菌活化方法如下:应用液体培养基对保加利亚乳杆菌菌株进行培养，培 养条件为37°C、初始pH值6.2、2 % (质量)的接种量IOml体系培养48h;
[0026] 种子液是15%甘油和85%菌液在-80°C条件下保存的菌种，以2% (质量)的量接种 于液体MRS中，37°C培养24h的培养液；
[0027] MRS培养基：蛋白陈1%(质量）、牛肉膏1%(质量）、酵母浸粉0 · 5 % (质量）、 K2PHO3O · 2 % (质量）、葡萄糖2 % (质量）、柠檬酸二铵0 · 2 % (质量）、吐温800 · Iml、MgS〇4 · 7H20 0 · 02 % (质量）、MnS〇4H20 0 · 005 % (质量）和蒸馏水，pH6 · 4-6 · 8，115°C灭菌20min。
[0028] 步骤一中嗜酸乳杆菌活化方法如下:将冷冻干燥保存的供试菌种，使用前按1%接 种量转接至MRS培养基中，37°C厌氧培养24小时，每次使用之前，各菌株均在MRS培养基上转 接两次（以便菌株活力得到充分恢复）；所述MRS培养基:蛋白胨10g、酵母提取物5g、牛肉膏 10g、葡萄糖20g、乙酸钠5g，柠檬酸二铵2g、吐温801mL、MgS〇4 · 7H20 0.58g、MnS〇4 · 4H20 0.05g、K2HP〇42g，琼脂粉17g和水lOOOmL，在121°C、lX105Pa条件下灭菌20min，灭菌前自然 pH 6.12~6.2。
[0029] 步骤一中双歧杆菌活化活化方法如下:冻干粉菌开封以后，用小牛血清溶解，接种 于TPY固体培养基上，培养条件为72h，36 ± 1°C，然后挑菌，接种于平板上，培养为72h，36 ± 1 °C，再用PYG液体培养基+菌液+30 %甘油水，-80°C冻存;所述TPY培养基:蛋白胨15. Og、酵母 粉2.0g、葡萄糖20.0g、可溶性淀0.5g、氯化钠5.0g、5%半胱氨酸10 .OmL、西红柿浸出液 400.0 mL、吐温801. OmL、肝提取液80.0 mL、琼脂20.0 g和蒸馏水520.0 mL，pH7.0;所述PYG液体 培养基：蛋白胨20.0 g、葡萄糖5.0、酵母浸10.0 g、氯化钠0.08g、半胱氨酸盐酸盐0.5g、氯化 钙0·008g、硫酸镁0·008g、磷酸氢二钾0·08g和碳酸氢钠0·4g，pH值7· 2±0· I(25°C)。
[0030] 采用下述试验验证发明效果
[0031] 感官评价
[0032] 1.品尝项目
[0035] 2、评分标准
[0036] 评分标准：由品尝小组（10个经验丰富的人员)进行对需品尝的饮品进行一系列考 察评价，以下是考察项目（总3项)与评分标准(总分10分），见表2。
[0037]表2感官评价评分标准
[0039] 结果见表3:
[0042]由表3可知，本发明的大豆乳清饮料感官上品质上优良，从色泽，滋、气味，形态方 面均受到测试者的青睐，综合评价高，因此，本发明的大豆乳清饮料的品质个方面较佳。
【主权项】
1. 一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，其特征在于该方法是按下述步骤进行 的： 步骤一、选择植物乳酸菌、酿酒酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌中三种 或者三种以上，分别活化后培养成菌悬液，然后混合，得到复合菌液； 步骤二、大豆乳清水经过滤筒进行压滤过滤得到培养液，置于发酵罐中，所述过滤筒的 过滤器孔径在2_以内； 步骤三、将复合菌液以2%-10% (质量)接种量在发酵罐中，在20°C~40°C条件下培养 10h~40h，即得到大豆乳清饮料。2. 根据权利要求1所述一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，其特征在于步骤 一选择植物乳酸菌、酿酒酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行复配。3. 根据权利要求2所述一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，其特征在于培养 的菌悬液按植物乳酸菌、酿酒酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌质量比为2: 0.5:1:0.5:0.5或1:1:1:1:1的配比混合得到复合菌液。4. 根据权利要求1所述一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，其特征在于步骤 一中植物乳酸菌活化方法如下:冷冻干燥菌粉加入lml经杀菌的MRS予以溶解呈悬浮液，吸 取菌液0.1ml至事先配制好装有5mlMRS的小试管中，于37°C静置培养24小时，取0.1ml至 5ml新鲜的MRS肉汤，于37°C静置培养5~7h; 所述MRS培养基：蛋白陈1 % (质量）、牛肉膏1 % (质量）、酵母浸粉0.5% (质量）、K2PH〇3〇 · 2 % (质量）、葡萄糖2 % (质量）、柠檬酸二铵0 · 2 % (质量）、吐温80 0 ·lml、MgS04 · 7H200 · 02 % (质量）、MnS〇4H20 0 · 005 % (质量）和蒸馏水，pH值6 · 4-6 · 8，115°C灭菌20min。5. 根据权利要求1所述一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，其特征在于步骤 一中酿酒酵母菌活化方法如下:将冰箱保存的种子接入马铃薯葡萄糖液体培养基中，在28 °C、120r/min的摇床中振荡培养24h;马铃薯葡萄糖液体培养基：马铃薯200g、蔗糖15~20g、 琼脂20~30g和蒸馏水1000ml。6. 根据权利要求1所述一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，其特征在于步骤 一中保加利亚乳杆菌活化方法如下:应用液体培养基对保加利亚乳杆菌菌株进行培养，培 养条件为37°C、初始pH值6.2、2 % (质量)的接种量10ml体系培养48h; 种子液是15%甘油和85%菌液在-80°C条件下保存的菌种，以2% (质量）的量接种于液 体MRS中，37°C培养24h的培养液； MRS培养基：蛋白陈1% (质量）、牛肉膏1% (质量）、酵母浸粉0.5% (质量）、K2PH〇3〇.2% (质量）、葡萄糖2%(质量）、柠檬酸二铵0.2%(质量）、吐温80 0.1ml、MgS〇4*7H20 0.02% (质量）、MnS〇4H20 0.005% (质量)和蒸馏水，pH6.4-6.8，115°C灭菌20min。7. 根据权利要求1所述一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，其特征在于步骤 一中嗜酸乳杆菌活化方法如下：将冷冻干燥保存的供试菌种，使用前按1%接种量转接至 MRS培养基中，37°C厌氧培养24小时，每次使用之前，各菌株均在MRS培养基上转接两次； 所述MRS培养基:蛋白胨10g、酵母提取物5g、牛肉膏10g、葡萄糖20g、乙酸钠5g，梓檬酸 二铵2g、吐温80lmL、MgS〇4.7H20 0.58g、MnS〇4.4H20 0.05g、K2HP〇42g，琼脂粉 17g和水 1 OOOmL，在121°C、1X105Pa条件下灭菌20min。灭菌前自然pH6· 12~6.2。8. 根据权利要求1所述一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，其特征在于步骤 一中双歧杆菌活化活化方法如下:冻干粉菌开封以后，用小牛血清溶解，接种于TPY固体培 养基上，培养条件为72h，36±1°C，然后挑菌，接种于平板上，培养为72h，36±1°C，再用PYG 液体培养基+菌液+30%甘油水，_80°C冻存； 所述TPY培养基:蛋白胨15.0g、酵母粉2.0g、葡萄糖20.0g、可溶性淀0.5g、氯化钠5.0g、 5 % (质量）半胱氨酸10.OmL、西红柿浸出液400.OmL、吐温80 1.OmL、肝提取液80.OmL、琼脂 20 · 0g和蒸馏水520 ·OmL，pH7 · 0; 所述PYG液体培养基：蛋白胨20.0g、葡萄糖5.0、酵母浸10.0g、氯化钠0.08g、半胱氨酸 盐酸盐0.5g、氯化钙0.008g、硫酸镁0.008g、磷酸氢二钾0.08g和碳酸氢钠0.4g，pH值7.2 土 0.1(25°〇〇9.根据权利要求1所述一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，其特征在于步骤 一中活化后的菌体加入生理盐水或磷酸缓冲液后，用接种环刮菌苔，震荡均匀得到菌悬液。
【专利摘要】本发明公开了一种复合生物技术制作大豆乳清饮料的方法，属于饮品领域。本发明解决了现有大豆乳清饮料口感不佳的技术问题。本发明的方法是选择植物乳酸菌、酿酒酵母菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌分别活化后配制成菌悬液，混合，得到复合菌液，将大豆乳清水经过滤筒进行压滤过滤得到培养液，置于发酵罐中，所述过滤筒的过滤器孔径在2mm以内，然后将得到的复合菌液以3％～6％(质量)接种量在发酵罐中，在35℃～40℃条件下培养35h～40h，即得到大豆乳清饮料。本发明方法制备的复合法菌种法制成的大豆乳清饮料营养丰富，进一步提高了饮料的风味，更适合大众口感。
【IPC分类】A23C11/10
【公开号】CN105432799
【申请号】CN201510990287
【发明人】许慧, 孙树坤, 陈昊, 郑环宇, 朱秀清
【申请人】国家大豆工程技术研究中心
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年12月25日