专利名称：石杉碱甲及其衍生物或其盐的注射用缓释微球及其制备方法
技术领域：
本发明涉及石杉碱甲及其衍生物或其盐的注射用缓释微球及其制备方法。
石杉碱甲(Huperzine A)，化学名为(5R，9R，11E)-5-氨基-11-亚乙基-5，6，9，10-四氢-7-甲基-5，9-亚甲环芳辛并-2(1H)-吡啶酮，是从中草药千层塔[Huperzia serrata(Thunb)Thev]中提取得到的酚性部分中获得的生物碱，是一种高效、低毒和可逆性的乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)。1993年美国FDA批准其作为类胆碱能剂。据报导，它可以用来治疗老年性痴呆病。科研人员并对其结构进行改造，发现它的一些衍生物也具有相似的功效。在本发明中它们分别是如下结构 其中，结构式(I)即为石杉碱甲，经过检索发现石杉碱甲的制剂有片剂、胶囊剂、透皮吸收剂、注射剂、透皮控释帖片等，但至今没有发现它的缓释微球。现有的石杉碱甲剂型，不管是口服制剂、注射剂还是透皮吸收剂，因为石杉碱甲其生物半衰期较短，故其在血液中的生物利用度偏低且副作用较大。副作用主要表现为头昏、恶心、多汗、便秘、口干、静坐不能、焦虑。呕吐。肌肉震颤、心率变化、瞳孔变化等。当剂量超过有效剂量时，副作用随剂量增大而增多。因此，迫切需要开发一种新型制剂，从而降低石杉碱甲毒副作用，提高其生物利用度，同时减少给药次数，方便患者用药。
本发明的目的就是提供一种如通式(1)所表述的石杉碱甲及其衍生物或其盐的注射用缓释微球，这种新剂型能够延长药物作用时间、减少用药次数、提高石杉碱甲及其衍生物的生物利用度，降低该药物的毒副作用。
本发明的另一个目的是提供上述石杉碱甲及其衍生物注射用缓释微球的制备方法。
本发明所述的石杉碱甲及其衍生物的缓释微球直径为1-250μm，是由微球总重量0.2-50％(w/w)的石杉碱甲及其衍生物和微球总重量50-99.8％(w/w)的分子量在5000-1000000道尔顿的可生物降解的高分子药用辅料组成。其中所述的可生物降解的高分子药用辅料选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羟基丁酸酯、聚乳酸-聚羟乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚邻酯、聚内酯、聚酐、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羟乙酸-聚乙二醇其中的一种；优选聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乳酸-聚羟乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物，最佳为聚丙交酯-乙交酯，分子量为12000-15000道尔顿；丙交酯-乙交酯的聚合比例为40∶60-60∶40。
另外本发明所述的石杉碱甲或其衍生物也包括它们的盐，如盐酸盐、醋酸盐、乳酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、硫酸盐等。
本发明所述的微球可以采用微球的常规制备方法制得，如采用乳化分散法、喷雾干燥法和溶剂挥发法，优选喷雾干燥法。当用乳化分散法制备本发明的微球时，用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸把石杉碱甲或其衍生物和可生物降解的药用辅料溶解配制成有机相，其中药用辅料在有机溶剂中的重量体积百分数为1-30％，有机相采用的乳化剂为HLB＝4.5～6.0的非离子型乳化剂，用量为有机相的0.01-12％；另外用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠水溶液配制连续水相，其中它们在水相中的重量百分数为0.01-10.0％，水相中的乳化剂为HLB＝14.0-15.5的非离子型乳化剂，用量为水相的0.01-12％；有机相与水相的体积比为1∶4-100；将有机相通过细管慢慢注入到连续相中，充分乳化后，过筛分离所形成的微球，干燥即得。当采用溶剂挥发法时，是在分散相通过细管慢慢注入到连续相中充分乳化后，减压挥发溶剂，离心分离得到所形成的微球，干燥即得。
当采用喷雾干燥法制备石杉碱甲或其衍生物的缓释微球时，是用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸把石杉碱甲或其衍生物和可生物降解的药用辅料充分溶解配制成有机溶液；过滤，喷雾干燥制成微球。
本发明所述的石杉碱甲或其衍生物的微球是将制好的微球无菌粉末先在无菌的0.9％的生理盐水溶剂中混悬，均匀后肌注来给药的。以石杉碱甲A剂量为400μg/kg给兔子肌肉注射，28天内，血药浓度至少为0.3ng/ml，最大量不超过20ng/ml。以石杉碱甲A剂量为200μg/kg给狗作肌肉注射，42天内，血药浓度至少为0.3ng/ml，最大量不超过20ng/ml。
以下将通过实施例来进一步说明本发明所述的石杉碱甲及其衍生物的微球的制备方法和缓释效果。
实施例1将100mg石杉碱甲A、200mg聚丙交酯-乙交酯溶于3ml二氯甲烷中，用针筒在激烈搅拌下将其滴至装有300ml内含3.5Ghlb＝14乳化剂的10％PVA的三颈瓶中，充分乳化1小时后，在30℃0.03MPa的压力下，挥发溶剂1.5小时，离心分离，用蒸馏水洗反应物三次，在30℃真空烘箱内烘干，用环氧乙烷在30℃灭菌48小时，确保残留环氧乙烷含量在5ppm以下，灌装。
实施例2称取石杉碱甲A100mg，聚丙交酯-乙交酯(丙交酯∶乙交酯＝50∶50)，2.0g于小烧杯中，加二氯甲烷31.5ml，电磁搅拌至充分溶解，用微孔滤膜过滤，采用喷雾干燥法制备微球，测得粒径5-80μm，灭菌，分装，进行动物体内释放试验，试验对象为家兔，剂量为400μg/kg，微球混悬于生理盐水中，肌注给药，在1到28日内，取血，HPLC-MS检测，血浓为1-5ng/ml。
实施例3称取石杉碱甲100mg，聚丙交酯-乙交酯(丙交酯∶乙交酯＝60∶40)，4.0g于小烧杯中，加二氯甲烷41ml，电磁搅拌至充分溶解，采用喷雾干燥法制备微球，测得粒径1-50μm，平均粒径13.26μm，灭菌，分装，对狗进行体内释放试验，石杉碱甲A剂量为200μg/kg，微球混悬于生理盐水中，肌注给药，在1到42日内，取血，HPLC-MS检测，血浓为0.5-5ng/ml。
实施例4将石杉碱甲100mg，聚丙交酯-乙交酯(丙交酯∶乙交酯＝50∶50)1.0g共置于小烧杯中，加冰醋酸22ml，电磁搅拌至充分溶解，采用喷雾干燥法制备微球，测得粒径1-100μm，灭菌，分装，体外模拟释放试验20天。
实施例5将石杉碱甲500mg及1000mg的聚丙交酯-乙交酯(丙交酯∶乙交酯＝50∶50)溶于10ml二氯甲烷并冷却至15℃，另以400ml内含0.01mol/L三羟甲基氨基甲烷和0.01％聚乙烯醇的水溶液(pH＝8.0)作为连续水相，将分散相通过细管慢慢注入到连续相中，在15摄氏度用乳化器乳化15分钟，然后加1600ml，15℃的蒸馏水，用磁力搅拌器搅拌20分钟，再在抽真空状态下搅拌15分钟，过筛，低压冻干即得1-10微米的微球。
实施例5称取石杉碱甲100mg，聚乳酸-聚羟乙酸，4.0g于小烧杯中，加二氯甲烷41ml，电磁搅拌至充分溶解，采用喷雾干燥法制备微球，测得粒径1-50μm，平均粒径13.26μm，灭菌，分装，实施例6将石杉碱甲100mg，聚乳酸1.0g共置于小烧杯中，加冰醋酸22ml，电磁搅拌至充分溶解，采用喷雾干燥法制备微球，测得粒径1-100μm，灭菌，分装。
实施例7将100mg石杉碱甲A、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯200mg溶于3ml二氯甲烷中，用针筒在激烈搅拌下将其滴至装有300ml内含3.5Ghlb＝14乳化剂的10％PVA的三颈瓶中，充分乳化1小时后，在30℃0.03MPa的压力下，挥发溶剂1.5小时，离心分离，用蒸馏水洗反应物三次，在30℃真空烘箱内烘干，用环氧乙烷在30℃灭菌48小时，确保残留环氧乙烷含量在5ppm以下，灌装。
实验例1 石杉碱甲微球的体外释放试验。
实验样品根据本发明实施例2、3、4所述的方法制备的微球。
实验试剂一定PH值的缓冲溶液(4.0、5.5)。
实验仪器恒温振荡器、离心机。
实验条件温度37±1℃，转速30rp/分钟。
实验方法精密称取实验样品约10mg置于容积为15ml的具盖塑料离心管中，加5ml释放介质(PH＝4和5.5磷酸缓冲溶液)置于恒温振荡器中，保持一定的温度和转速按时取样。
取样方法3600转条件下离心50min，精取3ml溶液，再补加3ml的释放介质，取出液用HPLC检测。
取样时间点(天)0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20。
其中、按实施例2、3、4所述的方法制备的微球在不同PH值的条件下体外释放效果图分别见附
图1、2、3试验结果石杉碱甲控释微球体外释放试验结果表试验结果石杉碱甲控释微球体外释放试验结果表
权利要求
1.一种如通式(1)的石杉碱甲及其衍生物或其盐的缓释微球，其特征在于它由微球重量的0.2-50％的石杉碱甲及其衍生物或其盐和微球重量的50-99.8％的分子量范围在5,000-1,000,000之间的可生物降解的药用高分子辅料组成，其中和其成盐的酸为盐酸、醋酸、磷酸、硫酸、乳酸、柠檬酸。
2.按照权利要求1所述的缓释微球，其中所述的石杉碱甲及其衍生物或其盐为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)化合物或其盐，其中与其成盐的酸为盐酸、醋酸、磷酸、硫酸、乳酸、柠檬酸。
3.按照权利要求1或2所述的缓释微球，其中所述的药用高分子辅料选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羟基丁酸酯、聚乳酸-聚羟乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚邻酯、聚内酯、聚酐、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羟乙酸-聚乙二醇其中的一种或其中的两种或两种以上混合。
4.按照权利要求3所述的缓释微球，其中所述的药用高分子辅料选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乳酸-聚羟乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物其中的一种或其中的两种或两种以上的混合。
5.根据权利要求4所述的缓释微球，其中药用高分子辅料为聚丙交酯-乙交酯。
6.按照权利要求5所述的缓释微球，其中所述聚丙交酯-乙交酯其分子量在12000-15000道尔顿之间。
7.按照权利要求5或6所述的缓释微球，其中聚丙交酯-乙交酯中丙交酯和乙交酯聚合比例在40∶60-60∶40之间。
8.一种石杉碱甲或其衍生物的缓释微球的制备方法，它是采用乳化分散法制成，其特征在于用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸把石杉碱甲和可生物降解的药用辅料溶解，其中药用辅料在有机溶剂中的重量体积百分数为1-30％，有机相采用的乳化剂为HLB＝4.5～6.0的非离子型乳化剂，用量为有机相的0.01-12％；另外用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠水溶液，配制连续水相，其中它们在水相中的重量百分数为0.01-10.0，水相中的乳化剂为HLB＝14.0-15.5的非离子型乳化剂，用量为水相的0.01-12％；将分散相通过细管慢慢注入到连续相中，乳化，然后过筛，干燥即得。
9.一种石杉碱甲或其衍生物的缓释微球的制备方法，它是采用溶剂挥发法制成，其特征在于用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸把石杉碱甲和可生物降解的药用辅料溶解，其中药用辅料在有机溶剂中的重量体积百分数为1-30％，有机相采用的乳化剂为HLB＝4.5～6.0的非离子型乳化剂，用量为有机相的0.01-12％；另外用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠水溶液，配制连续水相，其中它们在水相中的重量百分数为0.01-10.0，水相中的乳化剂为HLB＝14.0-15.5的非离子型乳化剂，用量为水相的0.01-12％；将分散相通过细管慢慢注入到连续相中，充分乳化，然后减压挥发溶剂，离心分离，干燥即得。
10.一种石杉碱甲或其衍生物的缓释微球的制备方法，它是采用喷雾干燥法制成，其特征在于用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸溶解0.2-50％石杉碱甲及其衍生物和50-99.8％的分子量在5000-1000000道尔顿的可生物降解的高分子药用辅料，搅拌充分溶解后，过滤，采用喷雾干燥法制得微球。
全文摘要
本发明提供了一种石杉碱甲及其衍生物或其盐的新剂型注射用缓释微球，它是由微球重量的0.2－50％的石杉碱甲或其衍生物和微球重量的50－99.8％的可生物降解的分子量为5,000－1,000,000道尔顿的药用高分子辅料组成。它可以采用乳化分散法、溶剂挥发法和喷雾干燥法制备。该缓释微球能够延长药物作用时间、减少用药次数、提高石杉碱甲及其衍生物的生物利用度，降低该药物的毒副作用。
文档编号A61K9/19GK1393220SQ0111995
公开日2003年1月29日 申请日期2001年7月3日 优先权日2001年7月3日
发明者刘万卉, 宋吉伦, 刘珂 申请人:山东绿叶制药股份有限公司