一种饮料及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及含有块菌、D-核糖的饮料及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 块菌（Truffle)，也称松露，具有独特的香味、口感和营养价值，人类食用块菌已有 上千年的历史。块菌富含17种氨基酸、8种维生素、适量的蛋白质、以及雄性酮、留醇、鞘脂、 脂肪酸、氨基酸及微量元素等50余种生理活性成分。并且含有人体自身不能合成的8种氨 基酸、锌、猛、铁、钙、磷、硒等必需营养素，具有增强免疫力、抗衰老、益胃、清神、止血、疗痔 等药用价值，具有抗癌活性，对癌细胞有一定的抑制作用，可以激发脑细胞活力。
[0003] 块菌泡制的保健酒香味独特、口感好，绿色保健和药理作用明显，具有壮阳、补肾， 降低血清低密度脂蛋白、胆固醇，升高高密度脂蛋白、防止动脉粥样硬化及抗肿瘤等显著功 效。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是利用发酵技术提供一种块菌D核糖饮品。
[0005] 具体而言，本发明提供了：
[0006] -种块菌D-核糖饮料，所述的块菌D-核糖饮料包括：1~99重量份块菌发酵液、 1~90重量份D-核糖。
[0007] 所述的块菌D-核糖饮料包括：1~99重量份块菌发酵液、1~90重量份D-核糖、 0. 1~50重量份瓜氨酸和/或可可粉。
[0008] 所述的D-核糖为D-核糖粉或D-核糖浓缩液。
[0009] 所述的块菌发酵液由以下方法制备：
[0010] 步骤1 :将块菌子囊果用组织分离法在MS改良培养基上分离纯化获得一批纯菌 株，将其分别接入筛选培养基中，于20~50°C、50~600转/分钟培养1~500小时得到 发酵液，发酵液中a-雄烷醇含量高的菌株既为块菌产香菌，将块菌产香菌接入筛选培养 基中于20~50°C、50~600转/分钟培养1~200小时得到块菌产香菌种子液；所述筛选 培养基为：葡萄糖10~100克/升、蛋白胨1~20克/升、酵母膏1~20克/升、硫酸镁 1~10克/升、磷酸二氢钾1~10克/升、橡树枝叶10~100克/升；
[0011] 步骤2 :将块菌共生菌根用组织分离法在MS改良培养基上分离纯化获得一批纯菌 株，将其分别与块菌产香菌一起接种到筛选培养基中，于20~50°C、50~600转/分钟培 养1~500小时，发酵液中菌丝体含量高的菌株即为块菌共生优势菌株，将块菌共生优势菌 株接入到共生培养基中于20~50°C培养0. 1~300小时得到块菌共生优势菌株发酵液； 共生培养基为：蔗糖和/或麦芽糖1~100克/升、酵母膏1~20克/升、麦麸或麦芽1~ 100克/升、磷酸二氢钾1~10克/升、硫酸镁1~10克/升、维生素B1 0.001~10克/ 升；
[0012] 步骤3 :将块菌产香菌种子液按照1~25%重量比接入发酵培养基中，于20~ 50°C培养1~500小时得到块菌产香菌发酵液；所述发酵培养基为块菌共生优势菌株发酵 液或由以下组分组成：鹿糖或葡萄糖1~100克/升、酵母膏1~50克/升、蛋白胨1~50 克/升、麦精1~50克/升、磷酸二氢钾1~50克/升、硫酸镁1~50克/升、可溶性淀 粉1~200克/升；
[0013] 步骤4:将块菌产香菌发酵液在微波功率10-600瓦下处理1-200秒，再按照0. 1~ 30%的重量比加入1 : 1的纤维素酶和果胶酶，在温度为20°C~60°C条件下保温1~60 小时，然后加温至70°C~125°C，保持1~125分钟得到块菌酶解发酵液；
[0014] 步骤5:将块菌酶解发酵液在1000~8000转/分钟，离心1~30分钟得到的离 心液即为块菌发酵液。
[0015] 所述的一种块菌D-核糖饮料由以下方法制备：将块菌发酵液澄清后与D-核糖混 合均匀，灭菌得到块菌D-核糖饮料。
[0016] 所述的一种块菌D-核糖饮料由以下方法制备：将块菌发酵液澄清后与D-核糖、瓜 氨酸和/或可可粉混合均匀，灭菌得到饮料。
[0017] 本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：
[0018] 1、本发明所述的制备方法简单易行，适合工业生产。
【具体实施方式】
[0019] 以下通过【具体实施方式】的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限 制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本 发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
[0020] 试验例1提高免疫力试验
[0021] 试验动物：BALB/C雄性小鼠，体重18-20g。
[0022] 试验药物：
[0023] 药物1组：试验例1中对比例得到的产品
[0024] 药物2组：实施例9得到的产品
[0025] 药物3组：实施例10得到的产品
[0026] 试验方法：取小鼠20只，随机分组成5组，将小鼠造模为免疫力低下，正常组不 造模，造模成功开始给药，对照组给予生理盐水〇. 2ml/20g。给药1-3组灌胃给药，给药量 30ml/kg，连续给药30天，停药后24小时断头放血处死小鼠，在无菌条件下取出脾脏，用 1640培养液（含10%小牛血清）制成脾细胞悬液，将小鼠脾细胞调整到5X106细胞/ml， 加到96孔培养板中，每孔100y1，每个孔加双份（即一个加ConA，一个不加ConA)。ConA 20y1 (浓度为1000yg/ml)，1640培养液80y1，是每孔至200y1体积，于5%C0237°C恒 温箱内培养72小时，终止培养前24小时，每孔加3H-TdR3. 7X109(iucr)。用细胞收集器 (TITERTEKCELLHARVESTER550)收集细胞于49型玻璃纤维滤纸上，依次用蒸馏水、5%三 胺醋酸、无水乙醇洗涤，将滤纸置于60°C温箱中烘干，加到含5ml闪烁液的杯内，经液闪仪 (BECKMENLS9800)测参入放射性活度（cpm)，然后计算刺激指数（SI)，即SI=加入ConA 孔cpm/未加入ConA孔cpm〇
[0027] 表1不同药物对免疫低下小鼠脾淋巴细胞转化的影响。
[0028]
[0029] 与对照组比较、<0? 01，与药物1组比较#p<0? 05
[0030] 由表2可知，本发明所制备的块菌酒可使免疫低下小鼠脾淋巴细胞转化显著增 加。
[0031] 试验例2小鼠抗疲劳实验
[0032] 试验动物：昆明种小鼠，体重18_20g。
[0033] 试验药物：
[0034] 药物1组：试验例1中对比例得到的产品
[0035] 药物2组：实施例9得到的产品
[0036] 药物3组：实施例10得到的产品
[0037] 试验方法：取小鼠20只，随机分组成4组，对照组给予生理盐水0.2ml/20g。给药 1-3组灌胃给药，给药量30ml/kg，给药1小时后，快速将小鼠放入事先备好的游泳池内，记 录小鼠子入池开始至不再游泳的时间。结果见表2。
[0038] 表2抗疲劳试验结果
[0039]
[0040] 与对照组比较、<0. 01，与药物1组比较#p<0. 05
[0041]由表2可知，本发明所制备的块菌D核糖饮品可显著延长小鼠的游泳时间，说明本 发明所述的饮品具有很好抗疲劳作用。
[0042] 实施例1
[0043] 步骤1:将块菌子囊果用组织分离法在MS改良培养基上分离纯化获得一批纯菌 株，将其分别接入筛选培养基中，于30°C、260转/分钟培养300小时得到发酵液，发酵液中 a-雄烷醇含量高的菌株既为块菌产香菌，将块菌产香菌接入筛选培养基中于36°C、200转 /分钟培养160小时得到块菌产香菌种子液；所述筛选培养基为：葡萄糖30克/升、蛋白胨 8克/升、酵母膏1. 2克/升、硫酸镁1. 1克/升、磷酸二氢钾1. 3克/升、橡树枝叶80克/ 升；
[0044] 步骤2 :将块菌共生菌根用组织分离法在MS改良培养基上分离纯化获得一批纯菌 株，将其分别与块菌产香菌一起接种到筛选培养基中，于50°C、250转/分钟培养300小时， 发酵液中菌丝体含量高的菌株即为块菌共生优势菌株，将块菌共生优势菌株接入到共生培 养基中于30°C培养100小时得到块菌共生优势菌株发酵液；共生培养基为：麦芽糖70克/ 升、酵母膏16克/升、麦麸80克/升、磷酸二氢钾2克/升、硫酸镁1. 3克/升、维生素B1 2. 1克/升；
[0045] 步骤3 :将块菌产香菌种子液按照1~25%重量比接入发酵培养基中，于20~ 50°C培养1~500小时得到块菌产香菌发酵液；所述发酵培养基由以下组分组成：蔗糖80 克/升、酵母膏30克/升、蛋白胨20克/升、麦精5克/升、磷酸二氢钾5克/升、硫酸镁 3克/升、可溶性淀粉100克/升；
[0046] 步骤4 :将块菌产香菌发酵液在微波功率10瓦下处理200秒，再按照3%的重量比 加入1 : 1的纤维素酶和果胶酶，在温度为20°C°C条件下保温10小时，然后加温至75°C， 保持25分钟得到块菌酶解发酵液；
[0047] 步骤5:将块菌酶解发酵液在6000转/分钟，离心20分钟得到的离心液即为块菌 发酵液。
[0048] 实施例2
[0049] 步骤1 :将块菌子囊果用组织分离法在MS改良培养基上分离纯化获得一批纯菌 株，将其分别接入筛选培养基中，于20°C、600转/分钟培养5小时得到发酵液，发酵液中 a-雄烷醇含量高的菌株既为块菌产香菌，将块菌产香菌接入筛选培养基中于20°C、600转 /分钟培养200小时得到块菌产香菌种子液；所述筛选培养基为：葡萄糖100克/升、蛋白 胨1克/升、酵母膏1克/升、硫酸镁10克/升、磷酸二氢钾1克/升、橡树枝叶100克/ 升；
[0050] 步骤2 :将块菌共生菌根用组织分离法在MS改良培养基上分离纯化获得一批纯菌 株，将其分别与块菌产香菌一起接种到筛选培养基中，于50°C、50转/分钟培养500小时， 发酵液中菌丝体含量高的菌株即为块菌共生优势菌株，将块菌共生优势菌株接入到共生培 养基中于50°C培养3小时得到块菌共生优势菌株发酵液；共生培养基为：鹿糖100克/升、 酵母膏1克/升、麦麸100克/升、磷酸二氢钾1克/升、硫酸镁1克/升、维生素B1 0. 001 克/升；
[0051] 步骤3:将块菌产香菌种子液按照10%重量比接入发酵培养基中，于36°C培养360 小时得到块菌产香菌发酵液；所述发酵培养基由以下组分组成：葡萄糖90克/升、酵母膏 50克/升、蛋白胨18克/升、麦精20克/升、磷酸二氢钾9克/升、硫酸镁35克/升、可溶 性淀粉10克/升；
[0052] 步骤4:将块菌产香菌发酵液在微波功率300瓦下处理180秒，再按照2. 5%的 重量比加入1 : 1的纤维素酶和果胶酶，在温度为36°C条件下保温48小时，然后加温至 l〇〇°C，保持95分钟得到块菌酶解发酵液；
[0053] 步骤5:将块菌酶解发酵液在7500转/分钟，离心20分钟得到的离心液即为块菌 发酵液。
[0054] 实施例3
[0055] 步骤1 :将块菌子囊果用组织分离法在MS改良培养基上分离纯化获得一批纯菌 株，将其分别接入筛选培养基中，于40°C、500转/分钟培养100