速释药物制剂的制作方法

专利名称：速释药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于递送特定药物的新的速释药物制剂，所述制剂的制备，以及所述制剂在治疗或预防血栓形成中的应用。
经常希望配制药物活性化合物以在口服和/或胃肠外给药后迅速释放，从而在引起治疗反应所需的时限内提供足够的血浆药物浓度。
在例如以下情况下，速释可能是特别期望的需要快速的治疗反应(例如在急性病症的治疗中)，或者当经口递送到胃肠道内不能在所需时限内提供足够的全身摄取而进行胃肠外给药。
在治疗或预防血栓形成时，可需要速释制剂来保证在较短时间内在血浆中提供足量的药物，从而能够迅速开始作用。速释制剂通常还比控释制剂更易于开发，并且还可以在施用给患者的剂量改变方面提供更大的灵活性。当不需要多份剂量，并且当无需在延长时间内保持恒定水平的血浆浓度时，速释制剂是优异的。
国际专利申请PCT/SE01/02657(WO 02/44145，最早的优先权日期是2000年12月1日，2001年11月30日提交，2002年6月6日公布)公开了多种化合物，这些化合物是胰蛋白酶样蛋白酶例如凝血酶的竞争性抑制剂，或者这些化合物代谢成是所述抑制剂的化合物。其中具体公开了以下三种化合物(a)Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe) 该化合物在下文中称为化合物A；(b)Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe) 该化合物在下文中称为化合物B；和(c)Ph(3-C1)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe) 该化合物在下文中称为化合物C。
甲氧基脒化合物A、B和C在口服和/或胃肠外给药后代谢成相应的游离脒化合物，已经发现这些游离脒化合物是有效的凝血酶抑制剂。因此·化合物A经由前药中间体Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH)(该化合物在下文中称为化合物G)代谢成Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(该化合物在下文中称为化合物D)；·化合物B经由前药中间体Ph(3-C1)(5-OCHF2)- (R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OH)(该化合物在下文中称为化合物H)代谢成Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(该化合物在下文中称为化合物E)；和·化合物C经由前药中间体Ph(3-C1)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH)(该化合物在下文中称为化合物J)代谢成Ph(3-C1)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(该化合物在下文中称为化合物F)。
合成化合物A、B、C、D、E、F、G和J的方法分别描述在国际专利申请PCT/SE01/02657的实施例12、40、22、3、39、21、2和31中。这些化合物或其代谢物的速释制剂或其代谢物尚未在文献中描述过。我们已经发现，式(I)化合物及其盐可配制成易于通过例如口服或胃肠外给药来施用的速释药物制剂。
根据本发明的第一个方面，本发明提供了速释药物制剂，所述制剂包含作为活性组分的式(I)化合物或其可药用盐和可药用稀释剂或载体 其中R1代表被一个或多个氟取代基取代的C1-2烷基；R2代表氢、羟基、甲氧基或乙氧基；且n代表0、1或2；条件是所述制剂不仅仅包含·一种活性组分与水的溶液；·一种活性组分与二甲亚砜的溶液；或·一种活性组分在乙醇∶PEG 660 12-羟基硬脂酸酯∶水5∶5∶90混合物中的溶液；所述制剂在下文中称为“本发明制剂”。
PEG 660 12-羟基硬脂酸酯是非离子表面活性剂，更经常称为Solutol KTM。
根据本发明的第二个方面，本发明提供了化合物H，Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OH)，其可通过类似于下文中描述的制备化合物G和J的方法制得。
式(I)化合物或其可药用盐可以是溶剂化物、水合物、混和溶剂化物/水合物，或优选脱溶剂化物例如脱水化物的形式。溶剂可以是一种或多种有机溶剂，例如低级(例如C1-4)烷基醇(例如甲醇、乙醇或异丙醇)、酮(例如丙酮)、酯(例如乙酸乙酯)或其混合物。
在本发明的一个具体方面，R1是CHF2或CH2CH2F。
变量n优选为0或2。
更优选的式(I)化合物包括定义如下的那些n代表0，或n代表2，这样提供了位于2-和6-位(相对于苯环与-NH-CH2-基团的连接点的两个邻位)上的两个氟原子。
式(I)化合物尤其是化合物A、化合物B或化合物C。
式(I)化合物的优选盐是酸加成盐。酸加成盐包括无机酸加成盐，例如下列酸的加成盐硫酸、硝酸、磷酸和氢卤酸例如氢溴酸和盐酸。更优选的酸加成盐包括有机酸的加成盐，例如下列酸的加成盐二甲基磷酸；糖精酸；环己基氨基磺酸；羧酸(例如马来酸、富马酸、天冬氨酸、琥珀酸、丙二酸、乙酸、苯甲酸、对苯二甲酸、马尿酸、1-羟基-2-萘甲酸、双羟萘酸、羟基苯甲酸等)；羟基酸(例如水杨酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸(包括L-(-)-苹果酸和D，L-苹果酸)、葡糖酸(包括D-葡糖酸)、羟基乙酸、抗坏血酸、乳酸等)；氨基酸(例如谷氨酸(包括D-谷氨酸、L-谷氨酸和D，L-谷氨酸)、精氨酸(包括L-精氨酸)、赖氨酸(包括L-赖氨酸和L-赖氨酸盐酸盐)、甘氨酸等)；和特别是磺酸(例如1，2-乙二磺酸、樟脑磺酸(包括1S-(+)-10-樟脑磺酸和(+/-)-樟脑磺酸)、乙磺酸、丙磺酸(包括正丙磺酸)、丁烷磺酸、戊烷磺酸、甲苯磺酸、甲磺酸、对二甲苯磺酸、2-均三甲苯磺酸、萘磺酸(包括1，5-萘磺酸和萘磺酸)、苯磺酸、羟基苯磺酸、2-羟基乙磺酸、3-羟基乙磺酸等)。
特别优选的盐包括与以下酸形成的盐C1-6(例如C1-4)链烷磺酸例如乙磺酸(乙磺酸盐)和丙磺酸(例如正丙磺酸)和任选被取代的(例如被一个或多个C1-2烷基取代的)芳基磺酸例如苯磺酸(苯磺酸盐)和萘二磺酸。
酸与游离碱的合适的化学计量比为0.25∶1.5-3.0∶1，例如0.45∶1.25-1.25∶1，包括0.50∶1-1∶1。
根据本发明的另一个方面，本发明提供了包含基本上是结晶形式的式(I)化合物的制剂。
虽然我们已经发现能够制备大于80％结晶的本发明化合物，但是“基本上结晶”包括大于20％、优选大于30％、更优选大于40％(例如大于50％、60％、70％、80％或90％)的结晶。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了部分结晶形式的本发明化合物。“部分结晶”包括5％或5％至20％的结晶。
结晶度(％)可由本领域技术人员使用X-射线粉末衍射(XRPD)测得。还可以使用其它技术，例如固态NMR、FT-IR、Raman光谱、差示扫描量热法(DSC)和微量热法。
可以以结晶形式制得的优选的式(I)化合物包括C1-6(例如C2-6，如C2-4)链烷磺酸例如乙磺酸、丙磺酸(例如正丙磺酸)和任选被取代的芳基磺酸例如苯磺酸和萘二磺酸的盐。
术语“速释”药物制剂包括这样的任何制剂，其中药物从制剂释放和/或药物吸收的速度没有被盖仑操作明显或故意延迟。在本申请中，速释可用合适的可药用稀释剂或载体提供，所述稀释剂不明显延长药物释放和/或吸收速度。因此，该术语排除了用以提供“改变的”、“控制的”、“持续的”、“延长的”、“迟滞的”或“延迟的”药物释放的制剂。
在本申请中，术语“释放”包括将药物提供(或呈递)到胃肠道、身体组织和/或全身循环内。对于胃肠道释放，释放是在pH条件，例如pH＝1-3，尤其是在约pH＝1的条件下进行的。在本发明的一个方面，包含结晶形式的式(I)化合物或其酸加成盐的本文所述制剂在一定pH条件范围内释放药物。在本发明的另一个方面，包含式(I)化合物或其酸加成盐的本文所述制剂在pH条件下，例如在pH＝1-3，尤其是在约pH＝1的条件下释放药物。因此，本发明制剂在口服或胃肠道给药后4小时内，例如3小时内，优选2小时内，更优选1.5小时，尤其是1小时内(例如30分钟内)可释放至少70％(优选80％)的活性组分。
本发明制剂可依据多种已知技术配制，例如M.E.Aulton在“PhamnaceuticsThe Scienceof Dosage Form Design”(1988)(Churchill Livingstone)中描述的技术，该文件的相关公开内容引入本文以供参考。
可依据标准技术配制本发明制剂，使其适于经口给药，例如以包含活性组分的速释片剂、速释胶囊剂或液体剂型的形式经口给药。这些制剂类型是本领域技术人员已知的，并且可以依据本领域已知技术制得。
适用于本发明经口给药制剂，例如速释片剂形式的制剂的稀释剂/载体(还可以称为“填充剂”)包括磷酸二氢钙、磷酸氢钙(包括磷酸氢钙二水合物和磷酸氢钙脱水化物)、磷酸钙、乳糖、微晶纤维素、硅化微晶纤维素、甘露醇、山梨醇、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉或米淀粉)、葡萄糖、乳酸钙、碳酸钙等。优选的稀释剂/载体包括磷酸氢钙和微晶纤维素，它们可单独使用或者与另一种稀释剂/载体例如甘露醇联合使用。
速释片剂形式的本发明制剂可包含一种或多种赋形剂来改善最终组合物的物理和/或化学性质，和/或辅助制备过程。这样的赋形剂是经口给药速释制剂的配方中常用的，并包括一种或多种以下物质一种或多种润滑剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂醇或优选富马酸十八酯钠)；助流剂(例如滑石粉或胶态二氧化硅)；一种或多种粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、聚乙二醇(PEG)、聚氧化乙烯、低分子量羟丙基甲基纤维素(HPMC)、低分子量甲基纤维素(MC)、低分子量羟丙基纤维素(HPC)、低分子量羟乙基纤维素(HEC)、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉或米淀粉)或低分子量羧甲基纤维素钠(优选的粘合剂是聚乙烯吡咯烷酮或低分子量HPMC)；一种或多种pH控制剂(例如有机酸(例如柠檬酸)或其碱金属(例如钠)盐，镁氧化物，碱金属或碱土金属(例如钠、钙或钾)硫酸盐、偏硫酸氢盐、丙酸盐或山梨酸盐)；一种或多种崩解剂(例如羟乙酸淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉或米淀粉)或藻酸盐)；着色剂、矫味剂、张力调节剂、包衣剂或防腐剂。
应当理解，可存在于最终的本发明速释口服制剂(例如片剂)中的某些上述赋形剂可具有一种以上的功能。
在本发明的另一个方面，使本发明的液体制剂适于口服给药。
欲口服给药的适当液体制剂包括其中式(I)化合物，尤其是化合物A、化合物B或化合物C或其可药用盐与含水载体例如水一起提供的那些。然而应当注意，一些特定制剂没有要求保护(参见具体方面和权利要求书)。
含有含水载体的本发明制剂还可以包含一种或多种赋形剂例如抗微生物防腐剂；张力调节剂(例如氯化钠、甘露醇或葡萄糖)；pH调节剂(例如常用的无机酸或碱，包括盐酸或氢氧化钠)；pH控制剂(即缓冲剂例如酒石酸、乙酸或柠檬酸)；表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠(SDS)或SolutolTM)；用于帮助溶解活性组分的助溶剂(例如乙醇、聚乙二醇或羟丙基-β-环糊精或聚氯乙烯(PVP))；或抗氧化剂。
液体口服制剂可以呈活性组分与含水溶剂的悬浮液，更优选水溶液(也就是包含水作为溶剂的活性化合物的溶液)的形式。在本申请上下文中，术语“水溶液”是指这样的制剂，其中在5℃和常压下至少有99％的活性组分是在溶液中，术语悬浮液是指在这样的条件下，有1％以上的活性组分不在溶液中。常用于悬浮液的分散剂是羟丙基甲基纤维素、AOT(磺基琥珀酸二辛酯)、PVP和SDS。也可以使用其它分散剂。
在本发明的另一个方面，本发明提供了包含式(I)化合物或其可药用盐、水和至少一种添加剂的口服液体制剂。所述添加剂包括i.聚乙二醇(PEG)和任选乙醇和/或酒石酸和/或柠檬酸和/或盐酸；或ii.氯化钠(其将溶解在制剂中)和任选乙醇；或iii.盐酸和/或氢氧化钠，以将pH调节至合适的值(对于其中R2是甲氧基或乙氧基的式(I)化合物例如化合物A、B或C，优选为3-8)；或iv.DMA(二甲基乙酰胺)和任选中链甘油三酯(例如miglyol)；或v.β-环糊精(例如羟丙基-β-环糊精)；vi.张力调节剂例如氯化钠和/或甘露醇。
在本发明的另一个方面，本发明提供了包含式(I)化合物或其可药用盐(优选化合物A、B或C)、水和至少一种在上文(i)-(vi)中提及的添加剂的口服溶液。
在本发明的另一个方面，本发明提供了式(I)化合物(例如化合物A、B或C)的含水制剂，所述制剂包含助溶剂例如聚乙二醇、β-环糊精(例如羟丙基-β-环糊精)、山梨醇或乙醇。
在本发明的另一个方面，本发明提供了包含式(I)化合物和乙醇的口服溶液制剂。该制剂还可以包含中链甘油三酯(例如miglyol)。
在本发明的另一个方面，本发明提供了包含式(I)化合物和DMA的口服溶液制剂。该制剂还可以包含中链甘油三酯(例如miglyol)。
在另一个方面，式(I)化合物是结晶的(尤其是化合物A的盐；优选C1-6(例如C2-6，如C2-4)链烷磺酸盐，例如乙磺酸、丙磺酸(例如正丙磺酸)或任选被取代的芳基磺酸盐，例如苯磺酸和萘二磺酸盐)。
本发明提供了如权利要求1所述的特定液体速释口服药物制剂，其中活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)，Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)，Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)，或其可药用盐。
本发明提供了如权利要求所述的另一特定液体速释口服药物制剂，其中活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)或其C1-6链烷磺酸或任选被取代的芳基磺酸盐。
本发明提供了如权利要求所述的另一特定液体速释口服药物制剂，其中活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)或其任选被取代的芳基磺酸盐(例如萘-1，5-二磺酸盐)。
然而应当注意，一些特定制剂没有要求保护(参见具体方面和权利要求书)。
在本发明的另一个方面，使本发明制剂适于胃肠外给药。术语“胃肠外”包括不包括经口给药至胃肠道的任何给药方式，并包括皮下给药、静脉内给药、动脉内给药、经皮给药、鼻内给药、颊内给药、皮内给药、肌内给药、脂肪瘤内给药、腹膜内给药、直肠给药、舌下给药、局部给药、通过吸入给药或通过任何其它胃肠外途径给药。
欲胃肠外给药的适当本发明制剂包括其中式(I)化合物或其可药用盐与含水载体例如水一起提供的那些。
含有含水载体的本发明制剂还可以包含一种或多种赋形剂例如抗微生物防腐剂；张力调节剂(例如氯化钠、甘露醇或葡萄糖)；pH调节剂(例如常用的无机酸或碱，包括盐酸或氢氧化钠)；pH控制剂(即缓冲剂例如酒石酸、乙酸或柠檬酸)；表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠(SDS)或SolutolTM)；用于帮助溶解活性组分的助溶剂(例如乙醇、聚乙二醇或羟丙基-β-环糊精或聚氯乙烯(PVP))；或抗氧化剂。
胃肠外给药制剂可以呈活性组分与含水溶剂的悬浮液，更优选水溶液(也就是包含水作为溶剂的活性化合物的溶液)的形式。在本申请上下文中，术语“水溶液”包括这样的制剂，其中在5℃和常压下至少有99％的活性组分是在溶液中，术语悬浮液是指在这样的条件下，有1％以上的活性组分不在溶液中。常用于悬浮液的分散剂是羟丙基甲基纤维素、AOT、PVP和SDS，但是也可以使用其它分散剂。
在本发明经口和胃肠外给药制剂中使用的赋形剂的数目取决于多种因素，例如存在的活性组分的性质和量以及所包含的稀释剂/载体(含水载体或其它)的量。
在本发明的另一个方面，本发明提供了包含式(I)化合物或其可药用盐、水和至少一种添加剂的胃肠外给药制剂。所述添加剂包括i.聚乙二醇(PEG)和任选乙醇和/或酒石酸和/或盐酸；或ii.氯化钠(其将溶解在制剂中)和任选乙醇；或iii.盐酸和/或氢氧化钠，以将pH调节至合适的值(对于其中R2是氢的式(I)化合物例如化合物D、E或F，优选为3-8；或对于其中R2是甲氧基或乙氧基的式(I)化合物例如化合物A、B或C，优选为3.5-8)；或iv.DMA(二甲基乙酰胺)和任选中链甘油三酯(例如miglyol)；或v.β-环糊精(例如羟丙基-β-环糊精)；vi.张力调节剂例如氯化钠和/或甘露醇。
在本发明的另一个方面，本发明提供了包含式(I)化合物或其可药用盐(优选化合物D、E或F)、水和至少一种在上文(i)-(vi)中提及的添加剂的注射溶液。
在本发明的另一个方面，本发明提供了式(I)化合物(例如化合物D、E或F)的含水制剂，所述制剂包含助溶剂例如聚乙二醇、β-环糊精(例如羟丙基-β-环糊精)、山梨醇或乙醇。
在本发明的另一个方面，本发明提供了包含式(I)化合物和乙醇的胃肠外给药制剂。该制剂还可以包含中链甘油三酯(例如miglyol)。
在本发明的另一个方面，本发明提供了包含式(I)化合物和DMA的胃肠外给药制剂。该制剂还可以包含中链甘油三酯(例如miglyol)。
在另一个方面，式(I)化合物是结晶的(尤其是化合物A的盐；优选C1-6(例如C2-6，如C2-4)链烷磺酸盐，例如乙磺酸、丙磺酸(例如正丙磺酸)或任选被取代的芳基磺酸盐，例如苯磺酸盐)。
在另一个方面，本发明制剂是固体剂型，其中R2是羟基、甲氧基或乙氧基(优选甲氧基)(式(I)化合物尤其是化合物A、化合物B或化合物C)。
在另一个方面，本发明提供了包含游离碱形式的式(I)化合物的胃肠外给药制剂(尤其是基于水的注射溶液)。
在另一个方面，本发明提供了包含游离碱形式的式(I)化合物的胃肠外给药制剂，其中R2是氢。
在另一个方面，本发明提供了固体制剂，所述制剂包含微晶纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；或包含微晶纤维素和羟乙酸淀粉钠。
包含盐的本发明的制剂，例如胃肠外给药制剂可通过向预先制备的盐中加入稀释剂/载体来制得。
包含活性组分的组合物还可以以用于临时制备本发明制剂(例如溶液，例如水溶液，例如胃肠外给药用溶液)的固体形式提供。这样的组合物也可以是包含活性组分，任选在一种或多种如上文所定义的赋形剂存在下，和任选最高达10％(w/w)稀释剂和/或载体的固体形式，所述组合物在下文中称为“本发明固体组合物”。
本发明固体组合物可通过将稀释剂/载体(例如溶剂)从可呈例如溶液如水溶液形式的本发明制剂或浓缩的本发明制剂中除去来制得。
在另一个方面，本发明提供了可口服给药的速释制剂，所述制剂包含式(I)化合物或其盐、载体(例如微晶纤维素)、崩解剂(例如羟乙酸淀粉钠)、粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)和润滑剂(例如富马酸十八酯钠)。这样的制剂还可以包含另外的载体(或填充剂)例如甘露醇。
速释片剂形式的本发明制剂可这样制得使用本领域技术人员已知的标准技术和使用标准装置，将活性组分与稀释剂/载体组合，所述技术包括湿法或干法制粒，直接压缩/压紧，干燥，研磨，制片和包衣，以及这些加工的组合，例如如下文所述。在本发明的一个方面，将结晶形式的式(I)化合物的酸加成盐配制成片剂。
因此，本发明提供了形成适用于临时制备本发明制剂(例如溶液如水溶液)的固体组合物的方法，所述方法包括将稀释剂/载体(例如溶剂)从本发明制剂或浓缩的本发明制剂中除去。
溶剂可通过多种本领域技术人员已知的技术来除去，例如蒸发(在减压或其他条件下蒸发)，冷冻干燥，或除去溶剂同时保持活性组分完整性的任何溶剂去除(干燥)加工。干燥的一个实例是冷冻干燥。
因此，根据本发明的另一个方面，本发明提供了冷冻干燥(冻干的)本发明固体组合物。
在制备本发明固体组合物时，本领域技术人员应当理解，合适的附加的赋形剂可在除去稀释剂/载体之前的适当阶段加入。例如，对于水溶液，可如上所述控制和/或调节pH。此外，可在稀释剂/载体除去期间加入合适的附加的赋形剂，以帮助形成本发明固体组合物(例如甘露醇、蔗糖、葡萄糖、甘露糖或海藻糖)。
因此，式(I)化合物或其盐的固体组合物包括这样的组合物，其中除了结晶溶剂以外，溶剂(例如水)含量不超过10％，例如低于2％的未结合的溶剂例如水。
可将本发明制剂灭菌，例如通过无菌过滤或高压灭菌来进行灭菌，和/或将其填充到初始包装例如瓶、药筒和预填充的注射器内。这样的加工步骤还可以在干燥以形成本发明固体组合物之前进行。
在给药之前，干燥的固体组合物可在例如水、生理盐水、葡萄糖溶液或任何其他合适的溶液中重组和/或稀释。
在本发明口服制剂(例如速释片剂)中，稀释剂/载体的量取决于多种因素，例如所用活性组分的性质和量以及存在于制剂中的任何其他组分(例如另外的赋形剂)的性质和量，但是通常为最终组合物的最高达40％(w/w)、优选最高达30％、更优选最高达20％、特别是最高达10％(w/w)。在这样的本发明口服制剂中，附加的赋形剂的量也取决于多种因素，例如所用活性组分的性质和量以及存在于制剂中的任何其他组分(例如稀释剂/载体和/或另外的赋形剂)的性质和量，但是润滑剂和助流剂的量通常为最终组合物的最高达5％(w/w)，粘合剂和崩解剂的量通常为最终组合物的最高达10％(w/w)。
将本发明制剂对哺乳动物类患者(包括人)给药，对于其中R2不是氢的式(I)化合物，其在给药后在体内代谢，形成具有药理活性的其中R2是氢的式(I)化合物。
因此，依据本发明的另一个方面，本发明提供了用作药物的本发明制剂。
特别是，式(I)化合物是有效的凝血酶抑制剂或者在给药后代谢成有效的凝血酶抑制剂，例如可在特别是国际专利申请PCT/SE01/02657以及国际专利申请WO 02/14270、WO 01/87879和WO 00/42059中描述的试验中证实，所述文件引入本文以供参考。
“凝血酶抑制剂的前药”包括这样的化合物，其在给药后代谢并形成可通过实验检测到的量的凝血酶抑制剂。
“活性组分”和“活性物质”是指存在于制剂中的药理活性剂(包括凝血酶抑制剂及其前药)。
因此，预计本发明制剂可用于其中需要抑制凝血酶的病症和/或是抗凝血治疗的适应证的病症，包括下列治疗和/或预防包括人在内的动物血液和/或组织中的血栓形成和高凝性。已知高凝性可导致血栓栓塞性疾病。可提及的与高凝性和血栓栓塞性疾病有关的病症包括遗传性或获得性激活蛋白C抗性，例如因子V-突变(因子V Leiden)，和遗传性或获得性抗凝血酶、蛋白C、蛋白S、肝素辅因子II缺乏。已知与高凝性和血栓栓塞性疾病有关的其他病症包括循环抗磷脂抗体(狼疮抗凝物)、高半胱氨酸血症、肝素诱导的凝血细胞减少和纤维蛋白溶解不足，以及凝血综合征(例如弥散性血管内凝血(DIC))和通常血管损伤(例如由于手术)。
治疗其中有不需要的过量凝血酶，但是没有高凝性征兆的病症，例如神经变性疾病如阿尔茨海默病。
可提及的具体病症包括治疗和/或预防静脉血栓形成(例如DVT)和肺栓塞，动脉血栓形成(例如在心肌梗死、不稳定型心绞痛、基于血栓形成的中风和周围动脉血栓形成中)，和系统栓塞，所述系统栓塞通常是在心房纤颤(例如非瓣性心房纤颤)期间从心房产生的，或在透壁性心肌梗死之后从左心室产生的，或者是由于充血性心力衰竭引起的；预防溶栓、经皮腔内血管成形术(PTA)和冠状动脉旁路手术后的再闭塞；预防通常的显微手术和血管手术后的再血栓形成。
另外的适应证包括治疗和/或预防由细菌、多创伤、中毒或任何其他机制引起的弥散性血管内凝血；当血液与体内外来表面例如血管移植物、血管支架、血管导管、机械和生物假体瓣或任何其他医疗装置接触时的抗凝血治疗；以及当血液与体外医疗装置接触时例如在使用心肺机械进行心血管手术期间或者在血液透析过程中的抗凝血治疗；治疗和/或预防特发性和成人呼吸窘迫综合征、放疗或化疗后的肺纤维化、脓毒性休克、败血症、炎性反应，包括但不限于水肿、急性或慢性动脉粥样硬化例如冠状动脉疾病和动脉粥样硬化斑形成、脑动脉疾病、脑梗死、脑血栓形成、脑栓塞、周围动脉疾病、局部缺血、心绞痛(包括不稳定型心绞痛)、再灌注损伤、经皮腔内血管成形术(PTA)和冠状动脉旁路手术后的再狭窄。
本发明的制剂还可以包含具有与式(I)化合物不同的作用机制的抗血栓剂，例如一种或多种下列活性剂抗血小板剂例如乙酰水杨酸、噻氯匹定和氯吡格雷；血栓烷受体和/或合成酶抑制剂；纤维蛋白原受体拮抗剂；前列环素模拟物；磷酸二酯酶抑制剂；ADP-受体(P2T)拮抗剂；和羧肽酶U(CPU)抑制剂。
抑制胰蛋白酶和/或凝血酶的式(I)化合物还可用于治疗胰腺炎。
因此，本发明制剂的适应证是治疗和/或预防性地治疗这些病症。
根据本发明的另一个方面，本发明提供了治疗需要抑制凝血酶的病症的方法，所述方法包括给患有或易患有这样的病症的人施用治疗有效量的本发明制剂。
在本发明的另一个方面，本发明提供了用于制备用来治疗血栓形成的药物的本发明制剂。
依据本发明的另一个方面，本发明提供了治疗血栓形成的方法，所述方法包括给患有或易患有这样的病症的人施用本发明制剂。
为了避免疑问，“治疗”包括治疗以及预防病症。
本发明制剂(口服或胃肠外给药制剂)、浓缩制剂和固体制剂中活性组分的适当量取决于多种因素，例如活性组分(游离碱/盐等)的性质、在制得或欲制得的口服制剂或最终的“即用”胃肠外给药制剂中所需要的剂量以及制剂其他组分的性质和量。然而，式(I)化合物或其可药用盐的典型日剂量为0.001-100mg/kg体重(在经口给药时)和0.001-50mg/kg体重(在胃肠外给药时)，所述的量不包括任何酸抗衡离子的重量，与该天治疗期间的给药次数无关。对于速释胃肠外给药制剂，给药可以是连续的(例如通过输注给药)。优选的日口服剂量是20-500mg，优选的胃肠外给药剂量是0.1-50mg。
一般操作TLC是在硅胶上进行的。手性HPLC分析是使用具有5cm防护柱的46mm×250mm Chiralcel OD柱进行的。柱温保持在35℃。使用1.0mL/分钟的流速。在228nm使用Gilson 115 UV检测器。对于每一种化合物，列出了由己烷、乙醇和三氟乙酸组成的流动相以及合适的比例。一般情况下，将产物溶解在最小量的乙醇中，并用流动相稀释。
在下面的制备A-I中，使用装配有CTC-PAL注射器和5Tm，4×100mm ThermoQuest，Hypersil BDS-C18柱的HP-1100装置进行LC-MS/MS。使用API-3000(Sciex)MS检测器。流速为1.2mL/分钟，流动相(梯度)由10-90％乙腈和90-10％ 4mM乙酸铵水溶液组成，二者均含有0.2％甲酸。另外，低分辨率质谱(LRMS)使用Micromass ZQ分光计以ESI正阴转换离子方式记录(质量范围m/z 100-800)；高分辨率质谱(HRMS)使用Micromass LCT分光计以ES负离子化方式记录(质量范围m/z 100-1000)，用亮氨酸脑啡肽(C28H37N5O7)作为质量内标。
1H NMR光谱是用四甲基硅烷作为内标。
合成式(I)化合物的方法记载于国际专利申请PCT/SE01/02657(WO 02/44145，最早的优先权日期是2000年12月1日，2001年11月30日提交，2002年6月6日公布))中，将其相关信息引入本文。
制备A制备化合物A(i)3-氯-5-甲氧基苯甲醛在25℃，将在THF(200mL)中的3，5-二氯苯甲醚(74.0g，419mmol)滴加到在THF(100mL)内的镁金属(14.2g，585mmol，用0.5NHCl预先洗涤过)中。加入后，滴加1，2-二溴乙烷(3.9g，20.8mmol)。将所得暗棕色混合物加热回流3小时。将该混合物冷却至0℃，一次性加入N，N-二甲基甲酰胺(60mL)。将该混合物用乙醚(3×400mL)和6NHCl(500mL)分配。将合并的有机萃取液用盐水(300mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，获得了油状物。通过快速硅胶色谱纯化(2×)，用Hex∶EtOAc(4∶1)洗脱，获得了本子标题化合物(38.9g，54％)，为黄色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.90(s，1H)，7.53(s，1H，7.38(s，1H，7.15(s，1H)，3.87(s，3H)。
(ii)3-氯-5-羟基苯甲醛将在CH2Cl2(250mL)中的3-氯-5-甲氧基苯甲醛(22.8g，134mmol；见上面的步骤(i))溶液冷却至0℃。用15分钟滴加三溴化硼(15.8mL，167mmol)。将该反应混合物搅拌2小时后，缓慢地加入H2O(50mL)。然后用Et2O(2×100mL)萃取该溶液。将有机层合并，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速硅胶色谱纯化，用Hex∶EtOAc(4∶1)洗脱，获得了本子标题化合物(5.2g，25％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.35(s，1H)，7.20(s，1H)，7.10(s，1H)，3.68(s，1H)(iii)3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛将3-氯-5-羟基苯甲醛(7.5g，48mmol；见上面的步骤(ii))在2-丙醇(250mL)和30％KOH(100mL)中的溶液加热至回流。在搅拌下，向该反应混合物中鼓入CHClF22小时。将该反应混合物冷却，用1N HCl酸化，并用EtOAc(2×100mL)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速硅胶色谱纯化，用Hex∶EtOAc(4∶1)洗脱，获得了本子标题化合物(4.6g，46％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.95(s，1H)，7.72(s，1H)，7.52(s，1H)，7.40(s，1H)，6.60(t，JH-F＝71.1Hz，1H)(iv)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN将在CH2Cl2(200mL)中的3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛(4.6g，22.3mmol；见上面的步骤(iii))溶液冷却至0℃。加入ZnI2(1.8g，5.6mmol)和三甲基甲硅烷基氰化物(2.8g，27.9mmol)，让该反应混合物温热至室温，并搅拌15小时。将该混合物在真空下部分浓缩，获得了本子标题化合物，为液体，其不用进一步纯化或表征而直接用于下面的步骤(v)中。
(v)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(NH)OEt将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN(6.82g，假定22.3mmol；见上面的步骤(iv))滴加到HCl/EtOH(500mL)中。将该反应混合物搅拌15小时，然后在真空下部分浓缩，获得了本子标题化合物，为液体，其不用进一步纯化或表征而直接用于下面的步骤(vi)中。
(vi)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(NH)OEt(6.24g，假定22.3mmol；见上面的步骤(v))溶解在THF(250mL)中，加入0.5M H2SO4(400mL)，将该反应在40℃搅拌65小时，冷却，然后在真空下部分浓缩以除去大部分THF。然后将该反应混合物用Et2O(3×100mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，获得了本子标题化合物，为固体，其不用进一步纯化或表征而直接用于下面的步骤(vii)中。
(vii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt(6.25g，假定22.3mmol；见上面的步骤(vi))在2-丙醇(175mL)和20％KOH(350mL)中的溶液于室温搅拌15小时。在真空下部分浓缩。然后将该反应在真空下部分浓缩以除去大部分2-丙醇。将剩余混合物用1M H2SO4酸化，用Et2O(3×100mL)萃取，干燥(Na2SO4)和真空浓缩，获得了固体。通过快速硅胶色谱纯化，用CHCl3∶MeOH∶浓NH4OH(6∶3∶1)洗脱，获得了本子标题化合物的铵盐。然后将该铵盐溶解在EtOAc(75mL)和H2O(75mL)的混合物中，用2N HCl酸化。分离出有机层，用盐水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩，获得了本子标题化合物(3.2g，从步骤(iv)到(vii)的产率是57％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.16(s，1H)(viii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(OAc)C(O)OH(b)将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(3.2g，12.7mmol；见上面的步骤(vii))和Lipase PS“Amano”(～2.0g)在乙酸乙烯酯(125mL)和MTBE(125mL)中的混合物加热回流48小时。将该反应混合物冷却，经由硅藻土过滤，将滤饼用EtOAc洗涤。将滤液真空浓缩，通过快速硅胶色谱纯化，用CHCl3∶MeOH∶浓NH4OH(6∶3∶1)洗脱，获得了本子标题化合物(a)和(b)的铵盐。将化合物(a)的盐溶解在H2O中，用2N HCl酸化，用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，获得了本子标题化合物(a)(1.2g，37％)。
对于本子标题化合物(a)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.17(s，1H)(ix)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在0℃，向Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(1.1g，4.4mmol；见上面的步骤(viii))和H-Aze-Pab(Teoc)(见国际专利申请WO 00/42059，2.6g，5.7mmol)在DMF(50mL)内的溶液中加入PyBOP(2.8g，5.3mmol)和可力丁(1.3g，10.6mmol)。将该反应在0℃搅拌2小时，然后在室温再搅拌15小时。将该反应混合物真空浓缩，通过快速硅胶色谱纯化(3×)，首先用CHCl3∶EtOH(9∶1)洗脱，然后用EtOAc∶EtOH(20∶1)洗脱，最后用CH2Cl2∶CH3OH(95∶5)洗脱，获得了本子标题化合物(1.0g，37％)，为白色固体。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋转异构体混合物)δ7.79-7.85(d，J＝8.7Hz，2H)，7.15-7.48(m，5H)，6.89和6.91(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.12和5.20(s，1H)，4.75-4.85(m，1H)，3.97-4.55(m，6H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.15(m，2H)，0.09(s，9H)MS(m/z)611(M+1)+(x)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.40g，0.65mmol；见上面的步骤(ix))溶解在20mL乙腈中，加入0.50g(6.0mmol)O-甲基羟基胺盐酸盐。将该混合物在70℃加热2小时。将溶剂蒸发，把残余物在水与乙酸乙酯之间分配。将水相用乙酸乙酯萃取2次，把合并的有机相用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。产量0.41g(91％)。
1H-NMR(400MHz；CDCl3)δ7.83(bt，1H)，7.57(bs，1H)，7.47(d，2H)，7.30(d，2H)，7.20(m，1H)，7.14(m，1H)，7.01(m，1H)，6.53(t，1H)，4.89(s，1H)，4.87(m，1H)，4.47(m，2H)，4.4-4.2(b，1H)，4.17-4.1(m，3H)，3.95(s，3H)，3.67(m，1H)，2.68(m，1H)，2.42(m，1H)0.97(m，2H)，0.01(s，9H)。
(xi)化合物A将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)(0.40g，0.62mmol；见上面的步骤(x))溶解在5mL TFA中，让反应进行30分钟。将TFA蒸发，把残余物在乙酸乙酯与NaHCO3(水溶液)之间分配。将水相用乙酸乙酯萃取2次，把合并的有机相用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。将产物从水/乙腈中冷冻干燥。无需进行任何纯化。产量0.28g(85％)。
1H-NMR(600MHz；CDCl3)δ7.89(bt，1H)，7.57(d，2H)，7.28(d，2H)，7.18(m，1H)，7.13(m，1H)，6.99(m，1H)，6.51(t，1H)，4.88(s，1H)，4.87(m，1H)，4.80(bs，2H)，4.48(dd，1H)，4.43(dd，1H)，4.10(m，1H)，3.89(s，3H)，3.68(m，1H)，2.68(m，1H)，2.40(m，1H)。
13C-NMR(125MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳，旋转异构体)δ172.9，170.8，152.7，152.6HRMS，C22H23ClF2N4O5(M-H)-的计算值是495.1242，实测值是495.1247制备B制备化合物B(i)2，6-二氟-4[(甲基亚磺酰基)(甲硫基)甲基]苄腈在氩气氛下，将(甲基亚磺酰基)(甲硫基)甲烷(7.26g，0.0584mol)溶解在100mL无水THF中，并冷却至-78℃。在搅拌下滴加丁基锂在己烷中的溶液(16mL 1.6M，0.0256mol)。将该混合物搅拌15分钟。其间，在氩气氛下，将3，4，5-三氟苄腈(4.0g，0.025mmol)在100mL无水THF中的溶液冷却至-78℃，经由套管用35分钟将前一溶液加到后一溶液中。30分钟后，移去冷却浴，当反应到达室温时，将其倒入400mL水中。将THF蒸发，把剩余水层用乙醚萃取3次。将合并的乙醚相用水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。产量2.0g(30％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.25(m，2H)，5.01(s，1H，非对映体)，4.91(s，1H，非对映体)，2.88(s，3H，非对映体)，2.52(s，3H，非对映体)，2.49(s，3H，非对映体)，2.34(s，3H，非对映体)，1.72(宽峰，1H)(ii)2，6-二氟-4-甲酰基苄腈将2，6-二氟-4[(甲基亚磺酰基)(甲硫基)甲基]苄腈(2.17g，8.32mmol；见上面的步骤(i))溶解在90mL THF中，加入3.5mL浓硫酸。将该混合物在室温放置3天，然后倒入450mL水内。用EtOAc萃取3次，将合并的乙酸乙酯相用碳酸氢钠水溶液洗涤2次，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。产量1.36g(98％)。通过13C NMR确定甲酰基的位置。在162.7ppm的氟化碳的信号表现出预期的偶合模式，具有顺序为260Hz和6.3Hz的两个偶合常数，其分别对应于从氟原子的本位和间位偶合。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.35(s，1H)，7.33(m，2H)(iii)2，6-二氟-4-羟基甲基苄腈将2，6-二氟-4-甲酰基苄腈(1.36g，8.13mmol；见上面的步骤(ii))溶解在25mL甲醇中，在冰浴上冷却。在搅拌下分批加入硼氢化钠(0.307g，8.12mmol)，将该反应放置65分钟。将溶剂蒸发，把残余物在乙醚与碳酸氢钠水溶液之间分配。将乙醚层用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。粗产物很快结晶，不用进一步纯化即可使用。产量1.24g(90％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.24(m，2H)，4.81(s，2H)，2.10(宽峰，1H)(iv)甲磺酸4-氰基-2，6-二氟苄基酯在搅拌下，向2，6-二氟-4-羟基甲基苄腈(1.24g，7.32mmol；见上面的步骤(iii))和甲磺酰氯(0.93g，8.1mmol)在60mL二氯甲烷内的冰冷溶液中加入三乙胺(0.81g，8.1mmol)。在0℃保持3小时后，将该混合物用1M HCl洗涤2次，用水洗涤1次，干燥(Na2SO4)并蒸发。该产物不用进一步纯化即可使用。产量1.61g(89％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，5.33(s，2H)，3.07(s，3H)(v)4-叠氮基甲基-2，6-二氟苄腈将甲磺酸4-氰基-2，6-二氟苄基酯(1.61g，6.51mmol；见上面的步骤(iv))和叠氮化钠(0.72g，0.0111mol)在10mL水与20mL DMF中的混合物于室温搅拌过夜。然后将所得混合物倒入200mL水中，用乙醚萃取3次。将合并的乙醚相用水洗涤5次，干燥(Na2SO4)并蒸发。将少量样本蒸发以进行NMR测定，产物结晶。将其余产物小心地蒸发，但是不完全至干。根据NMR和分析HPLC，产率(理论产量1.26g)假定几乎是定量的。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，4.46(s，2H)(vi)4-氨基甲基-2，6-二氟苄腈依据J.Chem.Res.(M)(1992)3128中描述的方法进行该反应。向520mg 10％ Pd/C(50％水分)在20mL水内的悬浮液中加入硼氢化钠(0.834g，0.0221mol)在20mL水中的溶液。结果释放出了某些气体。将4-叠氮基甲基-2，6-二氟苄腈(1.26g，6.49mmol；见上面的步骤(v))溶解在50mL THF中，用15分钟加到在冰浴上的含水混合物中。将该混合物搅拌4小时，然后加入20mL 2M HCl，将该混合物经由硅藻土过滤。再用水洗涤硅藻土，将合并的水相用EtOAc洗涤，然后用2M NaOH碱化。用二氯甲烷萃取3次，将合并的有机相用水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。产量0.87g(80％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20(m，2H)，3.96(s，2H)，1.51(宽峰，2H)
(vii)2，6-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苄腈将4-氨基甲基-2，6-二氟苄腈(0.876g，5.21mmol；见上面的步骤(vi))溶解在50mL THF中，加入在10mL THF中的二碳酸二叔丁酯(1.14g，5.22mmol)。将该混合物搅拌3.5小时。将THF蒸发，把残余物在水与EtOAc之间分配。将有机层用0.5M HCl和水洗涤3次，干燥(Na2SO4)并蒸发。该产物可以不用进一步纯化而直接使用。产量1.38g(99％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.21(m，2H)，4.95(宽峰，1H)，4.43(宽峰，2H)，1.52(s，9H)(viii)Boc-Pab(2，6-二F)(OH)将2，6-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苄腈(1.38g，5.16mmol；见上面的步骤(vii))、羟基胺盐酸盐(1.08g，0.0155mol)和三乙胺(1.57g，0.0155mol)在20mL乙醇中的混合物于室温搅拌36小时。将溶剂蒸发，把残余物在水与二氯甲烷之间分配。将有机层用水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。该产物可以不用进一步纯化而直接使用。产量1.43g(92％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.14(m，2H)，4.97(宽峰，1H)，4.84(宽峰，2H)，4.40(宽峰，2H)，1.43(s，9H)(ix)Boc-Pab(2，6-二F)×HOAc依据Judkins等人，Synth.Comm.(1998)4351描述的方法进行该反应。将在100mL乙酸中的Boc-Pab(2，6-二F)(OH)(1.32g，4.37mmol；见上面的步骤(viii))、乙酸酐(0.477g，4.68mmol)和442mg 10％ Pd/C(50％水分)于5atm压力下氢化3.5小时。将该混合物经由硅藻土过滤，用乙醇洗涤，并蒸发。将残余物从乙腈和水以及几滴乙醇中冷冻干燥，本子标题产物可以不用进一步纯化而直接使用。产量1.49g(99％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.45(m，2H)，4.34(s，2H)，1.90(s，3H)，1.40(s，9H)(x)Boc-Pab(2，6-二F)(Teoc)向Boc-Pab(2，6-二F)×HOAc(1.56g，5.49mmol；见上面的步骤(ix))在100mL THF和1mL水内的溶液中加入碳酸2-(三甲基甲硅烷基)乙基酯对硝基苯基酯(1.67g，5.89mmol)。用5分钟滴加碳酸钾(1.57g，0.0114mol)在20mL水中的溶液。将该混合物搅拌过夜。将THF蒸发，将残余物在水与二氯甲烷之间分配。用二氯甲烷萃取水层，将合并的有机相用碳酸氢钠水溶液洗涤2次，干燥(Na2SO4)并蒸发。通过快速硅胶色谱纯化，用庚烷/EtOAc＝2/1洗脱，获得了1.71g(73％)纯化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.43(m，2H)，4.97(宽峰，1H)，4.41(宽峰，2H)，4.24(m，2H)，1.41(s，9H)，1.11(m，2H)，0.06(s，9H)(xi)Boc-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)将Boc-Pab(2，6-二F)(Teoc)(1.009g，2.35mmol；见上面的步骤(x))溶解在50mL用HCl(气体)饱和的EtOAc中。将该混合物放置10分钟，蒸发并溶解在18mL DMF中，然后在冰浴上冷却。依次加入Boc-Aze-OH(0.450g，2.24mmol)、PyBOP(1.24g，2.35mmol)和二异丙基乙胺(1.158g，8.96mmol)。将该反应混合物搅拌2小时，然后倒入350mL水中，用EtOAc萃取3次。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。通过快速硅胶色谱纯化，用庚烷∶EtOAc(1∶3)洗涤，获得了1.097g(96％)所需化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.46(m，2H)，4.65-4.5(m，3H)，4.23(m，2H)，3.87(m，1H)，3.74(m，1H)，2.45-2.3(m，2-H)，1.40(s，9H)，1.10(m，2H)，0.05(s，9H)(xii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)
将Boc-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)(0.256g，0.500mmol；见上面的步骤(xi))溶解在20mL用HCl(气体)饱和的EtOAc中。将该混合物放置10分钟，蒸发并溶解在5mL DMF中。依次加入Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.120g，0.475mmol；见制备A(viii))、PyBOP(0.263g，0.498mmol)和二异丙基乙胺(0.245g，1.89mmol)中。将该反应混合物搅拌2小时，然后倒入350mL水中，用EtOAc萃取3次。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。通过快速硅胶色谱纯化，用EtOAc洗脱，获得了0.184g(60％)所需的本子标题化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋转异构体混合物)δ7.55-7.45(m，2H)，7.32(m，1H，主要旋转异构体)，7.27(m，1H，次要旋转异构体)，7.2-7.1(m，2H)，6.90(t，1H，主要旋转异构体)，6.86(t，1H，次要旋转异构体)，5.15(s，1H，主要旋转异构体)，5.12(m，1H，次要旋转异构体)，5.06(s，1H，次要旋转异构体)，4.72(m，1H，主要旋转异构体)，4.6-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主要旋转异构体)，4.24(m，2H)，4.13(m，1H，主要旋转异构体)，4.04(m，1H，次要旋转异构体)，3.95(m，1H，次要旋转异构体)，2.62(m，1H，次要旋转异构体)，2.48(m，1H，主要旋转异构体)，2.22(m，1H，主要旋转异构体)，2.10(m，1H，次要旋转异构体)，1.07(m，2H)，0.07(m，9H)(xiii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(OMe，Teoc)将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)(64mg，0.099mmol；见上面的步骤(xii))和O-甲基羟基胺盐酸盐(50mg，0.60mmol)在4mL乙腈中的混合物于70℃加热3小时。将溶剂蒸发，把残余物在水与EtOAc之间分配。将水层用EtOAc萃取2次，将合并的有机相用水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。该产物可以不用进一步纯化而直接使用。产量58mg(87％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(bt，1H)，7.46(m，1H)，7.25-6.95(m，5H)，6.51，t，1H)，4.88(s，1H)，4.83(m，1H)，4.6-4.5(m，2H)，4.4-3.9(m，4H)，3.95(s，3H)，3.63(m，1H)，2.67(m，1H)，2.38(m，1H)，1.87(宽峰，1H)，0.98(m，2H)，0.01，s，9H)(xiv)化合物B
将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(OMe，Teoc)(58mg，0.086mmol；见上面的步骤(xiii))溶解在3mL TFA中，在冰浴上冷却，让其反应2小时。将TFA蒸发，把残余物溶解在EtOAc中。将有机层用碳酸钠水溶液和水洗涤2次，干燥(Na2SO4)并蒸发。将残余物从水和乙腈中冷冻干燥，获得了42mg(92％)本标题化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.95(bt，1H)，7.2-7.1(m，4H)，6.99(m，1H)，6.52(t，1H)，4.88(s，1H)，4.85-4.75(m，3H)，4.6-4.45(m，2H)，4.29(宽峰，1H)，4.09(m，1H)，3.89(s，3H)，3.69(m，1H)，2.64(m，1H)，2.38(m，1H)，1.85(宽峰，1H)13C-NMR(100MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳)δ172.1，169.8，151.9APCI-MS(M+1)＝533/535m/z制备C制备化合物C(i)甲磺酸(2-单氟乙基)酯在氮气氛下于0℃，向2-氟乙醇(5.0g，78.0mmol)在CH2Cl2(90mL)内的磁搅拌着的溶液中加入三乙胺(23.7g，234mmol)和甲磺酰氯(10.7g，93.7mmol)。将该混合物在0℃搅拌1.5小时，用CH2Cl2(100mL)稀释，用2N HCl(100mL)洗涤。将水层用CH2Cl2(50mL)萃取，将合并的有机萃取液用盐水(75mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，获得了本子标题化合物(9.7g，88％)，为黄色油状物，其不用进一步纯化而可以直接使用。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.76(t，J＝4Hz，1h)，4.64(t，J＝4Hz，1H)，4.52(t，J＝4Hz，1H)，4.43(t，J＝4Hz，1H)，3.09(s，3H)。
(ii)3-氯-5-单氟乙氧基苯甲醛在氮气氛下于室温，向3-氯-5-羟基苯甲醛(8.2g，52.5mmol；见制备A(ii))和碳酸钾(9.4g，68.2mmol)在DMF(10mL)内的溶液中滴加甲磺酸(2-单氟乙基)酯(9.7g，68.2mmol；见上面的步骤(i))在DMF(120mL)中的溶液。将该混合物在100℃加热5小时，然后在室温搅拌过夜。将该反应冷却至0℃，倒入冰冷的2N HCl内，用EtOAc萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化该棕色油状物，用Hex∶EtOAc(4∶1)洗脱，获得了本子标题化合物(7.6g，71％)，为黄色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.92(s，1H)，7.48(s，1H)，7.32(s，1H)，7.21(s，1H)，4.87(t，J＝4Hz，1H)，4.71(t，J＝3Hz，1H)，4.33(t，J＝3Hz，1H)，4.24(t，J＝3Hz，1H)。
(iii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OTMS)CN在氮气氛下于0℃，向3-氯-5-单氟乙氧基苯甲醛(7.6g，37.5mmol；见上面的步骤(ii))和碘化锌(3.0g，9.38mmol)在CH2Cl2(310mL)内的溶液中滴加三甲基甲硅烷基氰化物(7.4g，75.0mmol)。将该混合物在0℃搅拌3小时，在室温搅拌过夜。将该反应用H2O(300mL)稀释，分离出有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，获得了本子标题化合物(10.6g，94％)，为棕色油状物，其其不用进一步纯化或表征而直接使用。
(iv)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH将浓盐酸(100mL)加到Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OTMS)CN(10.6g，5.8mmol；见上面的步骤(iii))中，将该溶液在100℃搅拌3小时。冷却至室温后，将该反应进一步冷却至0℃，用3N NaOH(～300mL)缓慢地碱化，用Et2O(3×200mL)洗涤。将水层用2N HCl(80mL)酸化，用EtOAc(3×300mL)萃取。将合并的EtOAc萃取液干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，获得了本子标题化合物(8.6g，98％)，为浅黄色固体，其不用进一步纯化而直接使用。
Rf＝0.28(90∶8∶2CHCl3∶MeOH∶浓NH4OH)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.09(s，1H)，7.02(s，1H)，6.93(s，1H)，5.11(s，1H)，4.77-4.81(m，1H)，4.62-4.65(m，1H)，4.25-4.28(m，1H)，4.15-4.I8(m，1H)。
(v)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(S)CH(OAc)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(b)
将Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(8.6g，34.5mmol；见上面的步骤(iv))和Lipase PS“Amano”(4.0g)在乙酸乙烯酯(250mL)和MTBE(250mL)中的溶液于70℃和氮气氛下加热3天。将该反应冷却至室温，通过经由硅藻土过滤来除去酶。将滤饼用EtOAc洗涤，将滤液真空浓缩。通过硅胶色谱纯化，用CHCl3∶MeOH∶Et3N(90∶8∶2)洗脱，获得了本子标题化合物(a)的三乙胺盐，为黄色油状物。此外，还获得了本子标题化合物(b)的三乙胺盐(4.0g)。将本子标题化合物(b)的盐溶解在H2O(250mL)中，用2N HCl酸化，用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机萃取液干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，获得了本子标题化合物(b)(2.8g，32％)，为黄色油状物。
关于本子标题化合物(b)的数据Rf＝0.28(90∶8∶2CHCl3∶MeOH∶浓NH4OH)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.09(s，1H)，7.02(s，1H)，6.93(s，1H)，5.11(s，1H)，4.77-4.81(m，1H)，4.62-4.65(m，1H)，4.25-4.28(m，1H)，4.15-4.18(m，1H).
(vi)化合物C在氮气氛下于0℃，向Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(818mg，3.29mmol；见上面的步骤(v))在DMF(30mL)内的溶液中加入HAze-Pab(OMe).2HCl(1.43g，4.27mmol，见国际专利申请WO00/42059)、PyBOP(1.89g，3.68mmol)和DIPEA(1.06g，8.23mmol)。将该反应在0℃搅拌2小时，然后在室温搅拌过夜。将该混合物真空浓缩，把残余物通过硅胶色谱纯化两次，首先用CHCl3∶EtOH(15∶1)洗脱，然后用EtOAc∶EtOH(20∶1)洗脱，获得了本标题化合物(880mg，54％)。
Rf＝0.60(10∶1CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋转异构体的复杂混合物)δ7.58-7.60(d，J＝8Hz，2H)，7.34(d，J＝7Hz，2H)，7.05-7.08(m，2H)，6.95-6.9(m，1H)，5.08-5.13(m，1H)，4.77-4.82(m，1H)，4.60-4.68(m，1H)，3.99-4.51(m，7H)，3.82(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)。
13C-NMR(150MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ173.3，170.8，152.5。APCI-MS(M+1)＝493m/z。
制备化合物D(Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab)化合物D将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.045g，0.074mmol；见制备A(ix))溶解在3mL TFA中，让其反应1小时。将TFA蒸发，把残余物从水/乙腈中冷冻干燥，获得了0.043g(100％)作为其TFA盐的本子标题化合物。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋转异构体δ7.8-7.75(m，2H)，7.55-7.5(m，2H)，7.35(m，1H，主要旋转异构体)，7.31(m，1H，次要旋转异构体)，7.19(m，1H，主要旋转异构体)，7.15(m，1H)，7.12(m，1H，次要旋转异构体)，6.89(t，1H，主要旋转异构体)，6.87(t，1H，次要旋转异构体)，5.22(m，1H，次要旋转异构体)，5.20(s，1H，主要旋转异构体)，5.13(s，1H，次要旋转异构体)，4.80(m，1H，主要旋转异构体)，4.6-4.4(m，2H)，4.37(m，1H，主要旋转异构体)，4.19(m，1H，主要旋转异构体)，4.07(m，1H，次要旋转异构体)，3.98(m，1H，次要旋转异构体)，2.70(m，1H，次要旋转异构体)，2.55(m，1H，主要旋转异构体)，2.29(m，1H，主要旋转异构体)，2.15(m，1H，次要旋转异构体)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋转异构体)δ172.6，172.5，172.0，171.7，167.0MS(m/z)465(M-1)-，467(M+1)+制备化合物E(Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F))化合物E将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)(81mg，0.127mmol；见制备B(xii))溶解在0.5mL二氯甲烷中，在冰浴上冷却。加入TFA(3mL)，将该反应放置75分钟。将TFA蒸发，把残余物从水和乙腈中冷冻干燥。通过制备RPLC纯化粗产物，用CH3CN∶0.1M NH4OAc(35∶65)洗脱，获得了39mg(55％)作为其HOAc盐的本标题化合物，纯度99％。
1H NMR(400MHz，CD3OD旋转异构体混合物)δ7.5-7.4(m，2H)，7.32(m，1H，主要旋转异构体)，7.28(m，1H，次要旋转异构体)，7.2-7.1(m，3H)6.90(t，1H，主要旋转异构体)，6.86(t，次要旋转异构体)，5.15(s，1H，主要旋转异构体)，5.14(m，1H，次要旋转异构体)，5.07(s，1H，次要旋转异构体)，4.72(m，1H，主要旋转异构体)，4.65-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主要旋转异构体)，4.16(m，1H，主要旋转异构体)，4.03(m，1H，次要旋转异构体)，3.95(m，1H，次要旋转异构体)，2.63(m，1H，次要旋转异构体)，2.48(m，1H，主要旋转异构体)，2.21(m，1H，主要旋转异构体)，2.07(m，1H，次要旋转异构体)，1.89(s，3H)13C-NMR(75MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋转异构体混合物)δ171.9，171.2，165.0，162.8，160.4APCI-MS(M+1)＝503/505m/z。
制备化合物F(Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA)(i)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮气氛下于0℃，向Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(940mg，3.78mmol；见制备C(v))在DMF(30mL)内的溶液中加入HAze-Pab(Teoc).HCl(2.21g，4.91mmol)、PyBOP(2.16g，4.15mmol)和DIPEA(1.22g，9.45mmol)。将该反应在0℃搅拌2小时，然后在室温搅拌4小时。将该混合物真空浓缩，把所得残余物通过硅胶色谱纯化两次，首先用CHCl3∶EtOH(15∶1)洗脱，然后用EtOAc∶EtOH(20∶1)洗脱，获得了本子标题化合物(450mg，20％)，为可压碎的白色泡沫状物。
Mp80-88℃Rf＝0.60(10∶1CHCl3∶EtOH)1HNMR(300MHz，CD3OD，旋转异构体的复杂混合物)δ7.79(d，J＝8Hz，2H)，7.42(d，J＝8Hz，2H)，7.05-7.08(m，1H)，6.93-6.99(m，2H)，5.08-5.13(m，1H)，4.75-4.80(m，2H)，4.60-4.68(m，1H)，3.95-4.55(m，8H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.11(m，2H)，0.08(s，9H)。
APCI-MS(M+1)＝607m/z。
(ii)化合物F将Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.357g，0.589mmol；见上面的步骤(i))溶解在10mL TFA中，让其反应40分钟.将TFA蒸发，把残余物从水/乙腈中冷冻干燥，获得了0.33g(93％)作为其TFA盐的本标题化合物。
1H-NMR(600MHz；CD3OD)旋转异构体δ7.8-7.7(m，2H)，7.54(d，2H)，7.08(s，1H，主要旋转异构体)，7.04(s，1H，次要旋转异构体)，6.99(s，1H，主要旋转异构体)，6.95(s，1H)，6.92(s，1H，次要旋转异构体)，5.18(m，1H，次要旋转异构体)，5.14(s，1H，主要旋转异构体)，5.08(s，1H，次要旋转异构体)，4.80(m，1H，主要旋转异构体)，4.73(m，1H)，4.65(m，1H)，4.6-4.4(m，2H)，4.35(m，1H，主要旋转异构体)，4.21(多重峰的双峰，2H)，4.12(m，1H，主要旋转异构体)，4.06(m，1H，次要旋转异构体)，3.99(m，1H，次要旋转异构体)，2.69(m，1H，次要旋转异构体)， 2.53(m，1H，主要旋转异构体)，2.29(m，1H，主要旋转异构体)，2.14(m，1H，次要旋转异构体)。
13C-NMR(150MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ172.8，172.1，167.4。
ESI-MS+(M+1)＝463(m/z)制备化合物G(Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH))(i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH，Teoc)将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.148g，0.24mmol；见制备A步骤(ix))溶解在9mL乙腈中，加入0.101g(1.45mmol)羟基胺盐酸盐。将该混合物在70℃加热2.5小时，经由硅藻土过滤，并蒸发。该粗产物(0.145g；75％纯度)不用进一步纯化而直接用于下一步骤。
(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH，Teoc)(0.145g，0.23mmol；见上面的步骤(i))溶解在0.5mL CH2Cl2和9mL TFA中。让该反应进行60分钟。将TFA蒸发，使用制备HPLC纯化残余物。将所要的级份合并，冷冻干燥(2×)，获得了72mg(两步的产率是62％)本标题化合物。
MS(m/z)482(M-1)-；484(M+1)+1H-NMR(400MHz；CD3OD)δ7.58(d，2H)，7.33(m，3H)，7.15(m，2H)，6.89(t，1H主要旋转异构体)，6.86(t，1H次要旋转异构体)，5.18 (s，1H主要旋转异构体；和m，1H次要旋转异构体)，5.12(s，1H次要旋转异构体)，4.77(m，1H主要旋转异构体)，4.42(m，2H)，4.34(m，1H主要旋转异构体)，4.14(m，1H主要旋转异构体)，4.06(m，1H次要旋转异构体)，3.95(m，1H次要旋转异构体)，2.66(m，1H次要旋转异构体)，2.50(m，1H主要旋转异构体)，2.27(m，1H主要旋转异构体)，2.14(m，1H次要旋转异构体)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋转异构体混合物)δ172.4，172.3，172.0，171.4 152.3，152.1制备化合物HPh(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze- Pab(2，6-二F)(OH) (i)Boc-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二F，4-CN)将Boc-(S)Aze-OH(1.14g，5.6mmol)溶解在45mL DMF中。加入4-氨基甲基-2，6-二氟苄腈(1.00g，5.95mol，见实施例1(xiv))、PyBOP(3.10g，5.95mmol)和DIPEA(3.95mL，22.7mmol)，将该溶液在室温搅拌2小时。将溶剂蒸发，把残余物在H2O与EtOAc(分别是75mL)之间分配。用2×50mL EtOAc萃取水相，将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。通过快速色谱纯化(SiO2，EtOAc/庚烷(3/1))，获得了本子标题化合物(1.52g，77％)，为油状物，该油状物在冰箱中结晶。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)δ7.19(m，2H)，4.65-4.5(m，3H)，3.86(m，1H)，3.73(m，1H)，2.45-2.3(m，2H)，139(s，9H)(ii)H-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二F，4-CN)×HCl将Boc-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二F，4-CN)(0.707g，2.01mmol，见上面的步骤(i))溶解在60mL用HCl(气体)饱和的EtOA中。在室温搅拌15分钟后，将溶剂蒸发。把残余物溶解在CH3CN/H2O(1/1)中，冷冻干燥，获得了本子标题化合物(0.567g，98％)，为灰白色非晶形粉末。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)δ7.49(m，2H)，4.99(m，1H)，4.58(m，2H)，4.12(m，1H)，3.94(m，1H)，2.80(m，1H)，2.47(m，1H)MS(m/z)252.0(M+1)+(iii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6- 二F，4-CN)将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.40g，1.42mmol，见上面的实施例1(viii))溶解在10mL DMF中，加入H-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二F，4-CN)×HCl(0.43g，1.50mmol，见上面的步骤(ii))和PyBOP(0.779g，1.50mmol)，然后加入DIPEA(1.0mL，5.7mmol)。在室温搅拌2小时后，将溶剂蒸发。将残余物在H2O(200mL)与EtOAc(75mL)之间分配。将水相用2×75mL EtOAc萃取，将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。通过快速色谱纯化(SiO2，EtOAc/庚烷(4/1))，获得了本子标题化合物(0.56g，81％)，为油状物。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋转异构体δ7.43(m，2H)，7.31(m，1H，主要旋转异构体)，7.26(m，1H，次要旋转异构体)，7.2-7.1(m，2H)，6.90(t，1H，主要旋转异构体)，6.86(t，1H，次要旋转异构体)，5.14(s，1H，主要旋转异构体)，5.11(m，1H，次要旋转异构体)，5.04(s，1H，次要旋转异构体)，4.71(m，1H，主要旋转异构体)，4.6-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主要旋转异构体)，4.2-3.9(m，1H；和1H，次要旋转异构体)，2.62(m，1H，次要旋转异构体)，2.48(m，1H，主要旋转异构体)，2.21(m，1H，主要旋转异构体)，2.09(m，1H，次要旋转异构体)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基碳)δ171.9，171.8MS(m/z)484.0，485.9(M-1)-，486.0，487.9 (M+1)+(iv)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OH)将Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二F，4-CN)(0.555g，1.14mmol，得自(iii))溶解在10mL EtOH(95％)中。向该溶液中加入羟基胺盐酸盐(0.238g，3.42mmol)和Et3N(0.48mL，3.44mmol)。在室温搅拌14小时后，除去溶剂，把残余物溶解在EtOAc中。将有机相用盐水和H2O洗涤，用Na2SO4干燥。通过制备RPLC纯化粗产物，用CH3CN∶0.1M NH4Oac洗脱，冷冻干燥后获得了本标题化合物，为非晶形粉末(0.429g，72％)。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋转异构体δ7.35-7.1(m，5H)，6.90(t，1H，主要旋转异构体)，6.85(t，1H，次要旋转异构体)，5.15(s，1H，主要旋转异构体)，5.12(m，1H，次要旋转异构体)，5.08(s，1H，次要旋转异构体)，4.72(m，1H，主要旋转异构体)，4.6-4.4(m，2H)，4.30(m，1H，主要旋转异构体)，4.12(m，1H，主要旋转异构体)，4.04(m，1H，次要旋转异构体)，3.94(m，1H，次要旋转异构体)，2.62(m，1H，次要旋转异构体)，2.48(m，1H，主要旋转异构体)，2.22(m，1H，主要旋转异构体)，2.10(m，1H，次要旋转异构体)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋转异构体)δ 172.4，171.9，171.0，152.3，151.5MS(m/z)517.1，519.0(M-1)-，519.1，521.0(M+1)+制备化合物J(Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH))(i)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)将Boc-Aze-Pab(Z)(见国际专利申请WO 97/02284，92mg，0.197mmol)溶解在10mL用HCl(气体)饱和的EtOAc中，让其反应10分钟。将溶剂蒸发，把残余物依次与Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(50mg，0.188mmol；见制备C(v))、PyBOP(109mg，0.209mmol)和二异丙基乙胺(96mg，0.75mmol)在2mL DMF中混合。将该混合物搅拌2小时，然后倒入50mL水中，用EtOAc萃取3次。将合并的有机相用水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。通过快速硅胶色谱纯化该粗产物，用EtOAc∶MeOH(9∶1)洗脱。产量100mg(87％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD旋转异构体混合物)δ7.85-7.75(m，2H)，7.45-7.25(m，7H)，7.11(m，1H，主要旋转异构体)，7.08(m，1H，次要旋转异构体)，7.05-6.9(m，2H)，6.13(bt，1H)，5.25-5.05(m，3H)，4.77(m，1H，被CD3OH信号部分掩蔽)，4.5-3.9(m，7H)，2.64(m，1H，次要旋转异构体)，2.47(m，1H，主要旋转异构体)，2.25(m，1H，主要旋转异构体)，2.13(m，1H，次要旋转异构体)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)将羟基胺盐酸盐(65mg，0.94mmol)和三乙胺(0.319g，3.16mmol)在8mL THF中混合，在40℃超声处理1小时。加入Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)(96mg，0.156mmol；见上面的步骤(i))和8mL THF。将该混合物在40℃搅拌4.5天。将溶剂蒸发，通过制备RPLC纯化粗产物，用CH3CN∶0.1M NH4OAc(40∶60)洗脱。产量30mg(38％)。纯度99％。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋转异构体混合物)δ7.6-7.55(m，2H)，7.35-7.3(m，2H)，7.12(m，1H，主要旋转异构体)，7.09(m，1H，次要旋转异构体)，7.05-6.9(m，2H)，6.15(多重峰的三重峰，1H)，5.15(m，1H，次要旋转异构体)，5.13(s，1H，主要旋转异构体)，5.08(s，1H，次要旋转异构体)，4.77(m，1H，主要旋转异构体)，4.5-4.2(m，5H)，4.08(m，1H，主要旋转异构体)，3.97(m，1H，次要旋转异构体)，2.66(m，1H，次要旋转异构体)，2.50(m，1H主要旋转异构体)，2.27(m，1H，主要旋转异构体)，2.14(m，1H，次要旋转异构体)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋转异构体混合物)δ172.8，172.2，171.4，159.1，158.9，154.2。
APCI-MS(M+1)＝497/499m/z方法1和2制备化合物A的盐方法1制备盐的一般方法采用以下一般方法来制备化合物A的盐将200mg化合物A(见上面的制备A)溶解在5mL MeOH中。向该溶液中加入溶解在5mL MeOH中的相应酸(1.0摩尔当量)的溶液。在室温搅拌10分钟后，通过旋转蒸发仪除去溶剂。将剩余固体物质再溶解在8mL乙腈∶H2O(1∶1)中。冷冻干燥，在每次获得了无色非晶形物质。
所用的酸(1S)-(+)-10-樟脑磺酸苹果酸环己基氨基磺酸磷酸二甲基磷酸对甲苯磺酸L-赖氨酸L-赖氨酸盐酸盐糖精酸甲磺酸盐酸合适的特征数据如表1所示。
表1
在该方法中形成的所有盐都是非晶形的。
方法2化合物A的其他非晶形盐是用类似于上面方法1中描述的技术由下列酸制得的氢溴酸(1∶1盐)
盐酸(1∶1盐)硫酸(1∶0.5盐)1，2-乙二磺酸(1∶0.5盐)1S-樟脑磺酸(1∶1盐)(+/-)-樟脑磺酸(1∶1盐)乙磺酸(1∶1盐)硝酸(1∶1盐)甲苯磺酸(1∶1盐)甲磺酸(1∶1盐)对二甲苯磺酸(1∶1盐)2-均三甲苯磺酸(1∶1盐)1，5-萘磺酸(1∶0.5盐)萘磺酸(1∶1盐)苯磺酸(1∶1盐)糖精酸(1∶1盐)马来酸(1∶1盐)磷酸(1∶1盐)D-谷氨酸(1∶1盐)L-谷氨酸(1∶1盐)D，L-谷氨酸(1∶1盐)L-精氨酸(1∶1盐)L-赖氨酸(1∶1盐)L-赖氨酸盐酸盐(1∶1盐)甘氨酸(1∶1盐)水杨酸(1∶1盐)酒石酸(1∶1盐)富马酸(1∶1盐)柠檬酸(1∶1盐)L-(-)-苹果酸(1∶1盐)D，L-苹果酸(1∶1盐)D-葡糖酸(1∶1盐)方法3制备非晶形化合物A，乙磺酸盐将化合物A(203mg；见上面的制备A)溶解在乙醇(3mL)中，将乙磺酸(1eq.，95％，35μL)加到该溶液中。将该混合物搅拌几分钟，然后将溶剂蒸发。把所得油状物在异辛烷中浆化，蒸发至干直至获得固体物质。最后将所得产物在异辛烷中再次浆化，将溶剂再次蒸发，获得了白色、干燥的非晶形固体。将该固体在40℃真空干燥过夜。
方法4-9制备结晶化合物A，乙磺酸盐方法4非晶形物质的结晶将非晶形化合物A，乙磺酸盐(17.8mg；见上面的方法3)在甲基异丁基酮(600μL)中浆化。1周后，观察到针状结晶，将其过滤并风干。
方法5-7反应结晶(不用反溶剂)方法5将化合物A(277mg；见上面的制备A)溶解在甲基异丁基酮(3.1mL)中。加入乙磺酸(1eq.，95％，48μL)。立即发生了非晶形乙磺酸盐的沉淀。再加入一些甲基异丁基酮(6mL)，用超声处理该浆液。最后加入第三份甲基异丁基酮(3.6mL)，然后把该浆液在搅拌下(磁搅拌器)放置过夜。第二天，该物质已经转化为针状结晶。将该浆液过滤，用甲基异丁基酮(0.5mL)干燥，并风干。
方法6在室温将化合物A(236mg；见上面的制备A)溶解在甲基异丁基酮(7mL)中。将乙磺酸(1eq.，41μL)与2mL甲基异丁基酮在瓶中混合。向化合物A的溶液中加入作为晶种的结晶化合物A，乙磺酸盐(见上面的方法4和5)。然后用45分钟分批加入250μL乙磺酸的甲基异丁基酮溶液。再次向该溶液中加入晶种，将温度提高至30℃。然后用大约1小时加入500μL甲基异丁基酮溶液。将所得浆液放置过夜，然后用20分钟加入最后量的甲基异丁基酮/酸溶液。将该瓶用1.5mL甲基异丁基酮洗涤，将洗涤液加到该浆液中。6小时后，过滤出结晶，用甲基异丁基酮(2mL)洗涤，在40℃减压干燥。总共获得了258mg结晶盐，相当于产率约为87％。
方法7将化合物A(2.36g；见上面的制备A)溶解在甲基异丁基酮(90mL)中。向该溶液中加入化合物A，乙磺酸盐的晶种(10mg)(见上面的方法4-6)，然后分两批加入乙磺酸(40μL)。再加入晶种(12mg)和两批乙磺酸(2×20μL)。将该浆液用甲基异丁基酮(15mL)稀释，然后继续加入乙磺酸。用1小时分批加入总共330μL乙磺酸。加入少量晶种，最后将该浆液在搅拌下放置过夜。在第二天，过滤出结晶，用甲基异丁基酮(2×6mL)洗涤，在40℃减压干燥。干燥后，获得了总共2.57g白色结晶产物，相当于产率为89％。
方法8和9反应结晶(采用反溶剂)方法8将化合物A(163mg；见上面的制备A)溶解在异丙醇(1.2mL)中。将该溶液加热至35℃。加入乙磺酸(28μL)。然后加入乙酸乙酯(4.8mL)，向该溶液中加入结晶化合物A，乙磺酸盐的晶种(见上面的方法4-7)。几乎立即开始了结晶。将该浆液在35℃放置约80分钟，然后让其冷却至室温(21℃)。2小时后，过滤出结晶，用乙酸乙酯(3×0.4mL)洗涤3次，在40℃减压干燥。总共获得了170mg本标题产物结晶，相当于产率约为82％。
方法9在40℃将化合物A(20.0g；见上面的制备A)溶解在异丙醇(146.6mL)中，将乙磺酸(3.46mL，95％，1eq.)加到该溶液中。向所得澄清溶液中加入化合物A，乙磺酸盐的晶种(50mg；见上面的方法4-8)。然后用10分钟加入乙酸乙酯(234mL)。向所得轻微不透明的溶液中再次加入晶种(70mg)，在搅拌下于40℃放置1小时以让结晶开始。然后用1小时以恒定速度加入总共352mL乙酸乙酯。当所有乙酸乙酯都已加入后，把浆液放置1小时，然后用2小时冷却至21℃。让结晶在21℃继续1小时，然后过滤出结晶，用乙酸乙酯(50mL+60mL)洗涤2次，最后在40℃减压干燥过夜。总共获得了21.6g白色结晶盐，相当于产率约为90％。
如下所述通过NMR测定化合物A，乙磺酸盐的特征将23mg盐溶解在氘化甲醇(0.7mL)troscopy中。联合使用1D(1H，13C和选择性NOE)和2D(gCOSY，gHSQC和gHMBC)NMR实验。所有数据都与如下所示的盐的理论结构非常一致。在甲醇中存在两种构象的分子。根据分配给H5(主要构象异构体)的峰和分配给H5’(其他构象异构体)的峰的积分，发现两种构象异构体的比例为70∶30。不能观测到H22，因为这些质子与溶剂CD3OD进行快速交换。
与位置1相对应的质子和碳共振发生分裂，这是由于和该位置上的两个氟核发生自旋偶合的缘故。偶合常数是2JHF＝73Hz和1JCF＝263Hz。
1H和13C NMR化学位移分配以及质子-质子相互关系如表2所示。
表2
a相对于在49.0ppm的溶剂共振。
b相对于在3.30ppm的溶剂共振。
cs＝单峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝宽峰，d＝双峰d在gCOSY实验中获得的。
e由于和两个氟核偶合，共振是三重峰。1JCF＝263Hz。
HRMS，C24H29ClF2N4O8S(M-H)-的计算值是605.1284，实测值是605.1296。
通过XRPD分析化合物A，乙磺酸盐结晶(通过一种或多种上文实施例4-9的方法获得的)，所得结果在下表(表3)和附

图1中显示。
表3
DSC表明了吸热现象，具有约131℃的外推的熔化开始温度。TGA表明在熔点周围质量减少了约0.2％(w/w)。用低溶剂含量的样本重复DSC分析，结果表明约144℃的熔化开始温度。
方法10制备非晶形化合物A，苯磺酸盐将化合物A(199mg；见上面的制备A)溶解在乙醇(2mL)中。在瓶内将苯磺酸(1eq.90％，70mg)溶解在乙醇(1mL)中。将该乙醇溶液加到化合物A的溶液中，用1mL乙醇洗涤该瓶，然后将洗涤液加到该混合物中。将该混合物搅拌几分钟，然后将乙醇蒸发直至形成油状物。加入乙酸乙酯(3mL)，将溶剂再次蒸发至干。形成了非晶形固体。
方法11-13制备化合物A，苯磺酸盐结晶方法11非晶形物质的结晶将非晶形化合物A苯磺酸盐(20.7mg；见上面的方法10)在乙酸乙酯(600μL)中浆化。5天后，在浆液中观察到了针状结晶。
方法12和13反应结晶方法12将化合物A(128mg；见上面的制备A)溶解在乙酸乙酯(3mL)中。向该溶液中加入作为晶种的上面方法11所得浆液。然后加入苯磺酸(1eq.，90％，45mg)。苯磺酸盐立即开始沉淀。向该浆液中加入异丙醇(0.8mL)，再次向该混合物中加入晶种。两天后，该物质已经转化为针状结晶。将该浆液过滤，用乙酸乙酯(3×0.2mL)洗涤，在40℃真空干燥短时间。总共获得了约140mg白色固体。
方法13将化合物A(246mg；见上面的制备A)溶解在异丙醇(1.52mL)中。加入苯磺酸(88mg，90％)。向该澄清溶液中加入乙酸乙酯(3mL)，然后向该混合物中加入晶种以开始结晶。1小时后，再加入乙酸乙酯(2.77mL)。最后让该浆液结晶过夜，然后过滤出结晶，用乙酸乙酯(3×0.3mL)洗涤，在40℃真空干燥。总共获得了279mg盐，相当于产率约为86％。
如下所述通过NMR测定化合物A，苯磺酸盐的特征将20mg盐溶解在氘化甲醇(0.7mL)中。联合使用1D(1H，13C和选择性NOE)和2D(gCOSY，gHSQC和gHMBC)NMR实验。所有数据都与如下所示的盐的理论结构非常一致。在甲醇中存在两种构象的分子。根据分配给H12(主要构象异构体)的峰和分配给H12’(其他构象异构体)的峰的积分，发现两种构象异构体的比例为70∶30。不能观测到H22，因为这些质子与溶剂CD3OD进行快速交换。
与位置1相对应的质子和碳共振发生分裂，这是由于和该位置上的两个氟核发生自旋偶合的缘故。偶合常数是2JHF＝74Hz和1JCF＝260Hz。
1H和13C NMR化学位移分配以及质子-质子相互关系如表4所示。
表4
a相对于在49.0ppm的溶剂共振。
b相对于在3.30ppm的溶剂共振。
cs＝单峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝宽峰，d＝双峰d在gCOSY实验中获得的。
e由于和两个氟核偶合，共振是三重峰。1JCF＝260Hz。
f由于共振102与103之间的重叠而难以确定连通性。
HRMS，C28H29ClF2N4O8S(M-H)-的计算值是653.1284，实测值是653.1312。
通过XRPD分析化合物A，苯磺酸盐结晶(通过一种或多种上文实施例11-13的方法获得的)，所得结果在下表(表5)和附图2中显示。
表5
DSC表明了吸热现象，具有约152℃的外推的熔化开始温度。TGA表明在熔点周围质量减少了约0.1％(w/w)。
方法14制备非晶形化合物A，正丙磺酸盐将化合物A(186mg；见上面的制备A)溶解在异丙醇(1.39mL)中，加入正丙磺酸(1eq.，95％，39μL)。加入乙酸乙酯(5.6mL)，将溶剂蒸发至干，形成了非晶形固体。
方法15和16制备化合物A，正丙磺酸盐结晶方法15非晶形物质的结晶将非晶形化合物A，正丙磺酸盐(20mg；见上面的方法14)溶解在异丙醇(60μL)中，加入乙酸异丙酯(180μL)。3天后，观察到针状结晶。
方法16反应结晶将化合物A(229mg；见上面的制备A)溶解在异丙醇(1.43mL)中。加入正丙磺酸(1eq.，95％，48μL)。加入乙酸乙酯(2mL)，然后向该溶液中加入作为晶种的由上面方法15所得结晶盐。再加入乙酸乙酯(5mL)，将该浆液放置过夜以结晶。过滤出结晶，用乙酸乙酯(3×0.3mL)洗涤，在40℃真空干燥。
如下所述通过NMR测定化合物A，正丙磺酸盐的特征将13mg盐溶解在氘化甲醇(0.7mL)troscopy中。联合使用1D(1H，13C)和2D(gCOSY)NMR实验。所有数据都与如下所示的盐的理论结构非常一致。在甲醇中存在两种构象的分子。根据分配给H12(主要构象异构体)的峰和分配给H12’(其他构象异构体)的峰的积分，发现两种构象异构体的比例为65∶35。不能观测到H22，因为这些质子与溶剂CD3OD进行快速交换。
与位置1相对应的质子和碳共振发生分裂，这是由于和该位置上的两个氟核发生自旋偶合的缘故。偶合常数是2JHF＝74Hz和1JCF＝260Hz。
1H和13C NMR化学位移分配以及质子-质子相互关系如表6所示。
表6
a相对于在49.0ppm的溶剂共振。
b相对于在3.30ppm的溶剂共振。
cs＝单峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝宽峰，d＝双峰d在gCOSY实验中获得的。
e由于和两个氟核偶合，共振是三重峰。1JCF＝260Hz。
HRMS，C25H31ClF2N4O8S(M-H)-的计算值是619.1441，实测值是619.1436。
通过XRPD分析化合物A，正丙磺酸盐结晶(通过一种或多种上文实施例15和16的方法获得的)，所得结果在下表(表7)和附图3中显示。
表7
DSC表明了吸热现象，具有约135℃的外推的熔化开始温度。TGA表明在熔点周围质量没有减少。
方法17方法17-A制备非晶形化合物A正丁烷磺酸盐将非晶形化合物A(277mg)溶解在IPA(1.77ml)中，加入丁磺酸(约1eq.70μL)。加入乙酸乙酯(6ml)，将溶剂蒸发至干，形成了非晶形固体。
方法17-B制备化合物A丁烷磺酸盐结晶将非晶形化合物A丁烷磺酸盐(71.5mg；见上面的制备)在乙酸乙酯(500μl)中浆化过夜。过滤出结晶，并风干。
如下所述通过NMR测定化合物A，丁烷磺酸盐的特征将21.6mg盐溶解在氘化二甲亚砜(0.7ml)中，用1H和13C NMR光谱法进行测定。其光谱与同一化合物的其他盐非常类似，并且与下面所示的结构非常一致。光谱中的大部分共振是作为两个峰的组呈现的，这是因为沿着C9-N10键的缓慢旋转所致，这样的缓慢旋转导致在该溶液中同时存在两种阻转异构体。同一化合物的其他盐也显示了这种现象。
位置1上的两个氟核使得该位置上的质子和碳的共振发生分裂。偶合常数是2JHF＝73Hz和1JCF＝258Hz。
表1给出了质子和碳的化学位移。由于化学交换，22和24位上的质子没有检测到。在与这些质子相对应的质子光谱中，在8与9ppm之间有非常宽的峰。
表8在氘化二甲亚砜中于25℃，化合物A正丁烷磺酸盐的1H和13C NMR化学位移分配。

a相对于在49.0ppm的溶剂共振。
b相对于在3.30ppm的溶剂共振。
cs＝单峰，d＝双峰，dd＝双双峰，t＝三重峰，m＝多重峰。
d由于和两个氟核F1偶合，共振是三重峰。1JCF＝258Hz。。与间位质子的4JHH偶合没有完全解析。
na＝不可用，nd＝未测得HRMS，C26H32ClF2N4O8S(M-H)-的计算值是633.1597，实测值是633.1600通过XRPD分析化合物A正丁烷磺酸盐的结晶(如上所述在方法17-B中获得的)，所得结果在下表(表9)和附图4中显示。
表9
DSC表明了吸热现象，具有约118℃的外推的熔化开始温度，并且TGA表明了0.04％的重量损失。
方法18制备化合物B的盐方法18-A制备盐的一般方法采用以下一般方法来制备化合物B的盐将200mg化合物B(见上面的制备B)溶解在5mL MIBK(甲基异丁基酮)中。向该溶液中加入溶解在1.0mL MIBK中的相应酸(1.0或0.5摩尔当量，如表10所示)的溶液。在室温搅拌10分钟后，通过旋转蒸发仪除去溶剂。将剩余固体物质再溶解在约8mL乙腈∶H2O(1∶1)中。冷冻干燥，分别获得了无色非晶形产物。
所用的酸乙磺酸盐(乙磺酸)苯磺酸盐(苯磺酸)环己基氨基磺酸盐硫酸盐溴化物对甲苯磺酸盐2-萘磺酸盐半硫酸盐甲磺酸盐硝酸盐盐酸盐合适的特征数据如表10所示表10
在该实施例中形成的所有盐都是非晶形的。
方法18-B化合物B的其他非晶形盐是用类似于上面方法18-A中描述的技术由下列酸制得的1，2-乙二磺酸(0.5盐)1S-樟脑磺酸(+/-)-樟脑磺酸对二甲苯磺酸2-均三甲苯磺酸糖精酸马来酸磷酸D-谷氨酸L-精氨酸L-赖氨酸
L-赖氨酸*HCl方法18-C制备非晶形化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐将非晶形化合物B(110.9mg)溶解在2.5mL 2-丙醇中，加入0.5当量1，5-萘-二磺酸四水合物(溶解在1mL 2-丙醇中)。将该样本搅拌过夜。通过显微镜仅观察到小颗粒(非晶形)或油滴。将该样本蒸发至干。
方法18-D制备化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐结晶在室温进行结晶实验。将非晶形化合物B(0.4克)溶解在乙醇(1.5mL)中，加入0.5当量1，5-萘-二磺酸四水合物(1.35克，10％在乙醇中的混合物)。然后加入庚烷(0.7mL)，直至该溶液变得轻微浑浊。约15分钟后，该溶液变得浑浊。约30分钟后，获得了稀薄浆液，加入另外的庚烷(1.3mL)。然后将该浆液放置过夜以成熟。为了稀释该浓厚的浆液，加入乙醇与庚烷(分别是1.5mL和1.0mL)的混合物。约1小时后，将该浆液过滤，将该结晶依次用乙醇和庚烷的混合物(1.5∶1)与纯庚烷洗涤。将结晶在室温干燥1天。该干燥的结晶重0.395g。
方法18-E制备化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐结晶将非晶形化合物B(1.009g)溶解在20mL 2-丙醇+20mL乙酸乙酯中。逐滴加入溶解在20mL 2-丙醇中的351.7mg 1，5-萘-二磺酸四水合物。在约5分钟内开始形成沉淀。将该浆液搅拌过夜，然后过滤。
方法18-F制备化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐结晶将430.7mg 1，5-萘二磺酸盐溶解在30mL 1-丙醇中。将该溶液加热至沸以溶解该物质。将该溶液在室温放置过夜以结晶，然后将结晶过滤。
方法18-G制备化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐结晶将得自方法18-F的母液蒸发，把固体残余物(61.2mg)溶解在6mL乙腈/1-丙醇，比例2∶1中。将该溶液在室温放置过夜以结晶，然后将结晶过滤。
方法18-H制备化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐结晶将得自方法18-C的样本溶解在约2mL甲醇中。在室温加入作为反溶剂的乙醇(约3mL)，并加入晶种。没有发生结晶，于是将溶剂蒸发(约一半量)，再加入一部分乙醇(约2mL)和晶种。当在室温搅拌过夜时，形成了结晶颗粒。
方法18-I制备化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐结晶将非晶形化合物B(104.1mg)溶解在2-丙醇中，加入溶解在2-丙醇中的1当量1，5-萘-二磺酸四水合物。2-丙醇的量总共约2.5mL。将该溶液在44℃搅拌约80分钟，形成了沉淀。根据偏振光显微镜，颗粒结晶。将样本过滤。
方法18-J制备化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐结晶将化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐(56.4mg)溶解在1.5mL甲醇中。加入甲基乙基酮(3mL)。向该溶液中加入晶种，结晶开始。将结晶过滤，用甲基乙基酮洗涤，并风干。
方法18-K制备化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐结晶将非晶形化合物B(161.0mg)溶解在3.5mL 1-丁醇中，将该溶液加热至40℃。在另一个烧杯中，将57.4mg萘-二磺酸四水合物溶解在3mL1-丁醇中。将两滴该酸溶液加到化合物B的溶液中。然后向该溶液中加入晶种，2个小时后，缓慢地加入其余酸溶液(在40℃)。然后将温度缓慢地降至室温，将实验物在搅拌下放置过夜。将浆液过滤，用1-丁醇洗涤，在44℃真空干燥2小时。产率为83％。
表征如下所述，经由NMR测定通过方法18-D获得的化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐结晶将21.3mg盐溶解在氘化甲醇中，取0.7ml进行NMR光谱测定。联合使用1D(1H，13C和选择性NOE)和2D(gCOSY，gHSQC和gHMBC)NMR实验。所有数据都与所提出的下示结构非常一致。分配所有碳以及连接在碳上的质子。连接在杂原子上的质子从溶剂中与氘交换，并且没有检测到。1D1H和13C NMR光谱中的大部分共振是作为两个峰的组呈现的。这是因为沿着C9-N10键的缓慢旋转所致，这样的缓慢旋转导致在该溶液中同时存在两种阻转异构体。1D NOE实验证实了这一点。当一种阻转异构体的共振被照射时，饱和被转移到另一阻转异构体的相应峰上。与1，5-萘二磺酸盐抗衡离子相对应的共振不表现出旋转对映异构现象。
在分子中有4个氟原子。它们使某些质子和碳的共振分裂。对应于位置1的质子和碳共振分裂，这是因为与该位置上的两个氟核自旋偶合所致。偶合常数是2JHF＝73Hz和1JCF＝263Hz。此外，对应于H19的质子共振是具有3JHF＝6.9Hz的畸变双峰，这是因为与18位的氟核自旋偶合所致。对应于C17、C18、C19和C20的碳共振也表现出与这些氟核的偶合。C17和C20共振是三重峰，分别具有2JCF＝19Hz和3JCF＝11Hz。C18共振具有双双峰，其具有偶合常数1JCF＝251Hz和3JCF＝8Hz。C19共振是多重峰。
比较对应于1，5-萘二磺酸盐抗衡离子与母化合物的共振积分大小，给出了一个1，5-萘二磺酸盐抗衡离子与两个母化合物分子结晶的化学计算关系。
1H和13C NMR化学位移分配以及质子-质子相互关系如表11所示。
表11
a相对于在49.0ppm的溶剂共振。
b相对于在3.30ppm的溶剂共振。
cs＝单峰，d＝双峰，dd＝双双峰，t＝三重峰，m＝多重峰。
d在gCOSY实验中获得的。
e由于和两个氟核F1偶合，共振是三重峰。1JCF＝263Hz。
f由于和两个氟核F18偶合，共振是三重峰。2JCF＝19Hz。
g由于和两个氟核F18偶合，共振是双双峰。1JCF＝251Hz和3JCF＝8Hz。
由于和两个氟核F18偶合，共振是多重峰。
k由于和两个氟核F18偶合，共振是三重峰。3JCF＝11Hz。
n与间位质子的4JHH偶合没有完全解析。
na＝不可用，nd＝未测得通过XRPD分析化合物B，半-1，5-萘二磺酸盐的结晶(通过上面的方法18-I获得的)，所得结果在下表(表12)和附图5中显示。
表12
DSC表明了吸热现象，具有约183℃的外推的熔化开始温度，并且TGA表明在25-110℃有0.3％的重量损失。
缩写Ac＝乙酰基APCI＝大气压化学电离(关于MS)API＝大气压电离(关于MS)aq.＝含水的Aze(&(S)-Aze)＝(S)-氮杂环丁烷-2-甲酸酯(除非另有说明)Boc＝叔丁氧基羰基br＝宽峰(关于NMR)CI＝化学电离(关于MS)d＝天d＝双峰(关于NMR)DCC＝二环己基碳二亚胺dd＝双双峰(关于NMR)DIBAL-H＝氢化二异丁基铝DIPEA＝二异丙基乙胺DMAP＝4-(N，N-二甲基氨基)吡啶DMF＝N，N-二甲基甲酰胺DMSO＝二甲亚砜DSC＝差示扫描量热法DVT＝深静脉血栓EDC＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐eq.＝当量ES＝电雾化ESI＝电雾化界面Et＝乙基乙醚(ether)＝乙醚EtOAc＝乙酸乙酯EtOH＝乙醇Et2O＝乙醚HATU＝O-(氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐HBTU＝[N，N，N′，N′-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐]HCl＝盐酸，氯化氢气体或盐酸盐(根据上下文)Hex＝己烷HOAc＝乙酸HPLC＝高效液相色谱法LC＝液相色谱法m＝多重峰(关于NMR)Me＝甲基MeOH＝甲醇min.＝分钟MS＝质谱MTBE＝甲基叔丁基醚NMR＝核磁共振OAc＝乙酸根Pab＝对脒基苄基氨基H-Pab＝对脒基苄基胺Pd/C＝披钯炭Ph＝苯基PyBOP＝(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐q＝四重峰(关于NMR)QF＝氟化四丁基铵rt/RT＝室温s＝单峰(关于NMR)solutol＝PEG 66012-羟基硬脂酸酯(非离子表面活性剂)t＝三重峰(关于NMR)TBTU＝[N，N，N′，N′-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)脲四氟硼酸盐]TEA＝三乙胺Teoc＝2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基TEMPO＝2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基TFA＝三氟乙酸TGA＝热重量分析法
THF＝四氢呋喃TLC＝薄层色谱UV＝紫外前缀n-、s-、i-、t-和tert-具有其通常含义正-、伯-、异-和叔-。
通过下列实施例来举例说明本发明。
实施例1化合物A 30μmolPEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。将该组合物通过管饲法对狗口服给药，每天给药一次，给药5天。150μmol/kg的剂量在第一次给药后给出了118-254μM(118-254μmol/L)的最大血浆浓度，第5次给药后给出了186-286μM(186-286μmol/L)的最大血浆浓度。
实施例2化合物A 40μmolPEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。将该组合物通过管饲法对大鼠口服给药，每天给药一次，给药5天。400μmol/kg的剂量在第一次给药后给出了3.17-6.91(3.17-6.91μmol/L)的最大血浆浓度，第5次给药后给出了3.01-10.5μM(3.01-10.5μmol/L)的最大血浆浓度。
实施例3化合物A 40μmolPEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。将该组合物通过管饲法对大鼠口服给药，每天给药一次，给药5天。800μmol/kg的剂量在第一次给药后给出了7.00-23.9μM(7.00-23.9μmol/L)的最大血浆浓度，第5次给药后给出了10.3-32.8μM(10.3-32.8μmol/L)的最大血浆浓度。
实施例4化合物A 250μmol
PEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少1000倍。
实施例5化合物A 21μmolPEG 400/乙醇/水20/10/70(w/w)％至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水20/10/70(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少100倍。
实施例6化合物A 51μmolPEG 400/乙醇/水20/10/70(w/w)％至1mL含有50μmol/mL酒石酸的水制剂是通过将化合物A溶解在酸化的PEG 400/乙醇/水20/10/70(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。该溶液的pH是3.6。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少250倍。
实施例7化合物A 44μmolPEG 400/乙醇/水30/5/65(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水30/5/65(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少200倍。
实施例8化合物A 88μmolPEG 400/乙醇/水30/5/65(w/w)％ 至1mL含有50μmol/mL酒石酸的水HCl至pH3.6 适量制剂是通过将化合物A溶解在酸化的PEG 400/乙醇/水30/5/65(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。通过加入HCl将该溶液的pH设置为3.6。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少400倍。
实施例9化合物A 120μmolPEG 400/乙醇/水40/5/55(w/w)％至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水40/5/55(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少600倍。
实施例10化合物A 198μmolPEG 400/乙醇/水40/5/55(w/w)％至1mL含有50μmol/mL酒石酸的水HCl至pH3.8 适量制剂是通过将化合物A溶解在酸化的PEG 400/乙醇/水30/5/65(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。通过加入HCl将该溶液的pH设置为3.8。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少1000倍。化合物A在该载体中的制剂在＜-15℃的条件下在至少3个月内是稳定的。
实施例11化合物A 136μmol羟丙基-β-环糊精/水40/60(w/w)％ 至1mLHCl至pH3.7 适量制剂是通过将化合物A溶解在羟丙基-β-环糊精/水40/60(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。通过加入HCl将该溶液的pH设置为4.7。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少700倍。
实施例12化合物A 76μmol羟丙基-β-环糊精/水28/72(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在羟丙基-β-环糊精/水28/72(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少400倍。
实施例13化合物A 40μmolPEG 400/乙醇/solutolTM/水50/5/5/40(w/w)％ 至1mL
制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/solutolTM/水50/5/5/40(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少80倍。
实施例14化合物A 40μmolPEG 400/水40/60(w/w)％至1mL制剂是这样制得的将化合物A溶解在PEG 400中，然后轻微搅拌至少1小时，之后加入水至终体积。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少200倍。
实施例15化合物A 52μmolPEG 400/水35/65(w/w)％至1mL含有50μmol/mL酒石酸的水制剂是这样制得的将化合物A溶解在PEG 400中，然后轻微搅拌至少1小时，之后加入水至终体积。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少250倍。
实施例16化合物A 58μmolPEG 400/水50/50(w/w)％至1mL制剂是这样制得的将化合物A溶解在PEG 400中，然后轻微搅拌至少1小时，之后加入水至终体积。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少300倍。
实施例17化合物A 88μmolPEG 400/水67/33(w/w)％至1mL制剂是这样制得的将化合物A溶解在PEG 400中，然后轻微搅拌至少1小时，之后加入水至终体积。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少400倍。
实施例18化合物A 92μmolPEG 400/乙醇/水45/1/54(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水45/1/54(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少450倍。
实施例19化合物A 159μmolPEG 400/乙醇/水45/1/54(w/w)％ 至1mL含有50μmol/mL酒石酸的水HCl至pH4.2 适量制剂是通过将化合物A溶解在酸化的PEG 400/乙醇/水45/1/54(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。用HCl将该溶液的pH设置为4.2。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少800倍。
实施例20化合物A 101μmolPEG 400/乙醇/水45/2/53(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水45/2/53(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少500倍。
实施例21化合物A 167μmolPEG 400/乙醇/水45/2/53(w/w)％ 至1mL含有50μmol/mL酒石酸的水HCl至pH4.3 适量制剂是通过将化合物A溶解在酸化的PEG 400/乙醇/水45/2/53(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。通过加入HCl将该溶液的pH设置为4.3。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少800倍。
实施例22化合物A 46μmolDMA/水50/50(w/w)％至1mL制剂是通过将化合物A溶解在该载体中，然后轻微搅拌至少1小时而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少230倍。
实施例23
化合物A 29μmolDMA/水25/75(w/w)％至1mL制剂是通过将化合物A溶解在该载体中，然后轻微搅拌至少1小时而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少150倍。
实施例24化合物A 5μmolHCl 10μmol水至1mLHCl/NaOH至pH3.6适量制剂是这样制得的将化合物A溶解在较小体积的两倍摩尔量的HCl中，然后轻微搅拌，并稀释至1mL。把最终溶液的pH调节至3.6。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少20倍。
实施例25化合物A 10μmol水至1mLHCl至pH1.0 适量NaOH至pH3.0 适量制剂是这样制得的将化合物A溶解在水中，加入HCl至pH1，然后将该溶液轻微搅拌。用NaOH把最终溶液的pH调节至3.0。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少40倍。在动力学比较实验中将该制剂对大鼠口服给药。
实施例26化合物A 100μmolMiglyol 0.25g/g化合物ADMA 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在1mL DMA/miglyol中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少4000倍。
实施例27化合物A 100μmolMiglyol 0.25g/g化合物A
乙醇 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在1mL乙醇/miglyol中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少4000倍。
实施例28化合物A 130μmol乙醇 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在1mL乙醇中，然后轻微搅拌而制得的。在该制剂中，化合物A在一周以上的时间是稳定的。
实施例29为了制备纳米颗粒，使用化合物A在乙醇中的约100mM的贮备溶液。还包括25％(w/w)Miglyol，所述百分比是按该物质的量计算的。用由在水中的0.2％(w/w)PVP和0.25mM SDS组成的稳定剂溶液对该溶液进行1/10稀释。被视为纳米颗粒制备期间的关键参数的混合是迅速和立即的。在超声处理期间，将该药物溶液迅速注射到稳定剂溶液内。在水溶液中进行1/10稀释后，获得了约150nm的纳米颗粒。在室温保持6周后，粒度未改变。
实施例30化合物A 4μmol盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。将该溶液对大鼠口服给药，1小时后，化合物D的血浆浓度为0.56μmol/L。将该溶液对大鼠皮下给药，1小时后，化合物D和A的血浆浓度分别为0.24μmol/L和0.6μmol/L。
实施例31化合物B 4μmol盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物B溶解在盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。将该溶液对大鼠口服给药，1小时后，化合物B和化合物E的血浆浓度分别为0.07μmol/L和0.65μmol/L。将该溶液对大鼠皮下给药，1小时后，化合物B和E的血浆浓度分别为0.4μmol/L和0.3μmol/L。
实施例32化合物C 4μmol盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物C溶解在盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。将该溶液对大鼠口服给药，1小时后，化合物C和化合物F的血浆浓度分别为0.2μmol/L和0.5μmol/L。将该溶液对大鼠皮下给药，1小时后，化合物C和F的血浆浓度分别为0.35μmol/L和0.5μmol/L。
实施例33化合物D(三氟乙酸盐) 5μmol盐水9mg/ml至1mL制剂是通过将化合物D的盐溶解在1mL盐水中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例34化合物D(三氟乙酸盐) 75μmolEtOH 0.05mL盐水(9mg/ml) 至1mL制剂是通过将化合物D的盐溶解在1mL盐水/乙醇溶液中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例35化合物D(三氟乙酸盐) 4μmolEtOH 0.02mL盐水 至1mL制剂是通过将化合物D的盐溶解在1mL盐水/乙醇溶液中，然后轻微搅拌而制得的。将该溶液对大鼠皮下给药，1小时后，化合物D的血浆浓度为0.55μmol/L。
实施例36化合物E(乙酸盐) 4μmolEtOH 0.02mL盐水 至1mL制剂是通过将化合物E的盐溶解在1mL盐水/乙醇溶液中，然后轻微搅拌而制得的。将该溶液对大鼠皮下给药，1小时后，化合物E的血浆浓度为0.75μmol/L。
实施例37化合物F(三氟乙酸盐) 4μmolEtOH 0.02mL盐水 至1mL制剂是通过将化合物F的盐溶解在1mL盐水/乙醇溶液中，然后轻微搅拌而制得的。将该溶液对大鼠皮下给药，1小时后，化合物F的血浆浓度为0.92μmol/L。
实施例38化合物E(乙酸盐) 22mg盐水9mg/ml至1mL制剂是通过将化合物E的盐溶解在1mL盐水中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例39化合物F(三氟乙酸盐) 22mg盐水9mg/ml至1mL制剂是通过将化合物F的盐溶解在1mL盐水中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例40化合物A(乙磺酸盐) 14mg水至1mL该溶液是这样制得的将过量化合物A的乙磺酸盐溶解在3mL水中，然后轻微搅拌过夜。过滤后，测定的该溶液的最终浓度为14mg/ml，pH为2.7。
实施例41化合物A(乙磺酸盐) 33mg磷酸钠缓冲液pH＝3.1 I＝0.1至1mL该溶液是通过将112mg化合物A乙磺酸盐溶解在3mL磷酸钠缓冲液中，然后轻微搅拌过夜而制得的。过滤后，测定的该溶液的最终浓度为33mg/ml，pH为2.7。
实施例42化合物A(乙磺酸盐) 1.6mg
磷酸钠缓冲液pH＝6.9 I＝0.1 至1mL该溶液是通过将20mg化合物A乙磺酸盐溶解在3mL磷酸钠缓冲液中，然后轻微搅拌过夜而制得的。过滤后，测定的该溶液的最终浓度为1.6mg/ml，pH为6.5。
实施例43下列冷冻干燥制剂可依据一个或多个上述实施例1-29中描述的技术制得a.
化合物A 10μmol甘露醇10mg水至1mLHCl至pH1.0 适量NaOH至pH3.0 适量b.
化合物D 10μmol甘露醇10mg水至1mLHCl至pH1.0 适量NaOH至pH3.0 适量c.
化合物E 10μmol甘露醇10mg水至1mLHCl至pH1.0 适量NaOH至pH3.0 适量d.
化合物F 10μmol甘露醇10mg水至1mL
HCl至pH1.0 适量NaOH至pH3.0 适量e.
化合物B 10μmol甘露醇 10mg水 至1mLHCl至pH1.0 适量NaOH至pH3.0 适量f.
化合物C 10μmol甘露醇 10mg水 至1mLHCl至pH1.0 适量NaOH至pH3.0 适量g.
化合物A(乙磺酸盐)14mg甘露醇 10mg水 至1mLHCl至pH1.0 适量NaOH至pH3.0 适量h.
化合物A(苯磺酸盐)14mg甘露醇 10mg水 至1mLHCl至pH1.0 适量NaOH至pH3.0 适量任选将溶液无菌过滤，例如经由0.22μm膜滤器过滤。将溶液(无菌或其他形式)填充到合适的容器(例如瓶)中，使用标准装置将制剂冷冻干燥。可将瓶在冷冻干燥装置中于氮气氛下密封。
实施例44
将赋形剂与药物混合，用溶解在水中的聚乙烯吡咯烷酮K90制粒。然后将颗粒在干燥烘箱中干燥。用富马酸十八酯钠将颗粒润滑，使用外心压片机(excenterpress)压制成片。
使用USP溶解装置2(桨+篮子1)以50rpm和37℃，在900ml介质中测试各个片剂的药物释放。所用的溶解介质是0.1M盐酸(pH1)和0.1M磷酸钠缓冲液(pH6.8)。使用C Technologies纤维光学系统进行在线定量测定，当使用0.1M盐酸作为溶解介质时，采用220nm作为分析波长，当使用磷酸盐缓冲液pH6.8作为溶解介质时，采用260nm作为分析波长。对于两种介质，都使用350nm作为参比波长。在分析的前两个小时，每15分钟测定一次释放值，然后对于分析的其余时间，每1小时测定一次。所得结果列在下表中。。
实施例45
将赋形剂与药物混合，用溶解在水中的聚乙烯吡咯烷酮K90制粒。然后将颗粒在干燥烘箱中干燥。用富马酸十八酯钠将颗粒润滑，使用外心压片机(excenterpress)压制成片。
实施例46
将赋形剂与药物混合，用溶解在水中的聚乙烯吡咯烷酮K90制粒。将颗粒在干燥烘箱中干燥。用富马酸十八酯钠将颗粒润滑，使用外心压片机(excenterpress)压制成片。
实施例47
将赋形剂与药物混合，用溶解在水中的聚乙烯吡咯烷酮K90制粒。将颗粒在干燥烘箱中干燥。用富马酸十八酯钠将颗粒润滑，使用外心压片机(excenterpress)压制成片。
实施例48化合物A 16μmolPEG414至1mL制剂是通过将化合物A溶解在酸化的PEG414中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例49化合物A 16μmolPEG 300 至1mL
制剂是通过将化合物A溶解在酸化的PEG 300中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例50化合物A 16μmolPEG 200 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在酸化的PEG 200中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例51化合物G 4μmo l盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物G溶解在盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例52化合物J 4μmol盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物J溶解在盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例53化合物H 4μmol盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物H溶解在盐水/乙醇/solutol 90/5/5(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例54
制剂是按照上面的实施例47制得的。
实施例55
制剂是按照上面的实施例47制得的。
实施例56
制剂是按照上面的实施例47制得的。
实施例57化合物A 24μmolPEG 400/乙醇/水25/10/65(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水25/10/65(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少100倍。该制剂在冰箱中在至少2个月内是稳定的。
实施例58化合物A 800μmolPEG 400/乙醇/水50/10/40(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水50/10/40(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少2000倍。
实施例59化合物A 500μmol柠檬酸 200μmol
HC1至pH3.6 适量PEG 400/乙醇/9mg/ml NaCl40/10/50(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物A溶解在PEG 400/乙醇/水40/10/50(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少1500倍。
实施例60化合物A 24μmol柠檬酸 5μmolHCl至pH3.2 适量乙醇/水12/88(w/w)％ 至1mL制剂是这样制得的将化合物A溶解在乙醇中，然后轻微搅拌，之后加入柠檬酸和水至终体积，并将pH设置为3.2。化合物A在该载体中的溶解度比在单独的水中高至少100倍。该制剂在冰箱中在至少1个月内是稳定的。
实施例61化合物A 2μmol柠檬酸 5μmolHCl至pH3.6 适量9mg/ml NaCl 至1mL制剂是通过将化合物A和柠檬酸溶解在生理盐水中，然后轻微搅拌而制得的。将pH设置为3.6。该制剂在冰箱中在至少3个月内是稳定的。
实施例62化合物A(苯磺酸盐)140μmol柠檬酸 5μmolHCl至pH3.6 适量PEG 400/乙醇/水40/5/55(w/w)％至1mL制剂是这样制得的将化合物A溶解在含有柠檬酸的PEG400/乙醇/水40/5/55(w/w)％中，然后轻微搅拌，并将pH设置为3.6。该制剂在冰箱中在至少1个月内是稳定的。
实施例63化合物A(苯磺酸盐)65μmol
柠檬酸 5μmolHCl至pH3.3适量PEG 400/乙醇/水20/5/75(w/w)％ 至1mL制剂是这样制得的将化合物A溶解在含有柠檬酸的PEG400/乙醇/水20/5/75(w/w)％中，然后轻微搅拌，并将pH设置为3.2。
实施例64化合物D(乙酸盐)25μmolPEG 400/乙醇/水40/5/55(w/w)％ 至1mL酒石酸组分A(D的乙酸盐)等摩尔量加5mM过量HCl至pH3.6适量制剂是这样制得的将化合物D溶解在酸化的PEG 400/乙醇/水40/5/55(w/w)％中，然后轻微搅拌。通过加入HCl将该溶液的pH设置为3.6。D在该载体中的制剂在＜-15℃的条件下在至少2个月内是稳定的。
实施例65化合物A50mgHPMC(15000 Cps)5mgSolutol HS15 20mg水 至1mL将HPMC悬浮在热水中，在剧烈搅拌下加入熔化的Solutol。将该溶液冷却，在剧烈搅拌下加入化合物A以形成良好分散的悬浮液。
实施例66化合物A(苯磺酸盐) 50mgHPMC(15000 Cps)5mgSolutol HS15 20mg水至 1mL将HPMC悬浮在热水中，在剧烈搅拌下加入熔化的Solutol。将该溶液冷却，在剧烈搅拌下加入化合物A(苯磺酸盐)以形成良好分散的悬浮液。
实施例67化合物D(乙酸盐)2μmol柠檬酸 5μmolHCl至pH3.6适量
9mg/ml NaCl 至1mL制剂是通过将化合物A和柠檬酸溶解在生理盐水中，然后轻微搅拌而制得的。将pH设置为3.6。该制剂在冰箱中在至少3个月内是稳定的。
实施例68为了制备纳米颗粒，使用化合物B在乙醇中的约100mM的贮备溶液。还包括25％(w/w)Miglyol，所述百分比是按该物质的量计算的。用由在水中的0.2％(w/w)PVP和0.25mM SDS组成的稳定剂溶液对该溶液进行1/10稀释。关键混合阶段是迅速和立即的在超声处理期间，将该药物溶液迅速注射到稳定剂溶液内。在水溶液中进行1/10稀释后，获得了约110nm的纳米颗粒。在室温保持6小时后，粒度未改变。
可任选使用DMA来代替乙醇，可不包括Miglyol，并且可进行更高稀释(1/20)。通过不同组合可获得粒度为100-300nm的颗粒。
实施例69化合物B200μmolPEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物B溶解在PEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。B在该载体中的制剂(0.5mg/mL)在＜-15℃的条件下在至少1个月内是稳定的。
实施例70化合物B230μmolPEG 400/乙醇/水60/5/35(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物B溶解在PEG 400/乙醇/水60/5/35(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。
实施例71化合物B50mgHPMC(15000 Cps)5mgSolutol HS15 20mg水 至1mL将HPMC悬浮在热水中，在剧烈搅拌下加入熔化的Solutol。将该溶液冷却，在剧烈搅拌下加入化合物B以形成良好分散的悬浮液。
实施例72化合物E(乙酸盐)39μmol9mg/ml NaCl 至1mL通过轻微搅拌将化合物E溶解在9mg/ml NaCl中来制得该制剂。在该制剂中获得的pH是8-9。
实施例73化合物C400μmolPEG 400/乙醇/水50/5/45(w/w)％ 至1mL制剂是通过将化合物C溶解在PEG400/乙醇/水50/5/45(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。C在该载体中的制剂(0.5mg/mL)在室温和更低温度下在至少1个月内是稳定的。
实施例74化合物C16μmol羟丙基-β-环糊精/水20/80(w/w)％至1mL制剂是通过将化合物C溶解在羟丙基-β-环糊精/水20/80(w/w)％中，然后轻微搅拌而制得的。C在该载体中的制剂在＜8℃的条件下在至少2周内是稳定的。
实施例75化合物F(三氟乙酸盐)38μmol9mg/ml NaCl 至1mL通过轻微搅拌将化合物F溶解在9mg/ml NaCl中来制得该制剂。在该制剂中获得的pH是3-4。F在该载体中的制剂(0.5mg/mL)在室温和更低温度下在至少2周内是稳定的。
实施例76片剂是依据实施例44的一般方法制得的。
释放数据依据实施例44的一般方法，但是使用500ml介质和75rpm进行测定。
实施例77片剂是依据实施例44的一般方法制得的。
可制备其中化合物A的苯磺酸盐的量为50-300mg的其他制剂；其他组分的比例类似于实施例77中给出的比例。
实施例78片剂是依据实施例44的一般方法制得的。
也可以制备其中使用100mg或200mg化合物B的半-萘-1，5-二磺酸盐的其他制剂；其他组分的比例类似于实施例78中给出的比例。
提供如下所述的本发明的特点方面1.速释药物制剂，所述制剂包含作为活性组分的式(I)化合物或其可药用盐和可药用稀释剂或载体
其中R1代表被一个或多个氟取代基取代的C1-2烷基；R2代表氢、羟基、甲氧基或乙氧基；且n代表0、1或2；条件是所述制剂不仅仅包含·一种活性组分与水的溶液；·一种活性组分与二甲亚砜的溶液；或·一种活性组分在乙醇PEG 66012-羟基硬脂酸酯∶水5∶5∶90混合物中的溶液。
2.如方面1中所描述的速释药物制剂，其中所述活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)；Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OH)；
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab；或Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH)。
3.如方面1中所描述的固体速释药物制剂，其中所述活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)；或Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)，或其可药用盐。
4.如方面1中所描述的固体速释药物制剂，其中所述活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)或其C1-5链烷磺酸或任选被取代的芳基磺酸盐。
5.如方面1中所描述的可注射的速释药物制剂，其中所述活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)；或Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab。
6.如方面1中所描述的制剂作为药物的应用。
7.如方面1中所描述的制剂在制备用于治疗心血管病症的药物中的应用。
8.在患有心血管病症或有患心血管病症危险的患者中治疗心血管病症的方法，包括对所述患者施用治疗有效量的如方面1中所描述的药物制剂.
9.制备如方面1中所描述的速释制剂的方法。
10.化合物Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OH)。
本发明还提供了可通过本文所述任何方法和/或实施例获得的制剂。
权利要求
1.速释药物制剂，所述制剂包含作为活性组分的式(I)化合物或其可药用盐和可药用稀释剂或载体 其中R1代表被一个或多个氟取代基取代的C1-2烷基；R2代表氢、羟基、甲氧基或乙氧基；且n代表0、1或2；条件是，当活性组分不呈盐形式时，所述制剂不仅仅包含·一种活性组分与水的溶液；·一种活性组分与二甲亚砜的溶液；或·一种活性组分在乙醇∶PEG 660 12-羟基硬脂酸酯∶水5∶5∶90混合物中的溶液。
2.权利要求1的速释药物制剂，其中所述制剂包含式(I)化合物的酸加成盐和可药用稀释剂或载体。
3.权利要求1或2的速释药物制剂，其中所述活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)；Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab；Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OH)；Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab；或Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH)。
4.权利要求1、2或3的制剂，其中所述活性组分是以下化合物的结晶盐Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)；或Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)。
5.权利要求1-4任一项的制剂，其中所述活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)或Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)的乙磺酸、正丙磺酸、苯磺酸、1，5-萘二磺酸或正丁烷磺酸加成盐。
6.权利要求1-5任一项的制剂，其中所述活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)苯磺酸盐，其特征在于，其X-射线粉末衍射花样的特征是具有在5.9，4.73，4.09和4.08的d-值的峰。
7.权利要求1-5任一项的制剂，其中所述活性组分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)半-1，5-萘二磺酸盐，其特征在于，其X-射线粉末衍射花样的特征是具有在18.3，9.1，5.6，5.5，4.13，4.02，3.86，3.69和3.63的d-值的峰。
8.权利要求1-7任一项的制剂，其中所述组合物是固体速释药物制剂、可注射的速释药物制剂或液体速释口服药物制剂。
9.权利要求1-8任一项的制剂作为药物的应用。
10.权利要求1-8任一项的制剂在制备用于治疗心血管病症的药物中的应用。
11.在患有心血管病症或有患心血管病症危险的患者中治疗心血管病症的方法，包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求1-8任一项的药物制剂。
全文摘要
本发明提供了速释药物制剂，所述制剂包含作为活性组分的式(I)化合物或其可药用盐和可药用稀释剂或载体，其中R
文档编号A61K47/26GK1655760SQ03812490
公开日2005年8月17日 申请日期2003年5月27日 优先权日2002年5月31日
发明者S·阿布拉姆森阿拉米, T·图哈德特, A·芒努松, C·-G·西弗里松, M·图恩 申请人:阿斯特拉曾尼卡有限公司