专利名称：缓释l－精氨酸制剂及其生产和使用方法
相关申请本申请要求2002年10月24日提交的标题为“治疗脑血管和心血管疾病和失调的方法和组合物”的美国临时专利申请序号60/421,258、2003年9月29日提交的标题为“治疗脑血管和心血管疾病和失调的方法和组合物”的美国临时专利申请序号60/507,312、和2003年10月17日提交的标题为“缓释L-精氨酸制剂及其生产和使用方法”的美国临时专利申请序号60/XXX,XXX的优先权，上面提到的每一个申请的完整内容都被完整并入本文作为参考。
背景技术：
被称为一氧化氮合酶(NOS)的一个酶家族从L-精氨酸合成一氧化氮(NO)-一种重要的生物学第二信使。NOS有几种不同的同种型，包括组成性NOS(cNOS)和可诱导的NOS(iNOS)。有两种不同的cNOS表皮NOS(eNOS)和神经元NOS(nNOS)。eNOS参与平滑肌松弛、血压降低，和血小板聚集的抑制的调节。eNOS存在于内皮细胞并且在应答细胞Ca2+的受体介导的增加中的短期内释放NO。Michel等人，“一氧化氮合成哪些、哪里、怎样和为什么？”J.Clin.Invest 1002146-2152(1997)。nNOS对于长期增强是重要的，并且负责神经元的依赖Ca2+的释放。iNOS在宿主防御中起作用，并且由免疫应答期间活化的巨噬细胞产生，在血管平滑肌细胞中诱导(例如，通过各种细胞因子、微生物产物，和/或细菌内毒素)，并且一旦表达就长时间合成NO。
认为内皮细胞中通过cNOS形成一氧化氮在正常血压调节、防止内皮功能异常如高脂血症、动脉硬化、血栓形成和再狭窄中起重要作用。CNOS是脑和上皮中存在的主要合酶，在功能上，cNOS在基础条件下有活性并且可以通过细胞内钙的增加进一步刺激，其中细胞内钙的增加是应答受体-介导的激动剂或钙离子载体而发生的。CNOS似乎是该酶的“生理”形式并且在生物学过程的各种组中起作用。体外研究表明一氧化氮自身可以以负反馈的方式调节NOS的活性。在心脑肾血管循环中，认为组成性产生的NO的主要靶标是可溶的鸟苷酸环化酶，其位于血管平滑肌、心肌(肌细胞)和冠状血管平滑肌中。
与cNOS相比，可诱导的、依赖钙的同种型iNOS最初仅在巨噬细胞中描述。现在知道一氧化氮合酶的诱导可以应答许多其他细胞类型中的适宜刺激而发生。该诱导可以在通常不表达一氧化氮合酶的组成性形式的细胞，如血管平滑肌细胞中发生，还可以在诸如表达高水平的组成性同种型的心肌的细胞中发生。
iNOS在基础条件下显示出可忽略不计的活性，但是当应答诸如脂多糖和某些细胞因子的因子时，在几小时时间内发生表达。该酶的诱导的形式产生比组成性形式大得多的NO量，并且被诱导的NOS似乎是该酶的“病理生理”形式，因为高浓度iNOS产生的NO对细胞是有毒的。通过糖皮质激素和某些细胞因子可以抑制iNOS的诱导。关于iNOS的转录后调节知道的相对较少。NO导致的细胞毒性效果可能很大程度上独立于鸟苷酸环化酶和环GMP形成。在该领域的大部分研究集中于使用L-精氨酸的各种衍生物刺激iNOS抑制剂。
NO是在NOS催化的反应中从分子氧和L-精氨酸的胍基氮合成的相对稳定的自由基。在许多组织和细胞类型中发现该酶，这些细胞类型包括神经元、巨噬细胞、肝细胞、平滑肌细胞、血管的内皮细胞，和肾的上皮细胞。NO在其释放点附近作用，进入靶细胞并活化胞质溶胶酶鸟苷酸环化酶，鸟苷酸环化酶催化第二信使环GMP(cGMP)的形成。在NO形成的数秒内，其经历氧化成亚硝酸盐或硝酸盐。David L.Nelson，Michael M.Cox，Lehninger Principles of Biochemistry，892页，第三版Worth Publishers，2000。
在应答各种血管活性剂，甚至生理刺激时，内皮细胞释放一种称为内皮细胞衍生的松弛因子(EDRF)的短命血管舒张剂(也称作内皮细胞来源的一氧化氮(EDNO)。炎症和血小板聚集的产物如5-羟色胺、组胺、缓激肽、嘌呤和凝血酶通过刺激NO的释放发挥它们的所有或部分作用。松弛的依赖内皮细胞的机理在各种血管床，包括冠状循环中是重要的。Hobbs等人，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.39191-220(1999)。NO可容易地扩散到下面的平滑肌并通过活化鸟苷酸环化酶而增加cGMP浓度，从而诱导血管平滑肌的松弛。
NO负责依赖内皮细胞的松弛和可溶的鸟苷酸环化酶的活化、中枢和外周神经系统中神经传递，和活化的巨噬细胞细胞毒性。在维管结构中，EDNO具有几种作用，其中包括血小板聚集的抑制、炎症细胞的粘附，和平滑肌细胞的增殖。具体地，EDNO是血管紧张度的重要调节剂。而且，依赖流动的舒张(一种常用的内皮功能指数)很大程度上受到NO的介导。
对内衬维管结构的内皮细胞的刺激，如乙酰胆碱、缓激肽、剪切力，等等启动NO对血管紧张度的调节机理。通过这些内皮细胞中所含eNOS的催化活性从L-精氨酸产生NO。所产生的NO离开内皮细胞并刺激邻近平滑肌细胞中鸟苷酸环化酶活性。鸟苷酸环化酶的活化增加了cGMP水平并导致平滑细胞松弛，从而扩张血管并增加血流。Moncada等人，New Eng.J.Med.3292002-2012(1993)；Vallance等人，J.Royl.Coll.Physician London 28209-219(1994)。
发明概述本发明提供了治疗和预防血管疾病和失调的方法，这些血管疾病和失调包括，但不限于，心血管、脑血管、和外周血管疾病和失调。本发明至少部分基于如下发现，即HMG-CoA还原酶抑制剂与L-精氨酸的缓释制剂共同施用在治疗和预防血管疾病和失调，尤其降低胆固醇和甘油三酯中具有协同效果。此外，本发明提供了L-精氨酸的缓释制剂和生产方法，该制剂和生产方法使得组合物具有最佳释放分布图。此外，该制剂和生产方法使得组合物可以被方便地压缩，但是不会过分易碎。
一方面，本发明提供了降低受试者中胆固醇的方法，该方法包括对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂和含有L-精氨酸的缓释制剂。在各种实施方案中，该方法降低总胆固醇、低密度脂蛋白(LDL)胆固醇和/或甘油三酯水平。此外，该方法增加了高密度脂蛋白(HDL)胆固醇。而且，该方法降低总胆固醇、LDL胆固醇和/或甘油三酯水平，和/或增加HDL水平的程度比仅施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用L-精氨酸的程度更大。
另一方面，本发明提供了通过施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸使不对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的受试者中一氧化氮的产生增加的方法。在另一方面，本发明提供了通过施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸使不对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的受试者中血管舒张增强的方法。在这些方面的各种实施方案中，L-精氨酸作为缓释制剂存在。在其他实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂是辛伐他汀。在某些实施方案中，受试者患有内皮功能异常。在本发明的这些方面的其他实施方案中，该方法增强内皮功能。
另一方面，本发明提供了通过对受试者施用L-精氨酸使该不对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的受试者中一氧化氮(NO)产生的增加的方法，其中L-精氨酸克服了ADMA的抑制效果。在另一方面，本发明提供了通过对受试者施用L-精氨酸使该不对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的受试者中血管舒张增强的方法，其中L-精氨酸克服了ADMA的抑制效果。在本发明的这些方面的各种实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，辛伐他汀)与L-精氨酸共同施用。在某些实施方案中，L-精氨酸作为缓释制剂存在。在本发明这些方面的其他实施方案中，该方法增强了内皮功能。
另一方面，本发明提供了缓释L-精氨酸组合物，其包括按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；按重量计约2％到约20％微晶纤维素；按重量计约3％以下的二氧化硅，和按重量计约3％以下的硬脂酸镁。在具体实施方案中，该组合物包含按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸为L-精氨酸单盐酸盐；按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；按重量计约10％微晶纤维素；按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅为胶态二氧化硅；和按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
另一方面，本发明提供了制备L-精氨酸的缓释制剂的方法，该方法包括用粒化剂粒化L-精氨酸以形成粒剂；湿润磨碎该粒剂；干燥粒剂；干燥磨碎粒剂；并将该粒剂与至少一种缓释制剂混合。在各种实施方案中，混合步骤可以包括预混合、混合和最终混合粒剂。在另一实施方案中，该方法可以包括粒化步骤前将L-精氨酸与结合剂干燥混合。该结合剂可以是聚乙烯吡咯烷酮。
在本发明该方面的具体实施方案中，该方法可以包括粒化L-精氨酸，其中L-精氨酸按重量计为缓释制剂的约50％，粒化剂包括聚乙烯吡咯烷酮，其中聚乙烯吡咯烷酮按重量计为缓释制剂的约3％到约4％；湿润磨碎该粒剂；干燥粒剂；干燥磨碎粒剂；并将该粒剂与羟丙基甲基纤维素混合，其中羟丙基甲基纤维素按重量计为缓释制剂的约35％。该方法可以还包括将粒剂与微晶纤维素、胶态二氧化硅和硬脂酸镁混合，其中微晶纤维素按重量计为缓释制剂的约10％，其中胶态二氧化硅为缓释制剂的约1％以下，并且其中硬脂酸镁按重量计为缓释制剂的约1％以下。
另一方面，本发明提供了含有L-精氨酸的缓释制剂(例如，L-精氨酸的缓释颗粒)的食物棒，其用于治疗或预防血管疾病或失调。该食物棒可以还含有HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，辛伐他汀)。在各种实施方案中，该食物棒降低胆固醇、降低C-反应蛋白，可治疗或预防阿尔茨海默氏病，和/或可治疗或预防间歇性跛行。
另一方面，本发明提供了预防或治疗受试者中血管疾病或失调的方法，该方法包括对受试者施用含有L-精氨酸缓释制剂的食物棒。在再一方面，本发明提供了降低受试者中胆固醇的方法，该方法包括对受试者施用含有L-精氨酸缓释制剂的食物棒。在再一方面，本发明提供了增加受试者中一氧化氮的方法，该方法包括对受试者施用含有L-精氨酸缓释制剂的食物棒。另一方面，本发明提供了增加受试者中血管舒张的方法，该方法包括对受试者施用含有L-精氨酸缓释制剂的食物棒。另一方面，本发明提供了治疗或预防受试者中阿尔茨海默氏病的方法，该方法包括对受试者施用含有L-精氨酸缓释制剂的食物棒。在其他方面，本发明提供了治疗或预防受试者中间歇性跛行的方法，该方法包括对受试者施用含有L-精氨酸缓释制剂的食物棒。在再一方面，本发明提供了降低受试者中C-反应性蛋白的方法，该方法包括受试者施用含有L-精氨酸缓释制剂的食物棒。在本发明前面方面的一些实施方案中，食物棒还可以含有HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，辛伐他汀)。
另一方面，本发明提供了降低受试者中胆固醇的方法，该方法包括对受试者施用L-精氨酸缓释制剂。在各种实施方案中，该方法可以降低受试者中的总胆固醇、低密度脂蛋白(LDL)胆固醇，和/或甘油三酯，和/或增加高密度脂蛋白(HDL)胆固醇。在其他方面，本发明提供了治疗或预防阿尔茨海默氏病的方法，该方法包括对受试者施用L-精氨酸缓释制剂。在再一方面，本发明提供了治疗或预防中间歇性跛行的方法，该方法包括对受试者施用L-精氨酸缓释制剂。在再一方面，本发明提供了降低C-反应性蛋白的方法，该方法包括受试者施用L-精氨酸(例如，缓释L-精氨酸)。在本发明前面方面的一些实施方案中，缓释制剂包括按重量计约25％到约75％的L-精氨酸或其药学上可接受的盐；按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；按重量计约2％到约20％微晶纤维素；按重量计约3％以下的二氧化硅，和按重量计约3％以下的硬脂酸镁。在具体实施方案中，该组合物包含按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸为L-精氨酸单盐酸盐；按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；按重量计约10％微晶纤维素；按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅为胶态二氧化硅；和按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
在各种其他方面，本发明提供了治疗或预防血管疾病或失调的方法、治疗或预防动脉粥样硬化的方法、增加血管舒张的方法，和/或增加一氧化氮产生的方法，该方法包括对受试者施用缓释制剂，该缓释制剂包括按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；按重量计约2％到约20％微晶纤维素；按重量计约3％以下的二氧化硅，和按重量计约3％以下的硬脂酸镁。在前面方面的具体实施方案中，该组合物包含按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸为L-精氨酸单盐酸盐；按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；按重量计约10％微晶纤维素；按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅为胶态二氧化硅；和按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
另一方面，本发明提供了降低受试者中C-反应性蛋白的方法，该方法包括对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸的缓释制剂。该方法与仅施用HMG-CoA还原酶抑制剂，或仅施用L-精氨酸相比更大程度地降低受试者中C-反应性蛋白。
根据下面的详细描述和权利要求，本发明的其他特征和优点将是明显的。
附图简述
图1是描绘含有L-精氨酸和辛伐他汀的制剂的释放模式的曲线图。
图2是用L-精氨酸和辛伐他汀处理的小鼠脑和未处理的小鼠脑中梗死大小的NMR图像照片。
图3是描绘用L-精氨酸、辛伐他汀，和L-精氨酸和辛伐他汀两者处理的小鼠中梗死体积的条形图。
图4是描绘用L-精氨酸和各种水平的辛伐他汀处理的小鼠中梗死体积的条形图。
图5是描绘生产缓释L-精氨酸片剂的方法的流程图。
图6是描绘生产缓释L-精氨酸片剂的方法的流程图。
图7是比较缓释L-精氨酸制剂的性能的条形图。
图8是比较辛伐他汀与或不与本发明的缓释L-精氨酸组合物的施用对人中依赖内皮的血管舒张的影响的图。
图9是概述辛伐他汀和本发明的缓释L-精氨酸组合物的施用对人中胆固醇水平的协同作用的图。
图10是阐明辛伐他汀对培养的人主动脉内皮细胞(HAEC)和未处理的培养的HAEC的影响的条形图。
发明详述本发明提供了治疗和预防血管疾病和失调的方法，这些血管疾病和失调包括，但不限于，心血管、脑血管、和外周血管疾病和失调。本发明至少部分基于如下发现，即HMG-CoA还原酶抑制剂与L-精氨酸的缓释制剂共同施用在治疗和预防血管疾病和失调(包括脑血管、心血管和外周血管疾病和失调)，尤其降低胆固醇方面具有协同效果。此外，缓释L-精氨酸和任选地，HMG-CoA还原酶抑制剂，可用于增加血管舒张、增加NO产生，和降低C-反应性蛋白。在另一实施方案中，此处描述的制剂和方法可用于延缓在例如处于发生血管疾病或失调和/或事件发生的危险中的群体中该疾病、失调和/或事件的发作。HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸缓释制剂可以顺序地或同时施用于该受试者。该还原酶抑制剂和L-精氨酸可以包含在单一制剂中。
此外，本发明提供了L-精氨酸的缓释制剂和生产方法，该缓释制剂和生产方法使得组合物具有最佳释放分布图。此外，该制剂和生产方法使得组合物可以被方便地压缩，但是不会过分易碎。
在一个实施方案中，用于本发明的方法的制剂含有至少一种缓释剂(对本发明来说，控释和缓释可以互换使用)，例如，内皮一氧化氮合酶的至少一种缓释激动剂(例如，HMG-CoA还原酶抑制剂和/或一氧化氮前体，如L-精氨酸)。在另一实施方案中，L-精氨酸被缓慢释放到受试者的系统中。L-精氨酸的缓释在血浆中产生的L-精氨酸的药物动力学图谱，该药物动力学图谱为NOS提供产生NO所需的L-精氨酸的基本上恒定的供应。因此，该制剂可以缓慢地在体内溶解并在一段时间内释放L-精氨酸的基本上一致的量，其对于受试者是治疗有效的。在另一实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂被缓慢释放到受试者的系统中。在再一实施方案中，NO的产生在长时间内基本上一致。
在本发明的另一方面，以食物的形式提供了用于治疗血管疾病(包括，但不限于，心血管、脑血管、外周血管疾病和失调)、间歇性跛行、关键肢局部缺血，和阿尔茨海默氏病的组合物。食物形式的这些组合物也可用于增加血管舒张、增加NO产生和降低胆固醇。优选地，食物为棒状食物，如处方健康棒状食物的形式。使用食物使得可以提供的L-精氨酸的量比可以掺入单个片剂的量更大。本发明提供了棒状食物，其可以提供1克以上L-精氨酸以及其他试剂(如果希望)。在一个实施方案中，L-精氨酸作为速释制剂，例如L-精氨酸的速释粒剂加入到食物棒中。在另一实施方案中，棒状食物包括缓释制剂，其包括，例如，L-精氨酸的缓释粒剂。在另一实施方案中，棒状食物还含有额外的试剂，如HMG-CoA还原酶抑制剂。优选地，HMG-CoA还原酶抑制剂是斯特汀，如辛伐他汀。
定义在进一步描述本发明前，为了方便起见，在这里收集了用于本说明书、实施例和权利要求书中的某些术语。
如此处所用的，除非另外指出，术语“受试者”包括哺乳动物。术语“哺乳动物”包括，但不限于，狗、猫、牛、马、猪，和人。
如此处所用的，术语“治疗”等等指对患者应用或施用治疗剂，或者对从患者分离的组织应用或施用治疗剂或制剂，该患者患有疾病或失调，疾病或失调的症状，或者疾病或失调的倾向，目的是治愈、治疗、减轻、解除、改变、补救、预防、改善、延迟疾病或失调和/或事件的发作，延缓疾病或失调的恶化，改善或影响该疾病或失调、疾病或失调的症状，或者疾病或失调和/或事件的诱因。
如此处所用的，术语“血管疾病”或“血管失调”通常指血管的疾病或失调并且包括，但不限于，心血管、脑血管，和外周血管疾病或失调。心血管疾病指心脏的血管的疾病。见，例如，Kaplan，R.M.，等人，″心血管疾病″，Health and Human Behavior，206-242页(McGraw-Hill，New York 1993)。心血管疾病同时是几种形式之一，包括，例如，高血压(也称为高血液压)、冠心病、中风，和风湿性心脏病。外周血管疾病或失调指心脏外任何血管的疾病。例如，外周血管疾病可以指将血液携带到腿和臂肌肉的血管变窄。脑血管疾病指影响血管向脑供血的能力的疾病。
术语“动脉粥样硬化”包括在医学相关领域中从业的医生识别和理解的血管疾病，失调和病症。动脉粥样硬化心血管病、冠心病(也称为冠状动脉病或缺血性心脏病)、脑血管病和外周血管病都是动脉粥样硬化的临床表现并且因此被术语“动脉粥样硬化”和“动脉粥样硬化病”所包括。
如此处所用的术语“共同施用”当用于描述对受试者施用两种或多种化合物时指可以通过相同或不同途径施用的化合物被同时(例如，作为混合物)或者顺序施用，从而每种化合物的药理学效果在时间上重叠。如此处所用的，除非另外说明，当应用于至少两种化合物的施用时，术语“顺序地”指施用化合物使得每种化合物的药理学效果在时间上重叠。在某些实施方案中，试剂基本上被同时施用。“基本上同时地”指本发明的制剂施用于受试者与至少一种额外的试剂的施用在时间上足够接近，从而这些试剂可以发挥相加的或甚至协同的作用，例如，但不限于，增加NOS活性、NO产生，或血管舒张。
如此处所用的，术语“NO的前体”包括天然NO的任何底物前体，例如，L-赖氨酸。
如此处所用的术语“天然NO”指通过L-精氨酸的生物转化或依赖L-精氨酸的途径产生的一氧化氮。术语“内皮来源的松弛因子(EDRF”或“内皮细胞来源一氧化氮(EDDO)”可以与“天然NO”互换使用。
如此处所用的术语“L-精氨酸”指L-精氨酸和所有其生化等价物，例如，L-精氨酸盐酸盐、前体、和其碱性形式，它们作为NOS的底物，导致NO产生增加。该术语包括L-精氨酸的药学上可接受的盐。
术语“药学上可接受的盐”指从药学上可接受的无毒酸或碱制备的盐，这些无毒酸或碱包括无机酸和碱或有机酸和碱。适宜的无毒酸包括无机和有机酸，如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、pamoic、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对-甲苯磺酸，等等。尤其优选盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸，最尤其优选盐酸盐。
因为用于本发明方法的L-精氨酸是碱性和酸性的，所以可从药学上可接受的无毒酸或碱制备盐，这些酸或碱包括无机和有机酸或无机和有机碱。这些盐可含有下面的阴离子的任一种乙酸根、苯磺酸根、苯甲酸根、樟脑磺酸根、柠檬酸根、反丁烯二酸根、葡萄糖酸根、氯离子、乳酸根、马来酸根、粘酸根、硝酸根、双羟萘酸根、磷酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒石酸根，等等。尤其优选苯磺酸根、溴离子、氯离子、和硫酸根。这些盐还可以含有下面的阳离子铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌、苄星(benzathine)、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、甲葡胺和普鲁卡因。
如此处所用的术语“激动剂”或“eNOS或cNOS的激动剂”指刺激底物如，例如，L-精氨酸向NO的生物转化的试剂。eNOS或cNOS的激动剂包括，例如，HMG-CoA还原酶抑制剂。“HMG-CoA还原酶(3-羟基-2-甲基戊二酰-辅酶A)”是催化胆固醇生物合成中的限速反应的微生物酶。“HMG-CoA还原酶抑制剂”抑制HMG-CoA还原酶。HMG-CoA还原酶抑制剂也被称作“斯特汀”。
文献中描述了天然或合成得到的许多化合物，它们抑制HMG-CoA还原酶并且被称为“斯特汀”，并且形成用于实施本发明的试剂类别。实例包括，但不限于，通过商业途径可得到的那些，如辛伐他汀(美国专利号4,444,784)、洛弗斯特丁(美国专利号4,231,938)、普伐他汀钠(美国专利号4,346,227)、氟伐地汀(美国专利号4,739,073)、托伐他汀(美国专利号5,273,995)、西伐他丁、rosuvastatin、和许多其他的，诸如美伐他汀、dalvastatin、美伐他汀、氟伐他汀、pitavastatin、HR-780、GR-95030、CI 980、BMY 22089、BMY 22566和在例如，美国专利号5,622,985、美国专利号5,135,935、美国专利号5,356,896、美国专利号4,920,109、美国专利号5,286,895、美国专利号5,262,435、美国专利号5,260,332、美国专利号5,317,031、美国专利号5,283,256、美国专利号5,256,689、美国专利号5,182,298、美国专利号5,369,125、美国专利号5,302,604、美国专利号5,166,171、美国专利号5,202,327、美国专利号5,276,021、美国专利号5,196,440、美国专利号5,091,386、美国专利号5,091,378、美国专利号4,904,646、美国专利号5,385,932、美国专利号5,250,435、美国专利号5,132,312、美国专利号5,130,306、美国专利号5,116,870、美国专利号5,112,857、美国专利号5,102,911、美国专利号5,098,931、美国专利号5,081,136、美国专利号5,025,000、美国专利号5,021,453、美国专利号5,017,716、美国专利号5,001,144、美国专利号5,001,128、美国专利号4,997,837、美国专利号4,996,234、美国专利号4,994,494、美国专利号4,992,429、美国专利号4,970,231、美国专利号4,968,693、美国专利号4,963,538、美国专利号4,957,940、美国专利号4,950,675、美国专利号4,946,864、美国专利号4,946,860、美国专利号4,940,800、美国专利号4,940,727、美国专利号4,939,143、美国专利号4,929,620、美国专利号4,923,861、美国专利号4,906,657、美国专利号4,906,624和美国专利号4,897,402中描述的那些试剂，这些专利在此处都被并入作为参考。本发明的方法中还可以使用两种或多种HMG-CoA还原酶抑制剂的组合。
如此处所用的术语“eNOS活性”指细胞从底物L-精氨酸产生NO的能力。可以以许多不同的方法实现eNOS活性增加。例如，eNOS蛋白的量的增加或者该蛋白质活性的增加(然而保持该蛋白质的恒定水平)可导致增加的“活性”。可利用的蛋白质的量的增加来自，例如并且不限于，eNOS基因的增加的转录、eNOS mRNA的增加的翻译、eNOSmRNA的增加的稳定性、eNOS的活化，或eNOS蛋白质降解的减少。
也可以以许多不同方法测量细胞或组织中eNOS活性。一种直接的测量是测量存在的eNOS的量。另一种直接测量是测量通过eNOS使L-精氨酸向瓜氨酸转化的量或者在特定条件，如组织的生理条件下通过eNOS产生的一氧化氮的量。还可以间接测量eNOS活性，例如通过测量mRNA半寿期(上游指示剂)或通过对NO存在的表型应答(下游指示剂)可以实施该间接测量。用于本领域的一种表型测量是测量应答乙酰胆碱的依赖内皮的松弛，该应答受到eNOS活性的影响。利用NO计可以测量样品中存在的NO水平。所有前面的技术都是本领域中普通技术人员熟知的。
本发明的方法通过导致NO产生的增加而不仅允许重建eNOS活性的正常基线水平，而且允许增加高于正常基线水平的这种活性。正常基线水平是正常对照组中的活性的量，其受到年龄的控制并且没有指示内皮细胞NOS活性改变(如低氧条件、高脂血症，等等)的症状。实际水平将取决于所选的具体年龄组和用于评估活性的具体测量方法。在异常环境中，内皮细胞NOS活性(和NO产生)降低到正常水平以下。因此，本发明的制剂不仅可以恢复这些异常条件中NO产生的正常基线水平，而且可以使内皮细胞NOS活性(和NO产生)增加到远远高于正常基线水平以上。
术语“载体”指用于制备药物组合物的混合物的稀释剂、赋形剂，等等。
如此处所用的，术语“剂型”指药物组合物，其含有用于以单一或多个剂量施用于受试者，例如患者的活性成分的适宜量。
如此处所用的术语“mg/Kg”指每Kg受试者体重试剂的mg。
如此处所用的，除非另外说明，术语“半寿期”指生物的血浆中药物的浓度降低到施用时该药物浓度的约一半所花费的时间。
如此处所用的，除非另外说明，术语“立即释放”指没有外在因素延迟一种或多种药物的体外释放。
如此处所用的，术语“药物组合物”或“药物制剂”在此处互换使用，指含有药学上可接受的成分的组合物。
如此处所用术语“药学上可接受的”指一种制剂类型，该制剂类型将被联邦或州政府的管理机构评审并且可能通过或者在美国药典或者其他公认的药典中列出用于动物中，更尤其用于人。
如此处所用的，除非另外说明，术语“药学上可接受的载体”指一种载体介质，其不干扰活性成分的生物活性的有效性并且对其所施用的受试者无毒性。药学活性制剂的这种介质或试剂的用途是本领域中熟知的。除了与该活性化合物不相容的常规介质或试剂之外，考虑用于本发明的方法中的制剂中使用任一常规介质或试剂。
如此处所用的，术语“药学上可接受的盐”指从药学上可接受的无毒酸，包括无机酸和有机酸，制备的盐。
如此处所用的，除非另外说明，术语“缓释”被定义为一种或多种药物的长期释放模式，从而药物在一段时间内释放。对于本发明，缓释和控释可互换使用。
如此处所用的，除非另外说明，术语“盐或复合物”用于描述含有两种或多种化学部分的化合物或组合物，这两种或多种化学部分通过至少一种类型的相互作用结合，这些相互作用包括，但不限于，范德华力、离子和/或氢键。盐或复合物可以作为固体存在或者存在于液体中。
如此处所用的术语“重量百分数”当用于描述制剂中的组分的量时指基于该制剂中所有组分的重量的特定组分的重量。
在下面的小节中进一步详细描述本发明的各方面I.用于治疗或预防脑血管和心血管疾病和失调的方法中的制剂本发明的方法包括治疗和预防受试者，例如人中脑血管和/或心血管疾病或失调的方法，该方法包括对受试者同时或顺序地施用含有HMG-CoA还原酶抑制剂的制剂和含有L-精氨酸的制剂。备选地，对受试者施用含有L-精氨酸和HMG-CoA还原酶抑制剂的单一制剂。
本发明的一个实施方案包括缓释制剂形式的L-精氨酸制剂、缓释制剂形式的HMG-CoA还原酶抑制剂制剂、或者缓释制剂形式的L-精氨酸和HMG-CoA还原酶抑制剂的制剂。在一个实施方案中，本发明包括含有L-精氨酸的制剂，其可以同时或顺序地与至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂施用，其中该制剂在长时间内以基本上恒定的浓度释放L-精氨酸并且HMG-CoA还原酶抑制剂存在于立即释放制剂中。在另一实施方案中，本发明包括含有高浓度L-精氨酸并且为缓释制剂形式的制剂，其中药物动力学图谱为0级释放动力学(即，随时间线性释放速度)。可以修饰两类药物的释放特征以提供释放模式，该释放模式允许该联合适于作为每天一次的单个单位剂量。
在一个实施方案中，用于本发明方法中的制剂含有治疗有效量的L-精氨酸、治疗有效量的HMG-CoA还原酶抑制剂，和至少一种缓释剂。
该制剂还可以包括为了施用、保存、美观等修饰该制剂所需的额外的成分。在一个实施方案中，本发明的制剂还包括结合剂、填充剂和润滑剂。在优选实施方案中，该制剂含有缓释L-精氨酸配方，该配方包括L-精氨酸、结合剂、一种或多种缓释剂、助流剂，和缓释剂或润滑剂。该制剂可以还含有填充剂和/和压缩剂。本发明的缓释制剂尤其有利，因为它们的释放图谱允许施用比立即释放或者通过商业途径可得到的缓释剂更低的剂量而保持相同的药物水平。因为缓释L-精氨酸与斯特汀的施用还可以增加斯特汀，例如，辛伐他汀的有效性，所以本发明制剂的使用还可以允许斯特汀的更低剂量而具有等价的有益效果。
通过技术人员公知的许多来源可以得到L-精氨酸。例如，通过商业途径从包括Sigma-Aldrich(Milwaukee，WI)的各种途径可以得到USP级L-精氨酸。适宜的精氨酸和精氨酸衍生化合物包括，但不限于，精氨酸盐，如精氨酸盐酸盐、精氨酸天冬氨酸盐，或精氨酸烟酸盐。其他精氨酸化合物或衍生物可选自二肽，其包括精氨酸如丙氨酰精氨酸(ALA-ARG)、缬氨酰-精氨酸(VAL-ARG)、异亮氨酰-精氨酸(ISO-ARG)、和亮氨酰-精氨酸(LEU-ARG)，和包含精氨酸的三肽如精氨酰-赖氨酰-谷氨酸(ARG-LYS-GLU)和精氨酰-甘氨酰-精氨酸(ARG-GLY-ARG)。L-精氨酸优选为L-精氨酸单盐酸盐。
在一个实施方案中，L-精氨酸按重量计为制剂的约10％到约75％。在另一个实施方案中，L-精氨酸按重量计为制剂的约25％到约75％。在优选实施方案中，L-精氨酸按重量计为制剂的约50％。
一种或多种缓释剂的使用允许在更长时间内缓慢释放L-精氨酸和/或HMG-CoA还原酶抑制剂。例如，缓释剂将以一定速度释放L-精氨酸，该速度将不会导致浓度尖峰或低谷，这种浓度尖峰或低谷将使得与血流中L-精氨酸的高浓度或低浓度有关的副作用加剧。适于用于本发明的方法的制剂的缓释剂包括水合剂，例如，诸如纤维素，其当与水性环境接触时部分水合而形成凝胶状屏障，该屏障阻碍水合剂所包被的试剂的溶解。换句话说，缓释剂形成暂时的水屏障从而水被缓慢吸收到制剂，从而水合该制剂并随后以没有缓释剂的制剂低得多的速度释放活性成分，例如，L-精氨酸。此外，缓释剂存在于颗粒大小中，当该颗粒被掺入胶囊或者压制或压缩成片剂、丸剂或gelcap时，水缓慢渗透到该结构。
在一个实施方案中，一种或多种缓释剂包括，但不限于，纤维素醚产物、聚甲基丙烯酸甲酯或聚乙烯醇。在另一实施方案中，缓释剂包括纤维素，其包括，但不限于甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素或它们的组合。在优选实施方案中，缓释剂包括一种或多种羟丙基甲基纤维素。适宜的缓释剂可通过商业途径从The DowChemical Company以商标名METHOCEL和ETHOCEL得到。在优选实施方案中，缓释剂为METHOCELK100M CR Premium和/或METHOCELE4M CR Premium。
缓释剂通常以足够的量存在以在所希望的时间内释放活性成分，例如，L-精氨酸或HMG-CoA还原酶抑制剂。在一个实施方案中，所存在的缓释剂按重量计为制剂的约5％到约40％。在另一个实施方案中，所存在的缓释剂按重量计为约5％到约75％。在再一个实施方案中，所存在的缓释剂按重量计为制剂的约15％到约50％。在优选实施方案中，所存在的缓释剂按重量计为制剂的约35％。上面范围内的所有范围都在本发明的范围内。
在一个实施方案中，缓释剂在10小时内释放L-精氨酸，如图1中描绘。在一个实施方案中，缓释剂在约4小时到约24小时内基本上一致地释放L-精氨酸。在另一个实施方案中，本发明的制剂在约8小时到约24小时内基本上一致地释放L-精氨酸。在再一个实施方案中，缓释L-精氨酸制剂在约12小时到约48小时内基本上一致地释放L-精氨酸。
在另一个实施方案中，用于本发明方法中的制剂将以一种方式释放精氨酸以提供药物动力学图谱，其中半寿期(T1/2)和Tmax足够保持L-精氨酸在基本上恒定的水平上。换句话说，在一个实施方案中，本发明的缓释制剂释放L-精氨酸从而实现了循环L-精氨酸的稳态并且该稳态保持恒定。在一个实施方案中，药物动力学图谱为使得T1/2为约4小时到约12小时并且Tmax为约4小时。在再一个实施方案中，T1/2为约4小时到约8小时并且Tmax为约4小时。
用于本发明的结合剂包括技术人员通常公知的那些结合剂。结合剂包括，但不限于，糖，如乳糖、蔗糖、葡萄糖、右旋糖和糖蜜；天然的和合成的树胶，如阿拉伯树胶、瓜尔胶、藻酸钠、爱尔兰苔藓的提取物、panwar树胶，和ghatti树胶；其他结合剂包括聚环氧乙烷和聚乙二醇的混合物、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素(HPC)、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、褐藻酸、乙基纤维素、微晶纤维素、卡波母、玉米醇溶蛋白、淀粉、糊精、麦芽糊精、明胶、预明胶化淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或聚烯吡酮，和它们的混合物。在优选实施方案中，结合剂是聚乙烯吡咯烷酮均聚物。
在一个实施方案中，所存在的结合剂按重量计为制剂的约20％以下。在另一实施方案中，所存在的结合剂按重量计为制剂的约0.5％到约5％。在优选实施方案中，所存在的结合剂按重量计为制剂的约3％到约4％。
在优选实施方案中，缓释L-精氨酸制剂还包括助流剂。助流剂可以是任一种公知的UPS级助流剂，包括，例如，二氧化硅。在优选实施方案中，助流剂是胶态二氧化硅。
在一个实施方案中，所存在的助流剂按重量计为制剂的约3％以下。在另一实施方案中，所存在的助流剂按重量计为制剂的约2％以下。在优选实施方案中，所存在的助流剂按重量计为制剂的约1％以下。
用于制剂中的填充剂包括技术人员通常公知的那些填充剂。典型的填充剂包括，但不限于，糖，如乳糖、蔗糖、右旋糖、甘露醇，和山梨醇、乳清、二碱磷酸钙、三碱磷酸钙、硫酸钙，和它们的混合物。其他填充剂包括但不限于，纤维素制剂，诸如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍树胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮，和它们的混合物。微晶纤维素还可以作为压缩剂以及填充剂。在优选实施方案中，填充剂/压缩剂是微晶纤维素。更优选地，微晶纤维素由The Dow ChemicalCompany以AVICELPH 102名称出售。
在一个实施方案中，所存在的填充剂按重量计为制剂的约50％以下。在另一实施方案中，所存在的填充剂按重量计为制剂的约2％到约20％。在优选实施方案中，所存在的填充剂按重量计为制剂的约10％。
可以加入赋形剂以增加制剂中存在的固体的量。通常联合用于该目的的赋形剂包括磷酸钠或钾、碳酸钙、磷酸钙、氯化钠、柠檬酸、酒石酸、明胶，和碳水化合物诸如右旋糖、蔗糖、乳糖、山梨醇、肌醇、甘露醇和葡聚糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶，和聚合物，诸如聚乙二醇。除了指出提到的那些，其他的是本领域技术人员公知的。
用于该制剂中的释放剂或润滑剂包括技术人员通常所公知的那些。典型的润滑剂包括，但不限于，硬脂酸盐、硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸钙、硬脂酸、氢化植物油(例如，氢化棉花子油)、硬脂酰延胡索酸钠、棕榈酰硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、苯甲酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、矿物油、滑石，和它们的混合物。在优选实施方案中，润滑剂是硬脂酸镁。在其他实施方案中，选择润滑剂使得确保营养物的最佳吸收和利用。
在一个实施方案中，所存在的润滑剂按重量计为该制剂的约20％以下。在另一个实施方案中，所存在的润滑剂按重量计为该制剂的约2％到约20％。在优选实施方案中，所存在的润滑剂按重量计为该制剂的约10％。
崩解剂包括，但不限于，淀粉羟基乙酸钠、交联羧甲纤维素钠、聚乙烯聚吡咯烷酮、交联的聚乙烯吡咯烷酮、玉米淀粉、预明胶化淀粉、微晶纤维素、褐藻酸、苯酚甲醛离子交换树脂、聚乙烯吡咯烷酮、多糖、羧甲基纤维素钠、琼脂、其盐诸如褐藻酸钠、Primogel、和它们的混合物。
压缩剂允许制剂被成形为片剂、锭剂、胶盖(gelcap)，或者以固态施用的其他形式。在一个实施方案中，压缩剂允许制剂被成形为片剂、锭剂、或者胶盖。压缩剂包括，但不限于，Avicel、硬脂酸镁、蜡、树胶、纤维素(celleusics)、硬脂酸盐，或者它们的联合。在优选实施方案中，压缩剂是微晶纤维素。
在一个实施方案中，所存在的压缩剂按制剂的重量百分数计为约0.01％到约5％。在另一个实施方案中，所存在的压缩剂的量为约0.5％到约3％。在再一个实施方案中，所存在的压缩剂的量按制剂的重量百分数计为约1％到约2％。
在一个实施方案中，L-精氨酸配方包括单位剂量中的L-精氨酸，其对于约5mg/kg到约40mg/kg受试者体重是足够的。在另一实施方案中，L-精氨酸配方包括单位剂量中的L-精氨酸，其对于约20mg/kg到约25mg/kg是足够的。
在另一实施方案中，L-精氨酸和HMG-CoA还原酶抑制剂都在缓释制剂中。HMG-CoA还原酶抑制剂的量可以基于制剂中存在的特定抑制剂而变，因为某些抑制剂比其他抑制剂更有效。例如，每个片剂中存在的BAYCOL可以为约0.1mg到约0.8mg，每个片剂中存在的ZOCOR可以为约10mg到约80mg。本领域技术人员将能够基于所用的特定抑制剂确定治疗量。在一个实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂为辛伐他汀并且所存在的单位剂量对于约0.5mg/kg到约3mg/kg受试者体重是足够的。在另一实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂为辛伐他汀并且所存在的单位剂量对于约1.2mg/kg到约1.4mg/kg受试者体重是足够的。
在再一个实施方案中，L-精氨酸和HMG-CoA还原酶抑制剂都在单独的缓释制剂，例如，单独的片剂中提供。缓释HMG-CoA还原酶抑制剂可通过商业途径从例如，Merck & Company，Inc.(Rahway，NJ)得到。
用于本发明方法中的制剂可以含有根据常规药物复合技术的药物载体。根据口服施用所希望的制剂形式，该载体可以采取各种形式。在制备口服剂型的制剂中，可以使用任一种常规药物介质。最优选的口服固态制剂是片剂和gelcap。备选地，本发明的制剂可掺入胶囊中。在该实施方案中，缓释L-精氨酸粒剂，和任选地，HMG-CoA还原酶抑制剂可被掺入胶囊中。
由于它们易于施用，所以片剂和胶囊剂代表最有利的口服剂量单位形式，在该情况中使用固态药物载体。片剂或胶囊剂可以在相同片剂或胶囊中含有不同配置的L-精氨酸制剂和HMG-CoA还原酶抑制剂制剂。配置包括，两部分半和半片剂或胶囊，围绕另一种制剂的制剂、在另一种制剂中的一种制剂的分散剂、两种制剂相互混合的粒剂，等等。如果希望，通过标准水性或无水技术可以包被片剂或胶囊剂。
用于本发明方法中的制剂还可以含有其他药学上可接受的成分，如本领域中常用的成分。见，Remingtonthe Science & Practice ofPharmacy，，Alfonso R.Gennaro，第20版，Williams & Wilkins，2000。用于本发明方法中的制剂中的额外成分包括，但不限于，水、二醇、油类、酒精、淀粉、糖、稀释剂、崩解剂、防腐剂、赋形剂、润滑剂、崩解剂、稀释剂、载体、稳定剂、着色剂、增味剂，和它们的联合。适宜的稀释剂的实例包括水、乙醇、多元醇、植物油、可注射的有机酯诸如油酸乙酯，和它们的联合。制剂还可以含有佐剂诸如防腐剂、增湿剂、乳化剂，和分配剂。通过各种抗细菌和抗真菌剂可以确保预防微生物的作用，这些抗细菌和抗真菌剂包括但不限于对羟基苯甲酸酯类、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、等等。还希望包括等渗剂，其包括但不限于糖、氯化钠、等等。
在本发明的另一个实施方案中，该制剂还可以与至少一种其他药剂共同施用。药剂类别的实例包括肾上腺素能剂、肾上腺皮质类固醇类、肾上腺皮质抑制剂、醛甾酮拮抗剂、氨基酸、氨解毒剂、合成代谢剂、强壮剂、止痛剂、雄激素、麻醉剂、减食欲剂、拮抗剂、垂体前叶抑制剂、驱虫剂、抗粉刺剂、抗肾上腺素剂、抗-过敏剂、抗变形虫剂、抗雄激素、抗贫血剂、抗绞痛剂、抗焦虑剂、抗关节炎剂、抗哮喘剂、抗动脉粥样硬化剂、抗细菌、抗胆石的、抗胆石形成、抗胆碱能剂、抗凝剂、抗球虫剂、抗惊厥剂、抗抑郁剂、抗糖尿剂、止泻剂、抗利尿剂、抗催吐剂、抗癫痫、抗雌激素、抗纤维蛋白溶解剂、抗真菌剂、抗血友病、抗出血、抗组胺、抗高脂血症、抗高脂蛋白血症药、抗高血压剂、抗感染、消炎、抗角质化剂、抗疟疾、抗微生物、抗偏头痛、抗有丝分裂、抗霉菌、抗恶心、抗肿瘤、antineutropenic、抗肥胖剂、抗寄生虫剂、抗帕金森病、抗蠕动药物、抗肺囊虫、抗增殖、抗前列腺肥大、抗原生动物、止痒的、抗精神病药、抗风湿病药、抗血吸虫剂、抗皮脂溢药、抗分泌、解痉药、抗血栓形成的、镇咳药、抗溃疡。抗尿石剂、抗病毒剂、食欲抑制剂、良性前列腺肥大治疗剂、血糖调节剂、骨吸收抑制剂、支气管扩张剂、碳酸酐醇抑制剂、心镇静剂、心保护剂、强心剂、心血管剂、利胆剂、胆碱能药物、胆碱酯酶钝化剂、球虫抑制剂、认知佐剂、镇静剂、利尿剂、多巴胺能剂、杀外寄生物药、催吐剂、酶抑制剂、雌激素、纤溶剂、荧光剂、自由氧自由基清除剂、胃肠运动效应物、糖皮质激素、生殖腺-刺激成分、毛发生长刺激剂、止血剂。组胺H2受体拮抗剂、激素、胆汁过少、低血糖、低血脂、低血压、显影剂、免疫剂、免疫调节剂、免疫调制剂、免疫刺激剂、免疫抑制剂、阳萎治疗辅助剂、溶角蛋白剂、LNRII激动剂、肝失调处理、溶黄体素、精神性能增强剂、情绪调节剂、粘液溶解剂、粘膜防护剂、散瞳剂、鼻减充血剂、神经肌肉阻断剂、神经保护基、NMDA拮抗剂、非激素甾醇类衍生物、催产剂、纤溶酶原激活物、血小板活化因子拮抗剂、血小板凝聚抑制剂、增效剂、孕酮、前列腺素、前列腺生长抑制剂、prothyrotropin、治疗精神病的试剂、放射性剂、调节剂、弛缓剂、分配剂、抗疥螨剂、硬化剂、镇静剂、选择性腺苷A1拮抗剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺抑制剂、5-羟色胺受体拮抗剂、类固醇、兴奋剂、抑制剂、症状性多发性硬化、协同剂、甲状腺激素、甲状腺抑制剂、thyromimetic、镇静剂、大脑局部缺血的治疗、派杰病的治疗、不稳定绞痛的治疗、促尿酸排泄剂、血管收缩剂、血管扩张剂、外伤剂、伤口愈合剂、或者黄嘌呤氧化酶抑制剂。
药剂的另一实例包括血管紧张肽转化酶抑制剂(ACE抑制剂)。ACE是催化血管紧张肽I向血管紧张肽II转化的一种酶。ACE抑制剂包括氨基酸和其衍生物、肽，包括二肽和三肽和ACE的抗体，这些ACE抑制剂通过抑制ACE的活性干扰肾素-血管紧张肽，从而减少或消除前体物质血管紧张肽II的形成。ACE抑制剂已经被在医学上用于治疗高血压、充血性心力衰竭、心肌梗死和肾病。公知可用作ACE抑制剂的化合物类别包括酰基巯基和巯基烷酰基脯氨酸如卡托普利(美国专利号4,105,776)和佐诺普利(美国专利号4,316,906)、羧烷基二肽，如依那普利(美国专利号4,374,829)、赖诺普利(美国专利号4,374,829)、喹那普利(美国专利号4,344,949)、雷米普利(美国专利号4,587,258)和普吲哚酸(美国专利号4,508,729)，羧烷基二肽模拟物，如西拉普利(美国专利号4,512,924)和贝那普利(美国专利号4,410,520)、氧膦基烷酰基脯氨酸，如福辛普利(美国专利号4,337,201)和群多普利。雌激素上调NOS表达，而ACE抑制剂不影响表达，但是影响NOS对L-精氨酸作用的效率。从而，可以以各种方法增加活性。通常，通过本发明的抑制剂通过相对于没有根据本发明的还原酶抑制剂处理的细胞，用该还原酶处理的细胞中存在的活性酶的量的增加而增加活性。
II.预防和治疗方法一方面，本发明提供了预防受试者中血管疾病或失调，如脑血管和/或心血管疾病或失调的方法，该方法包括对处于脑血管和/或心血管疾病或失调的危险中的受试者顺序地或同时施用含有L-精氨酸的制剂与含有HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，辛伐他汀)的制剂，或者含有L-精氨酸和HMG-CoA还原酶抑制剂的单一制剂。处于脑血管和/或心血管疾病或失调(包括事件)的危险中的受试者可以通过，例如，动脉粥样硬化的诱因、动脉粥样硬化的症状，或者存在危险因素如，例如，吸烟、高血压、糖尿病、家族史、遗传因素、高胆固醇水平、老年和饮酒来鉴定。
作为预防剂用于本发明方法中的制剂的施用可以在脑血管和/或心血管疾病或失调的发作的特征性症状表现出来之前施用，从而，该脑血管和/或心血管疾病或失调被防止、其恶化减慢，或者其发作延迟。
如在标题为“通过HMG-CoA还原酶抑制剂上调III型内皮细胞一氧化氮合酶”的国际专利公开号WO 00/56403(其被完整并入本文作为参考)中所描述的，NOS活性的上调不取决于胆固醇合成的减少并且尤其不取决于ox-LDL形成的减少。因此，无论何时希望恢复eNOS活性或者增加受感染的细胞或组织中这种活性时，都可以利用本发明。组织被定义为包括向组织提供营养的脉管系统中的细胞，以及表达eNOS的组织的细胞。
一氧化氮合酶活性与许多病症有关，这些病症包括阳痿、心力衰竭、胃和食管运动失调、肾失调，如肾高血压和进行性肾病、胰岛素不足，等等。患有这些病症的个体可以从NO产生的增加受益。例如，患有肺高血压的个体通常在它们的肺血管中一氧化氮合酶表达水平降低并且从吸入一氧化氮而在临床上受益。因此本发明尤其可用于治疗肺高血压。还表明低氧导致eNOS活性的抑制。因此本发明可用于治疗患有低氧诱导的病症的受试者。令人惊奇地，还发现HMG-CoA还原酶抑制剂可用于减小中风后的ID脑损伤。
受试者的病症特征是低氧诱导的eNOS活性的异常的低水平。在其他实施方案中，受试者患有一种病症，其包括化学诱导的eNOS活性的异常的低水平。在其他实施方案中，受试者患有一种病症，其包括细胞因子诱导的eNOS的异常的低水平。在某些重要的实施方案中，受试者患有肺部高血压或者肺部高血压的异常升高的危险。在其他重要实施方案中，受试者经历了缺血性中风或者具有缺血性中风的异常升高的危险。在其他实施方案中，受试者患有心力衰竭或进行性肾病。在其他重要实施方案中，受试者被长期暴露于低氧条件。
在其他重要实施方案中，受试者已经经历了血栓形成事件或者具有血栓形成的异常高的危险。在其他实施方案中，受试者具有动脉粥样硬化的异常升高的危险或者患有动脉粥样硬化。在其他重要实施方案中，受试者具有患心急梗死的异常升高的危险或者已经经历心急梗死。在再一实施方案中，受试者具有反复灌注损伤的异常升高的危险。在优选实施方案中，具有反复灌注损伤的异常升高的危险的受试者是器官移植受体(例如，心、肾、肝，等)。在其他重要实施方案中，受试者患有高胱氨酸尿症。在某些其他重要实施方案中，受试者患有皮层下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(CADASIL)综合症。在其他重要的实施方案中，受试者患有神经系统的退化性失调。在优选实施方案中，患有中枢系统的退化性失调的受试者患有阿尔茨海默氏病。
在某些其他实施方案中，当需要根据本发明的治疗的受试者具有缺血性中风的异常升高的危险时，HMG-CoA还原酶抑制剂被排除在作为这些受试者的治疗之外。
在其他实施方案中，本发明的方法和组合物(例如，L-精氨酸缓释制剂、L-精氨酸食物棒，等等)可用于治疗或预防阿尔茨海默氏病。在再一实施方案中，本发明的方法和组合物可用于治疗或预防间歇性跛行。在再一实施方案中，本发明的制剂和组合物可用于增加血管舒张。
在优选实施方案中，本发明的方法可用于降低受试者中的胆固醇水平。对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸可用于降低总胆固醇。在一个实施方案中，该方法使总胆固醇降低约50到约150mg/dL。在另一个实施方案中，该方法使总胆固醇降低约80到约100mg/dL。此外，对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸可用于降低低密度脂蛋白(LDL)胆固醇。在一个实施方案中，该方法使LDL胆固醇降低约40到约110mg/dL。在另一个实施方案中，该方法使LDL胆固醇降低约60到约100mg/dL。本发明的方法还可用于增加受试者中高密度脂蛋白(HDL)胆固醇。此外，施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸可以降低受试者中的甘油三酯。在一个实施方案中，本发明的方法使受试者中甘油三酯降低约30到约100mg/dL。在另一个实施方案中，本发明的方法使受试者中甘油三酯降低约45到约75mg/dL。
HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸的共同施用在降低受试者中胆固醇水平中具有协同效果。本发明的方法和组合物与其他公知方法和组合物相比已经表现出以令人惊奇的和显著的量降低胆固醇水平。具体地，HMG-CoA还原酶抑制剂和按照本发明的缓释L-精氨酸的共同施用比现有方法以显著的方式降低了甘油三酯和LDL水平。此外，HMG-CoA还原酶抑制剂和缓释L-精氨酸的共同施用比现有方法以显著的方式增加HDL。在一个实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸的共同施用与仅施用HMG-CoA还原酶抑制剂相比使总胆固醇多降低约5％到约15％。在另一实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸的共同施用与仅施用HMG-CoA还原酶抑制剂相比使总胆固醇多降低约5到约20mg/dL。在再一实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸的共同施用与仅施用HMG-CoA还原酶抑制剂相比使总LDL胆固醇多降低约2到约20mg/dL。在再一实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸的共同施用与仅施用HMG-CoA还原酶抑制剂相比使甘油三酯多降低约5到约50mg/dL，或者备选地约20到约35mg/dL。
在另一实施方案中，本发明的方法可用于降低受试者中的C-反应性蛋白。C-反应性蛋白是身体应答急性损伤、感染、或其他炎症刺激释放的急性期反应物。研究已经阐明了C-反应性蛋白和冠状动脉疾病之间的正相关性。Ridker，Circulation 108(12)e81-85(2003)；Blake等人，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.285(5)R1250-1252(2003)。在一个实施方案中，该方法使C-反应性蛋白降低约10％到约50％，或者约25％到约35％。
HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸的共同施用在降低C-反应性蛋白中具有协同效果。在一个实施方案中，该方法与施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用L-精氨酸的缓释制剂相比使C-反应性蛋白多降低约50％到约90％，或者约65％到约75％。在另一实施方案中，该方法与施用L-精氨酸的缓释制剂而不施用HMG-CoA还原酶抑制剂相比使C-反应性蛋白多降低约80％到约120％，或者约95％到约105％。
此外，本发明的方法可用于增加具有升高的不对称二甲基精氨酸(ADMA)的受试者中一氧化氮产生和/或增加血管舒张。不对称二甲基精氨酸(ADMA)是eNOS的内源的、竞争性抑制剂。升高的血浆ADMA水平的存在与内皮功能异常有关。斯特汀刺激体外内皮NO合酶(eNOS)的表达并增强体内依赖内皮的、NO-介导的血管舒张。因此，斯特汀(例如，辛伐他汀)可增强具有升高的ADMA的患者中的内皮功能。不希望被理论所束缚，认为L-精氨酸克服了ADMA的抑制效果。
通过对具有升高的ADMA的受试者施用L-精氨酸和，任选地，HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，辛伐他汀)，本发明的方法可用于增加一氧化氮产生和/或增加血管舒张。这种共同施用可以使内皮功能增加约5％到约15％或者备选地，约7％到约12％。根据本发明的一个实施方案，受试者具有内皮功能异常。
对于任一施用模式，所递送的化合物的实际量，以及实现此处描述的有利的药物动力学图谱所需的给药方案将部分取决于诸如该化合物(和/或其活性代谢物)的生物利用度、所治疗的失调、所希望的治疗剂量的因素和本领域技术人员将显而易见的其他因素。技术人员不用过多实验通过监视所施用的化合物和/或其活性代谢物的血浆水平，和调节实现所希望的药物动力学图谱所需的剂量或给药方案可以容易地确定递送的实际量和给药方案。
使用各种施用途径或模式，可以将如此处描述用于本发明方法中的制剂或者其药学上可接受的加成盐或水合物递送于受试者以便避免或者减少根据本发明的不希望的副作用。在一个实施方案中，受试者是动物。在另一实施方案中，受试者是哺乳动物。在再一个实施方案中，受试者是人。任何给定情况中最适宜的途径将取决于被治疗的病症的性质和严重性。本发明的优选施用途径是经口途径。这些组合物可以方便地以单位剂型给出，并且通过药剂学领域中熟知的任一方法制备。施用组合物的技术和配方可以在Remingtonthe Science &Practice of Pharmacy，Alfonso R.Gennaro，第20版，Williams& Wilkins，2000中发现。
本发明的制剂将通常以有效实现所计划的目的的量使用，例如，以治疗和/或预防脑血管和/或心血管疾病或失调。“治疗有效量”指有效治疗疾病、失调、与疾病或失调有关的症状，或者疾病或失调的倾向的量。如前面描述的，术语“治疗”指对患者应用或施用治疗剂或制剂，或者对从患者分离的组织应用或施用治疗剂或制剂，其中该患者患有疾病、失调、与疾病或失调有关的症状，或者疾病或失调的倾向，目的是治愈、治疗、减轻、解除、改变、补救、预防、改善、延迟疾病或失调和/或事件的发作，延缓疾病或失调的恶化，改善或影响该疾病或失调、疾病或失调的症状，或者疾病或失调和/或事件的倾向。确定治疗有效量将在本领域技术人员的能力之内，特别是参考本文提供的详细公开之后。
适于用于本发明的药物制剂包括这样的制剂，其中该制剂中含有治疗有效量(即有效实现所计划的目的的量)的L-精氨酸和/或HMG-CoA还原酶抑制剂。通常，有效量是单独或者与其他制剂一起产生所希望的应答的药物制剂的量。这可以包括仅暂时延缓疾病的恶化。在另一实施方案中，其包括永久停止该疾病的恶化或者延迟该疾病或病症的发作或者防止其发生。通过常规方法可以监视剂量对任一具体疾病的效果。当然，这些量将取决于被治疗的具体病症、该病症的严重性、个体患者的参数，包括年龄、生理条件、大小和体重、治疗的持续时间、并行治疗(如果有)的性质、施用的具体途径和健康技术人员的知识和专门技术内的类似因素。
通常，活性化合物的剂量将为每天约0.01mg/kg到每天约1000mg/kg。在一个实施方案中，预期约50到约500mg/kg的剂量将是适宜的。在另一实施方案中，施用是经口并且每天施用一次或数次。
当然，L-精氨酸和/或HMG-CoA还原酶抑制剂的实际量将取决于受试者的状况、受试者的体重和代谢。例如，当施用于患有IC或AD的受试者时，片剂、丸剂、糖锭剂、胶囊剂、gelcap、锭剂或胶囊剂所含有的L-精氨酸和/或HMG-CoA还原酶抑制剂的量将有效减轻血流不足对正常组织的有害作用，即，防止被治疗的受试者的症状的发生或者减轻现有症状，或者延长存活时间。有效量的确定是本领域技术人员的能力范围之内的，特别是参考本文中详述的公开之后。
还可以从动物模型估计用于人中的治疗有效量。例如，可以配制用于人的剂量以实现发现在动物中有效的浓度。
还可以从人药物动力学数据估计治疗有效剂量。然而不希望被任何具体理论所束缚，认为效能与受试者对所施用的药物和/或其活性代谢物的应用剂量的总暴露有关，这可通过测量血浓度-时间曲线(AUC)下的面积来确定。从而，预期根据本发明的方法施用的某一剂量是有效的，该剂量所具有的所施用的化合物(和/或其活性代谢物)的AUC为公知对适应症有效的剂量的AUC的约50％以内。优选剂量为所施用的化合物(和/或其活性代谢物)的AUC为公知有效剂量的AUC的约70％、约80％或甚至约90％和以上的范围内。通过细胞培养和实验动物中的标准药学方法，例如，用于确定LD50(50％群体致死的剂量)和ED50(50％群体治疗有效的剂量)的方法可以确定这些试剂的毒性和治疗功效。毒性和治疗效果之间的剂量比例为治疗指数并且可表达为比例LD50/ED50。优选显示出大治疗指数的制剂。尽管可以使用显示出毒性副作用的制剂，但是应该注意设计一种递送系统，该递送系统将这些制剂靶定所侵袭的组织的部位以便使对未受感染的细胞的可能损伤最小，从而，减小副作用。
从细胞培养测定和动物研究所得数据可用于配制用于人的一系列剂量。在一个实施方案中，本发明的这些制剂的剂量在包括ED50的循环浓度范围内，具有很小的或者没有毒性。剂量可以根据所用的剂型和所利用的施用途径在该范围内变动。对于用于本发明的治疗或预防方法内的任一制剂，可以从细胞培养测定初步估计治疗有效剂量。可以在动物模型中规化剂量，该剂量实现了循环血浆浓度范围，其包括如在细胞培养中确定的IC50(即，实现症状的半最大抑制的受试化合物的浓度)。该信息可用于更准确地确定人中的有用剂量。通过例如，高效液相层析可以确定血浆中的水平。
基于上述方法，尤其基于所施用化合物的血液浓度和持续时间和/或其活性代谢物调节在受试者中实现最大功效的剂量是普通技术人员能力范围之内的。
III.生产方法已经发现基质内L-精氨酸粒剂的有效和大量掺入或覆盖改善了本发明的组合物的缓释特征。对于纤维素基质，当与水接触时，该基质被部分水化，形成凝胶层，其控制L-精氨酸的释放速度。L-精氨酸粒剂的有效包裹或掺入产生了暂时的溶解屏障，其延迟了L-精氨酸的递送。基质中大量缝隙使得L-精氨酸溶解太快。本发明的方法导致与通过直接压缩产生的产品相比具有性质改进的产品。此外，本发明的方法相对于包括流化分散的方法相比是有利的，因为这些方法费时并且昂贵。
有效和有效率地覆盖的关键在于实施本发明的粒化、碾磨和混合步骤中。参考图5，在优选实施方案中，根据一种方法生产片剂，该方法包括粒化L-精氨酸(步骤110)、碾磨L-精氨酸(步骤125，140)、将L-精氨酸与剩余的成分混合(步骤145、150、155)，和将成分压缩形成片剂(步骤160)。优选地，该方法还包括筛选成分(步骤105)、和/或在碾磨步骤期间干燥L-精氨酸(步骤135)步骤的一步或者两个步骤。
如果在使用前筛选成分(步骤105)，#20和/或#30目筛可用于部分或所有成分。在优选实施方案中，在粒化(步骤105)，并且再次在碾磨(未显示)前筛选粒剂。筛选提供的粒剂具有更窄的颗粒大小分布范围，这对于包衣和/或压缩是有利的。
粒化步骤是有利的，因为其提供了更均匀的颗粒。使用本领域中公知的任一适宜的方法可以将活性剂制成粒状或者粒化。粒状化或粒化通常被定义为尺寸增大的过程，其中小颗粒聚集成更大的、持久的聚集体，其中原来的颗粒仍可以被鉴定并使得它们成为自由的流动态。粒化前，可以将结合剂加入活性剂以改善粒化过程。在粒化期间可以加入其他添加剂。这些添加剂包括，例如，增甜剂、调味剂、着色剂、抗氧化剂，等等。
任选地，可以加入水或其他溶剂以帮助粒化过程。所加入的水或溶剂的量取决于，例如，粒化方法的选择，并且本领域中的技术人员可以容易地确定。可以在粒化过程期间任一适宜的时间点加入水或其他溶剂。例如，结合剂可以与溶剂(例如，水)混合以形成粒化剂，然后粒化剂可以被喷雾到活性剂上。备选地，如果粒化剂太粘稠而不能均匀地喷雾到活性剂上，那么希望将结合剂首先与活性剂混合，然后喷雾水或其他溶剂以产生活性剂粒剂或小粒的均匀形式。
任一适宜的粒化方法都可用于产生含有活性剂的颗粒。可以使用湿润粒化和/或干燥粒化方法。
干燥粒化指粒化制剂而不使用热和溶剂。干燥粒化技术通常包括击压法或滚动压缩。击压法为干燥混合制剂并将该制剂在压缩机上压缩成大片剂或块剂(slug)。将所得片剂或块剂碾磨而产生粒剂。滚筒压缩类似于击压法，但是在滚筒压缩中，使用滚筒压缩机代替制片机。见，例如，Handbook of Pharmaceutical Granulation Technology，D.M.Parikh编者，Marcel-Dekker，Inc.102-103页(1997)。干燥粒化技术可用于某些情况中，例如，当活性剂对热或溶剂敏感时。
备选地，可以使用湿润粒化。在湿润粒化中，溶剂和结合剂通常被加入制剂以提供粒剂的更大聚集。粒化期间的温度可以被设定在任一适宜的点，通常不超过该制剂的任一组分的熔点。通常，将该混合物在约35℃到约65℃的温度下粒化小于约20分钟，更优选在室温下约1到约10分钟(见实施例8)。通常将粒剂在空气中干燥适宜的时间(例如，一或几小时)。
优选地，通过高剪切混合器粒化(“HSG”)或者流化床粒化(“FBG”)粒化活性剂。这两种粒化方法都提供了更大的粒剂或小粒，但是它们在所用的设备和该方法运行的机理上不同。使用通过商业途径可得到的装置可以实施这些粒化技术。
在HSG中，通过叶轮或切碎机的高机械搅拌完成混合和湿润块化。通过叶轮所产生剪切力和压缩力实现湿润物质的混合、稠化，和团聚。切碎机的主要功能是将块切成更小的片段和帮助液体结合剂的分布。液体结合剂被导入辊筒或者喷雾到粉剂上以实现更均匀的液体分布。
另一方面，流化是这样的操作，通过该操作细小的固体通过与其他接触被转化成类似液体状态。在一定的气体速度下，该液体将支持这些颗粒，使得它们自由运动而不被带走。这种流化床类似剧烈沸腾的液体，固体颗粒经历非常剧烈的运动，该运动随着气体速度增加。从而流化床粒化是这样一种方法，通过该方法，通过流化床将结合剂溶液喷雾到流化粉末床形成更大的颗粒而产生了粒剂。结合剂溶液可以从例如，以任何适宜的方式(例如，顶部或底部)安置的喷枪喷出。喷雾位置和喷雾速度取决于所用的活性剂和结合剂的性质，并且可以通过本领域技术人员容易地确定。
在根据本发明的优选方法中，粒化L-精氨酸(步骤110)包括将L-精氨酸与结合剂如聚烯吡酮混合形成混合物(步骤115)，并将混合物与粒化剂(粒化载体)在制粒机中粒化(步骤120)。粒化剂可以是，例如，溶于纯化水中的聚烯吡酮。优选地，使用高剪切制粒机，如Niro PMA65高剪切制粒机。该制粒机可用于混合L-精氨酸和结合剂，还可用于将粒化载体喷雾到混合物上后将该混合物粒化。
粒化制剂的一种或多种组分后，任选地，可以碾磨粒化的制剂。可以用任一适宜的通过商业途径可得到的设备(例如，装备0.039英寸筛子的CoMil)实施碾磨。可以根据所希望的粒剂的大小选择筛子的网眼大小。将粒化的活性剂碾磨后，如果希望可以将它们进一步干燥(例如，在空气中)。
在优选实施方案中，碾磨L-精氨酸包括按照本领域中熟知的技术(通常见美国专利号5,145,684和欧洲专利申请498,482,这两个申请的内容都被并入本文作为参考)碾磨湿润粒剂或者湿润碾磨(步骤125)，干燥粒剂(步骤130)，和碾磨干燥粒剂或干燥碾磨(步骤140)。磨机如CoMil可被用于湿润碾磨和干燥碾磨粒剂。在一个实施方案中，磨机被配备用于湿润碾磨的’375Q筛子和用于干燥碾磨的’062R筛。通过将粒剂在床干燥器，例如，Aeromatic S-2流化床干燥器中干燥到所希望的干燥损失(LOD)水平，例如≤3％LOD，可以实现干燥步骤。可以分阶段(步骤135)实施干燥步骤直到达到所希望的LOD。
将L-精氨酸与剩余的成分混合可以包括预混合步骤(步骤145)、混合步骤(步骤150)，和最终混合步骤(步骤155)。预混合步骤可以包括将L-精氨酸/聚烯吡酮粒剂与填充剂和助流剂，例如，微晶纤维素和胶态二氧化硅混合。例如，在8夸脱V形混合机中以25rpm混合约5分钟可以实现预混合步骤。混合步骤可以包括向该混合物加入一种或多种缓释剂，例如，一种或多种羟丙基甲基纤维素，和一种填充剂，例如，微晶纤维素。可以在例如2立方英尺V形混合机中以25rpm混合约20分钟可以实现混合步骤。最终混合步骤可以包括向2立方英尺V形混合机中的混合物加入释放剂/润滑剂，例如，硬脂酸镁并以25rpm混合约5分钟。
当制备了如上述的制剂后，将该制剂压缩(步骤160)成片剂形式。通过任一适宜的方法，用或者不用压缩力可以实施该片剂成形。例如，可以用任一压片机(例如，装备0.748”×0.380”卵圆形、凸起的、普通模具的Manesty Beta Press)完成粒化步骤后制剂的压缩，优选地，该制剂组合物被润滑剂(例如，硬脂酸镁)充分润滑。可以利用实现该步骤的许多备选方法，并且本发明不受到任一具体装置的使用的限制。可以用旋转型压片机实施压缩步骤。该旋转型压片机具有旋转板，后者又具有用于形成片剂的多个通过孔，或者模子。制剂被插入该模子并随后被压模。
备选地，通过模塑可以制备片剂。在适宜的机器中将用惰性液体稀释剂湿润的粉状混合物模塑可以制备模塑的片剂。
片剂的直径和形状取决于选择用于粒剂组合物的成形或压缩的模子、塑模和冲床。片剂可以是盘形的、卵圆形、椭圆形、圆形、圆柱形、三角形，等等。可以将片剂刮伤以促进破裂。上表面或下表面可以用符号或字母浮雕或凹入。
可以基于压片机的类型/模型、对片剂产品所希望的那些物理性质(例如，所希望的硬度、脆性，等等)、所希望的片剂外观和大小，等等，可以选择压缩力。通常，应用压缩力使得该压缩的片剂具有至少约2kp的硬度。这些片剂通常提供了足够的硬度和强度而可以被包装、运输或被使用者处理。如果希望，可以对片剂应用更高的压缩力以增加片剂硬度。然而，优选如此选择压缩力使得其不会使片剂内的含有活性剂的颗粒变性(例如，龟裂或破裂)。优选地，如此应用压缩力使得压缩片剂的应答小于约10kp。在某些实施方案中，优选将片剂压缩到约3kp到约7kp，任选约3kp到约5kp，或者约3kp的硬度。
通常，最终片剂的重量为约50mg到约2000mg，更通常约200mg到约1000mg，或者约400mg到约700mg。
生产本发明组合物的具体制剂和方法对缓释L-精氨酸组合物赋予了独特的优点。具体地，本发明的制剂和方法使得组合物具有所希望的缓释溶解分布图。任选地，缓释L-精氨酸制剂将持续体外药物释放至少长达14小时，优选约1小时时释放约10％到约40％，约4小时时释放约30％到约70％，约6小时时释放约55％到约75％，约8小时时释放约65％到约85％，约12小时时释放约75％到约95％，约14小时时释放约80％到约100％。如通过图7所阐明的，本发明的制剂实现了这种优选溶解。此外，如实施例8和实施例14中所示，溶解和稳定性研究表明本发明的制剂在生产后1和2个月显示出最佳的溶解分布图。
此外，本发明的制剂和方法使得缓释L-精氨酸组合物不过度易碎。此外，本发明的制剂和方法使得缓释L-精氨酸组合物是足够可压缩的以允许方便制备该组合物。
如果希望，可以将其他修饰掺入片剂的实施方案。例如，通过任一公知的技术，诸如，例如，应用各种包衣，例如，例如与，例如Amberlite IRP-69的离子交换复合物，可以实现活性剂穿过本发明的片剂基质释放的修饰。本发明的片剂还可以包括GI运动-减弱药物或者与该药物共同施用。还可以通过生物活性化合物的化学修饰来修饰活性剂以产生前药，该前药将在体内通过酶或水解切割等释放活性化合物。额外的层或包衣可作为扩散屏障以提供控制药物释放速度和时间的额外方法。
如果包括HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，辛伐他汀)和/或额外的试剂，那么这些试剂优选在混合步骤(步骤145、150、155)中加入。当片剂含有缓释L-精氨酸制剂和HMG-CoA还原酶抑制剂制剂时，该片剂可以具有缓释L-精氨酸制剂核心和含有至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的制剂的第二个外层覆盖或包衣。备选地，片剂可以含有L-精氨酸制剂，例如，缓释L-精氨酸制剂，和共享一个表面的HMG-CoA还原酶抑制剂制剂。
当L-精氨酸与HMG-CoA还原酶抑制剂顺序地或共同施用时，每种片剂、扁囊剂、锭剂，或胶囊可以含有约0.01mg到约200mg HMG-CoA还原酶抑制剂。HMG-CoA还原酶抑制剂的量将取决于所用的具体HMG-CoA还原酶抑制剂。
在本发明的另一方面，以食物的形式提供了用于治疗心血管和/或脑血管疾病的组合物。优选地，该食物为棒状食物如处方健康棒的形式。利用食物使得可以提供的L-精氨酸的量比可以掺入单一片剂的量更大，例如，在单个片剂中难以掺入1g以上的L-精氨酸。从而，需要多个片剂以递送超过1g的L-精氨酸的量。本发明提供了棒状食物，其可以提供1g以上的L-精氨酸以及其他试剂(如果希望)。在一个实施方案中，L-精氨酸作为立即释放制剂，例如，L-精氨酸的立即释放粒剂被加入到食物棒中。优选地，该棒状食物包括缓释制剂，其包括，例如，L-精氨酸的缓释粒剂。在优选实施方案中，粒剂包括味道掩蔽成分，例如，味道掩蔽包衣。在另一实施方案中，该棒状食物还含有额外的试剂，如HMG-CoA还原酶抑制剂。优选地，HMG-CoA还原酶抑制剂是斯特汀，如辛伐他汀。将L-精氨酸与斯特汀在食物载体中组合将提供节制和易于施用该制剂。当希望更高剂量时，使用食物还可以减少对服用L-精氨酸的多个片剂的需要。
在一个实施方案中，棒状食物具有约1到约80g辛伐他汀和约1到约10g L-精氨酸。在优选实施方案中，提供了棒状食物，其具有总共至少约10mg辛伐他汀和每个棒状食物约4g L-精氨酸或者其盐，以及糖、水果成分、蛋白质、和维生素和矿物质。该棒状食物的重量为约25到约100g。在具体方法中，通过将糖和水果糊在较高的温度混合，将该糖浆在较低的温度与少量成分混合制备棒状食物。将少量成分与糖浆混合后，加入L-精氨酸和辛伐他汀，尤其还加入蛋白质膨胀剂，然后膨胀，还加入食物剂，尤其水果片或其他细小的可食用的成分以提供所希望的质地和风味，还加入大豆蛋白。所得产品可以稳定保存，在可口方面具有所希望的影响感观的性质，并且提供了成分与辛伐他汀和L-精氨酸结合的健康组合。在美国专利号6,063,432中描述了生产含有L-精氨酸和L-赖氨酸的健康棒状食物的方法和配方，该专利被完整并入本文作为参考。
本发明的另一方面是生产上述棒状食物的方法。该方法将包括如上述的与图5，步骤110有关的粒化L-精氨酸。优选地，粒化步骤将包括预混合步骤(步骤115)和粒化步骤(步骤120)。优选地，该方法还包括上述湿润碾磨步骤(步骤125)。通过L-精氨酸与如上描述的适宜的赋形剂的湿润粒化可以得到这种棒状食物。所得粒剂将直接使用或者将其用味道掩蔽纤维素包衣。
通过下面的实施例进一步阐明本发明，这些实施例不应该被理解为限制。通过本申请应用的所有参考文献、专利和出版的专利申请的内容都被掺入本文作为参考。
实施例实施例1片剂制剂1将约250g L-精氨酸置于混合器中并且当其以100RPM缓慢混合时，加入100g EUDRAGIT RS 30D低渗透性甲基丙烯水性聚合物分散剂(Rohm America，Piscataway，NJ)以形成湿润块。使该湿润块穿过18-20目筛并允许在50℃干燥24小时。将所得干燥L-精氨酸粒剂(250g)与84g METHOCEL K100M CR甲基纤维素(The Dow ChemicalCompany，Danbury，CT)和3g硬脂酸镁干燥混合形成混合物。用7/16拱形冲床将所得混合物压缩成片剂。
实施例2片剂制剂2将250g L-精氨酸置于混合器中并且当其缓慢混合时，加入84gMETHOCEL K100M CR甲基纤维素和3g硬脂酸镁。用7/16拱形冲床将所得混合物压缩成片剂。
实施例3胶囊制剂1将250g L-精氨酸置于混合器中并且当其缓慢混合时，加入100gEUDRAGIT RS 30D低渗透性甲基丙烯水性聚合物分散剂以形成湿润块。使该湿润块穿过18-20目筛并允许在50℃干燥24小时。将所得干燥L-精氨酸粒剂(250g)与84g METHOCEL K100 M CR甲基纤维素和3g硬脂酸镁干燥混合形成混合物。所得混合物置于00凝胶胶囊中。
实施例4胶囊制剂2将250g L-精氨酸置于混合器中并且当其缓慢混合时，加入84gMETHOCEL K100 M CR甲基纤维素和3g硬脂酸镁。所得混合物置于00凝胶胶囊中。
实施例5片剂制剂3用KitchenAid混合器将250g L-精氨酸与50g METHOCEL K100M CR甲基纤维素混合并匀浆；混合机低速混合10分钟形成干燥混合物。将115g EUDRAGIT RS 30D低渗透性甲基丙烯水性聚合物分散剂以5g递增加入干燥混合物直到该物质被均匀地湿润。该湿润物质穿过12目筛，然后20目筛，随后在30℃干燥24小时直到水分含量按重量计为1％。将所得干燥L-精氨酸粒剂与7g硬脂酸镁干燥混合，然后用Beta Manesy press，使用7/16拱形冲床压缩成片剂。
实施例6缓释片剂的生产将约1000g L-精氨酸和约200g METHOCEL K100 M CR甲基纤维素在GP-1高剪切混合机(制粒机)中以100 RPM混合约5分钟。然后加入约138g EUDRAGIT RS 30D低渗透性甲基丙烯水性聚合物分散剂，叶轮以200RPM运行，压力为1.5巴。以200RPM粒化混合物1分钟。然后将颗粒在MP-1流化床制粒机中以45℃入口温度和100 CMH空气流干燥到约2％水分含量。然后用Comil 197S以55R筛和90％速度的圆形叶轮碾磨干燥粒剂。在8Qt.V形混合机中，向碾磨的粒剂加入约27g硬脂酸镁并混合2分钟。然后用Beta Manesty Press用7/16″标准拱形模具将材料压缩成片剂，该片剂的片剂重量为682.5mg，具有最高可能的硬度。将片剂以每瓶60片手工包装与75cc HDPE瓶中。
用高效液相色谱(HPLC)产生了该片剂相对于从BioEnergy(Warren，NJ)购买的通过商业途径可得到的缓释L-精氨酸片剂的释放图谱。图7是描绘两种制剂的释放图谱的图表。
实施例7L-精氨酸的药物动力学评估对处于禁食条件下的14名健康的成年志愿者实施了随机的四通交叉(four-way crossover)研究，该研究用于评估L-精氨酸缓释片剂对立即释放胶囊的药物动力学。如此处所用的“健康的”指没有心血管危险因素的非高胆固醇血症受试者。该研究比较了实施例6的缓释L-精氨酸片剂(L-精氨酸SR)和从Montiff(Los Angeles，CA)购买的通过商业途径可得到的立即释放L-精氨酸胶囊(L-精氨酸IR)。
研究目的是确定缓释L-精氨酸的药物动力学参数。如下表1中所描绘，基于对每种药物动力学参数进行的双尾成对t-检验的p值，Cmax和Tmax之间有统计学显著差异。如所预期的，与立即释放胶囊相比，缓释L-精氨酸片剂具有更低的Cmax(14.9μg/mL对24.1μg/mL)和更长的Tmax(4.4h对1.4h)。
表1L-精氨酸SR对L-精氨酸IR的PK参数
实施例8生产改进的缓释L-精氨酸片剂表II列出了用于生产改进的缓释片剂的成分，以及每种成分所用的量。
表II成分
*粒化中使用水，然后干燥混合物除了硬脂酸镁，所有成分都在#20目筛中筛选。硬脂酸镁在#30目筛中筛选。将约一半聚烯吡酮(聚乙烯吡咯烷酮)溶于纯化水并作为粒化剂置于一边。将L-精氨酸和剩余的聚烯吡酮在Niro PMA 65高剪切制粒机中干燥混合4分钟，然后通过向混合物喷雾粒化剂约6.5分钟将该混合物粒化。然后在装备’375Q筛子的CoMil中碾磨湿润粒剂。然后在Aeromatic S-2流化床干燥机中将碾磨的粒剂干燥成＜3％的LOD。接着在装备’062R筛子的CoMil中碾磨干燥粒剂。然后在8夸脱V形混合机中以25rpm将约一半的微晶纤维素和胶态二氧化硅混合5分钟并转移到2立方英尺V形混合机中。微晶纤维素的剩余部分和羟丙基甲基纤维素也被加入2立方英尺V形混合机中并以25rpm混合20分钟。然后向2立方英尺V形混合机中加入硬脂酸镁并以25rpm混合5分钟。最后，用装备0.748″×0.380″椭圆形凸起的普通模具的Manesty Bet Press将混合物压缩成目标重量1000mg。图6是该方法的示意性流程图。
在生产过程期间可以使用标准的过程中对照试验和规格，用于该实施例的对照试验和规格在下表III中列出。
表IIIL-精氨酸SR片剂过程中对照规格和方法
可以使用标准释放方法和规格，用于该实例中的在下表IV中提供
表IVL-精氨酸SR片剂释放方法和规格
此外，研究已经阐明了所希望的物理特征，包括本发明的缓释L-精氨酸制剂的脆性和含量均一性。
表V两批SR-L精氨酸制剂的物理试验、效力、含量均一性和溶解
实施例9L-精氨酸SR与和不与辛伐他汀和辛伐他汀与和不与L-精氨酸SR的药物动力学评估研究了L-精氨酸SR与和不与辛伐他汀和辛伐他汀与和不与L-精氨酸SR的药物动力学。使用了实施例6的L-精氨酸SR片剂和通过商业途径可得到的从BioEnergy(Warren，NJ)购买的辛伐他汀片剂。
如从表VI可以看出，基于对每种药物动力学参数实施的双尾成对t检验得到的p值，在Cmax、AUC0-10、和Tmax的处理之间没有统计学显著差异。如表VII中所描绘的，L-精氨酸SR对辛伐他汀的单一剂量动力学没有统计学显著影响。
表VI.有和没有辛伐他汀的L-精氨酸PK参数
表VII.有和没有L-精氨酸的辛伐他汀的PK参数
实施例10辛伐他汀与L-精氨酸的施用对小鼠中梗死大小的影响在小鼠中研究了施用辛伐他汀与L-精氨酸两者对梗死大小的影响。小鼠被腹膜内注射溶于盐水溶液中的含有辛伐他汀的溶液和含有辛伐他汀和L-精氨酸的溶液，用量如图3中所示。图2和图3中描绘了这些小鼠和对照组中的梗死大小结果。
实施例11辛伐他汀和L-精氨酸组合的剂量优化在小鼠中研究了辛伐他汀和L-精氨酸的组合施用的剂量优化。小鼠被注射不同水平的辛伐他汀和L-精氨酸，如图4中所示。该研究的结果也在图4中显示。统计学分析预测该组合的最佳范围为1.2-1.4mg/kg辛伐他汀和约20-25mg/kg L-精氨酸。
实施例12通过与L-精氨酸缓释联合增强ADMA水平升高的患者中依赖内皮的血管舒张的改善斯特汀刺激体外内皮NO合酶(eNOS)的表达并增强体内依赖内皮的NO介导的血管舒张。不对称二甲基精氨酸(ADMA)是eNOS的一种内源的竞争性抑制剂。血浆ADMA水平的升高与内皮功能异常有关。发现仅当通过补充的L-精氨酸缓释克服ADMA的抑制作用时，辛伐他汀才增强ADMA升高的患者中的内皮功能。
在三个周期的交叉设计中，15名临床无症状的ADMA水平升高的老年受试者以随机顺序接受辛伐他汀(40mg/天)、如实施例8中描述的L-精氨酸缓释(3g/天)或者它们的组合，每种施用持续3周，治疗之间至少有三周的清除(wash-out)时间。通过臂动脉超声使用计算机辅助图像分析评估依赖内皮的血管舒张；通过有效的HPLC方法确定ADMA和L-精氨酸血浆浓度。
对完成研究的15名患者的分析揭示与治疗前测量相比，缓释L-精氨酸单独或者与辛伐他汀联合都增强依赖内皮的血管舒张百分比。联合使得比只用辛伐他汀观察到的治疗前依赖内皮的血管舒张百分比的变化增加3.87％(p＜0.025)。联合和仅缓释L-精氨酸之间依赖内皮的血管舒张百分比的改变的差异很小。三硝酸甘油酯导致的依赖内皮的血管舒张不受任一治疗的影响。L-精氨酸缓释单独或者与辛伐他汀联合都显著提高了血浆L-精氨酸/ADMA比例(分别为基线82.3±4.0vs.102.8±9.2和102.6±10.8，每种p＜0.05)。这些结果在图8中概述。
辛伐他汀不能增强eNOS被升高的ADMA水平阻断的受试者中的内皮功能；辛伐他汀与口服L-精氨酸缓释的联合对内皮功能具有协同作用。由于NO-介导的效果可以在斯特汀的疗效中起主要作用，所以在ADMA浓度升高的患者中应该考虑与L-精氨酸缓释的组合。
实施例13通过辛伐他汀与L-精氨酸缓释的联合治疗提高胆固醇水平在实施例12中描绘的研究中，分析了治疗前和治疗后总胆固醇(TC)、LDL胆固醇、HDL胆固醇和甘油三酯的改变。该分析的结果在图9中显示。如结果所阐明的，本发明的缓释L-精氨酸与辛伐他汀的共同施用与仅施用辛伐他汀相比降低了总胆固醇、LDL胆固醇和甘油三酯并更大程度地增加了HDL胆固醇。
实施例14通过HPLC确定缓释精氨酸HCl 500mg片剂中精氨酸HCl的溶解释放如下制备流动相。最初，称量约0.9g 1-戊烷磺酸钠盐一水合物和3.5g磷酸二氢钠一水合物，加入适宜的容器中制备1升pH3.3缓冲液。加入约100mL去离子水溶解。通过加入磷酸调节pH至3.3。随后，将850mL pH3.3缓冲液与150mL甲醇合并到适宜的容器中并混合。混合物通过0.45μm尼龙膜滤器过滤。最后将混合物使用前脱气。
如下制备溶解介质(pH6.8的50mM磷酸缓冲液)。最初，将20.0mL 10M NaOH吸取到1000mL容量瓶中并用去离子水稀释以制备0.2M NaOH。随后，向适宜的容器中加入54.44g无水磷酸二氢钾，用2000mL去离子水溶解并稀释。向该容器加入896mL 0.2M NaOH并用去离子水稀释到8000mL。最后，该混合物在使用前脱气。
如下制备溶解样品。称量如实施例8中描述的制备的六精氨酸HCl500mg片剂。将每个片剂置于含有900mL磷酸缓冲液(pH6.8)的不锈钢沉锤(sinker)中。随后将该沉锤落入USP Apparatus 2(浆)的容器中在37℃±0.5℃以75rpm立即旋转。对于各自溶解分析在1、2、4、6、8、10、12和14小时时间点的每个时间点从容器取出10mL溶液。这些样品溶液的每一种都通过0.45μm PVDF注射器滤器过滤。将滤液收集到HPLC瓶中用于分析，其中将头1-2mL丢弃。使用10μmFull Flow Filter，每个取样点后将预热到37℃±0.5℃的10mL溶解介质返回到溶解容器中。操作人员应该明白该样品溶液在室温下最多稳定1天，在4℃下最多稳定3天。
如下制备精氨酸HCl标准溶液。准确称量28±2mg精氨酸HCl参比标准物置于50mL容量瓶中。用溶解介质将标准溶解并稀释到体积。
使用BDS Hypersil C18柱(5μm，250mm×4.6mm)实施HPLC，使用UV在210nm处检测。柱温度设置为室温。通常，运行时间为9分钟，注射体积为10μL，流速为0.8mL/min，流动相为pH3.3。缓冲液/甲醇(85/15，v/v)，如上述制备。
每个试验如下进行。注射一次溶解介质后，然后连续5次注射精氨酸HCl标准溶液并最后注射一次每种样品溶液。每6次样品注射后和顺序运行结束时再次注射精氨酸HCl标准溶液。整个运行中系统漂移(即，与精氨酸HCl标准溶液的5次连续注射的平均相比标准溶液的回收百分比)应该为约97％到约103％。
在确定释放的精氨酸的百分数时，操作人员应该小心确保工作标准溶液的注射中精氨酸HCl峰的USP尾随因子(T)小于2。如下计算TT＝W.05/2f其中W.05是距离基线的峰高的5％处精氨酸HCl峰的峰宽，f为峰最大值与峰的前沿之间的距离(在距离基线的峰高的5％点处测量的距离)。
如下计算释放的精氨酸HCl百分数
其中n是测量的总数，Vr是每种测量的溶解介质的体积(10mL)，V为溶解介质的最初体积(900mL)，Cs为工作标准溶液中精氨酸HCl的浓度(mg/mL)，Ci为每个样品溶液中精氨酸HCl的浓度(mg/mL)(其中i＝1到i＝n-1)，Ru为从样品溶液得到的精氨酸HCl峰的峰面积应答，Rs为从工作标准溶液的连续注射得到的精氨酸HCl峰的平均峰面积应答，LC为精氨酸HCl的标签声称(500mg)。
计算1、2、4、6、8、10、12和14小时处的释放百分数。表VI和VIII概述了各种溶液研究的结果。
表VIII在约40℃/75％RH稳定性下L-精氨酸SR片剂的溶解分布图
实施例15eNOS表达的依赖辛伐他汀的调节下面的方案用于研究eNOS功能中依赖辛伐他汀的增加的机理，该研究使用培养的人主动脉内皮细胞(HAEC)来区分eNOS功能的上调中重新蛋白质合成和蛋白质动员或蛋白质活化。
根据下面的方法培养人主动脉内皮细胞(HAEC-c)(BioWhittaker，Walkersville，MD)。EBM-2/EGM-2培养基(BioWhittaker)中的内皮细胞生长到约80％到约90％汇合。用5ml培养基洗涤每个瓶中的细胞并向每种细胞加入15ml培养基。用细胞刮刀使细胞脱离并将其转移到50ml锥形管中。通过在800RPM离心8分钟沉淀细胞。丢弃上清液并用冷的1×PBS洗涤沉淀。
如下匀浆细胞。使沉淀变松并加入400μl 10×匀浆缓冲液(250mM Tris，pH7.4，10mM EDTA和10mM EGTA)。用27G针匀浆样品约10次。将匀浆物转移到1.5ml epindorph管中。随后将沉淀重悬在30到45μl 1×匀浆缓冲液中。
如下分析细胞。在适当大小的柱子中用5柱床体积0.5N NaOH洗涤树脂AG 50W-X8(BioRad Laboratories，Hercules，CA)制备树脂浆。用20体积水洗涤柱子。以终止/平衡缓冲液(50mM乙酸钠，pH5.5)平衡树脂直到洗脱物在终止/平衡缓冲液的0.05pH单位内。所得溶液作为终止/平衡缓冲液中的50％浆液在4℃保存。此外，通过将602μltris加到预先称重的NADPH的5mg瓶制备25mM tris中的新鲜10mMNADPH(pH7.4)。将0.069mg钙调蛋白加入4.1mL水中制备1μM钙调溶液。还制备溶于水的8μM CaCl。通过混合50mM Tris(pH7.4)、6μM BH4、2μM黄素腺嘌呤二核苷酸和2μM黄素腺嘌呤单核苷酸制备2×反应缓冲液。随后，通过混合25μl 2×反应缓冲液、5μl 10mMNADP、5μl 8mM CaCl2、4μl钙调蛋白溶液和1μl14C精氨酸制备2×反应混合物。将40μl反应混合物和5μl样品或对照在1.5ml离心管中合并。将该离心管在37℃孵育1小时。
从1ml移液管头切除顶端以增加该移液管头的最小直径来制备柱子。将250μl如上描述制备的树脂浆液移液到每个柱子(FisherScientific，Glenlake，IL)。用400μl终止/平衡缓冲液(50mM乙酸钠，pH5.5)洗涤柱子两次。
孵育后，向每个样品和对照加入约400μl终止/平衡缓冲液(50mM乙酸钠，pH5.5)。向平衡的柱子加入400μl该混合物。用400μl终止/平衡缓冲液洗涤每个柱子。将400μl柱洗脱物转移到装有4ml闪烁液的闪烁瓶中。所得溶液在涡旋器上充分混合。用闪烁计数器(Beta counter，Beckman Coulter，Inc.，Fullerton，CA)得到所希望的计数。部分通过从每个样品减去背景(缓冲液对照)计算结果。样品值表达为每分钟计数或未处理细胞的百分数。
通过标记的L-精氨酸向L-瓜氨酸的转换测量相对eNOS功能并将其表达为未处理的细胞产生的瓜氨酸的百分数。图10显示了实验数据，其中在确定eNOS功能前将HAEC与1.0或0.3μM辛伐他汀孵育24小时。同时培养未处理的细胞并将这些细胞用于计算相对eNOS功能。图10清除地表明辛伐他汀增加了培养的内皮细胞中eNOS功能的水平。
全体数据表明辛伐他汀影响内皮细胞中eNOS表达和功能。eNOS功能的上调中蛋白质合成的需要和eNOS特异的mRNA和功能中依赖辛伐他汀的增加与eNOS基因转录的药物诱导的调节模型一致。
等价方案本领域技术人员仅使用常规实验就可以认识到或者能够确定本文中描述的本发明的特定实施方案的许多等价方案。这些等价方案将被下面的权利要求书包括。
权利要求
1.降低受试者中胆固醇的方法，该方法包括对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂和含有L-精氨酸的缓释制剂。
2.权利要求1的方法，其中HMG-CoA还原酶抑制剂含有缓释制剂。
3.权利要求1的方法，其中该方法降低受试者中总胆固醇和低密度脂蛋白(LDL)胆固醇。
4.权利要求1的方法，其中HMG-CoA还原酶抑制剂含有辛伐他汀。
5.权利要求1的方法，其中该方法使总胆固醇降低约50到约150mg/dL。
6.权利要求1的方法，其中该方法使总胆固醇降低约80到约100mg/dL。
7.权利要求1的方法，其中该方法使LDL胆固醇降低约40到约110mg/dL。
8.权利要求1的方法，其中该方法使LDL胆固醇降低约60到约100mg/dL。
9.权利要求1的方法，其中该方法增加受试者中高密度脂蛋白(HDL)胆固醇。
10.权利要求1的方法，其中该方法使甘油三酯降低约30到约100mg/dL。
11.权利要求1的方法，其中该方法使甘油三酯降低约45到约75mg/dL。
12.权利要求1的方法，其中该方法与当对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用含有L-精氨酸的缓释制剂时相比使总胆固醇多降低约5％到约15％。
13.权利要求1的方法，其中该方法与当对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用含有L-精氨酸的缓释制剂时相比使总胆固醇多降低至少约5到约20mg/dL。
14.权利要求1的方法，其中该方法与当对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用含有L-精氨酸的缓释制剂时相比使LDL胆固醇多降低至少约2到约20mg/dL。
15.权利要求1的方法，其中该方法与当对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用含有L-精氨酸的缓释制剂时相比使甘油三酯多降低至少约5到约50mg/dL。
16.权利要求1的方法，其中该方法与当对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用含有L～精氨酸的缓释制剂时相比使甘油三酯多降低至少约20到约35mg/dL。
17.增加不对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的受试者中一氧化氮产生的方法，该方法包括对该受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸。
18.增强不对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的受试者中血管舒张的方法，该方法包括对该受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸。
19.权利要求17或18的方法，其中HMG-CoA还原酶抑制剂含有辛伐他汀。
20.权利要求17或18的方法，其中L-精氨酸含有缓释制剂。
21.权利要求17或18的方法，其中该方法提高内皮功能至少约5到约15％。
22.权利要求17或18的方法，其中该方法提高内皮功能至少约7到约12％。
23.权利要求17或18的方法，其中该受试者患有内皮功能异常。
24.增加不对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的受试者中一氧化氮(NO)产生的方法，该方法包括对该受试者施用L-精氨酸，其中L-精氨酸克服了ADMA的抑制作用。
25.增强不对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的受试者中血管舒张的方法，该方法包括对该受试者施用L-精氨酸，其中L-精氨酸克服了ADMA的抑制作用。
26.权利要求24或25的方法，其中该受试者患有内皮功能异常。
27.权利要求24或25的方法，其中L-精氨酸含有缓释制剂。
28.权利要求24或25的方法，其中该方法使内皮功能提高约5到约15％。
29.权利要求24或25的方法，其中该方法使内皮功能提高约6到约10％。
30.权利要求24或25的方法，其还包括对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂。
31.权利要求30的方法，其中HMG-CoA还原酶抑制剂含有辛伐他汀。
32.权利要求30的方法，其中施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸使内皮功能提高约5％到约15％。
33.权利要求30的方法，其中施用HMG-CoA还原酶抑制剂和L-精氨酸使内皮功能提高约7％到约12％。
34.缓释L-精氨酸组合物，该组合物含有(a)按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；(b)按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约2％到约20％微晶纤维素；(e)按重量计约3％以下的二氧化硅；和(f)按重量计约3％以下的硬脂酸镁。
35.权利要求34的组合物，其含有(a)按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；(b)按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约10％微晶纤维素；(e)按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅包含胶态二氧化硅；和(f)按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
36.制备L-精氨酸的缓释组合物的方法，该方法包括(a)用粒化剂粒化L-精氨酸以形成粒剂；(b)湿润碾磨该粒剂；(c)干燥该粒剂；(d)干燥碾磨该粒剂；和(e)将该粒剂与至少一种缓释剂混合。
37.权利要求36的方法，其中步骤(e)包括预混合、混合和最终混合粒剂的步骤。
38.权利要求36的方法，其还包括在粒化步骤前将L-精氨酸与结合剂干燥混合。
39.权利要求38的方法，其中结合剂含有聚乙烯吡咯烷酮。
40.权利要求36的方法，该方法包括(a)用包括聚乙烯吡咯烷酮的粒化剂粒化L-精氨酸，其中L-精氨酸按重量计为缓释制剂的约50％，其中聚乙烯吡咯烷酮按重量计为缓释制剂的约3％到约4％；(b)湿润碾磨该粒剂；(c)干燥该粒剂；(d)干燥碾磨该粒剂；和(e)将该粒剂与羟丙基甲基纤维素混合，其中羟丙基甲基纤维素按重量计为缓释制剂的约35％。
41.权利要求40的方法，该方法还包括将粒剂与微晶纤维素、胶态二氧化硅和硬脂酸镁混合，其中微晶纤维素按重量计为缓释制剂的约10％，其中胶态二氧化硅按重量计为缓释制剂的约1％以下，并且其中硬脂酸镁按重量计为缓释制剂的约1％以下。
42.用于治疗或预防血管疾病或失调的食物棒，该食物棒含有包含L-精氨酸的缓释制剂。
43.权利要求42的食物棒，其中缓释制剂含有L-精氨酸的缓释粒剂。
44.权利要求42的食物棒，其还含有HMG-CoA还原酶抑制剂。
45.权利要求42的食物棒，其中该食物棒当被受试者消费时降低胆固醇。
46.权利要求42的食物棒，其中该食物棒用于治疗或预防阿尔茨海默氏病。
47.权利要求42的食物棒，其中该食物棒用于治疗或预防间歇性跛行。
48.权利要求42的食物棒，其中该食物棒当被受试者消费时降低C-反应性蛋白。
49.预防或治疗受试者中血管疾病或失调的方法，该方法包括对受试者施用含有包含L-精氨酸的缓释制剂的食物棒。
50.降低受试者中胆固醇的方法，该方法包括对受试者施用含有包含L-精氨酸的缓释制剂的食物棒。
51.增加受试者中一氧化氮的方法，该方法包括对受试者施用含有包含L-精氨酸的缓释制剂的食物棒。
52.增强受试者中血管舒张的方法，该方法包括对受试者施用含有包含L-精氨酸的缓释制剂的食物棒。
53.预防或治疗受试者中阿尔茨海默氏病的方法，该方法包括对受试者施用含有包含L-精氨酸的缓释制剂的食物棒。
54.预防或治疗受试者中间歇性跛行的方法，该方法包括对受试者施用含有包含L-精氨酸的缓释制剂的食物棒。
55.降低受试者中C-反应性蛋白的方法，该方法包括对受试者施用含有包含L-精氨酸的缓释制剂的食物棒。
56.权利要求49到54任一项的方法，其中食物棒还含有HMG-CoA还原酶抑制剂。
57.权利要求56的方法，其中HMG-CoA还原酶抑制剂含有辛伐他汀。
58.降低受试者中胆固醇的方法，该方法包括对受试者施用含有L-精氨酸的缓释制剂。
59.权利要求58的方法，其中该方法降低受试者中总胆固醇和低密度脂蛋白(LDL)胆固醇。
60.权利要求58的方法，其中该方法使总胆固醇降低约50到约150mg/dL。
61.权利要求58的方法，其中该方法使总胆固醇降低约80到约100mg/dL。
62.权利要求58的方法，其中该方法使LDL胆固醇降低约40到约110mg/dL。
63.权利要求58的方法，其中该方法使LDL胆固醇降低约60到约100mg/dL。
64.权利要求58的方法，其中该方法使受试者中高密度脂蛋白(HDL)胆固醇增加。
65.权利要求58的方法，其中该方法使甘油三酯降低约30到约100mg/dL。
66.权利要求58的方法，其中该方法使甘油三酯降低约45到约75mg/dL。
67.权利要求58的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；(b)按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约2％到约20％微晶纤维素；(e)按重量计约3％以下的二氧化硅；和(f)按重量计约3％以下的硬脂酸镁。
68.权利要求67的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；(b)按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约10％微晶纤维素；(e)按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅包含胶态二氧化硅；和(f)按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
69.治疗或预防血管疾病或失调的方法，该方法包括对受试者施用缓释制剂，该缓释制剂含有(a)按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；(b)按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约2％到约20％微晶纤维素；(e)按重量计约3％以下的二氧化硅；和(f)按重量计约3％以下的硬脂酸镁。
70.权利要求69的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；(b)按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约10％微晶纤维素；(e)按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅包含胶态二氧化硅；和(f)按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
71.治疗或预防阿尔茨海默氏病的方法，该方法包括对受试者施用含有L-精氨酸的缓释制剂。
72.权利要求71的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；(b)按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约2％到约20％微晶纤维素；(e)按重量计约3％以下的二氧化硅，和(f)按重量计约3％以下的硬脂酸镁。
73.权利要求72的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；(b)按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约10％微晶纤维素；(e)按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅包含胶态二氧化硅；和(f)按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
74.治疗或预防间歇性跛行的方法，该方法包括对受试者施用含有L-精氨酸的缓释制剂。
75.权利要求74的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；(b)按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约2％到约20％微晶纤维素；(e)按重量计约3％以下的二氧化硅，和(f)按重量计约3％以下的硬脂酸镁。
76.权利要求75的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；(b)按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约10％微晶纤维素；(e)按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅包含胶态二氧化硅；和(f)按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
77.治疗或预防受试者中动脉粥样硬化的方法，该方法包括对受试者施用缓释制剂，该缓释制剂含有(a)按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；(b)按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约2％到约20％微晶纤维素；(e)按重量计约3％以下的二氧化硅，和(f)按重量计约3％以下的硬脂酸镁。
78.权利要求77的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；(b)按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约10％微晶纤维素；(e)按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅包含胶态二氧化硅；和(f)按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
79.增强受试者中血管舒张的方法，该方法包括对受试者施用缓释制剂，该缓释制剂含有(a)按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；(b)按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约2％到约20％微晶纤维素；(e)按重量计约3％以下的二氧化硅，和(f)按重量计约3％以下的硬脂酸镁。
80.权利要求79的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；(b)按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约10％微晶纤维素；(e)按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅包含胶态二氧化硅；和(f)按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
81.增加受试者中-氧化氮产生的方法，该方法包括对受试者施用缓释制剂，该缓释制剂含有(a)按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；(b)按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约2％到约20％微晶纤维素；(e)按重量计约3％以下的二氧化硅，和(f)按重量计约3％以下的硬脂酸镁。
82.权利要求81的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；(b)按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约10％微晶纤维素；(e)按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅包含胶态二氧化硅；和(f)按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
83.降低C-反应性蛋白的方法，该方法包括对受试者施用L-精氨酸。
84.权利要求83的方法，其中L-精氨酸包括缓释制剂。
85.权利要求83的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约25％到约75％L-精氨酸或其药学上可接受的盐；(b)按重量计约0.5％到约5％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约5％到约40％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约2％到约20％微晶纤维素；(e)按重量计约3％以下的二氧化硅，和(f)按重量计约3％以下的硬脂酸镁。
86.权利要求85的方法，其中缓释制剂含有(a)按重量计约50％L-精氨酸单盐酸盐，其中L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；(b)按重量计约3％到约4％聚乙烯吡咯烷酮；(c)按重量计约35％羟丙基甲基纤维素；(d)按重量计约10％微晶纤维素；(e)按重量计约1％以下的胶态二氧化硅，其中二氧化硅包含胶态二氧化硅；和(f)按重量计约1％以下的硬脂酸镁。
87.降低受试者中C-反应性蛋白的方法，该方法包括对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂和含有L-精氨酸的缓释制剂。
88.权利要求87的方法，其中该方法使C-反应性蛋白降低约10％到约50％。
89.权利要求87的方法，其中该方法使C-反应性蛋白降低约25％到约35％。
90.权利要求87的方法，其中该方法与当对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用含有L-精氨酸的缓释制剂时相比使C-反应性蛋白多降低约50％到约90％。
91.权利要求87的方法，其中该方法与当对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用含有L-精氨酸的缓释制剂时相比使C-反应性蛋白多降低约65％到约75％。
92.权利要求87的方法，其中该方法与当对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用含有L-精氨酸的缓释制剂时相比使C-反应性蛋白多降低约80％到约120％。
93.权利要求87的方法，其中该方法与当对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂而不施用含有L-精氨酸的缓释制剂时相比使C-反应性蛋白多降低约95％到约105％。
全文摘要
本发明提供了用于治疗和预防脑血管和心血管疾病和失调的方法和制剂。本发明至少部分基于如下发现，即对受试者施用含有内皮一氧化氮合酶(eNOS)的激动剂，如HMG－CoA还原酶抑制剂的制剂和含有NO前体，如L－精氨酸的制剂可用于治疗或预防脑血管和/或心血管疾病或失调。
文档编号A61K9/22GK1731985SQ200380107369
公开日2006年2月8日 申请日期2003年10月24日 优先权日2002年10月24日
发明者E·S·龙 申请人:恩诺斯药品公司