前列腺癌标志物lncRNA MALAT-1及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)MALAT-1及其作为前列腺癌标志物的应用、以及在制备用于检测前列腺癌的芯片或制剂或试剂盒中的应用。
【专利说明】前列腺癌标志物IncRNA MALAT-1及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子生物学领域，具体地，本发明涉及尿液长链非编码IncRNA MALAT-I及其作为前列腺癌标志物的应用。
【背景技术】
[0002] 前列腺癌（Prostatic Cancer，PCa)是一种严重威胁男性健康的恶性肿瘤，其发病 及死亡率高峰在70岁左右，占全球肿瘤发病率第二位、死亡率第六位。我国PCa的发病率 近年来一直处于显著的上升趋势。在北京、上海、广州等医学、经济发达城市，PCa发病率已 位于当地十大常见肿瘤之列。来自上海市疾病控制中心的资料进一步显示，PCa的发病率 自2002年起已跃居男性泌尿生殖系恶性肿瘤的首位，从1990年2. 6/10万上升到2009年 32. 23/10万，跃居男性恶性肿瘤的第5位。流行病学数据还显示，中国PCa发病率已从1993 年的1. 71/10万男性人口增加到2005年的7. 9/10万男性人口，年增幅13%。
[0003] PCa-旦突出包膜就失去了根治的机会，其生存时间大大下降，因此，PCa的早期 诊断就显得尤为重要。血清PSA检测是目前应用最为广泛的PCa早期诊断分子标志物，它的 应用大大降低了 PCa特异性死亡。但是，PSA是前列腺特异性而非PCa特异性分子标记物， 诸如前列腺炎、良性前列腺增生等都能引起PSA的升高。在PSA的"诊断灰区"(PSA4-10ng/ ml)，其诊断阳性率仅为25-40%，这就导致了众多的不必要的穿刺，同时，也给穿刺患者带 来了经济负担和精神负担。所以，临床上亟需找到更具敏感性和特异性的分子标志物。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的为提供一种前列腺癌标志物IncRNAMALAT-I及其应用，即尿液长链 非编码IncRNA MALAT-I作为前列腺癌标志物的应用。
[0005] 在本发明的第一方面，提供了一种分离的lncRNAMALAT-1，所述IncRNAMLAT-I序 列为MALAT-I的全长或其片段。所述IncRNA MALAT-I序列如SEQ ID NO :1所示，其基因 ID 为FR077061 ;GenBank :BK001418. 1 ;其全长序列数据库链接为：
[0006] http： //www. ncbi. nlm. nih. gov/nuccore/BK001418g￡
[0007] http://www.ncrna.org/frnadb/detail.html? i name= FR077061&i tab = seq〇
[0008] 本发明中，所述IncRNA MALAT-I序列为MALAT-I的全长或其片段；所述片段包括 IncRNA的任意一个PCR片段，该任意一个PCR片段为PCR反应产物，因不同的PCR引物可获 得不同的PCR产物。
[0009] SEQ ID NO : 1 为：
[0010] GATCAGAGTGGGCCACTGCCAGCCAACGGCCCCCGGGGCTCAGGCGGGGAGCAGCTCTGTGGTGTGGGA TTGAGGCGTTTTCCAAGAGTGGGTTTTCACGTTTCTAAGATTTCCCAAGCAGACAGCCCGTGCTGCTCCGATTTCTC GAACAAAAAAGCAAAACGTGTGGCTGTCTTGGGAGCAAGTCGCAGGACTGCAAGCAGTTGGGGGAGAAAGTCCGCCA TTTTGCCACTTCTCAACCGTCCCTGCAAGGCTGGGGCTCAGTTGCGTAATGGAAAGTAAAGCCCTGAACTATCACAC TTTAATCTTCCTTCAAAAGGTGGTAAACTATACCTACTGTCCCTCAAGAGAACACAAGAAGTGCTTTAAGAGGCGGC GGAAGGTGATCGAATTCCGGTGATGCGAGTTGTTCTCCGTCTATAAATACGCCTCGCCCGAGCTGTGCGGTAGGCAT TGAGGCAGCCAGCGCAGGGGCTTCTGCTGAGGGGGCAGGCGGAGCTTGAGGAAACCGCAGATAAGTTTTTTTCTCTT TGAAAGATAGAGATTAATACAACTACTTAAAAAATATAGTCAATAGGTTACTAAGATATTGCTTAGCGTTAAGTTTT TAACGTAATTTTAATAGCTTAAGATTTTAAGAGAAAATATGAAGACTTAGAAGAGTAGCATGAGGAAGGAAAAGATA AAAGGTTTCTAAAACATGACGGAGGTTGAGATGAAGCTTCTTCATGGAGTAAAAAATGTATTTAAAAGAAAATTGAG AGAAAGGACTACAGAGCCCCGAATTAATACCAATAGAAGGGCAATGCTTTTAGATTAAAATGAAGGTGACTTAAACA GCTTAAAGTTTAGTTTAAAAGTTGTAGGTGATTAAAATAATTTGAAGGCGATCTTTTAAAAAGAGATTAAACCGAAG 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[0011] 在另一优选例中，所述IncRNA MLAT-I分离自人的尿液。
[0012] 在另一优选例中，所述尿液为前列腺按摩后尿液。所述尿液还包括非前列腺按摩 后尿液。
[0013] 在另一优选例中，所述IncRNA MALAT-I提取自尿液离心后的尿沉渣。
[0014] 在本发明的第二方面，提供了一种分离的MALAT-I前体IncRNA，所述的前体 IncRNA能在人细胞内剪切并表达成第一方面所述的IncRNA MALAT-1。
[0015] 在另一优选例中，所述的MALAT-I前体分离自人前列腺按摩后尿液，还可以分离 自非前列腺按摩后尿液。
[0016] 在本发明的第三方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸能被人细胞转 录成第一方面所述的IncRNA MALAT-I。
[0017] 在另一优选例中，所述的多核苷酸具有试（I)所示的结构：
[0018] Seq正向-X-Seq反向式（I)，
[0019] 式（I)中，
[0020] Seq1自为能在人细胞中表达成所述的MALAT-I的核苷酸序列；
[0021] Seqfi自为与Secte自基本上互补或完全互补的核苷酸序列；
[0022] X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向 不互补；
[0023] 并且，式⑴所示的结构在转入人细胞后，形成式（II)所示的二级结构：
[0024]
【权利要求】
1. 一种分离的IncRNA MALAT-1，其特征在于，其序列如SEQ ID勵：1所示；所述1此题八 MALAT-1为MALAT-1的全长或其片段。
2. 如权利要求1所述的IncRNA MALAT-1，其特征在于，所述IncRNA MALAT-1分离自人 的尿液。
3. -种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸能被人细胞转录成权利要求1所 述的 IncRNA MALAT-1。
4. 一种载体，其特征在于，其含有权利要求1所述的IncRNA MALAT-1或权利要求3所 述的多核苷酸。
5. 权利要求1所述的IncRNA MALAT-1在制备前列腺癌标志物中的应用。
6. 权利要求1所述的IncRNA MALAT-1在制备用于检测前列腺癌的芯片、制剂或试剂盒 中的应用。
7. -种芯片、制剂或试剂盒，其特征在于，其含有如权利要求1所述的IncRNA MALAT-1 或如权利要求3所述的多核苷酸。 8?-种IncRNA MALAT-1芯片，其特征在于，所述IncRNA MALAT-1芯片包括： 固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异 性地对应于权利要求1所述IncRNA MALAT-1所示的部分或全部序列。
9. 权利要求7所述的IncRNA MALAT-1芯片在制备用于检测前列腺癌的试剂盒中的应 用。
10. 如权利要求9所述的应用中，其特征在于，通过IncRNA MALAT-1芯片检测待测对象 的尿液中的IncRNA MALAT-1含量；所述检测步骤包括：先获得分离自待测对象尿液的RNA 样品，在所述RNA上设置标记物，将其与所述IncRNA MALAT-1芯片接触，杂交形成寡核苷酸 探针-RNA二元复合物，检测得到IncRNA MALAT-1含量。
11. 一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求8所述的IncRNA MALAT-1芯 片。
【文档编号】C12N15/63GK104498495SQ201410674678
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年11月21日 优先权日:2014年11月21日
【发明者】孙颖浩, 任善成, 王富博 申请人:上海长海医院