水稻抗褐飞虱主效基因qBph29(t)的分子标记及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了水稻抗褐飞虱主效基因qBph29(t)的紧密连锁分子标记及其应用。通过将水稻抗虫品系08BPH327(♂)与9311(♀)杂交获得的F2各单株的基因型，同时结合F2:3家系的抗褐飞虱的抗性级别进行遗传连锁分析，从抗虫品系08BPH327定位抗性主效基因qBph29(t)于分子标记RM16720和YM54之间的120K区间，发现了与qBph29(t)紧密连锁的分子标记。本发明分子标记可以有效检测抗虫品系08BPH327及其衍生品种中是否含有该主效抗性基因位点，大大提高抗褐飞虱水稻植株的选择效率，获得含有qBph29(t)的抗褐飞虱水稻品种。
【专利说明】水稻抗褐飞虱主效基因qBph29(t)的分子标记及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物分子遗传学领域，涉及水稻抗褐飞虱主效基因qBph29(t)的分子 标记及其该分子标记在选育水稻抗褐飞虱品种中的应用。
【背景技术】
[0002] 水稻是我国最主要的粮食作物之一，近几十年来受到大面积的病虫为害，使其生 产受到严重威胁。稻褐飞虱是一种单食性害虫，其成虫和若虫以口针刺吸植株韧皮部汁液， 引起水稻植株黄叶或枯死，最后导致减产或绝收。据中国农业年鉴记载，稻飞虱（主要是褐 飞虱）在 1966、1969、1973、1977、1983 和 2003 年全国性大发生，1987、1991、2005、2006 和 2007年全国性特大发生，其每季危害的面积达到水稻种植总面积的50%以上，给我国水稻 生产造成了严重的损失。由于褐飞虱的危害多发生在水稻成熟灌浆期，此时大量使用杀虫 齐U，对环境和稻谷的污染也是非常严重的问题。利用抗褐飞虱基因培育抗虫水稻品种是褐 飞虱综合防治中最为经济有效的方法。
[0003] 水稻抗褐飞虱基因的研究始于上世纪70年代初，至今已命名了 28个主效抗虫基 因（http://www.shigen.nig.ac.jp/rice/oryzabase_submission/gene_nomenclature/)〇 这些抗性基因分别来自不同的野生稻种和栽培稻农家品种资源。一些早期研究的抗褐飞虱 基因如Bphl、bph2和Bph3已培育成抗虫品种并在一些水稻种植区推广种植。然而，由于褐 飞虱新生物型的出现，抗褐飞虱品种逐渐丧失抗性或面临抗性丧失的危险。例如，带有Bphl 的抗虫品种，经过几年推广种植后很快就失去抗性，而携带Bphl和bph2两个基因的品种抗 性表现更强并更持久。因此，水稻生产中迫切需要携带新的和多个抗性基因的抗虫品种。
[0004] 由于抗虫性鉴定的复杂性，利用常规育种手段往往难以有效地导入和聚合不同的 抗虫基因。本发明是在找到与抗虫基因紧密连锁或共分离的分子标记的基础上，借助分子 标记辅助选择（Marker-assistedselection,MAS)技术则可以有目的地进行抗虫基因的导 入和聚合，选育持久抗性品种，延缓抗虫品种的退化年限和防止褐飞虱新生物型的发生。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的之一是提供一种水稻抗褐飞虱主效基因qBph29(t)的分子标记。
[0006] 本发明的目的之二是提供上述分子标记的检测方法。
[0007] 本发明的目的之三是提供一种使用上述分子标记在选育抗褐飞虱水稻中的用途。
[0008] 为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0009] 本发明公开了水稻抗褐飞虱主效基因qBph29(t)的分子标记，其是由下列引物对 经PCR扩增获得，所述引物对的上游引物为SeqIDNO. 1所示的序列，所述引物对的下游引 物为SeqIDN0. 2所示的序列；
【权利要求】
1. 水稻抗褐飞虱主效基因qBph29(t)的分子标记，其是由下列引物对经PCR扩增获得， 所述引物对的上游引物为Seq ID NO. 1所示的序列，所述引物对的下游引物为Seq ID NO. 2 所示的序列； Seq ID NO. 1 :5' -CTCTCCCCTCCAATCCTTTT-3' Seq ID NO. 2 :5, -AGCACCCTGGAAAGCAGTAG-3，。
2. 权利要求1所述分子标记用于筛选水稻抗褐飞虱主效基因qBph29(t)的方法，其 特征在于，包括步骤：以待检测的水稻基因组DNA为模板，以权利要求1所述的引物对进行 PCR扩增，如果引物能够扩增出205bp的基因片段，说明待检测的水稻存在抗褐飞虱主效基 因 qBph29 (t)。
3. 权利要求1所述的分子标记在水稻辅助育种中的用途。
4. 一种筛选抗褐飞虱水稻的方法，其特征在于，使用权利要求1中所述的引物对，以待 检测的水稻基因组DNA为模板进行PCR扩增，并判断是否能扩增出205bp的基因片段，如果 能扩增出所述205bp片段，则标志着该待检水稻为存在抗褐飞虱主效基因qBph29(t)的抗 性水稻材料。
5. 按照权利要求4所述的方法，其特征在于：以待检测的水稻基因组DNA为模板进行 PCR扩增后，可以通过凝胶电泳检测或测序的方式，判断是否能扩增出205bp的基因片段。
【文档编号】C12N15/10GK104342437SQ201410503189
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2014年9月26日 优先权日:2014年9月26日
【发明者】邱永福, 李容柏, 刘芳, 杨萌, 覃宝祥 申请人:广西大学