含有链球菌脂磷壁酸质的抗肿瘤和抗胆固醇制剂的制作方法

专利名称：：含有链球菌脂磷壁酸质的抗肿瘤和抗胆固醇制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种新的脂磷壁酸质(下称LTA-T)，包含此脂磷壁酸质并任选地含有单核因子和/或透明质酸酶的药用组合物，包括给予其抗肿瘤有效量的治疗癌症的方法，生产此新化合物和新药用组合物的方法，该新LTA-T的两种降解产物及其用途，以及从中可分离该新化合物的新链球菌菌株。
背景技术：
：脂磷壁酸质(LTAs)是一类在革兰氏阳性菌的细胞壁中发现的亲水脂物质，它从细胞膜外部穿过细胞壁伸至表面。LTAs的主要基团由一个亲水的聚(磷酸甘油)主链和一个疏水的糖脂部分组成。亲水的主链可用丙氨酸、己糖和氨基己糖替换。至于所述的糖脂主要为二己糖基甘油和某些三己糖基甘油。在亲水链的聚合度、糖苷取代的实质和程度、D-丙氨酸酯取代的程度以及脂部分的结构方面，脂磷壁酸质显示出属和种的差异(A.J.Wickenetal.，Science，187，1161-1167，(1975)，andMicrobiology，360-365，(1977)；FischerW.，Physiologyoflipoteichoicacidsinbacteria.Adv.Microb.Physiol.，29(233)233-302(1988)，FischerW.，Manns-feldT.，HagenG.，Onthebasicstructureofpoly-(glycerophosphate)lipoteichoicacids，Biochem.CellBiol.，68(1)33-43，(1990).已有报道，LTAs具有抗肿瘤活性，(EP135820；USP4,678,773；A.Yamamotoet.al.1985，Br.J.Cancer，51，739-742；andH.Usamiet.al.，Br.J.Cancer，1988，57，70-73)。LTAs从如瑞士乳杆菌(NCIB8025)，发酵乳杆菌(NCTC6991)，粪链球菌39，乳链球菌(ATCC9936)，突变链球菌AHT(A.J.Wickenet.al，1975)和酿脓链球菌SV株(ATCC21059)(EP135820，USP4,678,773，H.Usamietal.1985)分离。一种来自所述菌株的细胞制剂，M.Kanaoka等从低毒菌株酿脓链球菌SuATCC21060中分离到具有抗肿瘤活性的链球菌酸糖蛋白(SAGP)，Jp.J.CancerRes.(Gann)，78，1409-1414，(1987)。OK-432，被发现具有抗肿瘤剂的临床用途。但同时它被撤出市场。至今描述的LTAs在甘油糖脂锚带有不止一个单糖。Fischer等1988和1990已描述了不同的糖脂结构。带有单己糖基二酰基甘油糖脂作为脂质锚的LTA到目前为止没有描述。发明目的本发明的一个目的是提供具有强抗肿瘤活性的纯化的新LTA。还有一个目的是提供包含此新LTA并任选地组合有单核因子和/或透明质酸酶的药用制剂。还有一个目的是提供包括给病人施用抗肿瘤有效量的新LTA，并任选地组合使用单核因子和/或透明质酸酶的治疗癌症的方法。还有一个目的是提供降低病人血液胆固醇水平的方法，包括给这种病人施用降低胆固醇量的LTA。还有一个目的是提供生产新LTA和新药用制剂的方法。还有一个目的是提供此新LTA的两种降解产物及其用途。还有一个目的是提供能从中分离此新LTA的新链球菌菌株以及它的繁殖方法。发明详述本发明涉及一种新纯化的，可从新链球菌sp菌株DSM8747分离的脂磷壁酸质(LTA)。发现的第一种新LTA称做LTA-T。它由式I所示的规定化合物组成，具有如第3页表中给出的链长微不均匀性和脂肪酸组成。此微不均匀性是脂质大两亲物质的典型特征〔FischerW.(1993)，Molecularanalysisoflipidmacroamphiphilesbyhydrophobicinteractionchromatography，exemplifiedwithlipoteichoicacids，Anal.Biochem.，208，49-56〕。天然存在的LTA-T的准确成分不容易确定。它依赖于微生物的培养条件。本发明更特别地提供式I的脂磷壁酸质LTA-T及其盐，其中R1为氢或与磷摩尔比例为0.27-0.35的D-丙氨酰基R2为具有12、14、16或18个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸残基，n的平均值为9。LTA-T由于含有单己糖基糖脂部分而是一种新型的脂磷壁酸质。这样的单己糖基糖脂部分在其它生物体中还没有发现作为脂磷壁酸质的一部分。如下面式II所示的脂质锚为β-呋喃半乳糖基(1-3)甘油-二-R2-酯，其中R2是与甘油部分两个相邻羟基基团酯化的不同脂肪酸残基(rest)。脂肪酸残基R2来自直链、具有12、14、16或18个碳原子的饱和或单不饱和羧酸，包括饱和的月桂酸(C-12)，豆蔻酸(C-14)，棕榈酸(C-16)和硬脂酸(C-18)，以及分别在7、9、11或13位带有一个双键的相应单不饱和羧酸。其分布是不均一的，反应了在整个膜脂质中的分布。对于典型培养已发现R2的下列近似百分率C-12，饱和的ca.6.0％C-14，饱和的ca.17.0％C-14，单不饱和的(位置未知)ca.3.7％C-16，饱和的ca.33.0％C-16，可能在7-位单不饱和的ca.3.8％C-16，在顺式-9-位单不饱和的ca.11.3％C-16，在顺式-11-位单不饱和的ca.2.4％C-18，饱和的ca.10.0％C-18，可能在9-位单不饱和的ca.3.2％C-18，在11-位(顺式)单不饱和的ca.8.5％C-18，可能在13-位单不饱和的ca.1.1％亲水主链由平均10个磷酸甘油单位的聚(磷酸甘油)组成。甘油部分2位的羟基为游离的或被D-丙氨酸酯化。相对磷的取代摩尔比为0.27-0.35，相应地每分子LTA-T2.7-3.5D-丙氨酸基团。D-丙氨酸含量依赖于培养条件。磷原子的游离羟基是酸性的。在pH4.7醋酸钠缓冲液和生理盐水中，阳离子为钠离子，LTA-T可与其它带正电的离子形成盐，特别是生理上可接受的盐，如碱金属或碱土金属盐，还有重金属盐如锌或铁盐，或伯、仲、叔、季铵盐(酸加成盐)。这类其它盐为如钾、钙、铵、单-，二-，三-或四-低级烷基-，如甲基-，或乙基-，或甲基-乙基，丙基或-丁基铵盐。非生理可接受盐如重金属盐，例如铜盐可用来分离和纯化LTA-T。优选盐为钠盐，这时LTA如所述纯化。就治疗用途而言，药用组合物中带正电的离子的量要调至生理上可接受的pH，尤其约pH7或7.2。本发明涉及制备脂磷壁酸质LTA-T的方法，特征在于从链球菌(DSM8747)中分离并通过常规方法纯化。LTA-T的分离和纯化可以类似于FischerW.，KochH.U.，HaasR.(1983)，改进的脂磷壁酸质的制备，Eur.J.Biochem.，133523-530，或任何其它方法获得。例如，细胞细胞(DSM8747)悬于蒸馏水或优选缓冲液如pH3.0的柠檬酸缓冲液，并破碎如通过匀浆器和玻璃珠，优选冷却条件下。破碎细胞悬液调至约pH4.7，如用NaHCO3。该水溶性悬液在适度升高的温度下用酚抽提，例如升至约68℃。分离水相并透析几次，如对pH4.7的乙酸钠缓冲液透析，用截断值10-12RD分子量的隔膜。剩下的澄清溶液在装有PM10的膜的超滤装置中浓缩，不溶物如多糖通过离心除去。该粗提取物再除去不期望的物质如蛋白质、核酸和多糖，例如通过疏水相互作用层析(HIC)，例如通过在丙醇/乙酸钠pH4.7的溶液中上样至辛基琼脂糖凝胶柱。LTA-T用如在pH4.7乙酸钠溶液中线性梯度的丙醇洗脱。流出液根据SchnitgerH.，PapenbergK.，GanseE.，CzokR.，BücherT.，AdamH.(1959)，ChromatographiePhosphathalitgerMetaboliteeinesmenschlichenLeberpunktats，Biochem.Zentralblatt，332167187的有机磷比色测定法进行监测。LTA-T在约30-38％的丙醇浓度下被洗脱。含有LTA-T的组分对缓冲液透析，如pH4.7的乙酸钠，并用PM10的膜超滤浓缩或完全真空干燥。纯化的LTA-T或其浓缩液在-20℃贮存。通过以常规方式在复合培养基中如ToddHewitt肉汤或胰酶大豆培养基，在37℃、pH约7.2并搅拌和无通气条件下培养得到细菌细胞(DSM8747)。在对数生长期末的收集细胞，如通过离心，悬浮在如pH3的柠檬酸缓冲液的常规缓冲液中，其中它们可在低温如-20℃下贮存以进一步使用。本发明还涉及包含脂磷壁酸质LTA-T或其生理可接受盐的药用制剂，任选地组合使用单核因子和/或透明质酸酶。单核因子为例如干扰素，如α类，例如干扰素α2b、γ干扰素、细胞因子，为例如白介素，如白介素-1-α，-1-β，-1-γ、-2，-3，-4，-5，-6，-7或-8，肿瘤坏死因子，如TNF-α或β，或TGF-β-1，-β-2，-β-3，-β-5和-α。透明质酸酶为任何一种商业上可得到的，如通透酶。有用制剂为常规形式。本发明的LTA-T或药用组合物以任何常见的药用形式口服或胃肠外给药以获得疗效。这包括固体或液体单位口服剂量形式，如片剂、胶囊剂、散剂、悬液、溶液以及糖浆、透皮膏药可吸入制剂等，包括缓释制剂，和流体可注射形式如无菌的溶液和悬液。在说明书和权利要求书中使用的术语剂量形式指以单剂或多剂量施用于人或温血动物的物理上的分离单位每一单位含有与所需稀释液、载体或赋形剂相关的预测的所需量的活性物质。活性物质的数量定义为施用一个或更多这种单位产生所期望的疗效。散剂的制备是通过粉碎化合物至合适的大小并与类似粉碎的稀释剂药用载体混合，如食用的碳水化合物如淀粉。还可加甜味剂，增香剂，防腐剂，分散剂和着色剂。散剂利于吸入使用，并为此目的装入吸入器。这种用于干散剂的吸入器是技术上已知的。胶囊通过如上所述制备散剂并装入形成的明胶外壳制得。润滑剂，如滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙在填装操作前可作为佐剂加入粉末。助流剂如胶态硅酸也可加入以改善流动性质。可加入崩解剂或增溶剂以改善当胶中被摄取时的药物利用度。片剂的制备是通过制粉末混合物、颗粒化或击块制颗粒，加入润滑剂和崩解剂并压成所期望的形式。粉末混合物的制备通过适当弄碎该化合物，并与稀释剂或基质如淀粉。基糖、高岭土和磷酸氢钙等混合。粉末混合物可通过用粘合剂如糖浆、淀粉糊、金合欢胶浆或者纤维素或多聚物的溶液弄湿并通过筛网而形成颗粒。作为颗粒化的另一种方法，此粉末混合物可通过压片机得到不完全形成的预压片再破碎成颗粒。通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油可润滑颗粒防止其粘剂形成片剂的模上。润滑的混合物再压片。药物还可与自由流动的惰性载体混合，不经过颗粒化或预压片步骤而直接压片；保护包衣由片胶封闭层、糖或聚合材料包衣组成，并可提供蜡的光滑涂层。包衣可抵抗胃使活性成分在肠中释放。这些包衣中可加入染料以区分不同的单元剂量。口服液如糖浆和酏剂可以单位剂量形式制备，以使给定的量如一茶匙，含有预定量的化合物。糖浆的制备可通过将活性化合物溶于合适味道的蔗糖水溶液，而酏剂则通过使用无毒醇类如乙醇，赋形剂来制备。悬液和乳液可通过在无毒赋形剂中分散药物来配制。对于胃肠外给药，流体单元剂量形式的制备可通过将已测定量的活性物质悬浮或溶解于适合注射的无毒液体赋形剂如水溶性的，醇的，比如乙醇或油状介质。这种液体剂量单元形式可以含有增溶剂，如聚乙二醇，稳定剂和缓冲液，如柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液，以提供所需的渗透压。或者一定量的活性物质置于一个小瓶，此瓶和内容物均灭菌并封口可提供伴随的小瓶或赋形剂以在给药前混合。还可将溶液特殊制备以利于吸入，并提供吸入器。液体所用的吸入器是技术上已知的。经皮使用的散剂或糖浆可制成合适的的透皮膏药。这种膏药在技术上是已知的，如果想联合使用LTA-T与单核因子和/或透明质酸酶，这种组合可分开、同时或相继使用，或者根据上述方法共同配制成一种药用制剂。本发明还涉及通过常规方法生产包含LTA-T或其生理可接受盐并任选地含单核因子和/或透明质酸酶的药用制剂的方法。本发明还涉及一种治疗癌症的方法，包括给患有癌症、肿瘤或其恶性细胞的病人施用抗肿瘤有效量的脂磷壁酸质LTA-L或其生理上可接受的盐，以及任选含单核因子和/或透明质酸酶。用LTA-T诱导单核细胞后8小时，根据BhakdiS.，KlonischT.，NuberP.，FischerW.，Stimulationofmonokineproductionbylipoteichoicacids，Infect.Immun.，59(12)4614-4620，(1991)，andKellerR.，FischerW.，KeistR.，BassettiS.，Macrophageresponsetobacteriainductionofmarkedsecretoryandcellularactivitiesbylipoteichoicacids，Infect.Immun.，60(9)3664-3672，(1992)，的方法分别检测并发现下列生物学作用。表1</tables>在同批实验中得到的用已知酿脓链球菌和乳链球菌的LTAs诱导的值比这些数据少2-4倍。此新LTA-T优选皮下、静脉内或腹腔内以，包含0.1-20μmol/ml量的LTA-T或其生理可接受盐以及一种或多种药用载体的药用制剂的剂量单元形式给药。LTA-L的抗肿瘤有效量为例如约0.001-20mg，1-20mg/kg，优选0.01-2mg/kg，在整个治疗过程中可能需要给正常体重的病人一次或最好几次。施用的量和形式依赖于疾病的的类型和严重程度，患者的体重和一般状况，并由医生判断。此新LTA-T可以在此之前的量预防使用。如果使用透明质酸酶，使用的量为约500-5000，优选大约1000UUSP，并优选皮下。如果使用单核因子，使用的量约为0.1×106-20×106，优选约6×5mio单位，并优选皮下。8名患不同种肿瘤/癌症的病人用在生理盐水中含LTA-T1μmol/ml的溶液，经皮下一次或重复给药治疗。大多数病人还被皮下给予透明质酸酶，而且一个人还被给予α-干扰素。结果见实施例7，表2。本发明还涉及从中可分离此新LTA-T的新链球菌菌株DSM8747。此新菌株分离自恶性乳腺癌完全缓解的女性患者的丹毒。该株在链球菌属中为新的种。它被命名为链球菌PT，并据布达佩斯协定保藏于DeutscheSammlungfurMikroorganismen，Braunschweig，Germany，保藏号DSM8747，1993年11月25日。此菌株可如前所述在常规条件下培养和贮存。本发明还涉及LTA-T的新降解产物，以及通过常规方法，如碱或氢氟酸(HF)水解，进行制备的方法。这种新的降解产物如式I的脱酰基dLTA-T，其中R1和R2均为氢。该化合物通过用常规方法分裂脂肪酸和D-丙氨基获得，例如用碱如0.1MNaOH水溶液在37℃处理LTA-T约1小时。依照FolchJ，LeesM.，Sloan-Stanley，G.M.S.(1957)，从动物组织中分离纯化总脂的简单方法，J.Biol.Chem.226，497-509的方法，通过在两相系统氯仿∶甲醇∶水(1∶0.9∶0.9)间的划分(partition)，分离并纯化形成的dLTA-T。另一个新的降解产物为式II的β-呋喃半乳糖(1-3)甘油-二-R2-酯其中R2为具有12、14、16或18个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸残基，式II的单个化合物及其盐。式II的化合物通过从式I的化合物，分裂呋喃半乳糖基的6-羟基和磷酸部分的键产生，如用48％氢氟酸于2℃处理LTA-T约36小时。式II的化合物，其中R2为氢(去酰基的脂质锚)是从式I化合物产生的，如通过用0.2NNaOH在100℃处理12小时，然后用磷酸单酯酶裂解磷酸单酯。降解产物对LTA-T的鉴定和定性是有用的分析工具，并且是制备具有规定基团R2的新LTAs的有用起始原料，如通过用特定脂肪酸酯化dLTA-T，对制备带有酯化到呋喃半乳糖部分中6-羟基基团的规定亲水基团的新LTA也是有用的。下列实施例更详细地描述本发明。但它们不会作为其限制而解释。实施例1细菌菌株和培养保藏于DeutscheSammlunyfürMikroorganismenunterNo.DSM8747的革兰氏阳性菌链球菌PT分离自患恶性乳腺癌的病人丹毒。它属于链球菌群。16SRNA测序显示此菌株不能归于已知的链球菌群。它被命名为链球菌PT并具有以下生长特性形态学依剪切力，形成链的球菌有5-40单位最佳生长pH最适pH7.2；T最适37℃；微需气生长。该细菌培养在ToddHewitt肉汤(Difco，USA)中至对数生长期未。培养条件为工作液体积VR500l温床37℃pH7.2±0.1换气速率无-0.05vvm搅拌速度500rpm培养基冷却并立即离心收集细胞。细胞(每升400g湿重)悬于0.1M柠檬酸缓冲液pH3.0并在-20℃贮存以进一步使用。实施例2脂磷壁酸质LTA-T的分离和纯化不指明的话所有步骤在4℃进行。0.1M柠檬酸缓冲液pH3.0中的DSM8747细菌细胞悬液(250ml)(每升400g湿重，如实施例1所述获得)与等体积玻璃珠(BraunMelsungen，φ0.17-0.18mm)混和，并在装有CO2冷却装置的Braun匀浆器中冷却搅拌6分钟。破碎细胞悬液倾入G1玻璃滤器，剩下的玻璃珠用pH4.70.1M乙酸钠洗。收集的滤液和洗涤液用1MNaHCO3调至pH4.7。该粗悬液用等体积80∶20(v/v)酚/水在68℃抽提1小时。冷却后，在3000rpm(1800g)离心30分钟分离水相。收集上面水相，向剩下的酚相中加入等体积0.1MpH4.7的乙酸钠缓冲液并抽提，如前所述离心和收集。如果水相混浊，则在室温用酚(水体积的1/8(v/v))再抽提30分钟并如前离心。合并的水相进一步在截断分子量10-12KD的Medicell器中对0.05M乙酸钠pH4.7透析(4次5升交换至少24h)。澄清的溶液用有PM10膜(MWCO10KDa)的AmiconUltrafiltration装置浓缩，不溶物(如多糖)离心分开。粗抽提液用疏水相互作用层析(HIC)除去蛋白，核酸和多糖。为此粗LTA制剂用含15％丙醇的0.1M乙酸钠pH4.7上样到预先用相同的丙醇一缓冲液平衡的辛基-琼脂糖凝胶柱(PharmaclaLKBSweden)。分开核酸、蛋白和多糖后，LTA-T用0.1MpH4.7的乙酸钠中含线性梯度为15-55％(v/v)丙醇的溶液洗脱。流出物根据Schnitger，同上比色测定有机磷进行监测。LTA在丙醇浓度约33％时被洗脱。收集含LTA的组分并对0.05MpH4.7的乙酸钠透析，用带有PM10膜(MWCO10KDa)的Amicon超滤装置超滤浓缩至含约5μmol磷/ml。LTA-T的浓缩液贮存于-20℃。此澄清的LTA-T溶液没有污染的蛋白质(酸水解后氨基酸的HPLC显示)、核酸(准确的Gro/P比率)和碳水化合物(酸水解后无污染的糖)。它可以蒸发干燥粉未，因为该粉未形成胶粒而不在水中增溶，它在水和有机溶剂如乙醇，或稳定剂，如聚乙二醇的混合物中增溶。如实施例3所述，用氢氟酸水解后的LTA-T因其独特脂质锚而表征。实施例3结构鉴定纯化的LTA经HF水解(48％HF，36h，2℃)，亲水部分(主链的产物)和疏水部分(脂质锚)在氯仿∶甲醇∶水(1∶0.9∶0.9)中用Folch隔膜分开〔FolchJ.，LeesM.，Sloane-StanleyG.H.S.(1957)，从动物组织中分离和纯化总脂质锚的简单方法，生物化学杂志，226497-509〕。分别分析这两部分。脂质锚的核心脱酰基为部分甲基化的乙酸糖醇后通过GLC-MS进行分析。可观察到典型的1，2-二甲基-3-乙酰基-甘油和2，3，5，6-四-O-甲基-1，4-二-O-乙酰基-半乳糖醇片段形式。亲水性产物在HCl水解或碱性去丙氨酰化前后用GLL(气相液相色谱)分析。因而未检测到糖。对于分子组成，LTA用2MHCl于100℃水解2.5小时，然后用磷酸单酯酶处理以除去磷酸单酯。得到的磷，甘油，半乳糖和丙氨酸比例为1∶1.05∶0.11∶0.27，表示式I所给的建议结构〔依据FischerW.(1988)，PhysiologyofLipoteichoicaeidsinbacteria，Adv.Microb.Physiol.，29(233)233-302中描述的方法〕。LTA-T的去酰基化化合物(dLTA-T)的NMR分析得到确定的结构鉴定。NMR谱见图1。峰的鉴别在下面表2中列出表2</tables>总之，此LTA区别于其它LTAs的特征如下--β-呋喃半乳糖-(1-3)二乙酰甘油为脂质锚--非糖基化、线性、无分枝的GroP-链--平均链长10个GroP单元--脂质形式实施例4去酰基-LTA-T(dLTA-T)的制备LTA-T经温和的碱水解(0.1MNaOH，1h，37℃)。溶液用HCl调至pH3，脂肪酸用石油醚∶氯仿(4∶1)抽提4次。水溶液用NaOH中和再在截断值为2KD的管中对水透析。保留的产物为无丙氨酸酯、无脂肪酸的LTA-T，叫做dLTA-T。实施例5β-呋喃半乳糖基(1-3)甘油-二-R2-酯式II的脂质锚β-呋喃半乳糖基(1-3)甘油-二-R2-酯可在HF水解后，按实施例3略述的进行分离。由于呋喃半乳糖基-β-1-3甘油还发现是膜脂质的一部分，所以它从整个脂质制品中分离。脂质用Bligh-Dyer的方法分离〔BlighE.G.，DyerW.J.(1959，Arapidmethodoftotallipidextractionandpurification，CanJ.BiochemPhysiol，379111-9117〕，粗的脂质抽提物先用阴离子交换柱(DEAE纤维素)分级，然后用硅胶纯化。用不同的氯仿∶丙酮混合物洗脱。最终纯化用制备TLC硅胶板〔KatesM(1986)Techniquesinlipidology.InLaboratorytechniquesinbiochemistryandmolecularbiology.WorkT.S.，WorkE.(eds.)，North-Hollandpublishingcompany，Amsterdam〕。实施例6药物配制0.05MpH4.7的乙酸钠中纯化的TLA-T对生理NaCl溶液(0.9％)透析，并用生理盐水将体积调至1μmolLTA-T(基于磷含量)。溶液经滤膜(Millipore0.22μm)，过滤后，在无菌条件下将滤液以每份1ml装入无菌小瓶。这些小瓶含1μmol/mlLTA-T磷并皮下用于治疗目的。实施例7临床治疗结果患不同肿瘤/癌症的8位病人一次或重复经皮下给予生理盐水中浓度为1μmol/mlLTA-T的溶液进行治疗。多数病人还皮下给予透明脂酸酶，一位病人还给予α-干扰素。结果编入表3表3</tables><tablesid="table5"num="005"><tablewidth="843">C.H.，*1921乳癌伴有肺和纵隔转移LTA-T7/922μmolP组合使用透明脂酸酶1000NFUs.c.纵隔块部分缓冲</table></tables>1)剂量以LTA-T制剂中磷酸酯的量计算。2)透明质酸酶从CILAG获得，为透性酶。3)α-2b干扰素从ESSEXCHEMIE获得，为IntronH。缩写CR完全缓解；PR部分缓解；*出生年；PSA前列腺特异抗原；UUSP单位美国药典；P磷酸酯含量；微生物保藏用于本发明并命名为链球菌PT的微生物PT根据布达佩斯条约于1993年11月25日以DSM8747号保藏在DSM-DEUTSCHESAMMLUNGVONMIKROORGANISMENUNDZELLKULTURENGmbH，MascheroderWeg1b，D-38124Braunschweig。权利要求1.可从新链球菌PT菌株DSM8747分离的新的纯化脂磷壁酸质(LTA)。2.权利要求1式I的脂磷壁酸质LTA-T及其盐其中R1为氢或与磷的摩尔比为0.27-0.35的D-丙氨酰基，R2为具有12、14、16或18个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸残基，n的平均值为9。3.权利要求1的脂磷壁酸质，它以生理上可接受的盐的形式存在，例如由带正电荷的离子得来，如碱金属或碱土金属，或者带正电的伯、仲、叔、季铵离子(酸加成盐)，如钠、钾、钙、锌、铵、单-、二-、三-、四-低级烷基-，如甲基-或乙基-，或甲基-乙基-，丙基-或丁基-铵离子，尤其是钠离子。4.制备权利要求1的脂磷壁酸质LTA-T的方法，特征在于用常规方法从链球菌(DSM8747)中分离。5.以剂量单元形式存在的包含权利要求1的脂磷壁酸质LTA-T或其生理上可接受的盐的药物制剂。6.与α-干扰素组合使用的权利要求5的药物制剂。7.与透明质酸酶组合使用的权利要求5的药物制剂。8.与α-干扰素和透明质酸酶组合使用的权利要求5的药物制剂。9.通过常规方法生产包含权利要求1的脂磷壁酸质的药物制剂的方法。10.一种治疗癌症的方法，它包括给患有肿瘤或其恶性细胞的病人施用抗肿瘤有效量的权利要求1的脂磷壁酸质LTA-T或其生理上可接受盐。11.一种降低病人血液胆固醇水平的方法，它包括给有这种需要的病人施用降低胆固醇量的权利要求的LTA或其生理上可接受的盐。12.新链球菌PT菌株DSM8747。13.繁殖链球菌PTDSM8747的方法，其特征在于在增殖条件下生长所述细菌菌株。14.权利要求2的式I的去酰基dLTA-T或其盐，其中R1和R2均为氢，n具有所给的意义。15.式II的β-呋喃半乳糖基(1-3)甘油-二-R2-酯其中R2为具有12、14、16或18个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸部分，其单一化合物及其盐。全文摘要本发明涉及一种新的可从新链球菌DSM8747分离的脂磷壁酸质。该新的LTA叫做LTA－T。它有一个脂质锚,为呋喃半乳糖－β－1—3－甘油,在其甘油部分有酯化到两个相邻羟基基团的不同脂肪酸,和一个非糖基化并具有独特的短亲水GroP链的线性、无分枝GroP链。亲水主链由30%与D－丙氨酸酯化的仅10个磷酸甘油单位组成。本发明还涉及含此新LTA－T的药用组合物,任选地连同单核因子和/或透明质酸酶,包括施用其抗肿瘤有效量的治疗癌症的方法,生产此新化合物和新药用组合物的方法,新LTA－T的两种降解产物及其用途,以及能从中分离此新化合物的新链球菌株。文档编号C12R1/01GK1173206SQ96191668公开日1998年2月11日申请日期1996年1月24日优先权日1995年1月30日发明者彼得·特鲁格,P·罗利斯伯格尔申请人:彼得·特鲁格