旋替卡格雷中间体，其中R=CnH2n+1CO或CnHO (n=2~6)，R’ =Cbz或Boc，获得单一构型中间体(b)；
2.按照权利要求1的一种将CALB用于拆分具有(a)所示结构式的外消旋替卡格雷中间体获得单一构型中间体(b)的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)生物催化剂选择:选用南极假丝酵母脂肪酶B为生物催化剂； (2)将南极假丝酵母脂肪酶B溶于通用缓冲液中，再与消旋体底物(a)混合，得到混合液；将所述的混合液在一定温度下进行转化，得到反应液； (3)样品萃取:向反应液中加入有机溶剂，进行振荡混合后，离心分离，得化合物(b)。
3.按照权利要求2的方法，其特征在于，所述的通用缓冲液为三羟甲基氨基甲烷(Tris) 50mM ;硼酸 50mM ;柠檬酸 33mM ;Na3P0450mM，用 HCl 或 NaOH 调 pH3 ~12。
4.按照权利要求3的方法，其特征在于，所述的通用缓冲液pH为5。
5.按照权利要求2的方法，其特征在于，步骤(2)所述的混合液中CALB酶浓度为0.04 ~lmg/ml。
6.按照权利要求5的方法，其特征在于，混合液中CALB酶浓度为0.08mg/ml。
7.按照权利要求2的方法，其特征在于，所述的混合液中消旋体底物浓度为lg/L~100g/L。
8.按照权利要求7的方法，其特征在于，所述的混合液中消旋体底物浓度为20g/L。
9.按照权利要求2的方法，其特征在于，所述的转化温度为20~70°C。
10.按照权利要求2的方法，其特征在于，化合物(a)选自顺-1-丙酰氧基-N-苄氧羰基-4-氨基-2-环戊烯、顺-1- 丁酰氧基-N-苄氧羰基-4氨基-2-环戊烯，对应所得的化合物(b)为(1S，4R) N-苄氧羰基-4-氨基-2-环戊烯-1-醇。
【文档编号】C12R1/72GK104164469SQ201410081155
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2014年3月6日 优先权日:2014年3月6日
【发明者】郑国钧, 陈清 申请人:北京化工大学