专利名称：含有鞘糖脂的功能性食品或化妆品及其制造方法
技术领域：
本发明涉及含有鞘糖脂的功能性食品或化妆品及其制造方法。
过去，这些以鞘糖脂为中心的神经酰胺相关物质，是从牛脑等中提取并供给的。然而，自1986年发生疯牛病之后，从对人感染的可能性考虑，供应量急骤减少，产生了向安全的植物起源的神经酰胺相关物质发展的回归现象。
最近，基于来自植物的神经酰胺相关物质其效果并不逊色于来自动物的，而且没有任何副作用也没有毒性，因此从植物原料中提取神经酰胺相关物质的研究非常活跃。迄今，已经知道来自植物的鞘糖脂，尤其是其中作为糖基神经酰胺是来自于米(Agric.Biol.Chem.，49，2753(1985))及米糠(特开昭62-187404号公报，特开平11-279586号公报)、小麦(Agric.Biol.Chem.，49，3609(1985)、特表平6-507653号公报)、大豆(Chem.Pharm.Bull.，38(11)，2933(1990)、特开平7-2683号公报)等谷物及豆类的。
迄今，神经酰胺的摄取方法，基本上都是添加在皮肤化妆料、养发化妆料、浴液等中被皮肤吸收。然而，近年报道通过每天口服20mg含3质量％的来自小麦的神经酰胺的小麦提取物，摄取1个月，皮肤的保水功能得到改善(Fragrance Journal，23(1)，81(1995))，故作为食用化妆品口服而引人注目。
另外，最近，化妆品方面，已有配合了动物(马)、发酵(酵母)、合成的神经酰胺的化妆品销售。然而，来自植物的神经酰胺，由于安全性高，故印象好，以其为特征的化妆品也在大量销售。
可是，作为为了获得来自植物的鞘糖脂的植物原料，到目前为止，可利用的限定于谷类、豆类，它们的鞘糖脂含有量并不那么多，均为0.01质量％左右。而且，这些植物原料均只是作为人类食用，提取鞘糖脂后的残渣也就失去了作为食品的价值。这样，就存在着为了提取极少的鞘糖脂成分而使大量的食品原料失去其作为食品的价值的植物原料问题。另一方面，展望食品加工业行业，在制造以魔芋为原料的食品中的副产物魔芋粉尘，尽管一年要产生3,000～4,000吨，可是由于其特有的辣嗓子味与刺激臭味，虽然一部分已作为肥料、混凝土等的增粘剂利用，但作为食品仍是完全没被利用的资源。另外，棉籽油粕是压榨棉籽获取棉籽油时产生的副产物，直到大约10年前是作为植物性蛋白质饲料被利用，而近年来，作为用于提高牛奶脂肪率的高能饲料，直接提供棉籽的农户增多，可望提高其利用价值。
本发明，作为面向化妆品、食品方面的功能性材料，涉及引人注目的含有来自植物原料的鞘糖脂的功能性食品或化妆品，其目的是提供关于在由过去所用的动物组织提取的方法中指出较多的、制品安全性方面没有什么问题，且虽然是来自植物原料的提取物，但是使用迄今为止往往没有作为食品的价值的原料的功能性食品及化妆品。
即，本发明的第一方案是以含有来自芋类或油粕的鞘糖脂为特征的功能性食品，芋类优选魔芋。
本发明的第二方案是含有鞘糖脂及植物甾醇的功能性食品，鞘糖脂优选从芋类或油粕中提取的提取物，芋类优选魔芋。
本发明的第三方案是以含有来自芋类或油粕的鞘糖脂为特征的化妆品，芋类优选魔芋。
又，本发明的第四方案，要旨是鞘糖脂含有物、功能性食品或化妆品的制造方法，其特征是向芋类或油粕中添加有机溶剂，提取鞘糖脂。
本发明中作为原料使用的植物原料，只要是甘薯、马铃薯、芋头、山药、魔芋、家山药等芋类及棉籽油粕、菜籽油粕、椰子油粕、棕榈油粕等油粕，则可以用任何物质，既可以直接用，也可以通过干燥、磨碎、加热等操作进行加工后使用。这些之中作为优选的例子可列举魔芋，特别优选使用大量废弃的、价廉易得的魔芋粉尘。
本发明用的鞘糖脂，例如，可从上述的植物原料，通过使用有机溶剂由以下提取操作来获得。
作为提取溶剂所使用的有机溶剂，只要不是在提取中与原料及鞘糖脂反应损害本发明的效果，则任何有机溶剂都可使用。而且，可以单独使用一种溶剂，也可以混合使用几种溶剂。作为这样的有机溶剂，例如，可列举甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、叔丁醇等醇类，乙二醇、丙二醇、丁二醇、丙三醇等多元醇，丙酮、甲乙酮等酮类，醋酸甲酯、醋酸乙酯等酯类，四氢呋喃、二乙醚等醚类，二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿等卤代烃类，己烷、戊烷、石油醚等脂肪族烃类，甲苯等芳烃类，聚乙二醇等聚醚类、吡啶类等。这些之中，作为优选的例子可列举甲醇、乙醇、丙酮、己烷，最优选的例子可列举甲醇、乙醇。另外，在用这些极性有机溶剂进行提取时，为了提高提取效率，例如可以在不损及本发明的效果范围内，加入水、表面活性剂等添加物。
提取所使用有机溶剂的量，相对于成为原料的植物，优选1～30倍左右的量，更优选1～10倍左右的量。有机溶剂的使用量不在该范围以下，则便于溶剂更遍及全部原料中，可更充分地进行提取，即使添加超过该范围量的溶剂也并不影响提取量，因此在不超出该范围的条件下，可减轻后边浓缩工序中的除去溶剂作业的负担。
提取温度取决于所使用溶剂的沸点，在使用甲醇、乙醇时，优选为室温～70℃，更优选为室温左右～60℃的范围。提取温度不在该范围以下，可进一步提高提取效率，即使施加该范围以上的温度，对提取效率也没有多大影响，因此在不超过该范围的条件下可减少能量消耗。
提取时间为10分钟～24小时，优选1～10小时，提取时间不少于该范围时，可更充分地进行提取，即使超过该范围由于提取量不见增大，故可在不超过该范围的条件下更短时间地进行提取。
再者，提取操作并不限定于只1次的分批操作。在提取后的残渣中再添加新鲜的溶剂，就可进行提取操作，也可以使提取溶剂多次与提取原料接触。即，作为提取操作也可以使用分批操作、半连续操作、逆流式多级接触操作的任一种方式。另外，也可以使用索克斯累(Soxhlet)提取等公知的提取方法。
然后，分离除去提取残渣，分离的方法没有特殊限制，例如，可以用吸滤、压滤机、挤浆机、倾析器、离心分离器、过滤离心机等公知的方法。
把这样获得的提取液送到浓缩工序为优选，浓缩方法没有特殊限制，例如，可以用蒸发器之类的减压浓缩装置和蒸发机(大川原制作所)之类离心式薄膜真空蒸发装置，或经加热除去溶剂进行浓缩。
上述浓缩物可以直接使用，但在需要继续除去杂质类，进一步提高纯度时，可用常法精制。例如，用水洗、己烷洗、通过硅胶柱和树脂柱、反相柱等的方法，利用极性不同的溶剂的分配、重结晶法等。特别是在需要获得高纯度的鞘糖脂时，优选在用碱性溶液处理后，再用氯仿和乙醚等进行分配，分出有机层进行浓缩，再用硅胶色谱法分离出鞘糖脂。
以下，是本发明所得的浓缩物中的鞘糖脂的分析方法，作为最简便的分析方法可列举薄层色谱法。鞘糖脂，其中，糖基神经酰胺由于已是市售品，所以以此为标准，使用硅胶薄层板，使用氯仿-甲醇系等合适的溶剂体系使之展开，用浓硫酸和蒽酮试剂等使之显色，可容易地判断上述浓缩物中高含量地存在着鞘糖脂。此外，可用高速液相色谱法、各种色谱-质谱分析法等常用方法来判断富含鞘糖脂。
本发明中的所谓功能性食品，是指经口摄取、对选自皮肤保湿、改善皮肤粗糙、美肤、特异反应性皮炎、过敏性皮炎、干癣、长疮、皮肤老化、养发、生发、抗癌、抗艾滋病、高血压症、高胆固醇症、动脉硬化等中的1种或多种有效果的食品。本发明的功能性食品可直接摄取浓缩液，但为了容易使用，与在食品方面和/或饮料方面被允许的载体和/或稀释剂进行混合，例如制成粉末、片剂、胶囊剂、凝胶、水分散液、乙醇溶液、食用油溶液的形态为优选。
作为用于粉末、片剂、胶囊剂的载体，优选糊精、环糊精、马铃薯淀粉、玉米淀粉、乳糖等。作为用于凝胶的载体，优选明胶、琼脂、古柯豆胶、阿拉伯胶、魔芋甘露聚糖等。用于水分散液的水没有特殊限制，但用温泉水和深海水等为好。在不损害本发明的范围内可以含有糖类和氨基酸、无机盐类，还可以是果汁和碳酸水。为了有效地分散本发明的浓缩物，优选在水分散液中添加乳化剂。作为该乳化剂，例如，可列举蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、大豆卵磷酯等。乙醇溶液的乙醇优选使用酿造醇，对其浓度没有特殊限制。用于食用油溶液的食用油没有特殊限制，可以使用大豆油、菜籽油、橄榄油、胡麻油、红花油、小麦胚芽油等。另外，为了有效地分散本发明的浓缩物，食用油中可使用乳化剂。作为该乳化剂可列举大豆卵磷酯、蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯等。
经口摄取的方法，可以单独摄取上述形态的本发明功能性食品，也可以混合在食品和/或饮料中摄取。该食品和/或饮料没有特殊限制，例如，可列举面包、面条、荞麦面条、米饭等作为主食的食品，饼干、点心、果冻、布丁、糖果、口香糖、酸牛奶等的糕点类，清凉饮料水、酒类、营养饮料、咖啡、茶、牛奶等的饮料。另外，为了促进效果，还可以加入维生素类、骨胶原、三十碳烷、大豆卵磷脂、植物甾醇类、透明质酸、山梨糖醇、甲壳质、壳聚糖、葡萄糖胺、烟酸、烟酰胺、中亚玉米提取物、多酚类、辅酶Q10、苉二烯醇(ピクノジエノ-ル)、深海水等。这些之中，加入植物甾醇，对皮肤的保湿、特异反应性皮炎等的效果高而优选。
本发明使用的植物甾醇，只要是从植物中提取的，任何的都可使用。具体地说，可以用在制造米糠油、棉籽油、大豆油等时生成的脱臭渣油等的废弃物，也可以从魔芋粉尘和甘蔗糖厂废弃物中提取。另外，也可以单独使用β-谷甾醇、菜籽甾醇、豆甾醇、谷二氢睾醇(シトスタノ-ル)、菜籽二氢睾醇(カンペススタノ-ル)、豆二氢睾醇(スチグマスタノ-ル)及它们的衍生物，也可以将不少于2种混合使用。作为衍生物，可以是人工合成的，也可以是天然的，只要不损害本发明的效果，任何的都可以使用，优选糖键合的甾醇糖苷、酯化物、具有酰胺键的化合物等。
本发明使用的植物甾醇可用众所周知的方法来获得。作为代表性的例子，可列举在制造大豆油过程中的脱臭工序中，在将水蒸汽蒸馏油脂时馏出的脱臭渣油进行碱处理后，加入己烷等的有机溶剂进行提取，加入丙酮等溶解度低的溶剂进行晶析的方法。
另外，作为食品用的植物甾醇，市售产品(エ-ザイ公司商品名为植物甾醇F，筑野食品工业公司等制)也可在本发明中使用。
本发明中，当与鞘糖脂同时摄取植物甾醇时，其鞘糖脂可以是合成、发酵、来自动植物的。但从作为食品利用的观点看，优选安全性高、已被食用过的、来自植物的鞘糖脂。来自植物的鞘糖脂只要是从食用植物中提取的提取物，则可用任何的，优选的可列举从小麦、小麦糠、大麦、米、米糠、玉米等谷类，大豆等豆类，菠菜、油菜、蔓青等绿黄色蔬菜，甘薯、马铃薯、芋头、山药、魔芋、家山药等芋类，棉籽油粕、菜籽油粕、椰子油粕、棕榈油粕等油粕中提取的提取物。更优选的是从芋类或油粕中提取的提取物。其中，从魔芋中提取的鞘糖脂效果高，最优选。
把鞘糖脂及植物甾醇混合于其他的食品和/或饮料中时，它们的含量，随使含有的食品和食品摄取量的不同而异，故不能一概地规定，但可以以这些物质在体内的摄取量的方式表示。优选鞘糖脂一天的摄取量为1μg～100g，植物甾醇一天的摄取量优选为1mg～1000g，因此要调整食品中的含量使之成为这样的摄取量。
然后，为了把从植物中提取的鞘糖脂含有物加工成粉末，用冻结干燥法、喷雾干燥法、真空干燥法等将所得含有物进行干燥，再根据需要，例如用研钵、样磨、快速磨、渗合机、混合机等进行粉碎而得。有时粉末会带粘性，这种情况在不损害本发明效果的程度下可添加促进粉末化的载体。作为载体，例如可以用玉米淀粉、马铃薯淀粉、糊精、环糊精、小麦粉、面包粉、食盐、沸石、滑石、牡蛎壳等。
为了加工成片剂，可采用将上述所得粉末直接导入轧片机进行轧片的方法。在不损害本发明效果的范围内，轧片时也可添加粘结剂。
为了加工成胶囊，可在过去公知的医药用或食品用胶囊中导入上述所得的粉末和/或溶液状物。胶囊只要不损害本发明的效果可以用任何的。
为了加工成凝胶，在不损害本发明效果的范围内可以用过去公知的任何方法。例如，可以用将所得鞘糖脂含有物分散和/或溶解于水中后，添加过去公知的凝胶化剂、增粘多糖类等的方法。作为凝胶化剂，可优选明胶和琼脂等食品中所用的物质。
为了制造水分散液，可将鞘糖脂导入到规定量的水中进行搅拌，或在不损害本发明效果的范围内进行超声波处理，也可添加过去公知的乳化剂、分散剂促进分散。
对于乙醇溶液，由于鞘糖脂可溶于乙醇，故可以直接溶解于乙醇中来得到。为了防止沉淀的精制和悬浮，可在不损害本发明效果的范围内添加稳定剂。
对于食用油溶液，由于鞘糖脂含有物可溶于食用油，故可以直接溶解于食用油来得到。而，溶解困难时，在少量的大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂等中溶解后，如果在食用油中溶解，则可简单地调制食用油溶液。为了防止沉淀的精制和悬浮，可在不损害本发明效果的范围内添加稳定剂等。另外，此时，稍微加热降低食用油的粘度可促进溶解。
在本发明的功能性食品中，使用的食用油，只要是食用的油，则没有特殊限制，例如，可列举猪油、牛油、鲸油、鱼油、黄油等动物性油脂，菜籽油、大豆油、橄榄油、米油、蓖麻油、椰子油等植物性油脂以及赋予功能性的合成油、混合油。这些可以使用一种，也可以将不少于二种的食用油混合使用。这些之中优选使用植物性油脂和不影响健康的合成油。
本发明的功能性食品，由于采用来自植物的组合物构成，故其安全性高，经口摄取的量、间隔没特殊限制，为了体现本发明的效果，优选的摄取量换算成鞘糖脂的量平均每天为1μg～100g。以3天1次到1天10次左右的频率继续摄取为好。优选摄取不少于7天，更优选摄取不少于14天。
作为本发明所说的化妆品，是按照体外用处方，从皮肤和头发浸透，对选自皮肤的保湿效果、美白效果、皱纹、褐斑、雀斑、皮肤粗糙的改善、养发、生发、预防头发分叉、以及特异反应性皮炎、过敏性皮炎、长疮、干皮症等中的1种或多种具有效果的化妆品。因此，本发明也可以提供包括为了治疗和/或预防这些症状而使用有效量的本发明鞘糖脂在内的这些症状的治疗和/或预防方法。处方可单独用本发明的鞘糖脂，也可与其他的化妆品原料(即，化妆上被容许的载体/或稀释剂)一起混合使用。
化妆上被容许的载体和/或稀释剂没有特殊的限制，例如，可列举钛云母、滑石、二氧化硅、氧化钛等色材、橄榄油、蓖麻油、霍霍巴油、蜂蜡、含水羊毛脂、三十碳烷、鲸蜡醇、液体石蜡、甲基聚硅氧烷、有机硅聚醚共聚物、山萮醇等油性材料，丙三醇、透明质酸、山梨糖醇、丙二醇、二丙二醇、甲壳质、壳聚糖等保湿剂、烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐等表面活性剂、蔗糖脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、山梨糖醇脂肪酸酯、卵磷脂、聚氧乙烯烷基醚、烷基葡萄糖苷等乳化剂，榅梨子油、呫吨胶、羧甲基纤维素(CMC)钠、羧基乙烯基聚合物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇等胶质和水溶性高分子、此外水和乙醇等。
作为处方的形态没有特殊限制，可以作为化妆水、乳液、保湿膏、防晒膏、晒黑用化妆品、面膜、粉底霜、白粉、胭脂、眼黛、香水、花露水、唇膏、口红等涂布在皮肤上，也可以作为养发料、生发料、发蜡、烫发液、喷发液、染发料、滋发剂、睫毛化妆料涂布在毛发上，还可以添加在洗面奶、洗脸香皂、香波、柔发剂、疗效香波、及浴用剂等中制成处方。
本发明化妆品中含有的鞘糖脂的提取方法，与功能性食品中所含鞘糖脂的提取方法相同。提取的鞘糖脂可直接作为本发明的化妆品使用，但使之溶解在乙醇等的有机溶剂中，或分散在水中则会变得容易使用。
乙醇溶液，由于鞘糖脂含有物可溶于乙醇，故可直接溶解于乙醇来得到。为了防止沉淀的精制和悬浮，可在不损害本发明效果的范围内添加稳定剂。
为了制造水分散液，可将鞘糖脂含有物导入规定量的水中进行搅拌，也可以在不损害本发明效果的范围内进行加热或超声波处理，或者添加过去公知的乳化剂、分散剂促进分散。最优选溶解在大豆或蛋黄卵磷脂和加氢卵磷脂等乳化剂中后制成分散液。
为了促进效果，可在本发明的化妆品中加入维生素类、骨胶原、三十碳烷、大豆卵磷脂、植物甾醇类、透明质酸、山梨糖醇、甲壳质、壳聚糖、丙三醇、丁二醇、丙二醇、烟酸、烟酰胺、半乳糖苷神经酰胺等。
本发明的化妆品因为含有来自芋类或油粕的鞘糖脂，故安全性高，鞘糖脂的含有量没有特殊限制，但为了体现本发明的效果，来自芋类或油粕的鞘糖脂的含有量优选为0.001质量％～100质量％。使含有量不少于该范围，则可更快、更充分地获得本发明的效果。
作为将本发明的功能性食品或化妆品经口摄取或涂布在皮肤上时的代表性效果，可列举皮肤的保湿和粗糙皮肤的改善等。有关皮肤的保湿可用经表皮水分损失量(TEWL)的测定、角质水分量的测定等过去公知的测定方法来了解其效果。TEWL的测定，例如可以用蒸发计(Servo Med公司，瑞典)、表皮水分测定仪(Courage+Khazaka公司，德国)等。而角质水分量的测定，例如可以用角质仪(Courage+Khazaka公司，德国)、斯基康-200(I.B.S公司)等。有关皮肤粗糙的改善凭目视和当事人的感觉就可知道其效果。有关美白效果可用目视知道效果，但也可用目视仪-MX 16(Courage+Khazaka公司，德国)等肤色测定仪来定量地进行测定。
经口摄取本发明的功能性食品，或将本发明的化妆品涂布在皮肤上时的效果，由于芋类或油粕中含的鞘糖脂对皮肤有特异作用的结果，所以尤其是在皮肤粗糙、特异反应性皮炎、过敏性皮炎、长疮的改善方面，要比作为过去公知的植物原料的小麦、米糠、大豆等优异。
(1)鞘糖脂的定性方法鞘糖脂的定性使用硅胶薄层色谱仪(TLC)。将规定量的试料涂布在硅胶片(メルク公司制Sillicagel 60F 254型、层厚0.5mm)，导入氯仿∶甲醇∶水＝87∶13∶2(体积比)的展开槽中进行展开。展开后在干燥器等中干燥硅胶片，硫酸喷雾后经加热而显色。
(2)鞘糖脂的定量方法鞘糖脂的定量用高速液体色谱仪(HPLC)。用Waters制LC Module1，色谱柱用GLサイエンス公司制Inertsil SIL100A。溶剂用氯仿∶甲醇＝9∶1(体积比)，流速1.0mL/分钟，在37℃下进行测定。检测中使用光散射检测器(ALLTECH公司制500 ELSD)。
(3)角质水分量的测定方法角质水分量的测定用Courage+Khazaka公司制的角质仪CM 825，每次在左眼1cm下的相同部位进行测定。测定是以每人测10次的平均数作为该人的数据，用被测全体人员的平均值表示。实施例1(由魔芋粉尘中提取鞘糖脂)在搅拌槽中加入魔芋粉尘1kg，然后向其中加入乙醇2L，在常温下搅拌2小时。其后通过过滤分离出提取液和残渣。用蒸发器浓缩提取液，得茶褐色的蜡状浓缩物10.7g。按照上述的定性、定量方法测定浓缩物，用TLC检测出鞘糖脂的斑点、用HPLC测知含有鞘糖脂0.55g。粉尘提取物中的鞘糖脂的纯度是5.1质量％。实施例2(由棉籽油粕中提取鞘糖脂)在搅拌槽中加入1kg棉籽油粕，再向其中加入乙醇2L，在常温下搅拌5小时。然后经过滤分离出提取液和残渣。用蒸发器浓缩提取液，得茶褐色的蜡状浓缩物8.4g。按照上述定性、定量方法测定浓缩物，用TLC检出鞘糖脂的斑点，用HPLC测知含有鞘糖脂0.41g。棉籽油粕提取物中的鞘糖脂的纯度是4.9质量％。实施例3(由马铃薯皮中提取鞘糖脂)在搅拌槽中加入粉碎成不大于100μm的马铃薯皮1kg，再加入乙醇2L，在常温下搅拌2小时，然后经过滤分离出提取液和残渣。用蒸发器浓缩提取液，得黄色的蜡状浓缩物10.2g。按照上述的定性、定量方法测定浓缩物，通过TLC可看到鞘糖脂的斑点，采用HPLC定量的鞘糖脂是0.42g。马铃薯皮提取物中的鞘糖脂纯度是4.1质量％。比较例1(由小麦粉中提取鞘糖脂)在搅拌槽中加入小麦粉1kg，再加乙醇2L，在常温下搅拌5小时。然后经过滤分离出提取液和残渣，用蒸发器浓缩提取液，得深黄褐色的蜡状浓缩物6.8g。按照上述定性、定量方法测定浓缩物，采用TLC确认的鞘糖脂的斑点浅，采用HPLC定量的鞘糖脂是0.05g，小麦粉提取物中的鞘糖脂的纯度较少，为0.7质量％。比较例2(由米糠中提取鞘糖脂)在搅拌槽中加入脱脂米糠1kg，再加乙醇3L，在常温下搅拌2小时。然后经过滤分离出提取液和残渣。用蒸发器浓缩提取液，得茶褐色的蜡状浓缩物22.3g。按照上述的定性、定量方法测定浓缩物。采用TLC确认的鞘糖脂斑点浅，甘油糖脂、甾醇类等的斑点显色很深。用HPLC定量的鞘糖脂是0.38g，脱脂米糠提取物中的纯度是1.7质量％。
由以上可知，用有机溶剂从魔芋粉尘中所得的提取物，其鞘糖脂成分相对于提取物为5.1质量％，相对于提取原料为0.055质量％，均很高，即，在魔芋粉尘提取物中，鞘糖脂以极高的浓度高纯度存在。另外，可知与作为过去的提取原料使用的小麦粉、米糠相比较，马铃薯皮和棉籽油粕提取物中也以足够高的浓度、纯度含有鞘糖脂成分。这样，以极高的浓度从芋类及油粕中取出鞘糖脂获得成功。实施例4(粉末状功能性食品的制造)把实施例1所得的魔芋粉尘提取物10.0g溶解于20.0g的乙醇中，一边搅拌一边导入到200g的水中，在此分散状态下进行搅拌。经过30分钟后，导入氯化钠5.0g，再搅拌10分钟，得茶褐色的沉淀，该沉淀的重量是6.8g。采用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.45g。水洗作业后提取物中的鞘糖脂的纯度提高到6.6质量％。将该水洗作业再重复1次，得到含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的沉淀物A6.4g。用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.44g。2次水洗作业后的鞘糖脂的纯度提高到6.9质量％。
然后，把上述沉淀物A5.0g溶解于15mL的乙醇中。一边搅拌该乙醇溶液，一边导入到在50mL水中分散有玉米淀粉15.0g的悬浮液中，直接在沸水中加热5分钟。随着玉米淀粉的溶解及膨润，悬浮液的粘度上升，变成糊状。在真空干燥机中将该糊状组合物在50℃下干燥12小时，得乳白色的固体。用捏合机破碎此固体，得含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的粉末状功能性食品19.3g。将这样获得的粉末浸渍在乙醇中，溶解出可溶性成分，进行TLC分析，结果明确地确认出鞘糖脂的斑点。实施例5(粉末状功能性食品的制造)把实施例4中的沉淀物A5.0g溶解于15mL的乙醇中。一边搅拌该乙醇溶液一边导入到在20mL水中分散有β-环糊精10.0g的悬浮液中。继续搅拌则悬浮液的粘度上升变成糊状。在真空干燥机中将该糊状组合物在50℃干燥12小时，得乳白色的固体。用捏合机破碎此固体，得含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的粉末状功能性食品14.8g。将这样获得的粉末浸渍在乙醇中，溶解出可溶成分进行TLC分析，明确地确认出鞘糖脂的斑点。实施例6(粉末状功能性食品的制造)把实施例4中的沉淀物A5.0g溶解于15mL的乙醇中。一边搅拌该乙醇溶液，一边导入到在50mL水中分散有玉米淀粉15.0g的悬浮液中，直接在沸水中加热5分钟。随着玉米淀粉的溶解及膨润，悬浮液的粘度上升，变成糊状。在该糊状组合物中再加水450mL进行搅拌，得低粘度的分散液。一边搅拌该分散液，一边以3L/分钟的送液速度将其输送到入口温度250℃、出口温度150℃、喷雾器转速35000rpm的喷雾干燥式干燥机(大川原化工机械公司制的喷雾干燥机LT-8型)，进行粉末化，得含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的粉末状功能性食品。获得的粉末为18.7g，呈浅褐色。将解这样获得的粉末浸渍在乙醇中，溶出可溶成分进行TLC分析，明确地确认出鞘糖脂的斑点。实施例7(水分散液状功能性食品的制造)将实施例4中的沉淀物A5.0g与癸甘油单硬脂酸酯(商品名SYグリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)2.5g一起导入到500mL的水中，用ヤマト科学制的BRANSON 3200进行超声波分散处理30分钟。这样可获得含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的水分散液状的功能性食品。所得的水分散液均匀，3个月后也不产生沉淀。实施例8(凝胶状功能性食品的制造)把实施例4中的沉淀物A5.0g溶解于15mL的乙醇中。一边搅拌该乙醇溶液，一边导入到在加热到60℃的20mL水中溶解有明胶15.0g的水溶液中，然后放冷到室温。该水溶液在室温下变成土黄色的硬凝胶。这样获得了含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的凝胶状功能性食品。比较例3(含有来自小麦粉的鞘糖脂的食品的制造)把比较例1所得的小麦粉提取物5g溶解于10.0g的乙醇中，一边搅拌一边导入到100g的水中，直接在分散状态下进行搅拌。经30分钟后，导入氯化钠2.5g，再搅拌10分钟，得茶色的沉淀。该沉淀的重量是3.6g，用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.04g。水洗作业后提取物中的鞘糖脂的纯度是1.1质量％。将该水洗作业再重复1次，得含有来自小麦粉的鞘糖脂的沉淀物3.4g。用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.04g。2次水洗作业后的鞘糖脂的纯度是1.2质量％。
然后，把该沉淀物3.0g与癸甘油单硬脂酸酯(商品名SY グリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)1.5g一起导入到300mL的水中，采用与实施例7同样的方法，得含有来自小麦粉的鞘糖脂的水分散液。比较例4(含有来自米糠的鞘糖脂的食品的制造)把比较例2获得的米糠提取物10g溶解于20.0g的乙醇中，边搅拌边导入到200g的水中，直接在分散状态下搅拌。经30分钟后，导入氯化钠5.0g，再搅拌10分钟，得茶色的沉淀。该沉淀的重量是7.4g。用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.24g。水洗作业后提取物中的鞘糖脂的纯度是3.2质量％。再重复1次该水洗作业，得含有来自米糠的鞘糖脂的沉淀6.9g。用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.22g。2次水洗作业后的鞘糖脂的纯度是3.2质量％。
然后，把该沉淀物3.0g与癸甘油单硬脂酸酯(商品名SY グリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)1.5g一起导入到300mL的水中，采用与实施例7同样的方法，得含有来自米糠的鞘糖脂的水分散液。试验例1(对角质水分量的影响)请男性、女性各10名志愿者(20～40岁5名，40～60岁5名)合作，对实施例7所得的本发明的功能性食品(水分散液)、比较例3及比较例4所得水分散液、以及不含鞘糖脂的分散液进行有关皮肤的角质水分量提高效果的试验。不含鞘糖脂的分散液是将癸甘油单硬脂酸酯(商品名SYグリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)1.5g溶解于300mL的水中调制成的。
要求摄取实施例7所得本发明的功能性食品1.45mL/天、比较例3所得的分散液8.5mL/天和比较例4所得的分散液3.25mL/天，共摄取30天。即，每天均摄取鞘糖脂1mg。而，作为对照的不含鞘糖脂的分散液每天摄取1.45mL。
摄取各食品或分散液后用角质仪测定摄取10天后、20天后、30天后的左眼1cm下的皮肤的角质水分量。将20人的平均结果示于表1。
表1
由表1可知，摄取来自魔芋粉尘的鞘糖脂，比摄取来自小麦粉或来自米糠的鞘糖脂，在皮肤的角质水分量的提高上有更优异的效果。
试验例2(皮肤粗糙症状的改善效果)请手表面有皮肤粗糙症状的女性10名合作，对实施例7所得本发明的功能性食品(水分散液)、比较例3及比较例4所得的水分散液及不含鞘糖脂的分散液，进行有关皮肤粗糙症状的改善效果试验。不含鞘糖脂分散液是将癸甘油单硬脂酸酯(商品名SY グリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)1.5g溶解于300mL的水中制得。
要求摄取实施例7所得的本发明的功能性食品1.45mL/天、比较例3所得的分散液8.5mL/天及比较例4所得的分散液3.25mL/天，共摄取15天。即每天均摄取鞘糖脂1mg。而作为对照的不含鞘糖脂的分散液每天摄取1.45mL。
其间，在5天后、10天后、15天后测评有关手表面的状态。结果以总分的形式示于表2。
表2
测评内容与分数变得完全治愈为4分变得非常好为3分比以前好为2分没有变化为1分恶化为0分由表2可知摄取来自魔芋粉尘的鞘糖脂比摄取来自小麦粉和来自米糠的鞘糖脂，在皮肤粗糙症状的改善方面有优异的效果。实施例9(配合植物甾醇的粉末状功能性食品的制造)在实施例5所得的含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的粉末14.8g中掺入以来自大豆油的β-谷甾醇为主成分的植物甾醇(エ-ザイ公司、商品名为植物甾醇F)(以下表示为“植物甾醇F”)20g，充分搅拌均匀，制得功能性食品的粉末。实施例10(配合植物甾醇的水分散液状功能性食品的制造)在50℃下将实施例4中的沉淀物A 5.0g和“植物甾醇F”2.0g混炼5分钟，得茶色糊状物。将其与癸甘油单硬脂酸酯(商品名SYグリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)2.5g一起导入到500mL的水中，用ヤマト科学制的BRANSON 3200进行超声波分散处理30分钟。所得的含鞘糖脂、植物甾醇的水分散液为均匀状，3个月后也不产生沉淀。实施例11(配合植物甾醇的水分散液状功能性食品的制造)在50℃下将实施例4中的沉淀物A1.0g与“植物甾醇F”2.0g混炼5分钟，得茶色糊状物质。将其与癸甘油单硬脂酸酯(商品名SYグリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)2.5g一起导入到500mL的水中，用ヤマト科学制的BRANSON 3200进行超声波分散处理30分钟。所得含有鞘糖脂、植物甾醇的水分散液为均匀状，3个月后也不产生沉淀。实施例12(配合植物甾醇的水分散液状功能性食品的制造)除了使用β-谷二氢睾醇(シグマ公司制)代替“植物甾醇F”以外，其他进行与实施例10同样的操作，得含有鞘糖脂、植物甾醇的水分散液。该水分散液为均匀状，3个月后也不产生沉淀。实施例13(配合植物甾醇的凝胶状功能性食品的制造)把实施例4中的沉淀物A 5.0g溶解于15mL的乙醇中。再添加“植物甾醇F”2.0g，在30℃下搅拌5分钟使其溶解。一边搅拌一边将该乙醇溶液导入到在加热至60℃的20mL水中溶解有明胶15.0g的水溶液中，直接放冷到室温。该水溶液在室温下变成土黄色的硬凝胶，得到凝胶状的功能性食品。实施例14(配合植物甾醇的小麦粉提取物的制造)在50℃将比较例1获得的小麦粉提取物3.0g和“植物甾醇F”0.21g混炼5分钟，得土黄色糊状物质。与癸甘油单硬脂酸酯(商品名SY グリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)1.5g一起导入到300mL的水中，采用与实施例10同样的方法制得含有来自小麦的鞘糖脂和植物甾醇的水分散液。实施例15(配合植物甾醇的米糠提取物的制造)在50℃将比较例2获得的米糠提取物3.0g与“植物甾醇F”0.56g混炼5分钟，得茶色糊状物质。与癸甘油单硬脂酸酯(商品名SYグリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)1.5g一起导入到300mL的水中，采用与实施例10同样的方法制得含有来自米糠的鞘糖脂与植物甾醇的水分散液。比较例5～7为了比较，除了不添加β-谷甾醇外，其他均与实施例10同样地制作只含来自魔芋粉尘的鞘糖脂的水分散液(比较例5)、把作为乳化剂的“植物甾醇F”2.0g分散于在500g水中溶解有癸甘油单硬脂酸酯(商品名SY グリスタ-MSW-750、阪本药品工业公司制)2.5g的水分散液(比较例6)，以及只把前述的癸甘油硬脂酸酯2.5g溶解于500g的水中的溶液(比较例7)。试验例3(对角质水分量的影响)请男性、女性各10名志愿者(20～40岁5名，40～60岁5名)合作，要求每天按规定量摄取由实施例制得的各种功能性食品，共摄取30天，用角质仪测定10天后、20天后、30天后的左眼1cm下的皮肤的角质水分量。
试验所用的功能性食品样品与摄取量如表3所示。
把20人的平均结果示于表3。由表3可知，摄取由来自魔芋的鞘糖脂和植物甾醇组成的功能性食品对皮肤的角质水分量的提高有优异的效果。
表3
“植物甾醇F”エ-ザイ公司制，以来自大豆油的β-谷甾醇为主成分的植物甾醇试验例4(皮肤粗糙症状的改善效果)请手表面有皮肤粗糙症状的女性10名合作，要求按规定量每天摄取实施例制得的各种功能性食品的样品，共使用15天。其间，在5天后、10天后、15天后测评手表面的状态。
使用的样品和摄取量如表4所示。
结果以总分示于表4。由表4可知，摄取由来自魔芋的鞘糖脂和植物甾醇组成的功能性食品对皮肤粗糙症状的改善有优异的效果。
表4
“植物甾醇F”エ-ザイ公司制，以来自大豆油的β-谷甾醇为主成分的植物甾醇测评内容与分数完全治愈为4分变得非常好为3分比以前好为2分没有变化为1分恶化为0分实施例16(含有来自魔芋的鞘糖脂的化妆品的制造)把硅胶(ナカライテスク公司制硅胶60、70～230目)150mL填充在色谱柱中，使醋酸乙酯∶甲醇＝9∶1的混合溶剂200mL流过。在溶剂的液面达到硅胶的上端、流出变慢时，导入将实施例4中的沉淀物A1.9g溶解于己烷而形成的6.0mL溶液。其后，使醋酸乙酯∶甲醇＝9∶1的混合溶剂400mL流过，每次回收流出液20mL。用薄层色谱法分析回收的流出液，结果从最初开始数的第12～第17次的回收液中可看到鞘糖脂的浓斑点。收集该范围的流出液，馏去溶剂后得386mg的固体成分。用HPLC求该鞘糖脂含有量，结果是226mg。所得鞘糖脂含有物中的鞘糖脂浓度为58.5质量％。
然后，把硅胶(ナカライテスク公司制硅胶60、70～230)150mL填充在色谱柱中。使醋酸乙酯∶甲醇＝95∶5的混合溶剂200mL流过。在溶剂的液面达到硅胶的上端，流出变慢时，导入将由上述硅胶柱所得的固体成分386mg溶解于少量的己烷中所得的溶液。其后，使醋酸乙酯∶甲醇＝95∶5的混合溶剂800mL流过，每次回收流出液20mL。用薄层色谱法分析回收的流出液，结果从最初开始数的第20～第26次的回收液中可单独地看到鞘糖脂的斑点。收集该范围的流出液，馏去溶剂后得87mg的固体成分。用HPLC求出该鞘糖脂含有量是86mg，所得鞘糖脂含有物中的鞘糖脂浓度为98.9质量％。
一边搅拌一边把所得固体成分50.6mg导入到10mL的水中，用ヤマト科学制的BRANSON 3200进行超声波分散处理30分钟。这样可得到本发明的含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的化妆品。所得的含有鞘糖脂的水分散液均匀，1天后也不产生沉淀。即，该水分散液中含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂50mg。实施例17(含有来自马铃薯的鞘糖脂的化妆品的制造)把实施例3所得的马铃薯皮提取物5g溶解于10.0g的乙醇中，一边搅拌一边导入到100g的水中，直接在分散状态下进行搅拌。经过30分钟后，导入氯化钠2.5g，再搅拌10分钟，得淡茶色的沉淀。该沉淀的重量是3.0g。用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.18g。水洗作业后的提取物中的鞘糖脂的纯度是6.0质量％。再重复进行1次该水洗作业，结果沉淀的重量为2.8g，用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.18g。2次水洗作业后的鞘糖脂的纯度是6.4质量％。将这样制得的来自马铃薯皮的鞘糖脂含有物，与在实施例16中进行的过程一样地通过2次的硅胶柱色谱法进行精制，获得含鞘糖脂为96.8质量％的鞘糖脂含有物38mg。
将以上的操作重复多次而制造的来自马铃薯皮的鞘糖脂含有物51.7mg一边搅拌一边导入到10mL的水中，用ヤマト科学制BRANSON3200进行超声波分散处理30分钟。这样可获得本发明的含有来自马铃薯的鞘糖脂的化妆品。所得的含有鞘糖脂的水分散液均匀，1天后也不产生沉淀。即，该水分散液中含有来自马铃薯的鞘糖脂50mg。比较例8(含有来自小麦的鞘糖脂的化妆品的制造)把在比较例1中制得的小麦粉提取物5g溶解于10.0g的乙醇中，一边搅拌一边导入到100g的水中，直接在分散状态下搅拌。经过30分钟后，导入氯化钠2.5g，再搅拌10分钟，得茶色的沉淀。该沉淀的重量是3.6g。用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.04g。水洗作业后的提取物中的鞘糖脂的纯度是1.1质量％。再重复1次该水洗作业，结果沉淀的重量是3.4g，用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.04g。2次水洗作业后的鞘糖脂的纯度是1.2质量％，把这样制得的来自小麦的鞘糖脂含有物与在实施例16中进行的过程一样地经2次的硅胶柱色谱法进行精制，得到含鞘糖脂9为7.5质量％的鞘糖脂含有物2mg。
把重复多次以上的操作而制造的来自小麦的鞘糖脂含有物51.3mg，一边搅拌一边导入到10mL的水中，用ヤマト科学制BRANSON 3200进行超声波分散处理30分钟。所得的含有鞘糖脂的水分散液均匀，1天后也不产生沉淀。即，该水分散液中含有来自小麦的鞘糖脂50mg。比较例9(含有来自米糠的鞘糖脂的化妆品的制造)把在比较例2中制得的脱脂米糠提取物10g溶解于20.0g的乙醇中，一边搅拌一边导入到200g的水中，直接在分散状态下搅拌。经过30分钟后，导入氯化钠5.0g，再充分搅拌10分钟，得茶色的沉淀。该沉淀的重量是7.4g，用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.24g。水洗作业后的提取物中的鞘糖脂的纯度是3.2质量％。再重复1次该水洗作业，结果沉淀的重量为6.9g，用HPLC测定的鞘糖脂的含有量是0.22g。2次水洗作业后的鞘糖脂的纯度是3.2质量％。把这样制得的来自米糠的鞘糖脂含有物，与在实施例16中进行的过程一样地经2次的硅胶柱色谱法进行精制，得到含鞘糖脂为98.2质量的鞘糖脂含有物28mg。
把重复多次以上的操作而制造的来自米糠的鞘糖脂含有物50.9mg一边搅拌一边导入到10mL的水中，用ヤマト科学制的BRANSON 3200进行超声波分散处理30分钟。所制得的含有鞘糖脂的水分散液均匀，1天后也不产生沉淀。即，该水分散液中含有来自米糠的鞘糖脂50mg。试验例5(对角质水分量的影响)请皮肤干燥的女性10名志愿者(20～40岁5名，40～60岁5名)合作。用实施例16及17制得的本发明的化妆品及比较例8及9制得的水分散液测评提高皮肤的角质水分量的效果。要求每天在左侧上臂内侧涂抹各自的水分散液0.5mL，共抹30天，用角质仪测定10天后、20天后、30天后的左侧上臂内侧皮肤的角质水分量，将测定结果与不涂抹的对照组结果一起示于表5中。
表5
由表5可知，涂抹来自魔芋粉尘及来自马铃薯皮的鞘糖脂对提高皮肤的角质水分量有优异的效果。实施例18(含有鞘糖脂的化妆水的制造)、比较例10按照以下表6所示处方例，调制含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的化妆水(实施例18)。另外，调制在该化妆水中除了鞘糖脂含有物以外，以同样的处方调制的化妆水(比较例10)。
表6
试验例6(使用感的改善)请女性20名使用在实施例18中得到的化妆水及比较例10的化妆水2个月，对使用感进行感官试验。将结果示于表7。
表7
测评内容与分数相当好2分较好1分不认为好0分表的数值为合计分。
由表7可知，含有来自魔芋粉尘的鞘糖脂的化妆水，在具湿润感、弹力性和柔软性方面有优异的效果。产业上利用的可能性含有本发明的鞘糖脂的功能性食品及化妆品，是含有高浓度的存在于人的皮肤中的、对保湿方面起重要作用的鞘糖脂，在提高人皮肤的角质水分量，对皮肤粗糙、特异反应性皮炎、过敏性皮炎、长疮等的改善方面有优异的效果。另外，采用本发明的制造方法，由于是以完全不被用作食品的魔芋粉尘、马铃薯皮、油粕等为原料，故可价廉而简单地制造含有鞘糖脂的功能性食品及化妆品。
虽然已详细地或参照特定的实施方案说明了本发明，但本行业人员应清楚，可以增加不超出本发明精神和范围的各种变更或修改。
本申请是基于2000年7月19日申请的日本申请号No.2000-219087、2001年1月30日申请的日本申请号No.2001-021947、2001年3月26日申请的日本申请号No.2001-087695、2001年6月21日申请的日本申请号No.2001-188393的发明，全部内容在此作为参考而被采纳。
权利要求
1.一种功能性食品，其特征是含有来自芋类或油粕的鞘糖脂。
2.一种功能性食品，其特征是含有鞘糖脂及植物甾醇。
3.权利要求2记载的功能性食品，其特征是鞘糖脂是从芋类或油粕中提取的提取物。
4.权利要求1或3记载的功能性食品，其特征是芋类是魔芋。
5.一种化妆品，其特征是含有来自芋类或油粕的鞘糖脂。
6.权利要求5记载的化妆品，其特征是芋类是魔芋。
7.一种制造方法，是权利要求1、3～6的任一项记载的功能性食品或化妆品的制造方法，其特征是含有向芋类或油粕中添加有机溶剂，提取鞘糖脂的工序。
8.一种鞘糖脂含有物的制造方法，其特征是含有向芋类或油粕中添加有机溶剂，提取鞘糖脂的工序。
全文摘要
本发明涉及含有鞘糖脂的功能性食品或化妆品及其制造方法。
文档编号A61K8/68GK1392776SQ01802810
公开日2003年1月22日 申请日期2001年7月17日 优先权日2000年7月19日
发明者宫西健次, 小野贵博, 名和和惠, 林真由美, 向井克之 申请人:尤尼蒂卡株式会社