含长链多不饱和脂肪酸的婴儿配方和其用途的制作方法

专利名称：含长链多不饱和脂肪酸的婴儿配方和其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及营养配方，特别是涉及含长链多不饱和脂肪酸(LCP或LC-PUFA)的强化婴儿配方；还涉及利用这样的配方来提高婴儿神经发育的方法，特别是提高早产婴儿神经发育的方法。
本申请涉及已被放弃的临时专利申请，该临时申请序列号是60/196970，申请日是2000年4月13日。
背景技术：
无论是否是为早产婴儿设计的配方均应添加LCP，包括花生四烯酸(＂AA＂，204n-6)和/或二十二碳六烯酸(＂DHA＂，226n-3)，这已经成为眼下婴儿营养中最热门的作法之一。经过几步推理可以想到用没有AA和DHA的婴儿配方喂养的早产婴儿与足月婴儿相比出现这些脂肪酸的亚最佳血液和组织含量的机会就会大大增加。首先，在子宫内的最后三个月，即25至40周怀孕期内(Clandinin等人1980；Martinez，1991)和出生后早期几个月(Martinez，1991)，DHA在大脑和视网膜中的累积速度最块；因此，在产期对DHA的生理需要是最迫切的。其次，由于对这些脂肪酸的母体至胎儿输送的过早终止，使AA和DHA对早产婴儿的供应受到了限制。Clandinin等人(1980)报道约80％的子宫内AA和DHA在子宫的最后三个月内进行累积。第三，由于分别源自其膳食必需前体脂肪酸亚油酸(182n-6)和α-亚麻酸(183n-3)的AA和DHA不充分的全程合成，也限制了供应。已经显示出早产婴儿能够进行AA and DHA的全程合成(Carnielli等人1996；Salem等人1996；Sauerwald等人1996)，但对于早产婴儿，是否这些酶方法能充分满足AA和DHA的需要并不清楚(Carlson 1997)。通过一些用含DHA但不含AA配方喂养的早产婴儿的随机控制试验的真实结果已经证明了视网膜生理上(Birch等人1993)、视觉功能上(Birch，等人1993；Carlson等人1993a，1996a)和/或神经发育上有更快速的成熟。然而，也有报道显示用含DHA但不含AA的配方喂养早产婴儿，造成了伤害或较慢的生长。例如，对于在出院前用含DHA的早产儿配方喂养，而接着用补充了DHA的足月配方喂养直至9个月CA.的早产婴儿，Carlson等人(1992)从4至12个月CA发现生长较缓慢，而且在12个月CA运动神经的发育受到了抑制(Carlson 1993c)。Carlson等人的第二个研究(1996b)也显示出较慢的生长情况。在该研究中，早产婴儿用含DHA的早产配方喂养至2个月CA，而在6、9和12个月CA发现有生长不足的情况。第三个研究(Ryan等人1998)显示，对于出院后用含DHA的早产配方喂养两个月，接着用含DHA的足月配方再喂养四个月的早产婴儿，其生长较缓慢。在约3和5个月CA观察到男婴的生长缓慢。
而早期的营养和生长可以对以后发育作出有效的预测(Hack等人1991；Morley&Lucas 1994)，在保证喂养DHA而使视觉和神经发育得到了提高，却要以生长缓慢为代价，对此并未达成共识。因此，就有了这样一种需要，这就是提高了发育(视觉、神经和其它方面)而不会带来与现有喂养方式相关所带来的缓慢生长速率。
Carlson等人(1993b)假定在含DHA配方中含有AA，则会观察到对不良生长现象的修正。在申请人印象中，还没有现有研究对这一假定作出过验证。为了如此有效的工作，在超过2个月修正年龄(CA)，实际上在该随后时期内(例如3，5，6，9和12个月CA)对检验生长良好的研究必须进行，在所述的随后的时期内，在现有研究(Carlson等人1992，1996b；Ryan等人1999)中已经观察到不良生长现象。Schade等人的WO 98/44917(公开于1998年10月，要求优先权为申请日为1997年3月27日的US申请60/042,366)，其中描述了一项研究，就是在使用28天或直至出院的强化配方中，将DHA和AA给早产婴儿进行喂养，所述的时间无所谓哪一个更长，但婴儿接着转换为喂无AA和DHA的常规足月婴儿配方，且只直至4个月CA。该研究报道显示接着这个短暂的喂养间隔，在4个月CA期间或整个4个月CA在视觉敏度方面没有差异，也没有不良生长现象。Vanderhoof等人(1999；2000)报道了一项研究，其中对早产婴儿用补充了DHA和AA的强化配方进行喂养直至达到足月CA，接着转换为用补充了DHA和AA的标准配方直至2个月CA。1999年报道的数据从2个月CA的观察开始，而2000年(8月)报道的某些数据直至12个月CA。与对照相比生长没有差异，但报道显示没有任何发育方面的提高。
重要的是没有研究数据验证在长时间，例如6，9 or 12个月CA对早产婴儿喂养含AA和DHA配方的影响，所述的年龄是针对中止足月婴儿喂养配方，在没有HM的情况下推荐的年龄(美国儿科学会(American Academy of Pediatrics)，1998)。同样地，申请人意识到喂养AA和DHA对成熟影响的检验性研究还没有，所述的AA和DHA作为营养强化喂养方式的一部分，特别是针对超过6个月CA的早产婴儿而设计的。Lucas等人(1992)证明了在喂养了营养强化配方直至9个月CA的早产婴儿中直线性生长和增重大大增加，这是与用为足月婴儿设计的配方喂养的早产婴儿相比而得到的结果，但没有配方含DHA或AA。
而且，还没有作出研究数据，用以试图控制居家环境和母亲智力的可能性干扰。这两种变化因素可以明显影响婴儿的发育。
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因此，我们进行了一种综合的随机化对照试验，该试验足以对专为早产婴儿设计的富含营养素的强化配方的适应性和潜在的好处进行评定，所述的早产婴儿配方含有含LCP花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油(鱼/真菌或卵-DTG/鱼，如下定义)。用这些富含营养素的含LCP的配方进行超过6个月修正年龄的长期喂养，实际上直至12个月修正年龄。
延长时间的喂养方式；生长发育本发明的第一个方面涉及一种向早产婴儿提供营养的改善方法，包括在一个延长的时期，即直至至少6个月CA，且优选直至9个月或甚至12个月CA，向婴儿喂养富含营养素的配方。优选，该富含营养素配方添加了LCP，具体地说是本文所述含量的AA和DHA。这样的喂养方式可以是婴儿摄取热量的唯一来源，或可以在开始用母乳补充，和/或在以后的阶段，例如在约2至4个月CA之后，用固体食品补充。在一个优选的变化方式中，该方法包括根据阶段方式喂养婴儿，采用I型含DHA和AA的富含营养素配方直至婴儿出院或差不多达到足月修正年龄(＂CA＂)，接着通过II型含DHA和AA的富含营养素配方达到至少6个月和优选9或12个月CA。例如上面段落中描述的喂养方式，可以称为“追赶”喂养方式，涉及下述的增强神经发育。这样的喂养方式超越现有技术的主要好处是没有显示出对生长的抑制，而这种抑制在用DHA而不用AA喂养的情况下，已经显现出来。
神经发育本发明的第二个方面提供了对早产婴儿神经发育的改善和增强，这是通过向所述婴儿喂养含DHA和AA的富含营养素的配方直至婴儿达到至少6个月CA而实现的。神经发育的增强，在本文以视觉发育、运动神经发育和/或语言发育作为评定的标准，分别在下文加以描述，这是对没有接受可比较的含DHA和AA富含营养素配方喂养直至至少6个月CA的婴儿进行比较而进行的。喂养婴儿直至婴儿达到至少6个月CA的喂养方式可以由只用配方喂养、配方加母乳喂养，或在约2至4个月CA之后，可以包括补充固体食品组成。
视觉发育本发明的一个方面是用于改善早产婴儿视觉发育的方法，包括对所述婴儿喂养含DHA和AA的富含营养素的配方，直至婴儿达到至少6个月CA。视觉发育可以通过这样几个技术测量，包括如本文所述的Teller敏度卡(Teller Acuity cards)，视觉唤起潜能(Visual EvokedPotential)(＂VEP＂)敏度和VEP对比度灵敏度。而一些调查人员在现有技术中已经喂养了DHA，并发现了对视觉发育的增强，这一好处与早产婴儿较低的生长速率相关联，且引起了一些调查人员对有关婴儿配方添加DHA理论的忧虑。事实上，一些国家允许在配方中添加LCP，在美国和加拿大通过受控的代理商，它们仍被禁止，大概是由于对安全的担心。本发明通过对改善视觉发育而不会牺牲生长的证明，解决了这一问题。
优选根据本发明，含有本文所述含量和比例的DHA和AA，且它们以富含营养素的配方进行长时间的喂养。
运动神经发育本发明的另一个方面涉及一种增强或加速早产婴儿运动神经发育的方法，包括对所述婴儿用含DHA和AA的富含营养素的配方喂养，直至婴儿达到至少6个月CA，优选直至9或甚至12个月CA。该方法最明显适用于出生体重小于约1400g，优选小于约1250g的小的早产婴儿。优选根据如上所述的阶段性的延长时间的方式对早产婴儿进行喂养。通过对改善运动神经发育，而又没有牺牲生长的证明，本发明克服了现有技术的问题。
语言发育本发明的另一个方面涉及一种增强或加速早产婴儿语言发育的方法，包括对所述婴儿用含DHA和AA的富含营养素的配方喂养，直至婴儿达到至少6个月CA，优选直至9或甚至12个月CA。优选根据如上所述的阶段性的延长时间的方式对早产婴儿进行喂养。通过对改善语言发育，而又没有牺牲生长的证明，本发明克服了现有技术的问题。
LCP/LCP前体的平衡本发明的另一个方面涉及营养组合物，例如含一定量DHA和AA的婴儿配方，其各自的前体实质上是脂肪酸α-亚麻酸(ALA)和亚油酸(LA)，从本发明配方可以看出带来了好处。通过对本发明综合的研究，已经意想不到的发现，非常低的含量的DHA和AA可以用于婴儿配方从而获得有益的效果，而不会牺牲人体的生长。这种较低含量的好处至少是双重的首先鉴于在文献中记载的有关DHA和AA对生长和安全性的担忧，只有在这些LCP的添加对实现所需好处是必不可少的情况下，才能审慎地要求添加。其次，由于这些LCP油相当昂贵，且其添加明显地增加了婴儿配方的成本，因此只有在必需的情况下才添加。对早产婴儿提供营养的组合物和其用途的具体变化是本文所要讨论的。


图1A至1C显示的是用母乳和/或富含营养素的配方从研究第1天(中位值，5天大小)至12个月CA喂养的早产婴儿其重量(图1A)，长度(图1B)，和头围(图1C)的情况，所述的富含营养素配方有或没有AA和DHA。显示的数值作为针对热心试验的人群(主图)和严格研究喂养协定的遵守者(插入图)的平均±SD。具有三角形符号的开口线表示的是只用母乳喂养直至足月CA的婴儿。配方组1)对照[圆圈]，2)AA+DHA(鱼/真菌)[方块]，和3)AA+DHA(卵-DTG/鱼)(具有实线的三角形]。
图2显示的是通过Teller敏度卡(Teller Acuity card)(右轴)，用母乳和/或含有或不含有AA和DHA的富含营养素的配方喂养直至12个月CA的早产婴儿在2，4和6个月CA(±7天)所测定的视觉发育。用于热心试验人群的数据以平均(周期/度，cy/deg)±SD(以8度为单位)显示在左轴。具有三角形符号的开口线表示的是只用母乳喂养直至足月CA的婴儿。配方组1)对照[圆圈]，2)AA+DHA(鱼/真菌)[方块]，和3)AA+DHA(卵-DTG/鱼)(具有实线的三角形]。
图3显示的是在Kansas City，New York和Portland研究地点，用母乳和/或含有或不含有AA和DHA的富含营养素的配方喂养直至12个月CA的早产婴儿在4和6个月CA(±7天)的视觉唤起潜能(VEP)视觉敏度(右轴)。用于热心试验人群的数据以平均(周期/度，cy/deg)±SD(以8度为单位)显示在左轴。具有三角形符号的开口线表示的是只用母乳喂养直至足月CA的婴儿。配方组1)对照[圆圈]，2)AA+DHA(鱼/真菌)[方块]，和3)AA+DHA(卵-DTG/鱼)(具有实线的三角形]。在6个月CA，用AA+DHA(鱼/真菌)(LS平均±SE，11.4±0.1)或AA+DHA(卵-DTG/鱼)(12.5±01)配方喂养的婴儿平均VEP敏度比用对照配方(8.4±0.1)喂养的婴儿大。
详细说明术语在本申请的自始至终可以使用下述术语和缩写。
脂肪酸是重要的营养成分。脂肪酸是羧酸，基于其碳链的长度和饱和特性进行分类。短链脂肪酸具有2至约6个碳，且一般是饱和的。中链脂肪酸具有约6至约14个碳，一般也是饱和的。长链脂肪酸具有16至24或更多的碳，且也可以是饱和的或不饱和的。在较长的脂肪酸中可以有一处或多处是不饱和的，分别得到术语“单不饱和”和“多不饱和”。长链多不饱和脂肪酸(LCP或LC-PUFA)具有20或更多个碳，在本发明中特别有意义。
LC-PUFA是根据生物化学家公知的命名法，依据脂肪酸中双键的数量和位置进行归类的。根据离脂肪酸甲基端距离最近的双键的位置，有两个系列或族的LC-PUFA在第三个碳处有一个双键的n-3系列，直至第六个碳才有双键的n-6系列。因此，花生四烯酸(＂AA＂或＂ARA＂)具有二十个碳长度的链在第六个碳开始有四个双键。结果，被称为＂204n-6＂。同样地，二十二碳六烯酸(＂DHA＂)是具有二十二个碳长度的链，在从甲基端起第3个碳开始有六个双键，且因此称为＂226n-3＂。AA和DHA在本发明是特别重要的。另一个重要的LCP是二十碳五烯酸(＂EPA＂)，其被称为(205n-3)。对于AA(n-6系列)和DHA(n-3系列)从其各自的C18前体的生物合成方式是不同的，但共享伸长和去饱和步骤，并且是众所周知的。因此，其它重要的LCP是C18脂肪酸，它们是这些生物合成方式中的前体，例如，以n-6方式的亚油酸(182n-6)和γ-亚麻酸(183n-6)和n-3方式的α-亚麻酸(183n-3)和十八碳四烯酸(184n-3)。
在自然界中当酰基酯化为醇时，通常发现脂肪酸。甘油酯是一种或多种脂肪酸与甘油(1，2，3-丙三醇)而得到的酯。如果甘油主链分子只有一个位置与脂肪酸酯化，则产生“甘油单酯”；如果两个位置被酯化，则产生“甘油二酯”；且如果甘油的三个位置都与脂肪酸酯化，则产生“甘油三酯”或“三酰甘油”。如果所有酯化位置含有同样的脂肪酸，则甘油酯被称为“简单的”，而如果涉及不同的脂肪酸则称为“混合的”。磷脂是甘油二酯的特殊类型，其中甘油主链的第三个位置通过磷酸酯与含氮化合物例如，胆碱、丝氨酸、乙醇胺、肌醇等结合。甘油三酯和磷脂通常根据所结合的脂肪酸的长链或中链而分类。在母乳中，约98％的脂肪酸是在甘油三酯中。脂肪酸的“来源”可以包括源自天然或其它来源的甘油酯的任何这些形式。
脂类是描述脂肪或油成分的通用术语。在营养素中，脂类提供能量和必需脂肪酸和增强脂溶维生素的吸收。食用这种脂类影响许多生理参数，例如血浆脂类状态，细胞膜脂类组合物和免疫反应介质例如前列腺素和血栓烷的合成。
用于本发明较短链脂肪酸的来源包括源自植物，例如琉璃苣、红醋栗籽、玉米、椰子、加拿大菜籽、大豆、红花、高油红花、向日葵、高油向日葵、橄榄、月见草、棉籽、米糠、葡萄籽、亚麻子、大蒜、花生、杏仁、胡桃、小麦胚芽和芝麻的油。这样的植物源自然只产生出约18个碳的脂肪酸。较长的LCP的来源包括乳制品例如蛋类和奶油；鱼油，例如鳕鱼、油鲱、沙丁鱼、金枪鱼和许多其它鱼的油；某些动物脂肪，猪油、牛油和微生物的油，例如真菌和藻的油，如US5,374,657、US5,550,156和US5658,767中所详细描述的。尤其是鱼油是DHA的良好来源，它们以＂高EPA＂和＂低EPA＂品种市售，后者具有高DHA∶EPA比例，优选至少是3∶1。藻油例如源自甲藻纲腰鞭毛目的那些藻油，尤其是Crybthecodinium cohnii也是DHA(包括DHASCOTM)的来源，如US5,397,591、US5,407,957、US5,492,938和US5,711,983中所教导的。被孢霉属，尤其是高山被孢霉和Pythiuminsidiosum是AA的良好来源，包括ARASCOTM，如US Patent5,658,767和Yamada等人，分散科学和技术杂志(J.Dispersion Science andTechnology)9，10(4&5)，561-579页(1989)，和Shinmen等人的Appl.Microbiol.Biotechnol.3111-16(1989)。
当然，通过其它生物体，特别是植物和/或油料作物的基因处理，可以开发LCP的新的来源。脱氢酶和延长酶基因已经从许多生物体中被识别出来，这些基因可以被引入植物或其它宿主细胞，使其产生出大量低成本的含LCP油。这样的重组油的使用也是本发明所涉及的。
婴儿配方指的是满足Infant Formula Act，(21USC§350(a)如下所述)的标准和条件的营养素配方，且其用于对母乳进行替代或补充。虽然这样的配方可以是至少三种不同的形式(粉状，浓缩液和即食液体(＂RTF＂)，它通常称为基于“即食”的营养素浓缩液，且因此经常描述KTF，应该理解根据制造商的方向其它重组或稀释形式，实质上是同一种组合物，且本领域普通技术人员可以计算出用于浓缩的或粉剂形式的相关组合物。
＂标准＂或＂足月＂婴儿配方指的是用于足月出生的婴儿，作为第一次喂养的婴儿配方。下面表A提供了一些足月配方的相关特性，以及下述其它类型。从约8至10，46至50和41至44％卡路里，分别提供蛋白质、脂肪和碳水化合物成分；而热量密度范围仅仅从约660至约700kcal/L(或19-21Cal/fl.oz.)，通常约675至680(20 Cal/fl.oz.)。脂肪、蛋白质和碳水化合物成分中的卡路里分布在足月婴儿配方不同的制造商中多少有些不同。同样地，其它营养素，例如维生素、矿物质微量元素和牛黄酸、肉毒碱和核苷酸是在更广泛的范围内不同，且因此没有以定义的特性使用。足月婴儿配方的例子是SIMILARCTM(Ross Products Division，Abbott Laboratories)，ENFAMILTM(MeadJohnson Nutritionals)和GOOD STARTTM(Carnation)。
与之相比，＂富含营养素＂配方指的是相对“标准”或“足月”配方强化的婴儿配方。区别富含营养素的配方的第一个定义特性是热量密度；第二个因素是蛋白质浓度(参见表A)。例如，具有超过约700Kcal/L热量密度或超过约18g/L浓度的蛋白质的配方被认为是“富含营养素”的。富含营养素的配方一般也含有较高含量的钙(例如超过约650mg/L)和/或磷(例如超过约450mg/L)。
如本文所述的，有两种类型的富含营养素配方。类型I也称为“早产儿”或“在医院中”配方，其被设计成促进早产婴儿以子宫内速度生长的配方，并且不会中断新陈代谢的动态平衡。类型I的配方，其特征在于有最高的热量密度，一般从约790至约820kcal/L(或23-25Cal/fl.oz.)，优选约800至约810(24Cal/fl.oz.)。类型I还可以通过较高的钙浓度(超过约1200mg/L，优选约1300至1800mg/L)和磷浓度(超过约600mg/L，优选约700至1000mg/L)加以区别。类型I的富含营养素的配方的实例包括具有铁24的SIMILAC SPECIAL CARETM(Ross Products Division)和具有铁24的ENFAMIL PREMATUREFormulaTM(Mead Johnson)。
类型II的富含营养素的配方，也称为′出院后′配方，是强化的中间体。例如，类型II的配方的热量密度是700至将近800，优选约740至755Kcal/L；钙浓度从650至1200，优选约700至1000mg/L；且磷浓度从440至550，优选约440至520mg/L。放弃类型I配方的低出生体重婴儿和较大的早产婴儿仍然可能需要比标准足月配方提供更多能量和营养素密度的配方。在住院时，接着出院或更常见紧接着出院时可能存在，类型II富含营养素配方的实例包括SIMILACNEOSURETM(Ross Products Division)和ENFAMIL 22TM(Meadjohnson)，最近该名为ENFAMIL ENFACARETM.。
表A不同类型的婴儿配方的相关特性

*区别类型I、类型II和足月配方的定义特性一种富含营养素的配方优选含有LCP。已经显示出健康足月的婴儿可以分别从膳食必需前体脂肪酸亚油酸和α-亚麻酸制备AA和DHA。因此，用LCP补充足月配方没有显现出医学理论依据，所述的LCP是由提供的足够的前体必需脂肪酸而得到的。作为目前研究的结果，以前未知的，统计数量明显的临床受益已经在早产婴儿的情况下得到证明，特别是在非常小的早产婴儿的情况下(小于1250g)。用LCP对富含营养素的配方的补充，应优选至少包括AA和DHA，优选应不包括高含量的EPA。如果使用了DHA鱼油源，对于这个原因优选低EPA鱼油。
补充LCP精确的量仍然是一些讨论的主题。依据哺乳喂养阶段的膳食和其它因素，发现母乳中的含量有很大的差异。Jenson(1996，1999)报道西方妇女一般比非西方妇女具有更低量的乳LCP。一些建议者提倡用DHA和AA补充婴儿配方，补充的量接近于平均报道的母乳的上限，特别是西方妇女其膳食一般产生较低的平均含量。然而申请人已经发现，采用所提供的足够的必需前体脂肪酸和适当的喂养制度，使用比先前想象的还低含量的AA和DHA仍然能证明有好的效果。导致LCP合成的伸长和去饱和的生物合成方法被逐渐理解，且描述于US5223285中。因此，公知亚油酸(182n-6，＂LA＂)和中间体γ-亚麻酸(183n-6，＂GLA＂)和二高-γ-亚麻酸(203n-6，＂DHGLA＂)是AA(204n-6)的重要前体。同样地，α-亚麻酸(183n-3，＂ALA＂)和中间体十八碳四烯酸(184n-3)和EPA(205n-3)是DHA(226n-3)重要的前体。
根据本发明的一个方面，则DHA和AA的含量和其各自前体ALA和LA的含量在多多少少反向的关系方面是相关的，可以以多种方式表达。这就导致了这一次的发现，那就是提供较低的(因此可能更安全)DHA和AA含量，并不会使好的效果丧失。例如，如果有极少有效量的DHA和AA，可以使用ALA/DHA和LA/AA的比例表达本发明。因此，DHA和AA含量作为在富含营养素的组合物，例如婴儿配方中总脂肪酸的百分数可以分别是约0.36％和0.7％以下，优选分别是0.3％和0.5％以下，提供的ALA/DHA的比例范围是约约4-20，优选6-15，和LA/AA的比例范围是约5-40，优选约10-25。在另一个变化的情况下，该反向的关系可以通过对LCP的指定最大含量和各自前体的最小含量来表达。在这种方式中，本发明通过富含营养素的组合物具有的总脂肪酸百分数(wt/wt)，不超过约约0.3％DHA和0.5％AA，而且具有至少约2％ALA和15％的LA表达本发明。
本发明这样的组合物，而且本发明还有该组合物的用途，可以理想地与本文所述的喂养方法结合使用，以实现本文所述的有益的发育效果。最优选，用于喂养方法的该组合物可以实现本文所述的有益的效果，而不会遭受常规伴随着的生长迟缓，这种生长迟缓一般发生在用DHA喂养早产婴儿的第3个月和第12个月之间。
根据本发明的组合物可以提供100％至约50％的日常摄入膳食热量。如果用该配方喂养新生儿则可以用一些母乳补充。且随着婴儿长到约2-4个月CA，通常开始喂养固体食品，以提供一些热量，而配方的量可以随摄取总热量的百分数减少。
在配方中具体脂肪酸的含量一般以总脂肪酸的百分数表达，该百分数乘以配方中总脂肪酸的绝对浓度(即可以是g/L也可以是g/100kcal)，得到有益的脂肪酸的绝对浓度(分别是g/L或g/100kcal)。由于甘油主链的重量，总脂肪酸估计为总脂肪的的约95％。依据本领域普通技术人员公知的热量密度，从mg/100kcal至mg/L的转化只是一个简单的计算。因此，在多种优选和更优选的实施方案中，在富含营养素配方中LCP的量，其有关含量列在表B。
表B在富含营养素配方中选择的LCP的含量

甚至更优选所具有的LCP含量配方达到实施例1的表1b中的所述的含量。表B中所述的上述各项含量基于具有一般脂肪酸含量的配方，在表A中所示是约34至45g/L。在该情况下，整个产品的脂肪酸含量脱离这一范围，本领域普通技术人员可以确定如何调节来达到这些范围，用以向婴儿提供等值的LCP。
或者这些LCP合适的含量可以基于所需的每日摄取相关LCP每kg体重(见表C)来确定。通过一种估计，早产婴儿应食用约120kcal/kg体重/天直至约出院(一般约足月CA)，且之后约100kcal/kg体重/天。直至约2至4个月CA，这些热量的唯一的来源一般是母乳，优选类型I或类型II的富含营养素的配方，或者两种方式均有。约2至4个月CA，婴儿可以开始食用谷类食品或其它固体食品作为其热量摄取的一部分，且估计在约12个月约60％的热量摄取来自于乳类或配方，其余的40％来自于其它食品。在长时间内，有降低配方摄取的趋势，这是因为如表C中所示，在长时间内DHA和AA的摄取逐渐减少。随着婴儿食用越来越多的固体食品，而这些食品含有极少的或根本不含DHA和AA，其日常摄取下降。该效果对于类型II的配方更显著，因为在开始食用固体食品以提供热量摄取期间，类型II的配方比类型I更合适。且也就能解释为什么对于类型II的配方会发现平均较低的AA和DHA摄取量，尽管AA的强化对于类型I和类型II(比较表B)是同样优选的。
表C在富含营养素配方中选择的LCP的日常摄取量

类似地，新生儿在出生后的头几周里，逐渐地提高了食量，所以在出院时或略微靠后的时间里，出现日最高摄取量并不令人惊讶。在一个时间段内绘制每日LCP摄取图，由此得到宽阔的，具有最大弧形的曲线。复合的AA，DHA，LA和ALA摄取值列于表C的下面部分，一般从约出院或足月CA直至约2至4个月CA。之后，较低的摄取值，最多约40％，是本发明所期望的。
以另一种方式观察，以mg/kg体重/天形式显示的所需DHA摄取量是约2至65，优选约3至35，且更优选约7至26；而以mg/kg体重/天形式显示的所需AA摄取量是约2至65，优选约5至50，且更优选约20至40。这些较宽的范围被细分成专用于如表C或下文中所示的类型I和类型II配方的范围。以mg/kg/天计量的源自类型I配方的DHA摄取一般是约5至40，优选约10至30，更优选约10至20。以mg/kg/天计量的源自类型II配方的DHA服用量一般是约2至20，优选约4至12或15，更优选约6至10。而以mg/kg/天计量的源自类型I配方或类型II配方的优选AA服用量一般是约5至90，优选约10至40，更优选约15至30。上述服用量范围可以代替表C中所示的那些范围。
在本申请全文中，所记载的范围是＂从约x至y＂，应该理解“约”是对x和y值的修饰；而在x和y之间的所有的值以这样的范围公开是内含的和明确的。
用于本申请的“足月”和“早产”针对的是人的常规受孕期。因此，常规“足月”婴儿是受孕37-42周出生的婴儿，而“早产”婴儿是受孕不到37周出生的婴儿。而实际受孕不可能精确测定，它可以基于最后一次月经周期的粗略估计和/或基于其它客观的估计，例如早期的超声评估或临床新生期评估，例如Ballard。如果结果有了差异则选择的方法通常是由主治医师决定或依照惯例。
早产婴儿不具有足月婴儿源自母亲的生命支持体系所带来的好处，且因此有许多发育不全的器官和系统。早产婴儿进行与其足月同等婴儿相关的生长和发育“追赶”比赛。“修正年龄”(CA)的概念已经被用于使早产婴儿标准化为其足月同等婴儿，用于与其生长和发育进行比较。例如，早产8周的早产婴儿，在约2个月后达到“足月修正年龄”。而在6个月后，可以与4个月大的足月婴儿达到同样的发育水平。“追赶”目标是为了实现发育状态更接近于按顺序排列年龄的足月同等婴儿的水平。
最初早产婴儿通常不经肠道接受营养，且在至少最初的一些时间内，其中许多用母乳喂养。本文所采用的“第一次肠内喂养”指的是婴儿肠第一次与营养组合物接触，所述的营养组合物包括母乳，且可以包括有营养的和其它用于灌注肠和适应肠的食物。在现有技术研究中，只在婴儿以配方的形式接受了50％或100％的其每日热量摄取之后，才被加入是不寻常的；即在它们已经对该配方建立起了耐受性之后，才让其加入。这就有了将研究的任何婴儿排除的结果，这些婴儿出于某种原因是配方不耐性的。本文所采用的第一次肠内喂养并不依赖于所建立的耐受性。“第一次配方喂养”是采用人工婴儿配方，而不是母乳的第一次喂养。其可以是或不可以是第一次肠内喂养。
本发明的一些方面的关键是在延长的时间里，采用富含营养素配方的“追赶”喂养方法。该延长的时间开始于婴儿出生后的早期阶段并持续更长的时间。以延长的时间，喂养富含营养素配方改善了早产婴儿的发育。
最宽范围地，本发明的这个方面包括尽可能早地开始用富含营养素配方，尽可能早地进行第一次肠内喂养(SDAY1)并将其持续到出院后的至少6个月CA，优选至至少9个月CA，且最优选至至少12个月CA和甚至于更长。可以使用类型I或类型II的富含营养素配方，优选含有长链多不饱和脂肪酸DHA和AA。根据一种变化的实施方案，类型I的富含营养素配方从第一次配方喂养开始，优选从第一次肠内喂养开始，直至出院或至约足月CA，接着在第二阶段使用类型II的富含营养素配方直至至少6个月CA，优选更长时间，例如9或12个月CA。与这些喂养方法相一致，除了在早期阶段有富含营养素的配方并在后一阶段伴随着富含营养素配方喂养谷类和其它半固体食品以外，给婴儿喂养母乳并非是不寻常的。
在一个意想不到的发现中，发现了本文所述的增强的神经发育，尽管对照组通过母乳摄取了一些DHA和AA，这在对照组和试验组中都是允许的。通过使组之间的差异最小化，这一事实使所见到的任何效果趋向于最小化。
以许多方式对婴儿的成熟即生长和发育进行评定。如本文所使用的“人体测量生长”或简单的“生长”指的是婴儿物理尺寸逐渐增加，且通过物理计量单位重量、长度和头围进行测量。这些参数在1.3.1小节中进一步讨论。形成本发明基础的临床研究的参加早产婴儿，一般比现有技术研究的要小，这是重要的。而且，某种有益效果只在“小”早产婴儿中出现。而“小”是相对的术语，特别在针对早产婴儿时，本文对其的使用指的是出生体重小于1400g，优选小于1250g的婴儿。
除了物理“生长”以外，还有其它的成熟参数或“发育”可以用于对婴儿评定，即神经学上的评定。而这些神经发育可以部分依赖于生理成熟，它们明显由人体测量处理。对婴儿的主要神经发育研究是视觉发育、心智发育、运动神经发育和语言发育，将分别在下文讨论。值得注意的是所观察到的增强的神经发育，并没有带来在现有技术中所出现的对人体测量生长的任何抑制或生长迟缓。
“视觉发育”一般涉及视网膜、视神经和大脑的视觉中枢。众所周知视网膜的光感受器膜含有人体中最高浓度的DHA，而在子宫内最后三个月期间DHA在脑中和视网膜的累积是最快的。因此，已经要求早产婴儿需要用LCP进行营养补充，以弥补在子宫内最后三个月所减少的时间所导致的亏损。用于评定视觉发育的有几种测量方式，包括视觉唤起潜能敏度或＂VEP敏度＂和Teller视觉敏度测试。有关这些更详细的内容，描述于下文的1.3.3和1.3.4小节。第三种方法是VEP对比度灵敏度，其更详述于1.3.5.小节。
“心智发育”一般涉及脑和神经系统的生长，和涉及婴儿吸收和加工信息的能力。它涉及心智或认知方面以及运动神经方面。用于评定心智发育的方法包括Bayley心智发育指数或＂MDI.＂。Fagan＂看＂测试评定信息处理，并且是另一种心智发育的量度标准。“运动神经发育”涉及婴儿控制和协调其肌肉的能力，以实现所需的动作-另一种神经发育的量度标准。Bayley精神运动发育指数或＂PDI＂可以用于评定运动技巧。这些测试均更详述于下文的1.3.6和1.3.7小节。
“语言发育”涉及词汇的获得和运用，尤其是词汇量，并被认为是另一种神经发育的量度标准。语言发育可以通过几种方法来评定，包括MacArthur语言/词汇测试，其更详述于下文的1.3.8小节。
制备方法本发明的液体和粉状的营养产品可以通过本领域普通技术人员公知的常规的技术制备。简单地说，制备三种浆液，并混合在一起，再经过加热处理、标准化、喷雾干燥(如果合适的话)、包装和杀菌(如果合适的话)。
液体产品首先通过将水加热并搅拌，制备碳水化合物/矿物质浆液。接着加入矿物质。矿物质可以包括但并不仅限于柠檬酸钠、氯化钠、柠檬酸钾、氯化钾、氯化镁、磷酸三钙、碳酸钙、碘化钾和微量元素预混合物。将碳水化合物源，例如乳糖、玉米糖浆干粉、蔗糖、和/或麦芽糖糊精中的一种或多种溶于水中，从而形成碳水化合物溶液。也可以加入膳食纤维源例如大豆多糖。在升高的温度下将该完成的碳水化合物/矿物质浆液持续搅拌直至与其它浆液混合，优选不超过约12小时。
通过混合并加热基本油混合物制备油浆液。该基本油混合物一般含大豆油、椰子油、棕榈油精、高油红花油或向日葵油和中链甘油三酯的一些组合。乳化剂，例如是甘油一酯、甘油二酯、大豆甘油一酯、大豆甘油二酯的二乙酰酒石酸酯和大豆卵磷脂可以采用。任意或所有油溶维生素A，D，E(天然的R，R，R形式或合成的)和K可以单独添加或作为预混合物的一部分。β-胡萝卜素可以作为体内的抗氧化剂，也可以被添加，可以添加稳定剂例如角叉菜胶。可以将对本发明是重要的含特定LCP(例如DHA和AA)的油添加到油浆液中。必须小心使用这些LCP，因为其易于降解和酸败。将该完成的油浆液持续搅拌直至与其它浆液混合，优选不超过约12小时。
通过首先将水加热至适当的温度并搅拌，以制备水包蛋白质浆液。接着将蛋白质源加入水中并搅拌。一般该蛋白质源是完整的或水解的乳蛋白(例如，乳清、酪蛋白)，完整或水解的植物蛋白(例如，大豆)，自由氨基酸和其混合物。一般，任何公知的氨基氮源可以用于本发明。在升高的温度下将该完成的蛋白质浆液持续搅拌直至与其它浆液混合，优选不超过约2小时。作为一种替代，一些蛋白质可以混合进脂肪包蛋白质乳液，而不是水包蛋白质。
水包蛋白质和碳水化合物/矿物质浆液在搅拌下一起混合，且得到的混合浆液保持在一个升高的温度下。在短暂的延迟之后(例如几分钟之后)，将油浆液添加到前面步骤的混合浆液中，并搅拌。作为添加至油混合物的替代，LCP油可以直接添加进由混合蛋白质、碳水化合物/矿物质和油浆液得到的混合物。
在充分的搅拌之后，所有的成分彻底混合，完成的混合物的pH被调节至所需的范围。该混合的浆液接着经脱气、超高温热处理、乳化和均质，接着被冷却至冷藏温度。优选，在上述步骤完成之后，进行用于品控的适当的分析试验。基于品控试验的分析结果，并向该配料添加合适量的水，并搅拌用于稀释。
制备含水溶维生素和微量矿物质(包括硒酸钠)的维生素溶液，并在搅拌下添加进加工的浆液混合物。制备含核苷酸的单独溶液，并同样在搅拌下添加进加工的混合浆液。
终产品的pH可以进行再一次调节，以实现最佳的产品稳定性。完成的产品接着被灌注进合适的金属、玻璃或塑料容器中，并最终使用常规的技术杀菌。或者，该液体产品可以进行无菌消毒并灌注进塑料容器。
粉状产品如上所述用于液体产品的制备方法来制备碳水化合物/矿物质浆液。
如上所述用于液体产品的制备方法来制备油浆液，但有以下的例外1)乳化剂(甘油一酯、甘油二酯、卵磷脂)和稳定剂(角叉菜胶)一般不添加至粉中，2)除了β-胡萝卜素以外，其它抗氧化剂，例如混合的维生素E和棕榈酸抗坏血酸酯可以被添加进来，以有助于在任何后续的喷雾干燥方法过程中保持产品的氧化品质，和3)在混合浆液之后，将本发明重要的特定的LCP添加进来，而不是添加进油浆液。
以如上所述用于液体产品的制备方法制备水包蛋白质浆液。
以如上所述用于液体产品制备的类似方式将碳水化合物/矿物质浆液、水包蛋白质浆液和油浆液混合在一起。在将完成的混合物的pH调节之后，在搅拌下接着将LCP添加进混合的浆液。优选，以混合物恰好在均质之前以恒定的速率通过导管，使得LCP被缓慢地计量进产品中(在线混合)。
在脱气、超高温热处理、乳化和均质之后，将加工的混合物进行浓缩以提高混合物的固体含量，以便于更有效地喷雾干燥。接着将该混合物通过预热器和高压泵，并使用常规的喷雾干燥技术进行喷雾干燥。该喷雾干燥的粉可以结块，并接着包装进金属或塑料罐或真空箔/层压袋、充氮或其它惰性环境中。
这些制备方法的变化对本领域普通技术人员而言是公知的或是显而易见的。这并不意味着本发明仅限于任何特定的制备方法。本文所涉及的所有US专利全文在此引用作为参考。
实施例1临床研究1.1研究样本选择出生体重在750至1805g的四百七十名早产婴儿(＜33周的受孕年龄)在1996年10月至1998年1月之间在Neonatal IntensiveCare Units(NICU)登记注册，同意与位于Cleveland，OH；Kansas City，MO；Little Rock，AR；London，UK；Louisville，KY；Portland，OR；New York，NY；和Santiago，Chile的研究调查人员合作。为了对早期喂养耐受性的喂养研究影响作出评定，婴儿在第一次肠内喂养(包括营养食物或水)的72小时内参加，而肠内喂养需要在出生后的首个28天内进行。让独生子和双胞胎和小受孕年龄的婴儿共同参加。具有影响生长和发育的严重先天畸形婴儿，或在随机挑选之前已经作了大外科手术的婴儿不能参加的。其它被排除的条件包括心室周围/心室内出血＞II级，母亲机能不全包括母亲在怀孕期间可卡因或酒精滥用或两者同时发生、体外膜氧化、液体通风、由严重和永久的神经伤害导致的窒息，或在登记时有不能控制的全身感染。除了在第一次肠内喂养的72小时内登记的标准以外，其中8％的对象在该指定的窗口以外登记，99％的研究对象满足了所有规定的参加和排除的条件。1.2试验设计1.2.1研究配方根据上述常规的工艺，制备含DHA和AA的富含营养素配方。SIMILAC SPECIAL CARE(类型1)和SIMILAC NEOSURE(类型II)的改进配方用于本发明研究，其与市售的这些产品的配方不同之处在于，它们含有核苷酸，具有改进的乳清对酪蛋白比例(～50∶50)，并含有β-胡萝卜素和天然的维生素E(RRRα-生育酚)替代了合成的配方。NeoSure产品也含有作为碳水化合物的乳糖按比例的增加。这些改进列于表1a中。

在SSC中的脂肪混合物由30％的大豆油、20％的椰子油和50％中链甘油三酯(MCT)油的混合物组成。在NeoSure粉中的脂肪混合物由28％的大豆油、20％的椰子油和25％中链甘油三酯(MCT)油和27％高油红花油组成。椰子油的含量在补充LCP的配方中被降低，以保持总脂肪含量的恒定。在补充LCP组中，添加AA和DHA源对于SSC配方以实现0.42％和0.26％的平均含量，对于NeoSure配方，以实现0.42％and 0.16％的平均含量。在SSC-NeoSure配方喂养法中的一种，真菌油(源自M alpina；Suntory LTD；Osaka，Japan的SUN-TGA25)和源自富含DHA金枪鱼油的低-EPA鱼油(DHA对二十碳五烯酸[EPA]比例是5∶1)；Mochida International Co.，Ltd.；Tokyo，Japan被分别添加进来，用以提供AA和DHA。在其它补充LCP的SSC-NeoSure配方喂养法中，使用源自蛋的甘油三酸酯(＂蛋-DTG＂-EastmanChemical Co；Kingsport，TN，USA)来对这两个配方提供AA和DHA，使用低-EPA鱼油对SSC配方提供另外的DHA。对照和研究配方所具有的相关组合物列于表1b。

1.2.2研究组接着至少一名父母或监护人在通知上签字表示同意，用三种具有或不具有添加了长链多不饱和脂肪酸AA的DHA的研究配方之一随机地对婴儿喂养，三种配方是；1)对照，2)AA+DHA(鱼/真菌)，和3)AA+DHA(蛋-DTG/鱼)。在该研究中，第一次肠内喂养的那一天作为研究天(SDAY)1。使用变更的块算法，在计算机随机产生的表格中列出了地点、性别和出生重量等级(750-1250g和1251-1800g)的数据块。在随机运算之后，对对象喂养HM和/或分配的医院内类型I的早产配方(Similac Special Care_即食[24kcal/fl oz]的改进配方；SSC)直至其足月CA，配方中具有或不具有含有AA和DHA的甘油三酯油。
在足月CA时，婴儿转变为第2阶段，并分配出院后类型II的富含营养素配方(NeoSure_粉[22kcal/fl oz]的改进配方)，其中具有和不具有AA和DHA同样的来源和/或HM直至12个月CA。这些配方提供膳食必需脂肪酸，亚油酸和α-亚麻酸(分别是总脂肪酸的16-20％和2.5％)。
在该研究的计划阶段，显然参加NICU的大多数婴儿既不仅仅喂养配方也不是仅仅喂养母乳，但大多数婴儿喂养的是配方和母乳的组合。因此该研究设计成与母乳喂养相适应，而且在第一次配方喂养(SDAY1)时，婴儿可以经过了1)EHM-喂养，2)只是配方喂养，或3)母乳和配方的组合喂养。肠内喂养的时间选择和好处，在母乳喂养期间，关于肠内喂养补充的决定完全在于医生的判断力，除非肠内喂养目标＞120kcal/kcal/天。如果喂养母乳，建议强化到22至24kcal/fl oz，并提供最小量的蛋白质摄取是2.8g/kg/d。这其中的一个含义是，在对照组中的婴儿，如果它们接受了任何母乳，则已经接受了一些DHA和AA。这个事实使试验组中，甚至更强制的试验组中发现了发育的增强。1.3测定参数1.3.1人体测量生长根据标准化程序(Kocher 1991)(±7d)在SDAY 1和足月(±7d)，2-(±7d)，4-(±7d)，6(±7d)，9-(±7d)和12-(±10d)个月CA的出生日期，测定重量、长度和头围。使用精确到±10g(在医院内)或±20g(出院后)的电子或双光束称对婴儿在医院内进行至少一次称重，并在出院后称重两次。用具有固定床头板和可移动踏脚板的长度板(Ellard LengthBoard，Seattle，WA)和不可伸展带测量器(InserTape_，Ross ProductsDivision，Abbott Laboratories，Columbus，OH)分别测量躺着的身高和头围，精确至0.1cm。在医院各次测量时间中的至少一次和出院后的两次测量中对长度和头围进行测量。
1.3.2在医院中喂养的耐受性和临床问题接受肠内喂养至少一天的婴儿的百分数，由于胃残渣持续肠内喂养的婴儿的百分数和达到全肠内喂养(100kcal/kg/d)的天数，通过对开始住院的每一天对于每一个婴儿医疗记录的回顾来进行确定。同样地，将怀疑引起坏死的小肠结肠炎(NEC)，确诊的NEC(x-射线，积气症的外科手术或尸检证据、肝门道中肠内的自由空气或气体，或穿孔)，怀疑全身感染、确诊全身感染(阳性血液培养物)和慢性肺病(在超过产后1个月或36周CA补充氧)的发生率从医疗记录中提取。
1.3.3行为视觉敏度使用Teller敏度卡程序(Vistech Inc，Dayton，Teller等人.1986)在2-，4-和6-个月CA(±7天)对行为视觉敏度进行评定。婴儿被显示在一系列25.5×51cm的具有黑和白条纹的卡上，这些条纹的空间频率是不同的(条纹宽度)在半个八音度步骤中为38.0-0.32循环/cm(一个循环是一个黑和白的条纹)。一个八音度是空间频率的对半分或双倍。对于婴儿显示的一致的固定反应，最细的格栅(条纹宽度)是以循环/度表示的视觉敏度阈与八音度表示的方差(SD)。在第一批研究婴儿达到2-，4-和6-个月CA之前，每四个研究婴儿中的一个，和一小批未研究的婴儿，通过每一个地点的双培养测试进行测试，以确定可靠性。对于测试的95％发现同意＜0.59八音度而对于测试的78％＜0.5八音度。
1.3.4视觉唤起潜能(VEP)敏度使用VEP程序(Hartmann等人.，1998；Zemon等人1997)只在Kansas City，New York和Portland对视觉敏度进行估计。在4-和6-个月CA(±7 days)对婴儿[45对照，50 AA+DHA(鱼/真菌)，39AA+DHA(蛋-DTG/鱼)和23只用母乳EHM)]进行测试。使用三金杯EEG电极，使其附着于婴儿头皮表面上的水溶糊剂，记录下脑电波记录(EEG)。电极沿着在Oz具有活性位置的头的中线放置，参照于头顶(Gz)和这些两个位置(Pz)之间的至地面中途。该EEG被放大、数字化并储存在PC计算机(增益＝20K，通带0.5-100Hz)。各研究地点使用ENFANT记录系统以产生刺激，记录电生理信号并将数据储存(Neuroscientific Corp，Farmingdale，NY)。该PC计算机基系统包括光学分离差别放大器、模拟-数字转换器、产生刺激的硬件和线性化特性，该特性将“仰望桌子”结合，以修正视觉失真。对该三套设备进行校准，以产生相等的反应。刺激监视器是Nokia RGB监视器(非交织框架速率＝59.98Hz)，具有100cd/m2的平均的空间-平均亮度。黑和白(100％对比度)水平线方波光栅(即黑和白条纹)显现于屏幕上，且在7.5Hz上相反的相颠倒。一系列光栅图案使用扫描参数技术进行显示。具体地说，在一个单独的扫描参数运行期间，光栅的空间频率在六个离散的步骤中是不同的。在持续中每个步骤是约1秒，而从低到高运行在每个八音度间隔中空间频率提高(大至小条纹；0.8，1.5，3.0，6.0，12.0，24.0cyc/d)。在暗房间里，在离刺激显示114cm距离，婴儿坐在父母的膝盖上。试验者能够看到婴儿，并且在婴儿不看刺激时，中断试验，而在婴儿再次注视屏幕时重新开始记录。
对EEG的每1秒时间进行离散的傅里叶变换。对于每个对应时期(5或10扫描)第二谐波反应的正弦和余弦成分是矢量平均的，以产生平均反应。振幅和相位值源自这些平均值。应用Tcirc2统计量以判断在平均矢量附近的95％的可靠循环，且得到信噪比(S∶N；Zemon等人1997)。当S∶N＞1时，认为有真实的反应存在。在两个相邻的点之间至S∶N＝1(1点具有S∶N＞1和其它S∶N＜1)通过线性内推法，判断光栅敏度。在S∶N＝1的空间频率如敏度判断所指定的。
1.3.5VEP对比度灵敏度在Kansas City，New York和Portland只在4-和6-个月CA(±7天)，使用VEP程序判断对比度灵敏度。通过下式定义对比度C＝(Lmax-Lmin)÷(Lmax+Lmin)其中C＝对比度，Lmax＝图案的最大亮度，而Lmin＝图案的最小亮度。在同样的“坐位”，如VEP敏度程序使用上述硬件和电极位置进行该程序。7.5Hz方波临时信号用来对各下述空间频率进行对比-反向15，30和60循环/屏幕，其相当于在114cm的观察距离1.5，3.0和6.0循环/天。在8秒的对比度扫描期间，空间频率恒定。通过下面8个对比度水平，在每秒的一个对比度扫描期间，提高了对比度，这8个对比度是0％(丢弃条件)，0.5％，1％，2％，4％，8％，16％，32％，和64％。使用类似的上述内推法程序确定对比度阈值。所需的交互的对比度产生S∶N＝1，如对比度灵敏度测量所定义的。该电生理确定量度被设计成模拟行为量度，其是通过婴儿发现黑和白条纹需要最小量的交互的对比度。
1.3.6一般的神经发育对12-个月CA(±10天)进行婴儿发育的Bayley等级(Psychological Corporation，第2版.，SanAntonio，TX)评定以判断认知的和运动神经发育(分别是Mental Developmental Index[MDI]；Psychomotor Developmental Index[PDI])。在进行Bayley评定期间，约每10个研究婴儿(n＝41)有一个进行录像，而这些录像带进行中心计分(Dr R Arendt，Cleveland，OH)，独立的位置测试者计分。对于MDI和PDI在位置测试者和中心计分之间，计分的平均百分数分别是91％(范围，71-100％)和93％(范围73-100％)。
1.3.7信息处理对6-和9-个月CA(±7天)的婴儿进行婴儿智力的Fagan测试(Infantest Corporation，Cleveland，OH；Fagan&Singer 1983)，这些婴儿在临床访问时，仍然进行着喂养研究。在熟悉期间，显示面部刺激直至婴儿累积了预定的观看时间；在测试期间熟悉的面部刺激与新奇的面部刺激一并显示。记录下每个刺激所花费的观看时间(IBMThinkpad)，而对＂新奇偏爱＂，视觉认识记忆的一种量度(在测试阶段，观看新颖刺激占总观看时间的％；10次测试的平均值)进行计算。另外，平均持续观看时间被解释为信息处理的有效量度，对于熟悉期间通过将总观看时间除以10次测试的平均观看次数进行计算。(Colombo等人1988；Jacobson等人1993)。
1.3.8语言发育源自MacArthur Communicative Development Inventories(Fenson等人1993)的婴儿版的词汇表，一种标准化的父母报告工具在9-个月CA(±7days)和14-个月(±10天)CA时被完成。该词表用于提供有关在9-和14-个月CA时每个孩子的词汇理解(孩子理解的单词)和在14个月CA，词汇的产生(孩子说的单词)。由特定的性别标准计算百分制的分数，并转换成常规的标准分数。
1.3.9血液脂肪酸分析如果在研究天(SDAY)1和出院时抽血，作为常规临床实践的一部分，接着再抽一部分血，用于确定血浆中的脂肪酸组合物和红血细胞(RBC)的磷脂酰基-胆碱(PC)和磷脂酰基乙醇胺(PE)膜部分。而且，试图获得所有研究婴儿的血液，以确定血液脂肪酸含量，这些婴儿在4-和12-个月CA，仍然保持母乳和/或研究配方喂养。处理血液样品，并在-70℃冷冻，在干冰上，输送至中央实验室(Analytical Research andServices，Ross Products Division)用于分析。
1.3.10严重和/或意外的负面结果(SAE)通过作为任何经验的研究草案确定SAE，这些经验在临床踪迹中出现，这些临床踪迹导致死亡或威胁了生命、导致残废、需要住院或需要介入以防止永久性的损伤。这明显排除了非生命威胁的住所访问。在最初的住院期间，地方研究队得到指示不包括SAE(除了婴儿死亡)，所述SAE是在早产婴儿的天然病史记录中所期待的，但在调查人员看来可以包括的SAE，或者这些SAE与研究产品的使用有关。
对每个SAE进行复审，并指派一个α-数字器官系统，并通过婴幼儿学专家(P Pollack，MD)进行严格的打分，用以盲式研究喂养组。主要种类包括1)死亡；2)肺中心、肺自主疾病(例如.，窒息、突然发绀)；3)肺实质疾病(例如，肺炎、RSV、哮喘、喘呜)；4)其它严重的非肺部疾病(例如，腹泻、脱水、呕吐、发热、脓毒症)；和5)明显与所研究的喂养无关的(例如，用于视网膜病、氙气修复的激光疗法)。
1.4统计方法这是一项热心试验研究，它包括了所有的参加婴儿。由于在超过16个月研究期的高危病人中先前的协定有偏差。因此计划进行亚组的分析，以包括直至婴儿严格遵守喂养协定最后收集点的数据以来的所有数据。这个亚组婴儿是这样定义的，他们在足月CA继续遵守着喂养协定，且消费＞80％乳类食物(研究配方、母乳、非研究配方、牛奶)是研究配方和/或母乳。例如，如果婴儿在预定的4-和6-个月CA访问之间中断了研究喂养，在4个月CA访问的研究数据被包括在该亚组分析中，但不包括在6个月CA访问收集的数据。
在热心试验分析中，在12个月CA研究配方组中，对于具有80％的粉和在BSIDα＝0.05的0.5标准误差(SD)差异的发现，则判断样本大小(n＝420)。该判断包括考虑前期婴儿消耗(20％)的样本大小的增长，基于结果变量(25％)，摄取母乳的可能的钝化效果和在早期新生期参考期间EHM摄取的形成。
使用χ-正方形或Cochran-Mantel-Haenszel测试分析绝对变量，而通过方差分析(ANOVA)和/或协方差分析(ANCOVA)对连续变量进行分析。通过重复测量分析对多于一个时间点获得的数据进行分析。如前所定义的，三个研究配方组的统计比较包括对于位置的随机块(即，用作协方差的位置)。另外，具有连续结果变量的所有分析包括设计层协方差(性别和体重[750-1250g或1251-1800g])和母乳摄取的协方差。母乳摄取被定义为基于足月CA访问的婴儿分类的分类变量，这些分类是只靠母乳喂养(从统计分析中排除)，只是配方喂养＜50％源自配方的医院肠内能量摄取和≥50％的源自配方的医院肠内能量摄取。另外的预先计划的协方差包括用于生长受孕年龄的受孕大小、受孕大小、认知的、社会的和在家庭环境中对儿童的情感支持的品质和数量的量度(HOME Inventory；Caldwell&Bradley 1984)，和用于发育结果和产前吸烟、出院时在家庭中吸烟、受孕年龄、受孕大小、HOMEInventory和用于视觉结果的WAIS-R词汇成分的母亲智力(WAIS-R词汇成分；Weschler 1981)的代理量度。所有的统计测试均是上下限二头试验，对于交互作用，有效的水平是设置在0.05和0.10。考虑到通过访问、出生体重层和性别的多重比较，Bonferroni调节p-值用作合适的有效水平。1.5结果1.5.1研究样本参加的470名婴儿中的376人(80％)将试验完成到了12个月CA。基于母乳喂养直至足月CA的早期新生儿时期，43名婴儿被分类为只用母乳喂养。144名婴儿在对照组中，126(88％)和91(63％)分别在足月CA和12个月CA中保持研究喂养。同样地，140名婴儿参加AA+DHA(鱼/真菌)组，120(86％)和89(64％)分别在足月CA和12个月CA中保持研究喂养，143名婴儿参加AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组，126(88％)和91(64％)分别在足月CA和12个月CA中保持研究喂养。在足月CA，在对照组、AA+DHA(鱼/真菌)和AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组中分别有35％、28％和33％的婴儿，每天至少用母乳喂养一次。到了4个月CA，在对照组、AA+DHA(鱼/真菌)和AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组中分别只有14％、12％和12％的婴儿用母乳喂养。在对照组、AA+DHA(鱼/真菌)，AA+DHA(蛋-DTG/鱼)和EHM组中分别有19(13％)、20(14％)、11(8％)和(2％)的婴儿，由于与喂养不耐性相关的典型症状而中断研究喂养(主要原因是地方调查人员提出中止)。在研究期间，在对照组、AA+DHA(鱼/真菌)、AA+DHA(蛋-DTG/鱼)和EHM组中分别有6、3、6和0个婴儿死亡。通过各地的调查人员判断，没有与研究喂养相关的死亡。
1.5.2婴儿和家庭人口统计除了基于HOME Inventory的分数(表2和3)以外，在研究配方组之间的婴儿和家庭基准人口统计之间并没有什么不同。被随机分到对照组(LS平均SE，36.0±0.7)的婴儿_1250g比AA+DHA(鱼/真菌)组(33.7±0.7，p＝0.03)的婴儿具有更高的平均HOME Inventory分数。被随机分到对照组(LS平均SE，36.2±0.6；p＝0.006)和AA+DHA(鱼/真菌)(36.3±0.6，p＝0.0.004)组的出生体重＞1250g的婴儿比AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组(33.6±0.7)的婴儿具有更高的平均HOME Inventory分数。在三个研究配方组的多个出生状态(双胞胎对独生子)中发现最低限度的统计明显的差异。在对照组、AA+DHA(鱼/真菌)，和AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组中分别有17％、20％和28％的对象是双胞胎。表2早产婴儿-热心试验的总研究人口的新生婴儿期和产期的特性特性 对照 AA+DHA AA+DHAEHM*(鱼/真菌) (蛋-DTG/鱼)出生体 ，g 1287±272 1305±293 1309±286 1275±312对象数量142 138140 43出生时受孕年 周数 29.6±1.9 29.8±2.1 29.7±2.0 29.7±2.1对象数量143 138141 43出生时大 nSGA 9 14 147AGA 133 124126 36未知 1 0 1 0性 n男7777 7720女6661 6423多种出生状 n独生子119 110101 39双胞胎2428 404Apgar分8.0±1.4 8.0±1.4 8.0±1.4 8.3±1.2对象数量143 136141 43种族，n美 高加索人6159 6232非洲人 2219 282西班牙人/拉美人 4 2 3 0其它1617 7 0英 高加索人2021 239非洲人 0 1 0 0其它4 0 2 0智 西班牙人/拉美人 1619 16-研究天1重 ，g1207±276 1208±274 1219±2791198±326对象的数量 142138 140 43长 ，cm 38.6±3.1 38.9±3.1 39.1±2.838.6±3.1对象的数量 131130 132 41头 ，cm 27.2±2.0 27.3±2.0 27.4±1.927.0±2.2对象的数量 133129 135 40产后年 ，d55.±3.9 5.0±2.9 4.6±2.8 5.5±2.5对象数量 142138 140 43除非另有说明，数值是平均±SD。*在早期的新生期只用母乳喂养。只是参考组，这些数据并不包括在统计分析中。 通过对大小、性别、出生重量等级、喂养*性别和喂养*出生体重等级控制的ANCOVA评定配方组的差别。发现没有统计上的明显差异。 使用对位置控制的χ-正方形分析对配方组之间的差异进行评定。表3.家庭特性热心试验分析特性对照AA+DHA AA+DHA EHM*(鱼/真菌)(EDT/鱼)母亲年 ，岁 27.2±6.3(143) 27.0±6.3(138) 27.0±7.0(141) 29.7±5.1(43)母亲受教育程 美国、年12.9±2.4(99) 13.1±2.4(96)12.8±2.3(99) 15.1±2.0(34)智利、年10.5±1.6(16) 10.1±2.2(19)8.8±3.1(16)NA英国无 9 46 1＜3 5 62 0＞3级§6 912 2A级 1 01 2学位+ 2 34 4在怀孕期间吸烟§，n(％)是40(28.0)35(25.4) 41(29.3)2(4.7)否103(72.0) 103(74.6)99(70.7)41(95.3)产后在家中吸烟§，n(％)是37(27.4)39(29.1) 44(32.1)4(9.5)否98(72.6)95(70.9) 93(67.9)38(90.5)产前忧 ，n(％)头三个月119(83.8) 115(83.9)114(80.9) 42(97.7)第二个三个月19(13.4)17(12.4) 20(14.2)0(0.0)第三个三个月或没有 4(2.8) 5(3.6) 7(5.0) 1(2.3)HOME Inventory 36.3±5.3(123) 35.3±5.5(127) 34.8±6.5(109) 39.4±3.4(40)分 母亲WAIS-R 39.3±12.4 37.5±15.0(126) 37.0±15.2(108) 53.2±8.9(40)生词汇 (119)分 除非另有说明，数值是平均±SD(对象的数量)。*在早期的新生期只用母乳喂养。只是参考组，这些数据并不包括在统计分析中。 通过对大小、性别、出生重量等级、喂养*性别和喂养*出生体重等级控制的ANCOVA评定研究配方组的差别。 英国教育水平＜3中等教育证书(CSE)或低于C级的常规的中等教育(GCSE)或§英国教育水平＞3CSE或任何O级或GCSE级A-C 使用对位置控制的χ-正方形分析对这些数据进行分析。**对于HOME Inventory分数发现统计明显的喂养*出生体重交互作用(p＝0.0043)。被随机分到对照组(LS平均±SE，36.0±0.7)≤1250g出生体重的婴儿比随机分到AA+DHA(鱼/真菌)组(LS平均±SE 33.7±0.7，p＝0.0285)的婴儿具有更高的平均HOME Inventory分数。被随机分到对照组(LS平均±SE，36.2±0.6)＞1250g出生体重的婴儿比随机分到AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组(33.6±0.7，p＝0.0059)的婴儿具有更高的平均HOME Inventory分数。被随机分到对照组(LS平均±SE，36.2±0.6)＞1250g出生体重的婴儿比随机分到AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组(33.6±0.7，p＝0.0059)的婴儿具有更高的平均HOME Inventory分数。被随机分到AA+DHA(鱼/真菌)组(36.3±0.6)＞1250g出生体重的婴儿，比随机分到AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组(33.6±0.7，p＝0.0039)的婴儿具有更高的平均HOME Inventory分数。
1.5.3生长在热心试验的人群中，从SDAY1至足月，4个月和12个月CA，增加的重量、长度或头围中，或在SDAY1、足月、2-、4-、6-、9-和12-月CA测量的绝对的重量、长度和头围的重复测量分析中几乎没有差异和不一致的差异(参加表4a和4b&图1)。由SDAY1至12-个月CA增加的平均长度对照(LS平均±SE，5.95±0.07mm/wk)大于AA+DHA(鱼/真菌)(5.67±0.07mm/wk)，≤1250g(p＝0.008)的婴儿。由SDAY1至足月CA增加的平均头围女性对照组大于AA+DHA(蛋-DTG/鱼)婴儿(9.1±0.2和8.4±0.2mm/wk，p＝0.005)和SDAY1至足月CA(分别是9.0和8.4mm/wk，p＝0.004)的其中＞1250gAA+DHA(鱼/真菌)大于AA+DHA(蛋-DTG/鱼)婴儿。相反，所有研究访问的人体测量的重复测量分析证明了AA+DHA(蛋-DTG/鱼)婴儿的重量和长度大于足月CA对照婴儿(分别是2906±48g和2757±50g，p＝0.03；47.1±0.2cm和46.5±0.02cm，p＝0.01)。当排除了＞50％的最初医院源自母乳能量的婴儿，当进行热心试验人群的分析时，这些差异消失。
同样地，在亚组分析中(严格遵守喂养协定)，在研究访问中在人体测量或人体测量的重复测量分析中几乎没有差异和不一致的差异。从SDAY1至4个月CA增加的平均长度对照(LS平均±SE，8.68+0.14mm/wk)大于AA+DHA(蛋DTG/鱼)(8.33±0.14mm/wk，p＝0.04)。从SDAY1至足月CA增加的平均头围女性对照大于AA+DHA(蛋-DTG/鱼)婴儿(9.24±0.2mm/wk和8.4±0.2mm/wk，p＝0.003)。
表4b显示具有其参数较清楚的指示的一栏表中的数据，在时间和各组中有统计上的不同。表4b显示了很少的生长参数是有效的。在热心试验的分析中，排除了最早测量时间点(足月CA)的长度和重量，没有绝对的测量在统计上是不同的。在一些情况下对照配方比研究配方增加的更高；但这可以解释为这样的事实对照组通过随机的，恰巧在平均足月具有较低的重量。一般，较小的婴儿比较大的婴儿生长速度更快。表4a.体重、长度和头围的增加热心试验分析特性 对照 AA+DHA AA+DHA EHM*(鱼/真菌)(EDT/鱼)重量的增加，g/kg/dSDay1至足月CA 13.4±1.8(135) 13.7±1.9(134) 13.3±1.8(135) 12.0±1.8(42)SDay1至4个月CA 7.3±0.5(127)7.3±0.5(126)7.2±0.5(121)7.1±0.7(41)SDay1至12个月CA 3.6±0.2(119)3.6±0.2(123)3.5±0.2(105)3.5±0.2(41)长度的增加，mm/周SDay1至足月CA 9.8±2.1(135)9.8±2.1(124)9.6±1.9(125)9.1±2.1(40)SDay1至4个月CA 8.4±1.0(120)8.3±0.9(123)8.1±0.9(113)7.9±1.1(39)SDay1至12个月C 5.7±0.5(111)5.6±0.5(18) 5.6±0.4(100)5.7±0.5(39)头围的增加，mm/周SDay1至足月CA§8.7±1.4(126)8.4±1.5(122)8.4±1.4(131)8.0±1.1(39)SDay1至4个月CA 5.5±0.7(121)5.5±0.5(121)5.5±0.6(116)5.5±0.5(38)SDay1至12个月CA 3.1±0.3(112)3.1±0.3(118)3.1±0.3(103)3.1±0.3(38)数值是平均±SD(对象的数量。通过对位置、性别、出生重量等级、受孕大小、母乳摄取、喂养*性别和喂养*出生体重等级控制的ANCOVA评定研究配方组的差别。)*在早期的新生期只用母乳喂养。只是参考组，这些数据并不包括在统计分析中。 长度的增加，其中≤1250g的婴儿对照组大于AA+DHA(鱼/真菌)组(LS平均5.74对5.67mm/周，p＝0.0078)。 头围的增加，其中女性婴儿对照组大于AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组(LS平均9.1对8.4mm/周，p＝0.0039)。§头围的增加，其中＞1250g婴儿AA+DHA(鱼/真菌)大于AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组(LS平均9.0对8.4mm/周，p＝0.0029)。表4b人体测量结果概览足月CA2个月 4个月 6个月 9个月 12个月 交互作用CA CA CA CA CA热心试验分析增加*体重 NS- NS - - NS长度 NS- NS - - C+＞F a只是≤1250g出生体重头围 C＞FF§b- NS - - NSb只是女性EF＞EFcc只是＞1250g体重绝对测量体重 EF＞CNS NS NS NS NS长度 EF＞CNS NS NS NS NS头围 NS NS NS NS NS NS可评价分析增加*体重 NS - NS - - NS长度 NS - C＞EF - - NS头围 C＞EFd- NS - - NS d.只是女性绝对测量体重 NS NS NS NS NS NS长度 NS NS NS NS NS NS头围 NS NS NS NS NS NS*由SDAY1至足月CA，SDAY1至4个月CA和SDAY1至12个月CA得到的增加。 C，对照配方 EF，AA+DHA(鱼/真菌)配方§EF，AA+DHA(蛋-DTG)/鱼配方NS，不明显
1.5.4医院喂养耐受性和临床问题在热心试验和亚组分析中，至于已经进行肠内喂养至少一天的婴儿的百分数、由于胃的残渣持续喂养的婴儿的百分数和达到全肠内喂养的天数，各研究配方组中没有差异(Table5)。同样，慢性肺病的发生率或全身性感染或引起坏死的小肠结肠炎的怀疑或确诊的情况，在研究配方组中没有差异。表5医院喂养耐受性和临床问题热心试验分析对照 AA+DHA AA+DHA EHM*(鱼/真菌)(EDT/鱼)对象的数量 142138 140 43持续喂养至少1天的 29 31 31 26婴儿％由于胃残渣，持续喂 20 17 16 14养的婴儿％达到全肠内喂养的天 12.8±14.6 12.8±12.1 12.5±14.1 15.8±18.9*数(100kcal/kg/d)怀疑NEC的婴儿％24 23 26 21确诊NEC的婴儿％4 430怀疑全身感染的婴儿 33 35 39 33％确诊全身感染的婴儿 14 15 15 7％慢性肺病的婴儿％ 25 25 22 28对位置控制的Cochran-Mantel-Haenzel或生存者(只是全肠内喂养的天数)分析统计，判定各研究配方组之间没有差异。没有发现明显的统计分析差异。*在早期的新生期只用母乳喂养。只是参考组，这些数据并不包括在统计分析中。
1.5.5行为和VEP敏度在分析之前根据协定(Weistheimer 1987)，行为和VEP敏度结果(cy/d)被以日志的形式转换，而几何平均值(cy/d)以八音度的形式用SD报告。(图2&3)。不管是否对于热心试验人群，还是对于严格喂养协定的遵守者进行分析，发现研究喂养对行为敏度没有发现明显的影响。相反，在6个月CA，随机分到AA+DHA(鱼/真菌)(LS平均+SE，11.4±0.1cy/d)或AA+DHA(蛋-DTG/鱼)(12.5±0.1cy/d)的婴儿的平均VEP敏度大于随机分到对照配方(8.4±0.1cy/d，p＝0.01)的婴儿。而且，随机分到补充了AA+DHA配方的婴儿的平均VEP敏度在4个月和6个月CA之间增长了，而随机分到对照配方的婴儿的平均VEP敏度没有增加。在亚组分析中，在6个月CA(p＝0.002)，喂养AA+DHA(蛋-DTG/鱼)(LS平均±SE，12.9±0.1cy/d)的婴儿的平均VEP敏度大于喂养对照配方(8.5±0.1cy/d)的婴儿。年龄为6个月CA(p＝0.08)，比对照婴儿显示了较高视觉敏度的喂养了AA+DHA(鱼/真菌)的婴儿(10.6±0.1cy/d)中存在最低限度的明显差别。
没有作出统计比较，在早先的新生期接受研究配方的婴儿6个月CA的VEP敏度小于仅用母乳喂养的婴儿。在喂养未补充的对照配方的婴儿中，差异是最明显的。
由该试验的结果建议补充LCP，使以VEP敏度评定的6个月CA的早产婴儿在视觉发育方面得到了改善。在6个月CA，随机分到AA+DHA(鱼/真菌)或AA+DHA(蛋-DTG/鱼)的婴儿的平均VEP敏度是约0.34和0.42八音度大于随机分到对照配方的婴儿。在VEP和认识敏度(Mayer&Dobson 1997)之间是有区别的，这个差异的大小相当于是斯内伦氏视力表上的一行(即，20/70对20/50)。与补充AA+DHA的婴儿，在4和6个月CA之间，其VEP敏度得到了改善所不同，随机分到对照配方的婴儿的VEP敏度没有差别，暗示后一组婴儿的视觉系统发育出现了减速。
具有较高的VEP敏度(1-和4-个月CA)的这些结果是稳定的，而据Birch等人(1992)和Faldella等人(1996)的报道，只用DHA补充的早产婴儿中(3-个月CA)有更成熟的VEP波动起伏状态。同样地，Carlson等人(1993a，1996a)通过Teller卡方法证明改善了视觉敏度，该方法用于在2和4个月CA，由高EPA鱼油源只补充DHA的早产婴儿和在2个月CA由低EPA鱼油源，只喂养DHA的健康早产婴儿。在本研究中，采用预先计划的比较，在研究组中没有记录到在视觉敏度方面(通过Teller方法)有明显的统计差异；然而在各测量时间(2-，4-，和6-个月CA)的Teller敏度锄后(post-hoc)分析显示由蛋-DTG/鱼源(LS平均±SE，1.8±0.1cy/d)喂养AA+DHA的婴儿在4个月CA，比4个月CA喂养对照配方(1.7±0.1cy/d，p＝0.0323)的婴儿具有更高的统计平均敏度分数。绝对的差异却是不明显的。除了由前述研究结果的普遍的一致性，说明了对视觉发育的强大益处以外，在早期的视觉评定和以后的运动神经和认知损害(Hakkinen等人1987；Iinuma等人1997；van Hof-van Duin等人1998；Vohr等人1992)之间，有相关联的身体生长。这些相互关系说明补充LCP对视觉系统的早期好处是会具有长足孕的结果；尽管这一假说仍然没有得到验证。
这四个先前出版的同等-回顾临床试验证明了补充DHA(没有AA)有助于改善视觉发育，也报道了早产婴儿的生长缓慢，或没有足够的动力发现在生长结果中有意义的差异(Birch等人1992；Carlson等人1993a；Carlson等人1996b；Faldella等人1996；Uauy等人1994)。Carlson等人(1993b)提出假说虽然适当摄取必需脂肪酸，亚油酸，早产婴儿仍需要AA膳食源用于最佳的生长。相反，Woltil等人(1998)报道早产婴儿中的AA血液水平与10天大小的人体测量相关，但在42天大小时消失，由该组推断AA状态与子宫内有关而与产后生长无关。由本文所述的该研究的结果说明将富含营养素的配方的喂养与补充AA+DHA结合，延长至至少6个月CA，且优选12个月CA，提供了一种机理从而实现了视觉发育的增强，而不会带来令人不快的负面生长的结果。在本研究中，从SDAY1至足月，4个月和12个月CA，增加的重量、长度或头围中，或在SDAY1、足月、2-、4-、6-、9-和12-月CA测量的绝对的重量、长度和头围的重复测量分析中，＞200统计比较中几乎没有发现差异和不一致的差异。(图1，表4a和4b)。
1.5.6VEP对比度灵敏度如表6和7所概述的，通过使用预计划的统计比较的研究配方组，婴儿的平均VEP对比度灵敏度的测量没有不同。然而，6-个月CA的1.5cyc/d对比度灵敏度锄后(post-hoc)分析显示被随机分到AA+DHA(蛋-DTG/鱼)(LS平均±SE，12.0±0.1，p＝0.0084)和AA+DHA(鱼/真菌)(10.0±0.10，p＝0.0396)研究配方组的婴儿比随机分到对照组(5.9±0.1)的婴儿具有更高的平均对比度灵敏度。在AA+DHA(蛋-DTG/鱼)和对照之间的仅有差异，采用Bonferroni调节至0.0167的α-水平仍然保持统计上明显的存在。表6在4个月CA使用对比度扫描(1.5、3.0和6.0cyc/d)的对比度灵敏度—热心试验对比度扫描 对照 AA+DHA AA+DHA EHM*(鱼/真菌) (蛋-DTG/鱼)1.5cyc/d平均±SEM(SD)8.1±0.1(0.5) 7.9±0.1(0.5) 9.6±0.1(0.6)10.1±0.1(0.4)中位数 8.98.7 16.5 12.7第1、第3四分位数 3.6，19.8 4.2，15.7 2.8，29.36.6，19.1n39 45 31 233.0cyc/d平均±SEM(SD)5.0±0.1(0.5) 4.3±01(0.4)6.3±0.1(0.5)5.6±0.1(0.4)中位数 6.23.8 6.2 63第1、第3四分位数 2.1，11.8 2.2，8.22.8，17.12.7，9.9n38 44 30 236.0cyc/d平均±SEM(SD)1.8±0.1(0.4) 1.5±0.0(0.3) 1.6±0.1(0.3)1.5±0.1(0.3)中位数 1.01.0 1.0 1.0第1、第3四分位数 1.0，3.2 1.0，2.01.0，1.7 1.0，2.2n37 42 32 22*对比度灵敏度是对比度阈值的倒数。在统计分析之前，这些数据被log10转换。平均、中位数和第1和第3四分位数值是反对数(几何平均数)。SEM和SD是log单位。采用对位置、性别、出生体重等级、在怀孕期间母亲的吸烟史、在家中的产后吸烟、母亲受教育程度和母乳摄取控制的ANCOVA，确定差异。没有发现喂养或喂养*访问明显的统计影响。 在早期的新生期只用母乳喂养。只是参考组，这些数据并不包括在统计分析中。表7在6个月CA使用对比度扫描(1.5、3.0和6.0cyc/d)的对比度灵敏度—热心试验对比度扫描 对照 AA+DHAAA+DHA EHM*(鱼/真菌) (蛋-DTG/鱼)1.5cyc/d平均±SEM(SD) 5.8±0.1(0.6)11.1±0.1(0.4)12.7±0.1(0.4)10.1±0.1(0.6)中位数 7.1 11.8 14.7 16.5第1、第3四分位数1.6，18.27.0，21.4 8.1，19.5 7.1，24.6n 39 4733233.0cyc/d平均±SEM(SD) 4.9±0.1(0.5)6.9±0.1(0.4) 7.6±0.1(0.4) 8.7±0.1(0.5)中位数 4.5 6.6 8.4 10.5第1、第3四分位数1.9，12.63.7，14.4 3.9，16.4 3.2，25.8n 39 4632236.0cyc/d平均±SEM(SD) 2.4±0.1(0.4)2.8±0.1(0.4) 3.6±0.1(0.5) 3.1±0.1(0.4)中位数 2.2 2.6 4.7 2.9第1、第3四分位数1.0，5.5 1.0，4.8 1.0，7.6 1.0，7.0n 39 453322*对比度灵敏度是对比度阈值的倒数。在统计分析之前，这些数据被log10转换。平均、中位数和第1和第3四分位数值是反对数(几何平均数)。SEM和SD是log单位。采用对位置、性别、出生体重等级、在怀孕期间母亲的吸烟史、在家中的产后吸烟、母亲受教育程度和母乳摄取控制的ANCOVA，确定差异。没有发现喂养或喂养*访问明显的统计影响。 在早期的新生期只用母乳喂养。只是参考组，这些数据并不包括在统计分析中。
1.5.7一般的发育水平不管数据的统计分析是否包括随机分配研究的所有婴儿还是只包括严格遵守喂养协定的那些婴儿，通过MDI分数，在研究配方组中没有发现差别(Table8)。相反，通过PDI分数(p＝0.005)，观察到统计明显的喂养*出生体重交互作用。小于等于1250g严格遵守喂养协定的喂养AA+DHA(鱼/真菌)(LS平均+SE，90.6+4.4)的婴儿平均PDI分数大于对照(81.8+4.3；p＝0.007)的婴儿。Bayley PDI测量总的运动能力例如坐、走、站、爬楼梯以及手和手指的细微运动技巧。就我们所知道的，这是用以证明补充AA+DHA提高了运动神经发育分数的第一个预期随机试验。
通过研究配方组，明显延迟了心智或运动神经发育的热心试验或亚组人群中对象的百分数没有统计上的不同。例如，在热心试验人群中，分别约有4和12％的婴儿具有的MDI和PDI分数＜70，而所述的分数是延迟发育的明显指示水平。
1.5.8Language在热心试验或亚组分析中在9或14个月CA，三个研究配方组中词汇理解力没有不同(表8)。同样，在14个月CA产生词汇能力上，存在研究喂养的差异。在这些分析中，讲西班牙语的婴儿和双胞胎，通过计算百分数和性别特性标准以及采用说英语婴儿验证的标准分数转换，而被包括进来(Fenson等人1993)。Jackson-Maldonado(1993)报道对于说西班牙语和说英语的儿童获得语言的渠道是相似的，并证明了这一接近。然而当说西班牙语的婴儿和双胞胎从热心试验分析中去除时，随机分到对照组(LS平均±SE，94.1±2.9)的婴儿词汇理解力比随机分到AA+DHA(蛋-DTG/鱼)(102.2±2.8，p＝0.0145)或AA+DHA(鱼/真菌)组(100.6±2.9，p＝0.0422)的婴儿要低。同样在可评估分析中，对照喂养婴儿(LS平均±SE，95.3±3.3)比AA+DHA(蛋-DTG/鱼)喂养的婴儿(105.4±3.4，p＝0.118)词汇理解力更低。
表8认知、运动神经和语言发育热心试验*特性对照 AA+DHAAA+DHA EHM*(鱼/真菌) (EDT/鱼)在12个月CA婴儿发育的Bayley等级心智发育92.2±12.292.8±11.2 93.4±13.0 93.1±14.5指数(MDI) (119) (123)(105) (41)精神运动发育86.3±16.287.2±14.2 85.9±14.4 86.8±15.2指数(PDI) (118) (123)(105) (41)MacArthur语言发育清单词汇理解力分数9个月 103.7±21.9 104.2±19.1 101.7±19.4 96.2±17.6(122) (122)(102) (39)14个月 99.9±17.1101.6±16.4 101.2±18.8 97.0±14.5(98) (101)(93)(38)产生词汇分数14个月 97.8±18.496.6±17.2 98.3±18.1 96.6±18.9(98) (102)(93)(38)数值是平均±SD(对象的数量)。*通过对位置、性别、出生重量等级、喂养*性别、喂养*出生重量等级、HOME、母亲WAIS-R生词汇分数、受孕年龄、受孕大小、母乳摄取、出生次序和亲生母亲的母语控制，使用ANCOVA确定配方组的差别。小于50的MDI和PDI分数，被从统计分析中排除，但包括在本表所列的数据中。没有发现明显的研究配方喂养、喂养*性别或喂养*出生体重等级的统计影响。 在早期的新生期只用母乳喂养。只是参考组，这些数据并不包括在统计分析中。
1.5.9信息处理对于新奇偏爱(p＝0.10)和在熟悉期(p＝0.07)平均观看持续时间，观察到统计明显的喂养*交互作用，虽然在只对于新奇偏爱在各个时间点的研究喂养组的成对智慧比较中产生差异(Table 9)。在6个月CA，AA+DHA(蛋DTG/鱼)喂养的婴儿(LS平均±SE，60.0±0.8)的平均新奇偏爱明显大于对照(57.5±0.8；p＝0.02)和AA+DHA(鱼/真菌)喂养的婴儿(56.6±0.8，p＝0.003)。采用Bonferroni调节的0.0083α-水平，在AA+DHA(鱼/真菌)和AA+DHA(蛋DTG/鱼)之间仍然保持统计明显的差异。表9婴儿智力的Fagan测试—平均±SEM(SD)—可评估的*)对照 AA+DHA AA+DHA EH (鱼/真菌)(蛋-DTG/鱼)％新奇偏爱6个月 57.5±0.857.0±0.859.4±0.857.9±1.1(7.4)a，b(7.5)a(7.7)b(7.0)9个月 58.4±0.859.0±0.858.9±0.858.9±1.3(7.2)(7.4)(7.2)(7.7)在熟悉阶段平均持续观看时间，sec6个月 2.2±0.1 2.2±0.1 2.1±0.1 2.2±0.1(0.8)(1.0)(0.8)(0.8)9个月 1.4±0.0 1.4±0.0 1.5±0.1 1.6±0.1(0.4)(0.4)(0.5)(0.4)在测试阶段，平均持续观看时间，sec6个月 1.9±0.1 1.8±0.1 1.9±0.1 1.9±0.1(0.6)(0.7)(0.6)(0.6)9个月 1.3±0.0 1.3±0.0 1.3±0.0 1.3±0.0(0.3)(0.4)(0.4)(0.3)在熟悉的简短时间的平均持续观看时间，se 6个月 1.7±0.1 1.8±0.1 1.6±0.1 1.8±0.1(0.7)(1.4)(0.8)(0.8)9个月 1.3±0.0 1.4±0.1 1.5±0.1 1.4±0.1(0.4)(0.6)(0.7)(0.4)通过对位置、性别、访问、出生重量等级、HOME、WAIS-R、受孕年龄、受孕大小、经产状况、母亲年龄、母乳摄取、喂养*访问、喂养*性别和喂养*出生重量等级的控制，使用用于重复测量分析的PROC MIXED确定研究配方组的差别。对于新奇偏爱(p＝0.0992)，在熟悉的简短的时期平均持续观看时间(p＝0.0712)发现明显的喂养*访问统计交互作用。采用Bonferroni调节的0.0083α-水平，不象在每一行上标所指示的，有统计上明显的差异。 在早期的新生期只用母乳喂养。只是参考组，这些数据并不包括在统计分析中。 在头三个熟悉期间的头10(6个月CA)或6(9个月CA)秒期间1.5.10血液脂肪酸分析如所预料的，在SDAY1，关于血浆或RBC的PE或PC部分AA和DHA的浓度(g/100g)，研究配方组没有明显不同(未显示)。相反，食用鱼/真菌或蛋DTG/鱼配方的婴儿在出院时，一般比在对照研究组中的婴儿其血液中的AA和DHA浓度要高。在出院时，在对照组、鱼/真菌、蛋-DTG/鱼和EHM组的婴儿平均(±SD)血浆磷脂AA水平(wt％)分别是9.9±1.8、12.0±1.7、12.5±2.2和14.1±2.3，而平均(±SD)DHA水平分别是2.6±0.7、3.4±0.7、3.3±0.6和3.5±0.8。
除了在RBC PE中的AA水平，在2个月和4个月CA的血液脂肪酸数据的统计分析，显示出用补充AA+DHA配方喂养的婴儿血浆中的AA和DHA血液水平和RBc磷脂大于对照配方(p＜0.0001；表10)喂养的婴儿。用AA+DHA(鱼/真菌)，但不用AA+DHA(蛋-DTG/鱼)喂养的婴儿中RBC PE中AA的量比对照配方(p＝0.02)喂养的婴儿要高。表10在4和12个月CA，血浆和红血细胞磷脂中脂肪酸含量(wt％)--可评估的分析对照 AA+DHA AA十DHAEHM*(鱼/真菌) (EDT/鱼)血浆204n-6(AA 4个月CA 8.3±1.8(63) 12.1±2.0(64) 11.8±2.1(53) 13.0±1.7(10)12个月CA8.6±2.5(61) 11.3±2.2(58) 11.1±2.3(51) 10.6±2.5(22)226n-3(DHA 4个月CA 2.2±1.0(63) 3.9±0.9(64) 3.5±0.9(53) 4.1±0.8(10)12个月CA1.8±0.8(61) 3.4±0.8(58) 3.1±0.8(51) 2.6±0.9(22)红血细胞磷脂酰乙醇胺204n-6(AA)§4个月CA 17.5±7.1(67) 18.7±7.7(67) 17.9±7.0(55) 18.0±7.0(15)12个月CA17.3±6.1(61) 18.7±5.9(58) 18.5±6.5(56) 19.9±5.5(26)226n-3(DHA 4个月CA 3.2±1.7(66) 4.7±2.6(67) 4.3±2.3(55) 4.1±2.6(15)12个月CA2.4±1.1(61) 4.2±2.0(58) 4.0±1.9(56) 4.1±2.2(26)红血细胞磷脂酰乙醇胺204n-6(AA 4个月CA 4.4±1.6(65) 5.8±2.5(65) 5.6±2.2(56) 6.5±2.4(15)12个月CA4.2±1.8(61) 5.4±2.0(58) 5.5±2.0(56) 6.0±1.9(26)226n-3(DHA 4个月CA 0.9±0.4(60) 1.4±0.7(63) 1.4±0.7(54) 1.5±0.9(15)12个月CA0.7±0.4(61) 1.3±0.6(58) 1.1±0.5(56) 1.2±0.7(26)数值是平均±SD(对象的数量)。通过对位置、性别、出生重量等级、喂养*性别、喂养*出生重量等级和喂养*访问的控制，使用ANCOVA确定配方组的差别。*在早期的新生期只用母乳喂养。只是参考组，这些数据并不包括在统计分析中。 对照＜AA+DHA(鱼/真菌)，AA+DHA(蛋-DTG/鱼)，p＜0.0001。 AA+DHA(蛋-DTG/鱼)＜AA+DHA(鱼/真菌)，p＜0.0169。§对照＜AA+DHA(鱼/真菌1，p＜0.01731.5.11严重和/或意外的负面结果(SAE)具有至少一种SAE，随机分到对照、AA+DHA(鱼/真菌)，AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组的婴儿百分数在研究配方组中没有差异，分别有44％，46％，47％的婴儿具有至少一种SAE。随机分到对照、AA+DHA(鱼/真菌)和AA+DHA(蛋-DTG/鱼)组的婴儿，分别有38％、39％和43％的婴儿具有至少一次重新住院。当在各出生体重等级(750-1250g或1251-1800g)中进行喂养组比较时，SAE或重新住院的的数量比较没有差异。最后，在各SAE数量和字母系统以及严格等级中没有发现明显的统计喂养差异。
权利要求
1.一种营养组合物，包含一种富含营养素的基质，该基质包括一种脂肪酸源，而该脂肪酸源含有占总脂肪酸下述重量百分数的DHA，AA，ALA和LA，所述百分数分别是DHA至多约0.36％，AA至多约0.7％，ALA至少约2％，LA至少约15％。
2.根据权利要求1的营养组合物，含有占总脂肪酸下述重量百分数的脂肪酸，所述百分数分别是DHA至多约0.3％，AA至多约0.5％，ALA至少约2.2％和LA至少约15％。
3.根据权利要求1的营养组合物，其中ALA/DHA的比例范围是约4至40；而LA/AA的比例范围是约20至65。
4.根据权利要求1或2的营养组合物，其中ALA/DHA的比例范围是约6至25；而LA/AA的比例范围是约30至60。
5.一种营养组合物，包含一种富含营养素的基质，该基质包括一种脂肪酸源，而该脂肪酸源含有DHA，AA，ALA和LA，其中以占总脂肪酸的重量百分数计，DHA至多约0.36％，AA至多约0.7％，而其中ALA/DHA的比例范围是约4至40；而LA/AA的比例范围是约20至65。
6.根据权利要求5的营养组合物，其中以占总脂肪酸的重量百分数计，DHA含量是约0.19至0.3％，而AA含量范围是约0.35至0.7％。
7.根据权利要求6的营养组合物，其中ALA/DHA的比例范围是约6至25；而LA/AA的比例范围是约30至60。
8.根据权利要求1至7任一权利要求的组合物用于制备婴儿配方的用途，用以向早产婴儿提供营养直至所述的婴儿达到约6个月的修正年龄。
9.根据权利要求1至7任一权利要求的组合物用于制备婴儿配方的用途，用以向早产婴儿提供营养直至所述的婴儿达到约9个月的修正年龄。
10.根据权利要求1至7任一权利要求的组合物用于制备婴儿配方的用途，用以向早产婴儿提供营养直至所述的婴儿达到约12个月的修正年龄。
11.根据权利要求1至7任一权利要求的组合物用于制备婴儿配方的用途，用以向早产婴儿提供营养，而且避免了对人体测量生长的抑制。
12.根据权利要求1至7任一权利要求的组合物用于制备婴儿配方的用途，用以向早产婴儿提供营养，并与母乳结合喂养。
13.富含营养素的配方用于增强早产婴儿的神经发育的用途，所述配方含有DHA和AA，其特征在于如果所述的富含营养素的配方是摄取热量的唯一来源，则在持续至所述早产婴儿达到约6个月修正年龄的喂养方案中，提供的每kg体重平均日摄取量是约2至65mg DHA和约2至65mg AA。
14.根据权利要求13的用途，其中所述的富含营养素配方含有DHA和AA，其特征在于如果所述的富含营养素配方是摄取热量的唯一来源，则提供的每kg体重平均日摄取量是约3至35mg DHA和约5至50mg AA。
15.根据权利要求13的用途，其中所述的富含营养素配方含有DHA和AA，其特征在于如果所述的富含营养素配方是摄取热量的唯一来源，则提供的每kg体重平均日摄取量是约7至26mg DHA和约20至40mg AA。
16.富含营养素的配方用于增强早产婴儿的神经发育的用途，所述配方含有DHA和AA，在持续至所述早产婴儿达到约6个月修正年龄的喂养方案中，其浓度基于总脂肪酸的重量百分数是约0.15至1.0％的DHA和约0.2至1.0％的AA，并构成早产婴儿热量摄取的100％至约50％，。
17.根据权利要求16的用途，其中所述的富含营养素配方含有DHA和AA，其浓度基于总脂肪酸的重量百分数是约0.19至0.36％的DHA和约0.35至0.7％的AA。
18.根据权利要求16的用途，其中所述的富含营养素配方含有DHA和AA，其浓度基于总脂肪酸的重量百分数是约0.22至0.3％的DHA和约0.4至0.5％的AA。
19.根据权利要求13至18任一权利要求的用途，其中增强神经发育包括增强视觉发育。
20.根据权利要求13至18任一权利要求的用途，其中增强神经发育是增强运动神经发育。
21.根据权利要求13至18任一权利要求的用途，其中增强神经发育是增强语言发育。
22.根据权利要求13至18任一权利要求的用途，其中所述的富含营养素配方以与母乳喂养结合的喂养方案进行。
全文摘要
本发明公开了用于向早产婴儿提供营养和增强神经发育的方法。还公开了一种改进的营养组合物，其中含有特定量的DHA和AA，以及其前体必需脂肪酸α－亚麻酸和亚油酸。该方法包括在一个延长的喂养期内用补充LCP的富含营养素的配方喂养，延长一般直至至少3个月修正年龄(CA)，优选6或甚至12个月CA。神经发育，例如视觉发育、运动神经发育和语言发育得到了增强，而没有发现对人体测量生长的延迟或抑制。
文档编号A61K31/201GK1436048SQ01811142
公开日2003年8月13日 申请日期2001年4月12日 优先权日2000年4月13日
发明者D·L·奥康诺, N·奥埃斯塔, R·J·梅里特, K·费茨格拉尔德－古斯塔夫森, R·哈尔特, J·亚诺夫斯基, M·纽林格, L·T·辛格 申请人:艾博特公司