一种单只轮虫基因组dna的快速提取方法
【专利摘要】一种单只轮虫基因组DNA的快速提取方法，使用裂解液：25mMNaOH，0.2mMEDTA和缓冲液：40mMTris-HCL，pH5.0的两种试剂，操作过程为：自然水体中获取的轮虫经清洗、饥饿72小时后，在解剖镜下分离单只个体，分装入0.2mlEP管中，体积1uL，加入20uL裂解液，95℃30min，0℃5min，再加入20uL缓冲液,混匀；10000g离心2min,取上清，即可得到用于PCR的模板DNA。优点是：时间短，完成时间为1小时；受污染的几率大大降低；精准分析。可直接获得单只轮虫的基因组DNA，PCR结果能用于测序分析；使用低毒的基本裂解液和缓冲液，降低对操作人员的危害。
【专利说明】—种单只轮虫基因组DNA的快速提取方法
【技术领域】
[0001]本发明属于基因组DNA的提取方法，特别涉及一种单只轮虫基因组DNA的快速提取方法。
【背景技术】
[0002]轮虫是一种广泛分布在自然水体中的微小浮游动物，由于虫体微小，DNA含量少，所以目前广泛的方法是单只轮虫扩培几天后，待孤雌生殖群体数量足够多后，再批量提取DNA进行分析。有三方面不足:一，时间长。由于要扩培轮虫，才能获得足够多的遗传信息一致的DNA用于分析，所以从采样到得到DNA耗时至少一周；二，受污染风险大。扩培操作繁琐，中间环节易受纤毛虫、微生物污染，直接导致DNA不能用于分析；三，操作有危险性。传统的苯酹一氯仿法的试剂大都有强烈的腐蚀性和毒性，对操作人员构成潜在的危害。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是:提供一种单只轮虫基因组DNA的快速提取方法。达到在时间短，污染风险低，低毒害条件下分离出轮虫到DNA。
[0004]本发明的技术方案是:
[0005]一种单只轮虫基因组DNA的快速提取方法，其特征在于:使用裂解液:25mMNa0H，
0.2mMEDTA和缓冲液:40mMTris-HCL，pH5.0的两种试剂，操作过程为:自然水体中获取的轮虫经清洗、饥饿72小时后，在解剖镜下分离单只个体，分装入0.2mlEP管中，体积luL，加入20uL裂解液，95°C 30min,0°C 5min，再加入20uL缓冲液，混匀;1000Og离心2min，取上清，即可得到用于PCR的模板DNA。
[0006]本发明效果及优点:
[0007]本方法可以提取单只轮虫的基因组DNA，其优点为:
[0008](I)时间短。从分离轮虫到DNA提取完成时间为I小时左右；
[0009](2)污染风险低。从分离到获得DNA步骤少，时间段，受污染的几率大大降低；
[0010](3)精准分析。可直接获得单只轮虫的基因组DNA，PCR结果能用于测序分析；
[0011](4)低毒害。使用低毒的基本裂解液和缓冲液，靠温度辅助，降低对操作人员的危害。
【具体实施方式】
[0012]一种单只轮虫基因组DNA的快速提取方法，本法是改良后的hotshot法，需要裂解液(25mMNa0H，0.2mMEDTA)和缓冲液(40mMTris_HCL，ρΗ5.0)两种试剂。操作过程为:自然水体中获取的轮虫经清洗、饥饿72小时后，在解剖镜下分离单只个体，分装入0.2mlEP管中，体积luL，加入20uL裂解液，95°C 30min,0°C 5min，再加入20uL缓冲液，混匀。1000Og离心2min，取上清，即为可用于PCR的模板DNA。
[0013] 本专利申请由国家国际科技合作专项资助“饮用水源保护生态修复成套关键技术合作研究”(项目编号:2013DFA71340) [0014]InternationalScience&Techno1gyCooperationProgramofChina(GrantN0.2013DFA71340)。
【权利要求】
1.一种单 只轮虫基因组DNA的快速提取方法，其特征在于:使用裂解液:25mMNaOH，0.2mMEDTA和缓冲液:40mMTris-HCL，pH5.0的两种试剂，操作过程为:自然水体中获取的轮虫经清洗、饥饿72小时后，在解剖镜下分离单只个体，分装入0.2mlEP管中，体积luL，加入20uL裂解液，95°C 30min，0°C 5min，再加入20uL缓冲液，混匀;1000Og离心2min，取上清，即可得到用于PCR的模板DNA。
【文档编号】C12N15/10GK103937782SQ201410177155
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年4月29日 优先权日:2014年4月29日
【发明者】乔之怡, 霍达, 罗阳, 张俊, 刘瑞, 孙婧, 聂云思 申请人:天津农学院, 海河流域水环境监测中心