一种具有抗肿瘤、抗自由基损伤和调节免疫的天然生物反应调节剂的制作方法

专利名称：一种具有抗肿瘤、抗自由基损伤和调节免疫的天然生物反应调节剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有调节免疫、抗肿瘤和抗自由基损伤的中药组合物，尤其用于治疗恶性肿瘤、慢性肝炎、慢性胃炎、糖尿病、慢性支气管炎、慢性肾病、心血管疾病和机体免疫力低下的各类疾病的中药组合物。
近年来，现代医学在肿瘤治疗的研究方面已取得无可争议的成就。但是，由于恶性肿瘤发病隐匿，多数患者就诊时已进入中晚期，错过了早期手术的机会，而且中晚期患者往往是癌毒与体虚并重，机体免疫力极度低下，因此对于中晚期恶性肿瘤患者的治疗，最根本的目的是延长生存期和提高生存质量，达到有效的荷瘤生存。
机体免疫状态是关系到肿瘤患者生存期及生存质量的重要因素，大量研究证实中晚期肿瘤患者术后、放化疗后复发转移甚至恶液质等无不与机体免疫机能状态极度低落相关，从而直接影响肿瘤患者的生存期及生存质量。现代科学研究无可争辩地证实了中医药在机体免疫调节方面的独特治疗优势。大量的研究资料显示杀伤肿瘤细胞和减少副作用、保护机体的免疫功能具有同等重要的意义。因此，将“杀死癌细胞”和“调整人体的免疫功能”有机结合是治疗肿瘤的新发展趋势。
各种慢性疾病，如慢性肝炎、慢性胃炎、糖尿病、慢性支气管炎、慢性肾病、心血管疾病等均可表现为机体免疫力低下，中医则归属于虚证。清代名医王清任认为，元气是生命的根源，人体脏腑经络、四肢百骸的所有功能活动均赖元气，所谓“人体坐转动全仗元气，若元气足则有力，元气衰则无力，元气绝则死矣”，又指出“气有虚实，实者邪气实，虚者正气虚”，即元气之为病唯有虚证，无实证可言。因此，他将人体许多疾病都归之于虚。实验研究证明在多种不同疾病中因其中医虚证的病理基础相同，临床症状的趋同性表现突出，机体免疫功能低下是虚证的共同特点，气虚、阴虚以及气血两虚等虚证均可表现为机体免疫功能低下。因此，通过调节免疫功能和抗自由基损伤可以有效达到治疗各种虚证的目的。
本发明的组合物包括1-120重量份黄芪，1-100重量份西洋参，1-100重量份枸杞子，1-80重量份七叶胆，1-80重量份银耳，1-100重量份女贞子，1-100重量份黄精。
本发明的组合物优选包括10-60重量份黄芪，10-50重量份西洋参，10-50重量份枸杞子，10-40重量份七叶胆，10-40重量份银耳，10-50重量份女贞子，10-50重量份黄精。
本发明的组合物更优选包括20-50重量份黄芪，20-40重量份西洋参，20-40重量份枸杞子，20-30重量份七叶胆，20-30重量份银耳，20-40重量份女贞子，20-40重量份黄精。本发明的配方依据祖国医学认为，气是人生命活动的根本动力，血液之运行，津液之滋润，经络之通畅，脏腑之安和，皆赖于气。“正气存内，邪不可干”，气和则邪无从生，百病不侵。故配方通过扶正益气，养血生精，和调气血，从而达到调节免疫、抗肿瘤和抗自由基损伤的功效。
配方中黄芪为补气扶正之要品，固藩蓠，和气血，保护DNA，调节免疫、抗肿瘤为君；西洋参提高免疫功能、扶正固本、抗自由基损伤为臣，黄精、枸杞子为补气养元抗衰之品，更与抗突变、抗肿瘤之妙品女贞子、银耳相合益气养精，滋补气血共为佐，臣佐相辅，上以润肺，中以养肝，下以固肾，通补三焦而和调阴阳，更有七叶胆补五脏，强身体，富含多种免疫活性物质，改善生理状态，调节免疫功能而为使，全方按君、臣、佐、使科学配伍。近年来的现代研究科学的证实了黄芪、西洋参、枸杞子、银耳、黄精、女贞子、七叶胆的调节免疫、抗肿瘤和抗自由基损伤的作用机理，我们以此为依据确定“本发明药物”的配方，本发明药物具有调节免疫、抗肿瘤和抗自由基损伤的作用。
1、黄芪 主要成分皂甙、多糖、氨基酸、黄酮类、微量元素等。
(1)、黄芪免疫调节作用①黄芪能增加小鼠网状内皮系统的吞噬功能，使其吞噬指数明显提高。黄芪多糖能使小白鼠吞噬率和细胞百分率及指数明显增强，黄芪皂甙甲能明显促进淋巴结B细胞增殖分化和浆细胞抗体合成，黄芪能使小白鼠血液中的白细胞及多核白细胞数明显增加，能对抗免疫抑制剂，强的松龙所致的脾脏、胸腺、肠淋巴结等免疫组织的萎缩作用和对外周白细胞减少作用，能增强吞噬细胞的吞噬功能。
②黄芪对正常机体的抗体生成功能有明显的促进作用，能增加小鼠抗体生成主要器官脾脏的重量，脾细胞数及抗体反应。
③人外周血淋巴细胞转化实验证明黄芪水煎剂可促进正常人和肿瘤病人的淋巴细胞转化率，促进机体细胞免疫功能。黄芪水煎液可使胸腺细胞糖皮质激素受体浓度降低40％，表明具有促进T细胞分化与成熟的作用。
④黄芪水煎剂可增强小鼠NK细胞的细胞毒活性，这一过程与诱生干扰素是同时发生的，黄芪对干扰素系统有明显的刺激作用，包括自身诱生，促进诱生和活性发挥三个方面。
(2)、黄芪的抗肿瘤作用《中医药医学报》报导黄芪多糖(APS)对6种细胞系瘤株移植后的抑瘤作用进行了试验，表明APS对小鼠S180，H22、Anip973，人HC腹水型细胞瘤株有明显的抑制作用，抑瘤率分别为51.0％、41.7％、40.0％、36.0％，对小鼠实体瘤B16、Lewis肺癌有效抑癌率分别为47.0％、32.0％。有研究表明，黄芪煎液加入培养的小细胞中，能诱生IFNr，通过调动机体免疫系统杀伤肿瘤细胞，如通过促进巨唑细胞及IL-2等细胞因子的作用，从而改变肿瘤细胞膜特性，增加肿瘤相关抗原表达及增加自然杀伤细胞(NK)活性而杀伤肿瘤。
2、西洋参 主要成分皂甙、多糖、氨基酸、微量元素、有机酸等。
(1)、西洋参的免疫调节作用 西洋参能明显对抗环磷酰胺所致的小鼠外围白细胞下降及胸腺和脾脏重量减轻，同时对免疫功能低下的小鼠网状内皮系统吞噬功能亦有明显的增强作用。西洋参能促幼鼠胸腺器官的发育，明显增加小鼠脾脏NK细胞的活性，协同ConA增加小鼠脾T细胞产生淋巴因子的能力。
(2)、西洋参的抗肿瘤作用 人参皂甙Rh1和Rh2经药理实验证明，对S180肉瘤细胞的荷瘤小鼠腹腔以50mg/kg注射，造成S期肿瘤细胞堆积(P＜0.05)，从而抑制S180肉瘤细胞的增殖，说明人参皂甙Rh2具有较强的抗癌活性。人参总皂甙400μg/ml剂量和人参二醇组皂甙(Ra、Rb1、Rb2、Rc、Rd、F等)以100μg/ml剂量可抑制小鼠ARS肉瘤细胞DNA的合成。人参抗肿瘤有效成分Rh2可抑制B16黑色素瘤细胞的生长，而Rh1则无作用20(R)-人参皂甙Rh2在2μg/ml浓度时可抑制人白血病细胞(HL-60)的生长。
3、枸杞子 主要成分多糖、甜菜碱、胡萝卜素、维生素B1、维生素B2、氨基酸等。
(1)、枸杞子的免疫调节作用 枸杞子能明显提高小鼠吞噬功能，使小鼠免疫球蛋白和补体活性明显提高。枸杞多糖对T细胞有弱分裂剂ConA诱导的脾淋巴细胞转化功能有显著协同作用。枸杞多糖能提高小鼠吞噬细胞的吞噬功能和血清溶菌酶活性，增加小鼠脾淋巴细胞数和LAK活性，提高实验动物和正常人淋巴细胞转化率。老年人服用枸杞多糖或枸杞子均可增强其细胞免疫和体液免疫。
(2)、枸杞子的抗肿瘤作用《中国中医基础学杂志》报导枸杞多糖能使腹水型(U14小鼠宫颈癌、S180纤维肉瘤)荷瘤小鼠的生命延长率达41％和85％，抑制实体型(U14小鼠宫颈癌、S180纤维肉瘤)肿瘤的生长，抑制率达81.5％、72.99％，体外实验研究提示，能明显抑制人宫颈癌Hela细胞和人胃腺癌MGC-803细胞的生长和繁殖，抑制癌细胞克隆的形成。枸杞多糖20～40mg/kg剂量可增强巨噬细胞对P815瘤的杀伤率，最高杀伤率达49.8％。《现代应用药学》报导枸杞精能明显抑制大鼠肉瘤W256的生长，其抑制率可达37.7％，并能延长艾氏腹水癌小鼠的生命，生命延长率可达35.8％。
4、七叶胆 主要成分皂甙、糖类、氨基酸等。
(1)、七叶胆的免疫调节作用 七叶胆皂甙对抗环磷酰胺对脾脏和胸腺的减重，增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能，显著增加T淋巴细胞数。400mg/kg七叶胆皂甙可使C57小鼠NK(天然杀伤细胞)细胞活性升高91％，提示有明显增强机体非特异性免疫监视功能作用，能显著提高环磷酰胺造成的白细胞降低。七叶胆对实验所致免疫功能低下有良好的保护调整，对正常免疫功能也有一定增强作用。
(2)、七叶胆的抗肿瘤作用 《肿瘤》杂志报道在七叶胆对小鼠艾氏腹水癌(EAC)的生长抑制作用的实验中发现，七叶胆可使EAC小鼠生命延长率达到46.6％，抑瘤率为36.2％。体外抗肿瘤作用七叶胆对不同的瘤细胞有不同程度的抑制作用，《中西医结合杂志》报道七叶胆皂甙对S180细胞株有直接杀灭作用，对直肠癌细胞系及体外培养的人肝癌细胞均有抑制作用，可使细胞DNA合成降低，抑制蛋白质合成，减少核分裂数，使细胞变性坏死。七叶胆总皂甙在50-250mg/L剂量时可通过下调Bcl-2蛋白低表达，进而促进细胞程序性死亡，具有促进人肝癌(HepG2-A16)细胞程序性死亡作用。
5、银耳 主要成分蛋白质、脂肪、碳水化合物、多种维生素、微量元素、氨基酸、多糖等。
(1)银耳的免疫调节作用 银耳多糖能全面提升机体免疫能力，增强体液免疫功能和细胞免疫功能，增加免疫器官重量，银耳多糖能明显促进小鼠网状内皮系统，提高血中碳粒的廓清速度，增强巨噬细胞的吞噬能力，其吞噬指数和吞噬系统均明显提高，能增加小鼠血清溶血抗体的含量，并拮抗CY对体液免疫的和细胞免疫的抑制，提高IgA、IgG、IgM的水平，提高动物补体水平，诱生干扰素，促进健康人的T淋巴细胞转化率。
(2)银耳的抗肿瘤作用 《吉林中医药》报道黄精多糖100、200、400mg/kg3个剂量可明显对抗环磷酰胺所致小鼠外周血白细胞的减少。
6、女贞子 主要成分乔墩果酸、女贞子甙、甘露醇多糖。
(1)、女贞子的免疫调节作用 女贞子具有良好的调节免疫机能效果，可促进健康人淋巴细胞转化，并使溶血空斑形成细胞数增多。女贞子水煎剂可使小鼠胸腺脾脏重量增加，明显提高小鼠血清溶血素抗体活性和IgG含量，增加对抗环磷酰胺的免疫抑制作用，小鼠腹腔注射女贞子多糖(FLLPS)可明显对抗CY所造成的荷瘤小鼠的淋巴增殖反应的抑制低下作用，临床实验资料还表明，女贞子在体内外对T细胞均有促进作用，这种促进作用是通过增强细胞表面受体的活性来促进T细胞的活性，并部分通过消除或削弱TS细胞作用来实现。女贞子能使恶性肿瘤病人淋巴细胞引起的局部抗宿主反应增强，无论是体内体外，女贞子均有增强免疫功能的作用。
(2)、女贞子的抗肿瘤作用 女贞子水浸剂60g/kg灌胃，每日1次，在体外和体内均可抑制Hela细胞和小鼠宫颈癌U14瘤株，对小鼠子宫颈癌抑制率为49.2％，女贞子水浸剂能抑制动物某些移植性肿瘤的生长。小鼠以女贞子醇提制剂40g/kg/d灌胃，能明显对抗环磷酰胺所致白细胞下降，尚有报道女贞子可刺激骨髓造血功能，改善或促进造血机能。
7、黄精 主要成分黄精皂苷、多糖、醌类化合物、氨基酸、微量元素。
(1)、黄精的免疫调节作用 黄精多糖具有免疫刺激调节作用，能显著增加实验动物T细胞百分率，并增加其免疫活性，对免疫功能低下的病人，黄精提取物也能增加其淋巴细胞转化率及E-玫瑰花结的形成率，使实验动物免疫器官胸脾或脾脏重量增重，增强单核巨噬细胞的吞噬功能。朱瑾波等实验证实，黄精不仅能提高正常小鼠的免疫功能，也能明显改善S180荷瘤小鼠及MNNG诱癌大鼠的免疫功能。
(2)、黄精的抗肿瘤作用 《吉林中医药》等报道黄精多糖100、200、400mg/kg3个剂量可明显对抗环磷酰胺所致小鼠外周血白细胞的减少。
本发明的组合物可以按照本领域的常规方法，制成任何适宜的临床剂型，例如丸剂、胶囊、口服液、散剂、浓缩制剂等。
一种优选的提取工艺包括将西洋参、1/2～1/4，优选1/3量黄芪，烘干，粉碎；将银耳煎煮，浓缩滤液；将银耳药渣与黄芪剩余量、七叶胆、枸杞子、黄精、银耳和女贞子浸提，浓缩为流浸膏，取流浸膏及西洋参和黄芪(配方量的1/3)细粉，采用喷雾干燥、一步制粒法进行一步制粒，控制颗粒水分小于3％，再粉碎成60目细粉，装入胶囊，制成胶囊制剂。
还有一种提取工艺将黄芪、西洋参、枸杞子、银耳、黄精、女贞子、七叶胆加12倍量的水，温浸2h，煎煮2次，每次1h，滤过，合并滤液，浓缩至1∶1，加乙醇使含醇量达60％，调节pH至5.5，静置72h，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成浸膏，采用喷雾干燥、一步制粒法或联合制粒法进行制粒，装入胶囊，制成浓缩胶囊。
本发明的药物的剂量可以根据病人年龄、体重、疾病的种类、疾病的轻重程度、病程的长短等因素变化。作为指导的通常用量为1-4g/日，可分为2-4次服用。
实施例11、准备多功能提取罐、敞开锅、不锈钢托盘、粉碎机、小水泵、不锈钢物料桶等设备，确保内壁无任何杂质。
2、质验和配方对黄芪、西洋参、枸杞子、七叶胆、银耳、黄精、女贞子进行抽样质量检验，检验合后，按配方精确称量，备用，3、粉碎取西洋参50kg、黄芪20kg，洗净，70℃烘干称重，粉碎100目筛，细粉称重备用。
4、水煎提取水提取(1)取40kg银耳投入多功能提取罐，加水10倍量，浸泡4小时，煎煮2小时，滤过，滤液转下浓缩。水提取(2)保留银耳药渣投入黄芪40kg、七叶胆40kg、枸杞子50kg、黄精30kg、女贞子30kg，加水10倍量，浸泡1小时，加热微沸1小时，再联动提取6小时，合并银耳滤液，减压浓缩至流浸膏比重1.16～1.18/50℃。
5、一步制粒取上浓缩液及西洋参和黄芪(配方量的1/3)细粉，采用喷雾干燥、一步制粒法进行一步制粒(集混合、制粒、喷雾干燥在同一密闭容器内一次完成。药物粉末粒子在容器中呈环形流化状态，受到经过净化后的加热空气预热和混合，将浓缩液液雾化喷入，使药物粉末粒子聚集成含有流浸膏的团粒，由于热空气对药物团粒的不断干燥，使团粒中水分蒸发，流浸膏凝固，此过程不断重复进行，形成理想的、均匀的多微孔球状颗粒)，控制颗粒水分小于3％，再粉碎成60目细粉，称重，60Co辐照杀菌(照射剂量为6Kgy，时间为4小时)。
6、填充包装半成品检验合格后，经物料口送入10万级净化室中，用1号胶囊填充、分装、压板、装盒、装箱，质量检验。
实施例21、准备多功能提取罐、敞开锅、不锈钢托盘、粉碎机、小水泵、不锈钢物料桶等设备，确保内壁无任何杂质。
2、质验和配方对黄芪、西洋参、枸杞子、七叶胆、银耳、黄精、女贞子进行抽样质量检验，检验合后，按配方精确称量，备用，3、粉碎取西洋参55kg、黄芪15kg，洗净，70℃烘干称重，粉碎100目筛，细粉称重备用。
4、水煎提取水提取(1)取50kg银耳投入多功能提取罐，加水10倍量，浸泡4小时，煎煮2小时，滤过，滤液转下浓缩。
水提取(2)保留银耳药渣投入西洋参30kg、黄芪30kg、七叶胆20kg、枸杞子60kg、黄精20kg、女贞子20kg，加水10倍量，浸泡1小时，加热微沸1小时，再联动提取6小时，合并银耳滤液，减压浓缩至流浸膏比重1.16～1.18/50℃。
5、一步制粒取上浓缩液及西洋参和黄芪(配方量的1/3)细粉，采用喷雾干燥、一步制粒法进行一步制粒，控制颗粒水分小于3％，再粉碎成60目细粉，称重，60Co辐照杀菌(照射剂量为6Kgy，时间为4小时)。
6、填充包装半成品检验合格后，经物料口送入10万级净化室中，用1号胶囊填充、分装、压板、装盒、装箱，质量检验。试验一 本发明药物的临床疗效试验本发明药物具有免疫调节、益气补虚、扶正固本、抗肿瘤、抗自由基损伤之功效，适用于各种正气虚弱、气血不足、精气亏耗之病症，如中晚期肿瘤，慢性肾病，慢性肝炎，慢性胃炎，慢性支气管炎，心血管疾病，糖尿病等慢性病患者和机体免疫力低下的各类疾病。一、本发明药物对中晚期恶性肿瘤患者生存期的影响目的探讨本发明药物对中晚期恶性肿瘤患者的生存期及生存质量的影响。方法采用2∶1完全随机化的分组方法，将90例中晚期恶性肿瘤患者随机分为实验组(n＝60)与对照组(n＝30)。对应用本发明药物治疗后的60例中晚期肿瘤患者进行生存期和生存质量的随访研究。结果本发明药物对中晚期恶性肿瘤治疗后1年生存率为50.00％，一年以上生存率为48.33％，中位生存天数为495天，治疗后生存质量(Kamofsky分)较治疗前有明显的提高，与对照组相比较，差异有显著性意义(P＜0.05)。提示本发明药物可延长中晚期恶性肿瘤患者的生存期，提高患者生存质量。
1、临床资料(1)病例纳入标准①已经病理组织学或细胞学确诊，或有可靠的肿瘤标记，结合临床确诊的中晚期恶性肿瘤患者。②无药物过敏史。③病情允许观察一个月以上者。(2)病例一般资料本组纳入临床观察的共90例中晚期恶性肿瘤患者(获得随访的76例)，全部病例均经I级(病理学或细胞学)和II级(CT、MRI、X线、B超中两项联合诊断)临床诊断确诊。其中男54例，女36例；年龄最小者15岁，最大者74岁，30岁以内者18例，31-50岁者24例，50岁以上者48例。实验观察的90例中晚期癌症病例中胃癌21例，食管癌10例，肺癌16例，肝癌8例，肠癌7例，宫颈癌9例，膀胱癌5例，其他(骨，淋巴，乳房等)恶性肿瘤14例。本组病例中，曾作手术者21例，化疗者35例，放疗者15例，未作其他特殊疗法者19例。
2、治疗方法(1)分组方法采用2∶1完全随机化的分组方法，查随机排列表，将90例中晚期恶性肿瘤患者随机分为实验组与对照组。其中实验组60例，对照组30例，对两组患者治疗前的非治疗因素如年龄、性别、肿瘤种类进行统计学处理，P＞0.05，无显著差异，具有均衡可比性。(2)治疗方法实验组本发明药物，0.3g/粒，3次/日，3-4粒/次，口服。一个月为一个疗程。对照组维寿宁胶囊，0.45g/粒，3次/日，3-4粒/次，口服。一个月为一个疗程。(3)临床观察指标生存率、生存质量(Kamofsky)。(4)统计方法采用x2检验和t检验。(5)疗效评定标准生存质量(Kamofsky)评分标准(略)。
3、治疗结果(1)随访结果随访采用经治医生、随访部和家属双重填表信访、电话随访、邮寄回影像复查资料和复诊等多种形式。实验获得早期随访(6个月～1年)39例，中期随访(1年～2年)27例，长期随访(2年以上)10例。在观察期间，有14例患者生存期未足6个月，其中对照组13例，治疗组1例。(2)生存期观察临床观察表明本发明药物对中晚期恶性肿瘤治疗后1年生存率为50.00％，一年以上生存率为48.33％，中位生存天数为495天，与对照组相比，差异有显著意义(P＜0.05)见表1，显示本发明药物在延长中晚期恶性肿瘤患者的生存期方面有较好的疗效。表1 本发明药物组与化疗对照组治疗后生存率的比较分组 例数 早期随访中期随访长期随访生存率中位生存天数6个月～1年 1年～2年2年以上 治后1年＞1年化疗对照组 30 9例 6例 2例 30.00％26.67％ 308天本发明药物组 60 30例21例8例 50.00％*48.33％*495天注*本发明药物组与化疗对照组相比较，P＜0.05。
(3)生存质量观察 采用卡氏评分标准，对90例中晚期恶性肿瘤患者进行临床观察，结果见表2，60例肿瘤患者经本发明药物治疗后，其生存质量较治疗前明显提高，治疗后两组肿瘤患者Karnofsky分的变化差异显著(P＜0.01)，提示本发明药物具有提高中晚期肿瘤患者生存质量的作用。表2 本发明药物治疗前后生存质量(Kamofsky)比较分组观察例数 Kamofsky分(d±SD) P值(N) 治疗前 治疗后化疗对照组 30 32.36±10.4547.28±7.91＜0.01本发明药物组60 31.47±11.0669.13±8.33*＜0.01注*本发明约物组与化疗对照组相比较，P＜0.05。
4、讨论 机体免疫状态是关系到肿瘤患者生存期及生存质量的重要因素，大量研究证实中晚期肿瘤患者术后、放化疗后复发转移甚至恶液质等无不与机体免疫机能状态极度低落相关，从而直接影响肿瘤患者的生存期及生存质量。大量研究无可争辩地证实了中医药在机体免疫调节方面的独特治疗优势。大量的研究资料显示杀伤肿瘤细胞和减少副作用、保护机体的免疫功能具有同等重要的意义。生物反应调节剂和生物疗法就是适应这一发展趋势而提出的一种新颖的抗肿瘤的治疗方法，其治疗思路是把“杀死癌细胞”和“调整人体的免疫功能”有机结合。本发明药物为一种纯天然的生物反应调节剂，富含葡聚糖和人参皂甙成份，对机体具有免疫杀伤机能活化作用。传统医学认为中晚期肿瘤患者机体免疫系统全面崩溃引起的气血俱衰、正虚癌毒壅滞是影响其生存期及生存质量的主要因素，本发明药物是一种纯天然的生物反应调节剂(Biological Response Modify——BRM)，能激活免疫系统功能，提升CD3、CD4及NK细胞和LAK细胞的活性，杀伤癌细胞，抑制和稳定瘤体，改善生存质量并延长生存期，从而达到有效“荷瘤生存”的目的。二、本发明药物联合化疗治疗中晚期恶性肿瘤的临床疗效本组临床观察152例中晚期恶性肿瘤(包括胃癌、肺癌、肝癌、食管癌、卵巢癌、肠癌，膀胱癌、肾癌等)。本发明药物联合化疗治疗后临床总有效率91.45％，其中胃癌、肺癌、肝癌临床总有效率分别为93.93％、93.33％、93.33％，见表3。临床结果表明，本发明药物联合化疗可有效的杀伤癌细胞，增强化疗的敏感性，提高抗肿瘤的临床疗效，改善生存质量并延长生存期，从而达到有效“荷瘤生存”的目的。
表3 本发明药物联合化疗治疗恶性肿瘤的临床疗效统计癌种分类例数(n) 显效 有效 无效 总有效率胃癌33 18(54.55％)13(39.39％)2(6.06％)93.93％肺癌30 16(53.33％)12(40.00％)2(6.67％)93.33％肝癌17 5(29.41％) 9(52.94％) 3(17.65％) 82.35％食 管 癌38 26(68.42％)10(26.32％)2(9.09％)90.91％肠癌20 10(50.00％)8(40.00％) 2(10.00％) 90.00％其他癌症14 7(50.00％) 5(35.71％) 2(14.29％) 85.71％合计152 82(53.95％)57(37.50％)13(8.55％) 91.45％三、本发明药物对中晚期恶性肿瘤放化疗引起的外周血细胞减少症的临床疗效。
目的观察本发明药物治疗112例中晚期恶性肿瘤放化疗引起的外周血细胞减少症的疗效。方法将患者按照3∶1完全随机化的分组设计方法分为实验组和对照组，实验组给予放化疗+本发明药物；对照组给予放化疗+益血生胶囊。结果本发明药物治疗组的白细胞、红细胞、血小板回升作用明显优于对照组(P＜0.01、0.05)，同时本发明药物可明显改善放、化疗所致的乏力、恶心、虚弱、胃纳差等症状。结论本发明药物可有效的减轻放、化疗对骨髓造血功能的抑制，具有扶正升白作用。
1、资料与方法 (1)病例纳入标准①参照《中国常见恶性肿瘤诊治规范》，经病理组织学或细胞学确诊的恶性肿瘤患者。②放、化疗期间或治疗后出现外周血细胞减少，外周血白细胞总数低于4.0×109/L；③预计生存期不少于3个月者；④无造血功能障碍及药物过敏史；⑤年龄在18岁以上，80岁以下者。(2)排除标准①未接受放化疗的患者；②合并有严重的心、肝肾损害者。(3)临床资料本组纳入的符合以上标准的合格受试者共150例。分组方法将150例患者按照3∶1完全随机化的分组设计方法，查随机数字的排列表分为本发明药物治疗组(实验组)和对照组。本发明药物治疗组(实验组)112例，男64例，女48例，年龄21～76岁，平均年龄48.5，其中胃癌30例、肺癌37例，食管癌23例、乳腺癌15例，大肠癌7例。按国际TNM分期II期30例，III期68例，IV期14例。对照组38例，男20例，女18例，年龄22～74岁，平均年龄49.5，其中胃癌12例、肺癌10例，食管癌8例、乳腺癌5例，大肠癌3例。TNM分期II期11例，III期21例，IV期6例。两组病例年龄、性别、癌种、TNM分期及化疗方案均无显著性差异(P＞0.05)，有可比性。
2、治疗方法(1)观察方法第1周单用放化疗作为自身治疗前对照，白细胞计数＜3.0×109/L的病例纳入统计，第2周放化疗前3天开始实验用药，观察期间实验组和对照组停用其它升白药物。(2)放化疗方案食管癌DVB方案(DDP、VCR、BLM)治疗31例，同时采用60Coγ线放疗；胃癌EAP方案(VP-16.ADM.DDP)治疗42例；肺癌CAOP-16方案(CTX、ADR、VCR、VP-16)治疗47例。乳腺癌CMF方案(CTX+MTX+5-Fu)治疗20例。大肠癌FMC方案(5-Fu+MMC+ARA-C)治疗10例。(3)治疗方法实验组放化疗+“本发明药物”。本发明药物0.3g/粒，每日三次，每次3-4粒，口服。对照组放化疗+益血生胶囊。益血生胶囊每天三次，每次3粒，口服。
3、治疗结果 单纯化疗观察一周后，实验组与对照组白细胞总数下降均较为明显，用“本发明药物”治疗后白细胞总数回升水平与对照组的比较结果详见表4。结果显示本发明药物治疗后第3-5天白细胞数增加为4.86±2.54(×109/L)，第5-7天增至5.47±1.34(×109/L)，第10天白细胞增加到6.29±1.74(×109/L)，明显优于对照组，两组相比较，差异有显著性意义。说明“本发明药物”对外周血白细胞减少具有较好的治疗作用。
表4 本发明药物治疗前后外周血白细胞的动态观察(X±sD，×109/L)分组例数治疗前 治疗后(n) 3-5(d) 5-7(d)7-10(d)实验组 112 2.92±1.524.86±2.54*5.47±1.34*6.29±1.74**对照组 38 2.89±2.193.55±1.47 4.25±1.074.95±1.54注实验组(本发明药物)与对照组比较*P＞0.05；**P＜0.01。
4、讨论 本发明药物是一种纯天然的生物反应调节剂(Biological ResponseModify——BRM)，适用于各种正气虚弱、气血不足、精气亏耗病症。晚期肿瘤患者常伴有细胞免疫功能低下，肿瘤放化疗是把双刃剑，一方面攻击肿瘤细胞，另一方面严重攻伐正气，造成细胞免疫和体液免疫低下，骨髓抑制，进一步抑制了已经降低的免疫功能。本发明药物作为生物反应调节剂用于肿瘤的临床治疗，它一方面能够直接杀灭肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞分化、抑制血管形成，从而抑制肿瘤生长和转移；另一方面又可以固护正气，保护机体免疫系统，提高正常机体和肿瘤患者的免疫力，并且可以减轻放化疗的毒副作用，从中医角度讲，它即可“扶正”又可“荡邪”。临床结果表明本发明药物除对放化疗引起的白细胞减少有较好的治疗作用外，同时对红细胞、血小板等全血减少均有改善，临床观察还证实对恶性肿瘤患者常表现出的乏力、虚弱等到多种临床症状，本发明药物亦有较好治疗作用。四、本发明药物联合顺铂治疗恶性胸腹水的疗效观察目的观察本发明药物联合顺铂治疗恶性胸腹水的疗效。方法选择已确诊的中晚期肿瘤恶性胸腹水患者144例，随机分为两组，本发明药物+顺铂联合用药组与单用顺铂组各72例。结果本发明药物+顺铂组治疗恶性胸腹水临床总有效率为90.0％，与单用顺铂组相比较，差异有显著性意义(P＜0.05)。两组患者的副反应发生率单用顺铂组明显高于本发明药物+顺铂联合用药组(见表6)。结论本发明药物+顺铂联合用药可显著提高治疗恶性胸腹水的疗效，减轻顺铂的毒副反应，增强抗肿瘤效应，提高患者的免疫功能。
1、临床资料本组病例144例，均经组织学或细胞学证实为恶性肿瘤，并有X片、B超、CT等影像学检查提示中等量以上胸、腹水。其中男性75例，女性69例，年龄28-71岁，平均年龄51.8岁，原发病灶肺癌38例、肝癌34例、胃癌33例、胰腺癌20例、卵巢癌19例。
2、方法(1)治疗方法将144例病例随机分为两组本发明药物+顺铂联合用药组与单用顺铂组各72例。两组病例治疗前均先行胸腹腔穿刺抽液，抽液量一次600ml～3000ml。抽液时要严密监测血压、脉搏、呼吸状况，尽量放尽腔内积液，之后将顺铂50～80mg溶于生理盐水50ml，溶解后通过穿刺针注入胸腹腔内，嘱患者在1-2小时内卧床，反复改变体位，使药物充分分散到腔内各个部位。本发明药物+顺铂组本发明药物(3次/日，4粒/次，Po)+顺铂(50mg/次，1～2次/周)，连续1～2周；单用顺铂组顺铂50～80mg/次，1～2次/周，连续1～2周。(2)疗效评价标准按照WHO规定的癌性渗出液的疗效判定标准进行疗效判定显效(CR)渗出液消失，癌细胞阴性持续四周以上；有效(PR)渗出液基本消失或显著减少，癌细胞阴性持续四周以上；无效(NC)未达到上述指标。(3)统计学处理两组随机对照比较的临床资料采用SPSS统计软件进行X2检验。
3、治疗结果(1)两组胸腹水疗效观察本发明药物+顺铂联合用药组治疗恶性胸腹水临床疗效统计完全缓解(CR)31例，占43.06％；部分缓解(PR)37例，占51.38％；无变化(NC)4例，占5.56％，总有效率为94.44％，本发明药物+顺铂联合用药组与单用顺铂组相比，差异有显著性意义(P＜0.05)。详见表5。
表5 本发明药物联合顺铂治疗恶性胸腹水临床疗效统计分组 总例数 CRPR NC 总有效率(CR+PR)(n) n ％n％ n ％ ％单用顺铂组 72 28 38.89 32 44.44 12 16.6783.33本发明药物+顺铂组 72 31 43.06 37 51.38 45.56 94.44*注*本发明药物+顺铂组与对照组相比，X2＝4.5，P＜0.05。
(2)毒副作用 本发明药物+顺铂组与单用顺铂组红细胞及血小板无明显变化，肝肾功能、心电图无异常发现。两组患者的副反应发生率单用顺铂组明显高于本发明药物联合顺铂组(P＜0.05、0.01)，针对患者出现的发热、胸闷症状，单用顺铂组对症处理后好转，本发明药物+顺铂联合用药组未作特殊处理，5小时后症状消失，且本发明药物+顺铂联合用药组未出现乏力、恶心、呕吐及低血压症状，说明本发明药物可减轻顺铂的毒副反应，同时可起到增敏作用，提高患者的免疫功能。
表6本发明药物联合顺铂组与单用顺铂组毒副作用比较分组 总例数发热 胸闷 乏力 恶心 呕吐 低血压 白细胞下降单用顺铂组72168 13 15 12 8 18本发明药物+顺铂组 722**2*0**0**0**0**8*注本发明药物+顺铂与单用顺铂组比较，*P＜0.05、**P＜0.01。
4、本研究显示纯天然的生物反应调节剂(BRM)——本发明药物联合顺铂应用可显著提高临床治疗恶性胸腹水的疗效，增强抗肿瘤效应，并减少其毒副作用。究其机理，“本发明药物”乃是精选具有益气补虚、调节免疫作用的药物提取而成，其主要有效成分之一葡聚糖可增强人体淋巴细胞、巨噬细胞的转化，增强巨噬细胞消灭癌细胞的能力，另一主要成分人参皂甙可提高体内外的自然杀伤细胞-NK细胞活性，同时增强白介素-II和干扰素的活性。本发明药物与顺铂联合应用，一方面减轻了顺铂对患者机体免疫系统的伤害，增强对正常细胞及组织的保护作用，另一方面，本发明药物的免疫增强作用提高了抗肿瘤治疗的力度，提高了临床疗效。五、本发明药物对慢性病虚证患者的临床疗效目的探讨本发明药物对慢性病虚证患者的治疗作用。方法纳入中晚期肿瘤，慢性肝炎，慢性支气管炎，慢性肾病，糖尿病，慢性胃炎，肺心病等慢性病患者667例，采用本发明药物口服进行临床对比观察。结果本发明药物对慢性病虚证患者临床总有效率为93.15％，对神疲乏力、腰膝酸软、易患感冒、动则出汗等临床症状具有较好的改善作用，同时，本发明药物能明显提高慢性病虚证患者的细胞免疫功能，治疗后CD3、CD4、CD4/CD8上升显著，与对照组相比较，差异有显著性意义(P＜0.01)。
1、资料与方法(1)观察对象的纳入标准①观察对象为符合《中医虚证辩证参考标准》的气虚证、肺虚证、脾虚证、肾虚证、气血两虚、脾肺气虚、脾肾气虚的慢性病患者。(包括中晚期肿瘤，慢性肾病，慢性肝炎，慢性胃炎，慢性肺病，心脏病，糖尿病。)②年龄范围在35-75岁之间。③病情允许观察一个月以上者。④按规定用药，可判断疗效者。(2)中医虚证辨证标准根据全国中西医结合虚证与老年病研究专业委员会修订的《中医虚证辩证参考标准》进行辩证。(3)临床资料本组纳入符合以上标准的慢性病虚证患者共667例，其中中晚期肿瘤患者152例，慢性肝炎89例，慢性支气管炎70例，慢性肾病58例，糖尿病85例，慢性胃炎80例，肺心病68例，冠心病65例。按中医虚证辨证分型为气虚证45例、肺虚证40例、脾虚证32例、脾肺气虚23例、肾气虚23例、脾肾气虚18例、气血两虚15例。
2、治疗方法(1)观察方法①分组方法将667例患者按照3∶1完全随机化的分组设计方法，查随机数字的排列表分为实验组和对照组。②观察方法采用随机单盲对照法，实验组本发明药物，0.3g/粒，每日三次，每次3-4粒，口服。对照组服用“黄芪精口服液”，口服每次10ml，每日二次，1个月为1个疗程，服药期间饮食及生活习惯依旧。(2)观察指标虚证症状积分值，T细胞亚群。(3)疗效评定方法虚证积分值评定(略)。(4)统计学处理方法计数资料采用X2检验；计量资料采用t检验法分析，统计分析软件SPSSFor Windows 10.0。
3、治疗结果(1)本发明药物对各种慢性病患者的临床疗效见表7，结果提示本发明药物可作为生物反应调节剂用于恶性肿瘤、慢性肝炎、糖尿病、慢性肾病、慢性胃炎、慢性支气管炎、心血管疾病和机体免疫力低下的各类疾病的临床治疗。
表7 本发明药物治疗各种慢性病的临床疗效观察表病种分类 观察例数治疗结果(n)显效 有效无效总有效率恶性肿瘤 152 82(53.95％) 57(37.50％) 13(8.55％) 91.45％慢性肝炎 89 47(52.81％) 34(38.20％) 8(8.99％)91.01％糖尿病 85 41(48.24％) 35(41.18％) 9(10.59％) 89.41％慢性胃炎 80 38(47.50％) 33(41.25％) 9(11.25％) 88.75％肺心病 68 31(45.59％) 25(36.76％) 12(17.65％) 82.35％冠心病 65 29(44.62％) 26(40.00％) 10(15.38％) 84.62％慢性支气管炎 70 33(47.14％) 27(38.57％) 10(14.29％) 85.71％慢性肾病 58 24(41.38％) 22(37.93％) 12(20.69％) 79.31％(2)本发明药物对T细胞亚群的影响 本发明药物治疗后CD3、CD4、CD4/CD8比值上升显著，自身治疗前后比较，差异有显著意义(P＜0.05、0.01)，而对照组各项均无明显改善(P＞0.05)。本发明药物组(实验组)与对照组治疗后比较，有显著性差异(P＜0.01，表8实验结果表明本发明药物能明显提高慢性病虚证患者的细胞免疫功能。
表8 两组自身治疗前后T细胞亚群测定结果(X±SD)分组例数(N)CD3CD4CD8CD4/CD8实验组疗前 42859.5±9.2 36.1±9.520.9±7.21.73±0.65实验组疗后 42766.3±12.1**△△ 40.9±8.4**△△ 18.1±5.12.26±0.43*△对照组疗前 15559.3±11.3 35.2±12.2 20.7±7.51.70±0.81对照组疗后 15160.4±10.7 36.9±16.7 21.5±9.61.72±0.49注实验组即本发明药物组。*表示治疗前后自身比较*p＜0.05；**P＜0.01△表示本发明药物组与对照组治疗后比较 △p＜0.05；△△P＜0.01。
(3)本发明药物对各种慢性病虚证患者的临床疗效 临床结果显示本发明药物对慢性病虚证患者临床总有效率为93.15％。(见表9)表9 “本发明药物”疗效与辩证分型的关系辩证分型例数 显效(％) 有效(％) 无效(％) 总有效率(％)气虚证 33 20(60.61)12(36.36)1(3.03)96.97肺虚证 30 16(53.33)14(46.67)1(3.33)96.67脾虚证 24 14(58.33)9(37.50) 1(4.17)95.83脾肺气虚17 9(52.94) 6(35.29) 2(11.76) 88.24肾气虚 16 7(43.75) 7(43.75) 2(12.50) 87.50脾肾气虚14 5(35.71) 7(50.00) 2(14.29) 85.71气血两虚12 6(50.00) 5(41.66) 1(3.33)91.66合计14677(52.74)59(40.41)10(6.85) 93.154、讨论 本发明药物系由纯天然中药提纯而成的一种纯天然的生物反应调节剂(BRM)，临床上用于治疗恶性肿瘤、慢性肝炎、慢性胃炎、糖尿病、慢性支气管炎、慢性肾病、心血管疾病和机体免疫力低下的各类疾病取得了较好的疗效。临床观察结果表明经本发明药物治疗后临床总有效率为93.15％，对神疲乏力、腰膝酸软、易患感冒、动则出汗等临床症状具有较好的改善作用，同时，本发明药物能明显提高慢性病虚证患者的细胞免疫功能，治疗后CD3、CD4、CD4/CD8上升显著，与对照组相比较，差异有显著性意义(P＜0.01)。实验研究证明在多种不同疾病中因其中医虚证的病理基础相同，临床症状的趋同性表现突出，细胞免疫功能低下是虚证的共同特点，气虚、阴虚以及气血两虚等虚证均可表现为细胞免疫功能低下，本发明药物以虚论治因诸虚不足，五劳七损，久病虚弱所致的各种慢性病可谓正中纲要。经云“邪之所揍，其气必虚”，“正气存内邪不可干”，本发明药物以补正气、固根本、益气补虚、抗自由基损伤、调节免疫为治疗基础，在中晚期肿瘤、慢性肾病、慢性肝炎、慢性胃炎、心脏病，糖尿病等慢性病的治疗中显示了较好的疗效，值得进一步研究和探讨。试验二 本发明药物对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究探讨本发明药物对荷瘤小鼠体内和体外的抗肿瘤机理。方法体内抑瘤实验分别对肉瘤S180和H22腹水肝癌小鼠模型灌胃给药后取瘤称重，计算抑瘤率判断本发明药物对两种瘤体的抑制作用；生存期实验荷瘤小鼠接种癌细胞后24hr开始灌胃给药，10天于每3天给药一次，比较各组小鼠存活时间；体外抑瘤实验用体外培养法研究本发明药物对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用。结果本发明药物对两种实体瘤均有显著的抑制作用，并明显延长荷瘤小鼠的存活天数，同时，该产品可有效抑制HeLa细胞的生长。
1、实验材料(1)本发明药物内容物为褐色粉状，胶囊装，0.3g/粒。批号010903，人体推荐量每日3次，每次3-4粒，以每人每天3.6g计算(成人体重为60kg)即0.06g/天/kg。(2)试剂小牛血清上海生物制品研究所提供，56℃、30min灭活，-20℃冰箱保存。PRMI1640培养液PRMI培养干粉(GIBCO)、1％多抗(青、链霉素各100μg/ml，卡那、庆大霉素各50μg/ml)，应用时附加10％的小牛血清。生理盐水，批号010503。(3)仪器750-G型分光光度计，CO2培养箱等。(4)动物昆明种小鼠，雌雄均用，体重20g±2g，由河南医科大学实验动物中心提供。合格证号豫动合格证字176号。实验室室温为22-25℃，常规饲料喂养，饮水量不限。(5)瘤株肉瘤S180为河南省医科所药理研究室保存的传代瘤株，制备方法如下选择无破损无感染生产良好的传代8-10天的瘤株，在无菌条件下，将瘤体称重后剪碎，匀浆，与NS之比为1∶4，制成瘤悬液，接种于受试鼠腋部皮下，0.2ml/只。H22小鼠肝癌腹水型肿瘤细胞株由中科院上海肿瘤药物研究所提供。(6)细胞人宫颈癌HeLa细胞，细胞株由河南省医科所药理研究室提供。
2、实验方法(1)本发明药物体内抑瘤实验 无菌条件下取肉瘤S180和H22腹水肝癌荷瘤小鼠，处死固定，用碘酊及酒精消毒操作部位皮肤，然后切开，选择生长良好的瘤块组织置于组织浆器中，制成1×107/ml的细胞悬液，接种于小鼠右前肢皮下，0.1ml/只，次日将接种两种癌细胞的小鼠各随机分为5组，每组8只，分别为阴性对照组、本发明药物低、中、高剂量组及环磷酰胺(CPA)阳性对照组，按表10所示剂量灌胃给药，每日1次，连续10天，于末次给药后24hr处死小鼠，摘瘤称重，以抑瘤率(TGI)判断抑瘤效果，抑瘤率计算公式TGI(％)＝(对照组瘤重-实验组瘤重)/对照组瘤重×100％。试验重复3次，结果为3次试验的平均值。
(2)本发明药物对荷瘤小鼠的生命延长作用观察无菌条件下取肉瘤S180和H22腹水肝癌荷瘤小鼠，以2.1方法制成1×107/ml的细胞悬液，接种于小鼠腹腔，0.2ml/只，接种次日，两种癌细胞的荷瘤小鼠随机分为5组，组别、剂量同2.1。每日灌胃给药，连续10天后，改为每日3天给药一次，记录各组动物死亡时间，比较各实验组与对照组动物生存期差异。
(3)本发明药物体外荷瘤小鼠实验将培养瓶中的Hela细胞经0.25％胰酶消化贴壁的细胞，然后用加10％小牛血清的RPMI1640培养液稀释成105数量级的肿瘤细胞悬液，在消毒后的培养板上每孔加0.1ml的肿瘤细胞稀释液，然后加入生理盐水、本发明药物三个不同的剂量及环磷酰胺(CPA)，每种浓度重复4孔，以仅加肿瘤细胞稀释液而不加药的孔作为对照，高压灭菌，用前PH调至7.2，将培养板置CO2培养箱中37C培养24h后，在倒置显微镜下定性观察细胞生长情况。用生理盐水洗去培养液中的小牛血清及不贴壁的死细胞，每孔加1％SDS0.2ml，将培养液置50℃的烘箱中加热30min，使细胞溶解成可溶性蛋白质。最后将4孔的蛋白液混匀，用751G型分光光度计，在波长650nm处进行比色，并计算肿瘤细胞杀伤率。 3、实验结果(1)本发明药物对肉瘤S180和H22肝癌腹水瘤荷瘤鼠实体瘤生长抑制作用及存活期的影响见表10。
表10 本发明药物(实验组)对肉瘤S180和H22腹水肝癌的抑瘤作用及生存期的影响瘤种 分组动物 剂量 存活天数瘤重抑瘤率(始/终) (/kg/d) (d) (g) (％)阴性对照组 8/6 20ml 16.12±2.67 1.86±0.45 -CPA对照组 8/8 25mg 22.08±1.85 0.59±0.52 68.28S180低剂量实验组8/8 0.2g 17.44±1.05## 1.18±0.71*# 36.56中剂量实验组8/8 0.6g 19.63±3.54*# 0.91±0.44*# 51.08高剂量实验组8/8 1.8g 18.64±2.11*# 0.82±0.76**# 55.91阴性对照组 8/7 20ml 15.82±3.041.53±0.91 -CPA对照组 8/8 25mg 22.47±1.420.45±0.22 70.59H22低剂量实验组8/8 0.2g 17.81±2.33*##0.93±0.71*# 39.22中剂量实验组8/8 0.6g 20.32±2.14**#0.68±0.59**55.56高剂量实验组8/8 1.8g 19.17±1.66**#0.65±0.48**57.52
注实验组即本发明药物组。
*表示本发明药物组与阴性对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；#表示本发明药物组与CPA对照组比较，#P＜0.05；##P＜0.01。
实验结果显示，本发明药物低、中、高剂量组对S180肉瘤及H22肝癌腹水瘤均具有较明显的抑制作用，尤其以本发明药物高剂量组效果尤为显著，差异有显著意义(P＜0.01)。实验结果还表明，本发明药物低、中、高剂量组均能明显延长S180肉瘤及H22肝癌腹水瘤的存活期，提示本发明药物对S180肉瘤及H22肝癌腹水瘤有明显的抑制作用，同时可延长荷瘤动物的生存期限。
(2)本发明药物体外抑瘤实验 体外抑瘤实验结果表明，“本发明药物”对体外培养的人宫颈癌HeLa细胞具有较好的抗癌活性，且呈一定的量效关系。
表11“本发明药物”体外抑瘤实验结果统计浓度(g/ml) Hela细胞杀伤率(％)本发明药物组CPA组4×10-165.54 80.621×10-159.38 72.442.5×10-243.15 65.216.25×10-332.51 41.634、小结 中医认为肿瘤的发生与脏腑失调、正气虚弱、体内抗病能力减弱及免疫监视功能下降有关，因此在肿瘤的治疗上强调补正气、调真元、增强免疫，正所谓“正气存内，邪不可干”。通过扶正固本，免疫调节，增强机体抗病能力，从而影响肿瘤的发生、发展和转归。大量的实验研究发现，生物反应调节剂(BRM)作用于荷瘤动物不仅具有抗肿瘤作用(如对肿瘤细胞的抑制和细胞毒作用)，而且可激发荷瘤动物机体的免疫功能(如促进多种类型的免疫细胞分子的增殖作用)，增强抗癌能力。本实验结果证明本发明药物作为一种天然生物反应调节剂对多种瘤株都具有明显的抑制作用，并且能延长荷瘤小鼠的生存期。试验三 本发明药物对小鼠体内自由基代谢的影响目的观察和评价本发明药物对小鼠体内自由基代谢的作用机制。方法给老龄小鼠灌服本发明药物溶液，采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)、硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定丙二醛(MDA)、DTNB法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)。结果本发明药物高、中、低剂量均能升高小鼠血浆、肝脏、肌肉中SOD和GSH-Px含量，同时可降低小鼠MDA含量。结论本发明药物能明显提高机体抗氧化能力，调节和改善自由基代谢对机体的损害。
1、材料与方法(1)实验药物 本发明药物内容物为褐色粉状，胶囊装，0.3g/粒，批号011206。人体推荐量每日3次，每次3-4粒，以每人每天3.6g计算(成人体重为60kg)即0.06g/天/kg。茸杞胶囊0.3g/粒，批号011127，人体推荐量3次/日，2-3粒/次。(2)实验动物昆明种小鼠，雌雄均用，体重20g±2g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号沪动合格证字153号。实验室室温为22-25℃，常规饲料喂养，饮水量不限。(3)实验方法选用健康老龄昆明种小鼠50只，体重20g±2g，雌雄各半，按体重和性别随机分成5组，空白对照组灌服等体积蒸馏水；阳性对照组灌服1.0g/kg体重的茸杞胶囊溶液；实验组灌服本发明药物，灌服剂量本发明药物高剂量组1.8g生药/kg、本发明药物中剂量组0.6g生药/kg、本发明药物低剂量组0.2g生药/kg，各组动物每天灌服一次，连续给药6天，均于第7天给药45分钟后在小鼠右眼静脉丛采血0.5ml，肝素抗凝，取小鼠后肢肌肉、肝脏、心脏，冰浴下制备组织匀浆，测定血浆及组织匀浆的各项生化指标。超氧化物歧化酶(SOD)测定采用黄嘌呤氧化酶，丙二醛(MDA)测定采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法，谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px测定采用DTNB法。(4)统计学处理数据均经SPSS For Windows 10.0统计软件包处理，采用单因素方差分析进行显著性检验。
2、实验结果(1)本发明药物对超氧化物歧化酶(SOD)的影响 实验结果显示本发明药物高、中、低三个剂量均可升高小鼠SOD的含量，其中以本发明药物中剂量组尤为明显，P＜0.01，详见表12。
表12 本发明药物(实验组)对小鼠体内SOD含量的影响(X±S，Nu/ml)组别 n 血浆 肝脏 肌肉空白对照组 10307.62±97.23 311.53±119.76354.98±89.72阳性对照组 10320.16±91.56 318.61±121.86359.63±78.15高剂量实验组 10340.43±96.75*△ 332.13±79.43*△350.83±70.60中剂量实验组 10355.86±105.43*/△△ 362.55±93.57**△△ 368.91±86.76△*低剂量实验组 10329.63±89.56*324.63±81.56*355.13±54.18注实验组即本发明药物；*表示本发明药物组与阳性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01
△表示本发明药物组与空白对照组相比△P＜0.05，△△P＜0.01(2)本发明药物对谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响。实验结果表明本发明药物高、中、低剂量均可升高小鼠血浆、肝脏及肌肉中的GSH-Px含量，尤其是本发明药物在0.6g/kg体重时，其提高小鼠血浆及肝脏中的GSH-Px含量尤为显著，与对照组比较，P＜0.01。
表13 小鼠体内GSH-Px含量的变化(X±S，u/ml)组别 n 血浆 肝脏 肌肉空白对照组1024.18±4.18 1315.1±156.43382.58±185.13阳性对照组1025.98±5.10 1324.8±181.56386.13±103.58低剂量实验组 1027.63±3.65* 1342.3±126.05387.22±78.53中剂量实验组 1032.13±6.15△△*1390.9±213.89△△*398.56±98.13△*高剂量实验组 1026.71±5.65 1332.6±125.06388.12±101.53注实验组即本发明药物；*表示本发明药物组与阳性对照组相比*P＜0.05，**P＜001△表示本发明药物组与空白对照组相比△P＜0.05，△△P＜0.01(3)本发明药物对丙二醛(MDA)的影响 从表14实验结果显示本发明药物可明显降低小鼠体内MDA的含量，与对照组比较均有显著意义(P＜0.05)。
表14小鼠体内MDA含量的变化(X±S，nm/ml)组别 n 血浆 肝脏肌肉空白对照组 1029.73±5.6339.18±12.6340.86±10.53阳性对照组 1028.98±6.8938.98±13.8941.53±11.58低剂量实验组 1026.67±7.89*△33.91±28.93*△ 30.65±15.13**△△中剂量实验组 1022.64±5.89**△△ 31.13±10.89**△△ 32.89±12.91*△高剂量实验组 1024.07±4.53*△34.89±29.13*△ 34.13±18.03*△注实验组即本发明药物；*表示本发明药物组与阳性对照组相比*P＜0.05，**P＜001△表示本发明药物组与空白对照组相比△P＜0.05，△△P＜0.013、小结 本发明药物系一种纯天然的生物反应调节剂(BiologicalResponse Modify——BRM)，临床上用于治疗恶性肿瘤、慢性肾病，慢性肝炎，慢性支气管炎，糖尿病，心血管疾病和机体免疫力低下的各类疾病。本实验结果提示本发明药物能明显提高小鼠体内抗氧化酶活性，降低体内增强的脂质过氧化反应，提高机体清除自由基的能力，具有调节和改善机体氧自由基代谢失衡的作用。试验四 本发明药物对小鼠NK和LAK细胞活性影响的实验研究目的探讨本发明药物对自然杀伤细胞(NK细胞)和淋巴细胞因子活化杀伤细胞(LAK细胞)活性的影响。方法采用乳酸脱氢酶法(LDH)对NK细胞活性和LAK细胞活性进行检测。结果本发明药物可显著提高小鼠NK细胞及LAK细胞活性，本发明药物中、高剂量组与溶剂对照组比较，差异有显著性意义(P＜0.05、0.01)，表15、16。结论本发明药物作为一种天然的生物反应调节剂具有较好的抗肿瘤免疫作用。
1、材料与方法(1)药品本发明药物内容物为褐色粉状，胶囊装，0.3g/粒，100粒/瓶，批号010903。人体推荐量为每日3次，每次3-4粒，以每人每天3.6g计算(成人体重按60kg)即0.06g/天/kg。(2)动物清洁级BALB/C雄性小鼠，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号沪动合格证字153号。将小鼠分为三批，每批48只，体重18～20g，随机分为四组，每组12只。(3)剂量选择本发明药物分三个剂量组，低、中、高剂量分别为人体推荐量的3.3、10、30倍，即0.2、0.6、1.8g/kg.bw，溶剂对照组为N.S。经口灌胃，灌胃量为0.2ml/10g.bw，各试验组均连续灌胃30天后测各组相应的免疫指标。(4)实验方法和观察指标①NK细胞活性测定无菌条件下取小鼠的脾脏，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用4层纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107ml，取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μl；上述各项均设三个复孔，于37℃、5％CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μl置平底96孔培养板，同时加入LDH基质液100μl，反应3min，每孔加入1mol/L的HCL 30μl，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD) ②LAK细胞活性测定分别处死小鼠，无菌条件下取小鼠的脾脏，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用4层纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，加入pH7.2的Tris-NH4Cl溶解红细胞后，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×107ml-1，加入rIL-2200U·ml-1，培养72min，诱导LAK细胞生成。将LAK细胞(效应细胞)和传代后24h生长旺盛的YAC-1细胞(靶细胞)用RPMI1640液洗2次后，用含0.5％BSA的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度分别为5×106·ml-1个和1×105·ml-1个，取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50∶1)，混合2种细胞，靶细胞杀伤率用乳酸脱氢酶法(LDH)进行检测。
2、结果(1)本发明药物对小鼠NK细胞活性的影响由表15可见，本发明药物中、高剂量组的NK细胞活性高于溶剂对照组，差异具有显著性意义(P＜0.05、0.01)，提示本发明药物对NK细胞活性有明显的增强作用。
表15 本发明药物(实验组)对小鼠NK细胞活性的影响组别动物数(只) NK细胞活性％ P值溶剂对照组 12 38.4±14.1 -低剂量实验组12 47.3±14.8 0.534中剂量实验组12 57.1±15.3 0.050高剂量实验组12 70.1±10.4 0.008(2)本发明药物对小鼠LAK细胞活性的影响 由表16可见，本发明药物中、高剂量组的LAK细胞活性高于溶剂对照组，差异具有显著性意义(P＜0.05、0.01)，提示本试验条件下本发明药物对LAK细胞活性有明显的增强作用。
表16 本发明药物(实验组)对小鼠LAK细胞活性的影响组别动物数(只) LAK细胞活性％ P值溶剂对照组 12 17.4±5.17 -低剂量实验组12 22.8±5.64 0.534中剂量实验组12 30.3±6.11 0.050高剂量实验组12 32.7±6.08 0.0073、小结 NK细胞为自然杀伤细胞，是机体抗肿瘤的第一道防线，它可以非特异性的直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞而无须抗体存在和抗原致敏。LAK细胞为淋巴细胞因子激活的杀伤细胞，可杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无损伤。近年来的研究表明，NK细胞和LAK细胞可以溶解各种类型的肿瘤细胞，在抗肿瘤细胞免疫作用中具有重要地位。本实验研究显示本发明药物中、高剂量均能显著提高小鼠的NK细胞和LAK细胞活性，P＜0.05，从而佐证了本发明药物临床上用于治疗恶性肿瘤、慢性肾病，慢性肝炎，慢性支气管炎，心血管疾病、糖尿病等慢性病患者和机体免疫力低下的各类疾病的作用机理与提高患者机体的NK细胞和LAK细胞活性不无关系，实验结果提示本发明药物可做为生物反应调节剂用于肿瘤的临床治疗，说明本发明药物不仅能益气补虚，而且可以通过提高患者的抗肿瘤免疫力而扶正祛邪。
试验五 本发明药物免疫调节作用的实验研究目的观察本发明药物对小鼠的迟发型变态反应、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验及抗体生成细胞检测的影响。方法采用足跖增厚法观察小鼠的迟发型变态反应，以Jeme改良载片法检测抗体生成细胞及采用体外法对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞进行试验。结果本发明药物对小鼠的迟发型变态反应、抗体生成细胞数、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均有显著作用，本发明药物高、中、低三个剂量组与溶剂对照组比较，本发明药物中、高剂量组均有显著性差异(P＜0.05、0.01)。结论本发明药物作为一种天然的生物反应调节剂具有较强的免疫调节作用。
1、材料与方法(1)本发明药物内容物为褐色粉状，胶囊装，0.3g/粒。批号010903，临床推荐量为每日3次，每次3-4粒，以每人每天3.6g计算(成人体重为60kg)即0.06g/天/kg。(2)动物清洁级BALB/C雄性小鼠，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号沪动合格证字153号。将小鼠分为三批，每批48只，体重18～20g，随机分为四组，每组12只。(3)剂量选择本发明药物三个剂量组低、中、高分别为人体推荐量的3.3、10、30倍，即0.2、0.6、1.8g/kg.bw，溶剂对照组为蒸馏水。经口灌胃，灌胃量为0.2ml/10g.bw，各试验组均连续灌胃30天后测各组相应的免疫指标。(4)实验方法和观察指标①迟发型变态反应 绵羊红细胞诱发小鼠DTH(足跖增厚法)取羊血，用生理盐水洗涤3次(2000rpm，10分钟)，每只小鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC0.2ml，致敏后4天，测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。然后在测量部位皮下注射20％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC 20μl，于注射后24小时测量左后足跖部厚度，以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH的程度。②抗体生成细胞检测(Jeme改良载片法)将压积SRBC用生理盐水配成2％的细胞悬液，每只小鼠腹腔注射0.2ml进行免疫，四天后，将小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，放在盛有Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮在5ml RPMI1640培养液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5×106个/ml。将表层培养基(1g琼脂糖加双蒸水至100ml)加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2-7.4、2倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl 10％SRBC(v/v，用SA液配制)，25μl脾细胞悬液(5×106个/ml)，迅速混匀，倾到于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1∶6)加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。③小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(体外法)实验前4天给每只小鼠腹腔注射2％压积绵羊红细胞0.2ml。用颈椎脱臼法处死小鼠，经腹腔注射给予小鼠含有5％小牛血清的Hank’s液5ml/只，约2分钟后抽取腹水1～2ml，将Hank’s液配制成1％鸡RBC悬液0.5ml和0.5ml的腹水加入试管内，混匀，取混悬液0.5ml涂片，放入垫有湿纱布的瓷盘内，置37℃温箱内25min，取出后用生理盐水从玻片背面冲洗，固定、染色、阅片。计算吞噬率和吞噬指数。
2、结果(1)本发明药物对绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠DTH的影响由表17可见，本发明药物中、高剂量组的足跖肿胀度高于溶剂对照组，差异均有显著性意义(中剂量组P＜0.01、高剂量组P＜0.05)，提示本试验条件下本发明药物能增强小鼠的迟发型变态反应。
表17 本发明药物(实验组)对绵羊红细胞诱导小鼠DTH的作用组别动物数(只) 24h足跖肿胀度(mm)P值溶剂对照组 12 0.16±0.13 -低剂量实验组12 0.30±0.09 0.168中剂量实验组12 0.37±0.20 0.005高剂量实验组12 0.34±0.13 0.030(2)本发明药物对抗体生成细胞的影响 由表18可见，本发明药物高剂量组溶血空斑数/全脾高于溶剂对照组，差异具有显著性意义(P＜0.05)，提示本试验条件下本发明药物中、高剂量组对小鼠抗体生成细胞的生成有促进作用。
表18 本发明药物(实验组)对抗体生成细胞数的影响组别 动物数(只) 溶血空斑数(个/全脾)P值溶剂对照组 11 130.2±45.8-低剂量实验组 11 172.3±47.60.464中剂量实验组 11 195.7±55.10.050高剂量实验组 11 210.4±79.00.015
(3)本发明药物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响 由表19可见，本发明药物高剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力(吞噬率和吞噬指数)高于溶剂对照组，差异具有显著性意义(吞噬率P＜0.05，吞噬指数P＜0.0 1)，提示本发明药物中、高剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力有明显的升高作用。表19 本发明药物(实验组)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响组别动物数(只) 吞噬数(％)P值 吞噬指数 P值溶剂对照组 12 37.3±7.2 -0.65±0.14-低剂量实验组12 39.7±7.7 0.9450.79±0.130.298中剂量实验组12 40.6±5.9 0.8110.81±0.200.0452高剂量实验组12 46.0±5.8 0.0171.00±0.220.0013、讨论 实验结果表明本发明药物对小鼠的迟发型变态反应、抗体生成细胞数、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均有显著作用，本发明药物高、中、低三个剂量组与溶剂对照组比较，差异有显著性意义(P＜0.05)。从以上实验指标表明本发明药物对小鼠的细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能有明显促进作用，同时，通过实验研究也可进一步从另一角度证明本发明药物作为一种生物反应调节剂对恶性肿瘤、慢性肝炎、慢性支气管炎、慢性肾病，心血管疾病，糖尿病等慢性病患者和机体免疫力低下的各类疾病的疗效机理与其免疫调节有关。机体免疫系统的细胞与体液因子处于微妙的调控之中，在失去平衡的情况下，机体的反应或应答能力会显著地受到影响，使用生物反应调节剂就是使失去平衡的机体状态恢复正常，以达到防治疾病的目的。
权利要求
1.一种中药组合物，特征在于包括1-120重量份黄芪，1-100重量份西洋参，1-100重量份枸杞子，1-80重量份七叶胆，1-80重量份银耳，1-100重量份女贞子，1-100重量份黄精；更优选包括10-60重量份黄芪，10-50重量份西洋参，10-50重量份枸杞子，10-40重量份七叶胆，10-40重量份银耳，10-50重量份女贞子，10-50重量份黄精；和还更优选包括20-50重量份黄芪，20-40重量份西洋参，20-40重量份枸杞子，20-30重量份七叶胆，20-30重量份银耳，20-40重量份女贞子，20-40重量份黄精。
2.根据权利要求1的中药组合物在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。
3.根据权利要求1的中药组合物在制备治疗慢性肝炎的药物中的用途。
4.根据权利要求1的中药组合物在制备治疗慢性胃炎的药物中的用途。
5.根据权利要求1的中药组合物在制备治疗糖尿病的药物中的用途。
6.根据权利要求1的中药组合物在制备治疗慢性支气管炎的药物中的用途。
7.根据权利要求1的中药组合物在制备治疗慢性肾病的药物中的用途。
8.根据权利要求1的中药组合物在制备治疗心血管疾病的药物中的用途。
9.根据权利要求1的中药组合物在制备治疗机体免疫力低下的各类疾病的药物中的用途。
10.制备权利要求1的中药组合物的制备方法，包括将西洋参、1/2～1/4，优选1/3量黄芪，烘干，粉碎；将银耳煎煮，浓缩滤液；将银耳药渣与剩余量黄芪、七叶胆、枸杞子、黄精、银耳和女贞子浸提，浓缩为流浸膏，再与上述西洋参、部分量黄芪粉末一步制粒或者联合制粒，装入胶囊，制成胶囊制剂。
全文摘要
本发明公开了一种具有调节免疫、抗肿瘤和抗自由基损伤的中药组合物，系由纯天然中药提纯而成的一种生物反应调节剂((Biological Response Modify——BRM)，尤其用于治疗恶性肿瘤、慢性肝炎、慢性胃炎、糖尿病、慢性支气管炎、慢性肾病、心血管疾病和机体免疫力低下的各类疾病的中药组合物。该组合物包括1－120重量份黄芪，1－100重量份西洋参，1－100重量份枸杞子，1－80重量份七叶胆，1－80重量份银耳，1－100重量份女贞子，1－100重量份黄精。
文档编号A61P39/06GK1421238SQ0215737
公开日2003年6月4日 申请日期2002年12月23日 优先权日2002年12月23日
发明者丁铁岭, 林平 申请人:丁铁岭