专利名称：谷氨酰胺果糖－6－磷酸酰胺转移酶(gfat)抑制剂的制作方法
糖尿病的特征在于外周抗胰岛素性、增加的葡萄糖产生和降低的胰岛素分泌水平。通常血清中的葡萄糖水平是升高的。而且，在进餐后血清葡萄糖水平较长时间地升高，并且以减慢的速度回到正常水平。尽管这些现象背后的生化和分子机理还没有得到清楚的说明，但是葡萄糖水平升高的后果却是众所周知的。游离的脂肪酸、甘油三酸酯和其它因素也可能直接导致葡萄糖水平的提高。
己糖胺路径已经被连接作为能够对抗胰岛素性、增加的葡萄糖产生和降低的胰岛素分泌起作用的生化路径之一。己糖胺路径涉及UDP-GlcNAc的合成。葡萄糖被依次转化成果糖-6-磷酸酯，葡糖胺-6-磷酸酯，并且最终转化成UDP-GlcNAc。UDP-GlcNAc一经合成，就结合到各种含糖大分子中，这些大分子中许多是关键的细胞组分。另外，UDP-GlcNAc是酶OGT、O-连接的GlcNAc转移酶的底物，后一种酶在细胞中催化GlcNAc残基向各种蛋白的转移，包括细胞质蛋白，核蛋白，膜蛋白和转录因子。在这种情况下，这些蛋白的活性可以被显著调节。该路径的限速酶是谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶(GFAT)，这种酶催化酰氨基转移和果糖-6-磷酸酯异构化成葡糖胺-6-磷酸。GFAT被认为可能涉及糖尿病症状的发展，因为GFAT转基因小鼠有抗胰岛素性。导致抗胰岛素性的生化路径包括PKC的活化，膜组分的改变，转录活性的改变以及其它仍需阐明的生化机理。
GFAT水平在2型糖尿病患者(T2DM)和啮齿动物T2DM模型中是升高的。GFAT转基因小鼠(具体到肌肉，肝，脂肪和胰)都是抗胰岛素的和血胰岛素过多的。葡糖胺和己糖胺路径的产物造成了抗胰岛素性、增加的肝葡萄糖输出和降低的胰岛素分泌。GFAT可以在T2DM肾并发症中起作用。GFAT是己糖胺路径中的限速酶，而降低GFAT酶活性应导致葡萄糖水平的降低，这对治疗糖尿病是有益的。
已知类别的GFAT抑制剂是类似底物的或非类似底物的，并且据信通过可逆的或不可逆的(共价)机理起抑制作用。GFAT的两种底物是糖类，果糖-6-磷酸，和氨基酸，谷氨酰胺。类似果糖-6-磷酸的抑制剂包括N-碘代乙酰基葡糖胺-6-磷酸(S.L.Bearne，J.Biol.Chem.，271，3052-3057(1996))，和2-氨基-2-脱氧葡萄糖醇-6-磷酸酯(M.-A.Badet-Denisot，C.Leriche，F.Massiere和B.Badet，Bioorg.Med.Chem.Letters，5，815-820(1995))。类似谷氨酰胺或基于谷氨酰胺的抑制剂包括谷氨酸-γ-半醛(S.L.Bearne和R.Wolfenden，Biochem.，34，11515-11520(1995))，L-γ-谷氨酰基-2-[((对-二氟甲基)苯基)硫代]-甘氨酸(F.Massiere，M.-A.Badet-Denisot，L.Rene和B.Badet，J.Amer.Chem.Soc.，119，5748-5749(1997))，抗荚膜菌素(H.Chmara，J.Gen.Microbiol.，131，265-271(1985))，6-重氮基-5-氧代-正亮氨酸(DON)，重氮丝氨酸和N3-卤代乙酰基-L-2，3-二氨基丙酸(其中卤代基＝I、Br和Cl)(S.Milewski，H.Chmara，R.Andruszkiewicz和E.Borowski，Biochim.Biophys.Acta，1115，225-229(1992))。
罂粟啶(CA索引名称甲酮(6，7-二甲氧基-1-异喹啉基)(3，4-二甲氧基苯基)-(9Cl))表现出可能具有治疗心脏病的潜在用途的性质。(Anselmi，Elsa等，″Selective inhibition of calcium entry induced by benzylisoquinolines in ratsmooth muscle″，J.Pharm.Pharmacol.(1992)，44(4)，337-43；Markwardt，Fritz等，″Influence of 6，7-dimethoxyisoquinoline derivatives on the function ofthrombocytes″，Acta Biologica et Medica Germanica，(1969)，23(2)，295-306)。
发明概述本发明提供式(I)化合物，
R1是-COOH，-低级烷基-COOH，-低级醇，-CH2OCH3，-CH2NH2，-CH2NHSO2R7，-C(＝O)R8，-CNHCH2CH2-R8，-C(＝NH)-R8，-(CH2)nNHC(＝O)R9，-(CH2)mC(＝O)N(R11)(R12)，-C(＝NH)-R13或-(CH2)n-R14；R2是 其中X是-CH或-N；R3、R4、R5和R6各自选自以下基团组成的组-H，-低级烷基，-N(CH3)2，-N(CH3)CH2CH3，-N(CH2CH3)CH2CH3，-卤代基，-O-低级烯基，-低级烷氧基，-O-低级醇，和-O(CH2)n-环烷基；或者其中R5和R6是位于相邻环碳原子上的取代基，任选R5和R6与它们所连的碳原子一起形成5或6元饱和碳环；R7是-CF3，-低级烷基，-CH2Cl，-CH2CF3或-R8；R8是5或6元饱和的取代或未取代的杂环，所述杂环含有选自N、O和S的一个杂原子，其中所述的取代的环是被-OH或-苯基取代的杂环；R9是-低级烷基，-低级烷氧基或-(CH2)nR10；R10是含有选自N和O的一个或两个杂原子的5或6元饱和或不饱和杂环；R11是-H或-CH3；R12是-H，-低级烷基，-C≡N，-OH，-低级烷氧基或-CH2COOCH2CH3；R13是-低级烷氧基，-NH2或-N-低级烷基；R14是饱和或不饱和的取代或未取代的5元杂环，该杂环含有1至4个杂原子，其中杂原子选自N、O和S，其中所述的取代的环是在一个或两个环碳处被＝O取代的杂环，或者在环N处被-低级醇或-低级烷基取代的杂环；m是0、1或2；n是0或1；或其可药用的盐或酯。
本发明的化合物是可用于治疗II型糖尿病的GFAT抑制剂。
发明详述本发明提供式(I)化合物，
R1是-COOH，-低级烷基-COOH，-低级醇，-CH2OCH3，-CH2NH2，-CH2NHSO2R7，-C(＝O)R8，-CNHCH2CH2-R8，-C(＝NH)-R8，-(CH2)nNHC(＝O)R9，-(CH2)mC(＝O)N(R11)(R12)，-C(＝NH)-R13或-(CH2)n-R14；R2是 其中X是-CH或-N；R3、R4、R5和R6各自选自以下基团组成的组-H，-低级烷基，-N(CH3)2，-N(CH3)CH2CH3，-N(CH2CH3)CH2CH3，-卤代基，-O-低级烯基，-低级烷氧基，-O-低级醇，和-O(CH2)n-环烷基；或者其中R5和R6是位于相邻环碳原子上的取代基，任选R5和R6与它们所连的碳原子一起形成5或6元饱和碳环；R7是-CF3，-低级烷基，-CH2Cl，-CH2CF3或-R8；R8是5或6元饱和的取代或未取代的杂环，所述杂环含有选自N、O和S的一个杂原子，其中所述的取代的环是被-OH或-苯基取代的杂环；R9是-低级烷基，-低级烷氧基或-(CH2)nR10；R10是含有选自N和O的一个或两个杂原子的5或6元饱和或不饱和杂环；R11是-H或-CH3；
R12是-H，-低级烷基，-C≡N，-OH，-低级烷氧基或-CH2COOCH2CH3；R13是-低级烷氧基，-NH2或-N-低级烷基；R14是饱和或不饱和的取代或未取代的5元杂环，该杂环含有1至4个杂原子，其中杂原子选自N、O和S，其中所述的取代的环是在一个或两个环碳处被＝O取代的杂环，或者在环N处被-低级醇或-低级烷基取代的杂环；m是0、1或2；n是0或1；或其可药用的盐或酯。
本发明的化合物是可用于治疗II型糖尿病的GFAT抑制剂。
此处使用的如下术语阐明了用于描述本发明的各种术语的范围和含义。术语“低级”用于表示含有1到6个碳原子，优选1到4个碳原子的基团。
“环烷基”是指含有3到7个碳原子的、非芳香族的、部分或完全饱和的环状烃基。环烷基的实例包括环丙基，环丁基，环戊基和环己基。
术语“卤素”和术语“卤代基”或“杂原子”，除非另外声明，指的是所有四种卤素，即氟、氯、溴和碘。
“低级烷基”包括含有1到7个碳原子、优选1到4个碳原子的直链和支链烷基。典型的低级烷基包括甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，叔丁基，2-丁基，戊基和己基。当结合到另一官能团上时，此处使用的低级烷基可以是二价的，例如-低级烷基-COOH。
“低级烷氧基”是指式-O-低级烷基的基团，其中术语“低级烷基”具有先前所给的含义。典型的低级烷氧基包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，异丁氧基，仲丁氧基和叔丁氧基。
“低级醇”是指至少一个氢在包括末端的任意位点上被羟基取代的-低级烷基。典型的低级醇包括乙醇，异丙醇和正丙醇。
“低级烯基”是指含有至少3C原子的-低级烷基，其中至少一个从-低级烷基至少第二个碳开始的两个碳原子之间的键是双键，并且这些碳原子每一个上的至少一个氢原子不存在。因此低级烯基是至少部分不饱和的。典型的低级烯基包括2-丙烯，3-甲基-2-丁烯和2，3-二甲基-2-丁烯。
“芳基”表示苯基。此处显示的芳基可以在一个或多个位置上被指定的一个或多个取代基取代。更具体地，单独的或者组合的术语“芳基”表示苯基，或者任选携带一个或多个、优选1至3个取代基的苯基，每个取代基独立地选自卤素，三氟甲基，三氟甲氧基，氨基，烷基，烷氧基，烷基羰基，氰基，氨基甲酰基，烷氧基氨基甲酰基，亚甲二氧基，羧基，烷氧羰基，氨基羰基，烷基氨基羰基，二烷基氨基羰基，羟基，硝基，烷基-SO2-，氨基-SO2-，环烷基等。特别优选苯基。
“杂芳基”是指含有至少一个选自N、O和S的杂原子的5或6元不饱和的，特别是芳族杂环。此处所示的杂芳基在一个或多个位置处可以被指定的一个或多个取代基取代。
“IC50”是指用此处所示的测量方法测量的50％的体外GFAT活性被抑制所需的本发明特定化合物的浓度。
“可药用的盐”是指保持了式I化合物生物效力和性质的常规酸加成盐或碱加成盐，这些盐是从合适的无毒有机或无机酸、或者有机或无机碱形成的。酸加成盐的实例包括那些衍生自无机酸的盐，所述无机酸如盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸和硝酸，以及衍生自有机酸的盐，所述有机酸如对甲苯磺酸，水杨酸，甲磺酸，草酸，琥珀酸，柠檬酸，苹果酸，乳酸，富马酸等。碱加成盐的实例包括衍生自铵，钾，钠和季铵的氢氧化物的盐，例如衍生自氢氧化四甲基铵的盐。将药物化合物(即药物)化学改性成盐是众所周知的技术，该技术用于改善包括物理或化学稳定性的性质，例如化合物的吸湿性，流动性或溶解度。参见例如H.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems，(第6版，1995)196和1456-1457页。
“可药用的”，如可药用的载体、赋形剂等，是指药学上可接受的，并且对特定化合物给药的对象基本上无毒。
“可药用的酯”是指含有羧基的式I化合物的常规酯化物，该酯保持了式I化合物的生物效力和性质，并且在体内(有机体内)分解成相应的活性羧酸。本发明中，酯可以是以，例如，其中R1是-COOH或-低级烷基-COOH的形式存在的。在体内分解成相应羧酸(在水解情况下)的酯基实例是这样的酯基，其中断开的氢被-低级烷基取代，所述-低级烷基被杂环、环烷基等任选取代。取代的低级烷基酯的实例是其中-低级烷基被吡咯烷、哌啶、吗啉、N-甲基哌嗪等取代的烷基酯。
关于用于输送药物化合物的酯的实例和用途的更多信息，可查阅Design of Prodrugs，Bundgaard H.编辑，(Elsevier，1985)。还可参见H.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(1995年第6版)108-109页；Krogsgaard-Larsen等，Textbook of Drug Design andDevelopment(1996年第二版)152-191页。
本申请通过引用以全文形式结合了美国临时申请No.60/471,690，该临时申请于2003年5月19日提交，标题为Glutamine Fructose-y-PhosphateAmedotransferase(GFAT)Inhibitors。
本发明还提供包含至少一种式I化合物，或其可药用盐，以及可药用载体的药物组合物。
药物组合物可以口服给药，例如以片剂，包衣片剂，糖锭剂，硬或软明胶胶囊，溶液，乳剂或悬浮剂形式口服。还可以进行直肠给药，例如以栓剂形式，或者可以肠胃外给药，例如以注射液形式。
包含式I化合物和/或其盐或酯的本发明药物组合物可以用本领域已知的方式制造，例如常规的混合，装胶囊，溶解，造粒，乳化，包载，制糖锭或冻干方法。可以将这些药物制剂和治疗惰性的无机或有机载体复配。可以使用乳糖，玉米淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸或其盐等，作为用于片剂、包衣片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊的这种载体。软明胶胶囊的合适载体包括植物油，蜡和脂肪。根据活性物质的性质，软明胶胶囊通常不需要载体。在这种情况下，据信可药用载体是软明胶胶囊。制造溶液或糖浆的合适载体是水，多元醇，蔗糖，转化糖和葡萄糖。注射剂的合适载体是水，醇类，多元醇，甘油，植物油，磷脂和表面活性剂。栓剂的合适载体是天然或硬化油，蜡，脂肪和半液体多元醇。
药物制剂还可以包含防腐剂，增溶剂，稳定剂，湿润剂，乳化剂，甜味剂，着色剂，芳香剂，用于改变渗透压的盐，缓冲剂，涂层剂或抗氧化剂。它们还可以包含其它有治疗价值的物质，包括式I化合物以外的另外的活性成分。
本发明的化合物可用作治疗II型糖尿病的药物。治疗有效量的确定属于本领域的技术。
根据本发明的化合物的治疗有效量或剂量可以在宽限度内变化并且可以用本领域已知的方式确定。这样的剂量在每个具体病例中将被调整以适应个体需要，包括给药的具体化合物，给药途径，治疗的病情，以及受治患者的情况。通常，在向体重约70Kg的成年人口服或肠胃外给药的情况下，日剂量为约10mg到约1,000mg每天应当是合适的，尽管遵医嘱可以超过其上限。日剂量可以以单剂量或分剂量形式给药，或者对于肠胃外给药，可以以连续灌输方式给药。
优选根据式I的化合物，其中R1是-COOH，低级烷基-COOH，(CH2)nNHC(＝O)R9，-CH2NHSO2R7或-(CH2)n-R14。
更优选的是式I化合物，其中R1是-COOH，-低级烷基-COOH，其中-低级烷基-COOH是-CH2COOH或-(CH2)n-R14。
本发明另一优选的方面是式I化合物，其中R1是-COOH或-(CH2)n-R14，并且R14是未取代的杂环。
还优选式I化合物，其中R1是四唑。
更优选那些式I化合物，其中R1是-(CH2)nNHC(＝O)R9或-CH2NHSO2R7。
本发明更优选的实施方案是式I化合物，其中R9是低级烷基。
还优选的是那些式I化合物，其中R7是-CF3。
本发明另一优选的方面是那些式I化合物，其中R2是 更优选的是那些式I化合物，其中X是-CH。
本发明另一优选的方面是式I化合物，其中X是-N。
更优选的是那些式I化合物，其中
R1是-(CH2)nR14并且其中R14是未取代的环，-COOH，-CH2COOH，-低级醇，-CH2OCH3或-CH2NH2；R2是 其中X是-CH或-N；R3、R4、R5和R6各自选自-H，-低级烷氧基，-N(CH3)CH3，-低级烷基和-O-低级烯基；或者其中R5和R6是位于相邻环碳原子上的取代基，任选R5和R6与它们所连的C原子一起形成5或6元饱和碳环。
更优选的是式I化合物。其中-低级烷基是甲基，-低级醇是-甲醇，-低级烷氧基是-甲氧基，并且-低级烷基-COOH是-CH2-COOH。
本发明另一优选的方面是式I化合物，其中R3、R4、R5和R6各自选自-H，含有1至4个碳原子的-低级烷基，-N(CH3)2，含有1至4个碳原子的-低级烷氧基，-卤代基和含有1至4个碳原子的-O-低级烯基；或者其中R5和R6是位于相邻环碳原子上的取代基，任选R5和R6与它们所连的C原子一起形成6元饱和碳环。
更优选选自以下化合物的式I化合物(萘-2-基)-[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-甲酮，和(萘-1-基)-[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-甲酮，或者它们的可药用盐。
优选的式I化合物选自-喹啉-3-基-甲酮，和[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-喹啉-8-基-甲酮，或者它们的可药用盐。
还优选的根据式I的化合物选自[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(4-甲氧基-萘-1-基)-甲酮，[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(4-二甲基氨基-萘-1-基)-甲酮，[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(4-甲基-萘-1-基)-甲酮，(2-烯丙氧基-萘-1-基)-[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-甲酮，[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(7-甲基-萘-2-基)-甲酮，[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(1，2，3，4-四氢-菲-9-基)-甲酮，和[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(2-甲氧基-萘-1-基)-甲酮；或者它们的可药用盐。
更优选的式I化合物选自1-(4-二甲基氨基-萘-1-羰基)-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-羧酸，和1-(4-甲氧基-萘-1-羰基)-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-羧酸，和6，7-二甲氧基-1-(1，2，3，4-四氢-菲-9-羰基)-异喹啉-4-羧酸；或者它们的可药用盐。
此外，优选的是如下根据式I的化合物6，7-二甲氧基-1-(萘-1-羰基)-异喹啉-4-羧酸，或者它们的可药用盐。
更优选的是制备根据权利要求1至19任何一项的化合物的方法，该方法包括a)下式的化合物， 在NaN3和NH4Cl并且优选DMF存在下的反应，以得到下式的化合物，
其中R2’是 X是CH或N；R3’是H或CH3；R5’是H，OCH3或OCH2CH＝CH2；R6’是H，OCH3，N(CH3)2或CH3；或者b)下式的化合物， 在碱，优选NaOH存在下，特别是在EtOH和H2O存在下的反应，以获得下式的化合物，
其中R2”是 并且R4”是H，OCH3或N(CH3)2。
还优选的是根据上述方法制造的式I化合物。
更优选的是用作治疗活性物质的根据式I的化合物。
还优选的是用于制备药物的式I化合物，所述药物用于预防和治疗II型糖尿病。
本发明的另一优选方面是包含式I化合物和治疗惰性载体的药物组合物。
更优选的是式I化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和预防II型糖尿病。
此外，优选的是治疗患者的II型糖尿病的方法，所述患者需要这种治疗，该方法包括以约10mg至约1,000mg/天的量，将治疗有效量的式I化合物或者其可药用盐向患者给药。
本发明的化合物可以如所指出的或者用本领域技术人员已知的方法制备。
通用合成方案方案1
方案3
实施例1(萘-2-基)-[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-甲酮，三氟乙酸盐 向高藜芦腈(17.7g，0.1mol)和甲醇钠(7.7g，0.11mol)在乙醚(300mL)中的混合物中加入甲酸乙酯(8.2mL)的乙醚(100mL)溶液。将混合物剧烈搅拌3天。过滤沉淀的固体，用乙醚洗涤。将固体溶解在水(100mL)中。在加入10％乙酸使pH＝3后，过滤收集得到的沉淀物，用水洗涤并且干燥，得到2-(3，4-二甲氧基苯基)-3-氧代-丙腈白色固体(19g，93％)。C11H11NO3(MH+)的LC-MS m/e计算值为206，实测206。
向2-(3，4-二甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈(20.5g，0.1mol)、氨基甲酸乙酯(8.9g，0.1mol)在甲苯(400mL)中的混合物中加入浓硫酸(0.5mL，10mmol)。将混合物回流，并且通过缓慢蒸馏浓缩至体积约50mL。将冷却的混合物过滤，沉淀物用苯洗涤并且干燥。用快速色谱法(Merck硅胶60，70-230目，20％二氯甲烷)得到[2-氰基-2-(3，4-二甲氧基-苯基)-乙烯基]-氨基甲酸乙酯固体C14H16N2O4(MH+)的LC-MS m/e计算值为277，实测277。1H NMR(300MHz)相符。
将浓硫酸(0.4mL)加入到[2-氰基-2-(3，4-二甲氧基-苯基)-乙烯基]-氨基甲酸乙酯(33.5g，121mmol)和二苯醚(230mL)的混合物中。将混合物加热至230℃6小时。冷却后，加入乙醚以沉淀固体。将得到的固体通过过滤收集，用乙醚洗涤并且干燥，得到6，7-二甲氧基-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-4-腈(20.7g，74.1％)棕色固体，将该产物不经进一步纯化直接使用。C12H10N2O3(MH+)的LC-MS m/e计算值为231，实测231。
将6，7-二甲氧基-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-4-腈(8g，35mmol)和三溴氧化磷(70g，244mmol)在茴香醚(30mL)中的混合物加热至80℃12小时。用旋转蒸发仪除去溶剂和过量的POBr3。得到的固体用己烷洗涤并且干燥。将固体缓慢加入到冰中，并且用氯仿萃取产物。将有机层用饱和碳酸钠水溶液、饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并且真空浓缩，得到棕色固体。用快速色谱法(Merck硅胶60，70-230目，二氯甲烷)得到1-溴-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-腈(7.5g，75％)棕色固体。C12H9BrN2O2(MH+)的LC-MS m/e计算值为293，实测293。
将氢化钠(11mg，0.26mmol)加入到搅拌着的1-溴-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-腈(50mg，0.17mmol)、2-萘甲醛(40.6mg，0.26mmol)、1，3-二甲基咪唑鎓碘化物(16mg，0.26mmol)在DMF(2mL)中的混合物中。反应混合物变成暗色。1小时后，向上述混合物中加入水(4mL)，并且用氯仿(6mL)萃取。萃取物用水(4mL)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并且真空浓缩，得到固体，将该固体不经进一步纯化直接使用。
将上述固体(0.17mmol)、叠氮化钠(34mg，0.51mmol)和氯化铵(27mg，0.51mmol)在DMF(2mL)中的混合物在100℃搅拌24小时。在除去溶剂后，将粗产物直接用HPLC纯化(反相C18，10％-90％乙腈水溶液，10分钟)，得到固体状的所需产物。C22H16N6O3(MH+)的LC/MS m/e计算值为412，实测412。
实施例2[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-喹啉-3-基-甲酮，三氟乙酸盐 类似于实施例1，不同之处在于使用3-喹啉甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C22H16N6O3(MH+)的LC/MS m/e计算值为413，实测413。
实施例3[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(4-甲氧基-萘-1-基)-甲酮，三氟乙酸盐 类似于实施例1，不同之处在于，使用4-甲氧基-1-萘甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C24H19N5O4(MH+)的LC/MS m/e计算值为442，实测442。
实施例4[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(4-二甲基氨基-萘-1-基)-甲酮，三氟乙酸盐 类似于实施例1，不同之处在于，使用4-二甲基氨基-1-萘甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C25H22N6O3(MH+)的LC/MS m/e计算值455，实测455。
实施例5(萘-1-基)-[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-甲酮，三氟乙酸盐
类似于实施例1，不同之处在于，使用1-萘甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C23H17N5O3(MH+)的LC/MS m/e计算值为412，实测412。
实施例6[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(4-甲基-萘-1-基)-甲酮，三氟乙酸盐 类似于实施例1，不同之处在于，使用4-甲基-1-萘甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C24H19N5O3(MH+)的LC/MS m/e计算值为426，实测426。
实施例7(2-烯丙氧基-萘-1-基)-[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-甲酮，三氟乙酸盐
类似于实施例1，不同之处在于，使用2-烯丙氧基-1-萘甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C26H21N5O4(MH+)的LC/MS m/e计算值为468，实测468。
实施例8[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(7-甲基-萘-2-基)-甲酮，三氟乙酸盐 类似于实施例1，不同之处在于，使用7-甲基-2-萘甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C24H19N5O3(MH+)的LC/MS m/e计算值为426，实测426。
实施例9[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-喹啉-8-基-甲酮，三氟乙酸盐
类似于实施例1，不同之处在于，使用8-喹啉甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C22H16N6O3(MH+)的LC/MS m/e计算值为413，实测413。
实施例10[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(1，2，3，4-四氢-菲-9-基)-甲酮，三氟乙酸盐 类似于实施例1，不同之处在于，使用9-(1，2，3，4-四氢-菲甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C27H23N5O3(MH+)的LC/MS m/e计算值为466，实测466。
实施例11[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(2-甲氧基-萘-1-基)-甲酮，三氟乙酸盐
类似于实施例1，不同之处在于，使用2-甲氧基-1-萘甲醛(0.26mmol)代替2-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C24H19N5O4(MH+)的LC/MS m/e计算值为442，实测442。
实施例121-(4-二甲基氨基-萘-1-羰基)-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-羧酸，三氟乙酸盐 将氢化钠(11mg，0.26mmol)加入到搅拌的1-溴-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-腈(参见实施例1)(50mg，0.17mmol)、4-二甲基氨基-1-萘甲醛(51.8mg，0.26mmol)、1，3-二甲基咪唑鎓碘化物(16mg，0.26mmol)在DMF(2mL)中的混合物中。反应混合物变成暗色。1小时后，向上述混合物中加入水(4mL)，并且用氯仿(6mL)萃取。将萃取物用水(4mL)洗涤，硫酸钠干燥，过滤并且真空浓缩，得到固体。经快速色谱(Merck硅胶60，70-230目，0-40％EtOAc的二氯甲烷溶液，30分钟)，得到1-(4-二甲基氨基-萘-1-羰基)-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-腈(31mg，41％)白色固体。C21H18N2O5(MH+)的LC-MS m/e计算值为379，实测379。
向1-(4-二甲基氨基-萘-1-羰基)-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-腈(31mg，0.082mmol)的甲醇(2mL)悬浮液中加入25％的氢氧化钠水溶液(0.27mL，1.68mmol)。将混合物在90℃搅拌12小时。在冷却至室温后，用2N HCl溶液将反应物调节至pH＝2。产物用氯仿(2×200mL)萃取。将合并的有机层用水(3×50mL)洗涤，硫酸钠干燥，过滤并且真空浓缩。粗产物直接用HPLC纯化(反相C18，10％-90％乙腈水溶液，10分钟)，得到固体形式的所需产物1-(4-二甲基氨基-萘-1-羰基)-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-羧酸(9mg)。C25H22N2O5(MH+)的LC/MS m/e计算值为431，实测431。
实施例131-(4-甲氧基-萘-1-羰基)-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-羧酸，三氟乙酸盐 类似于实施例12，不同之处在于，使用4-甲氧基-1-萘甲醛(0.26mmol代替4-二甲基氨基-1-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C24H19NO6(MH+)的LC/MS m/e计算值为418，实测418。
实施例146，7-二甲氧基-1-(1，2，3，4-四氢-菲-9-羰基)-异喹啉-4-羧酸，三氟乙酸盐 类似于实施例12，不同之处在于，使用9-(1，2，3，4-四氢-菲甲醛(0.26mmol)代替4-二甲基氨基-1-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C27H23NO5(MH+)的LC/MS m/e计算值为442，实测442。
实施例156，7-二甲氧基-1-(萘-1-羰基)-异喹啉-4-羧酸 类似于实施例12，不同之处在于，使用1-萘甲醛(0.26mmol)代替4-二甲基氨基-1-萘甲醛(0.26mmol)，得到固体产物。C23H17NO5(MH+)的LC/MS m/e计算值为388，实测388。
实施例16体外GFAT试验酶的制备将用GFAT-α或GFAT-β转染的，生长至90％汇合的COS细胞，破碎到含有PBS 100mM，KCl 50mM，EDTA 10mM和蛋白酶抑制剂亮抑蛋白酶肽、A-protinin、PMSF &胃蛋白酶抑制剂的缓冲液中。最终浓度为4×10-7细胞/ml。将其在冰上以3-4ml的体积用设置4的microtip探头超声处理15秒。
温育缓冲液制备缓冲液，该缓冲液包含谷氨酰胺(8mM，0.01ml)，6-磷酸果糖(100mM，0.01ml)，PBS 10X(0.01ml)，EDTA(50mM，0.01ml)，±抑制剂(0.01ml)，酶(0.005ml)和水(稀释到0.10ml)。
方法在100％DMSO中配制抑制剂，在微量滴定盘中稀释。然后将抑制剂和DMSO一起加入到试验平板中作为对照。制备反应混合物，包括足以形成标准曲线的样品，并保持在冰上。将90μl混合液加入到96孔板上开始反应。将该板用粘着性平板密封材料覆盖，并在37℃水浴中放置60分钟。应当小心以确保在板下不形成气泡。温育后，将10μl在DMSO中配制的6-磷酸葡糖胺标准物加入到标准曲线孔中。2.5到30纳摩尔的浓度范围是该曲线的线性部分，并且覆盖了生产的6-磷酸葡糖胺的量。将含有酶的冷的温育混合液加入到对照和标准曲线孔中。然后通过加入10μl乙酸酐的1.5％丙酮溶液，随后加入50μl四硼酸钾(200mM)，将6-磷酸葡糖胺乙酰化。将该板用新的盖子密封，并在微振荡器上振荡2分钟。将该板在80℃水浴中放置25分钟。然后将该板在冰上放置5分钟。向孔中加入130μl Ehrlich试剂，将该板在37℃水浴中放置20分钟。然后将该板在585nm处读数。用softmax程序从标准曲线内插ODs，得到产生的纳摩尔数。
本发明化合物具有IC50在1nM和100μM之间的、优选在10nM和20μM之间的GFAT抑制剂活性。
制备实施例13显示以下的IC50值GFAT-αIC50＝8μM和GFAT-βIC50＝3.25μM。
权利要求
1.一种式(I)化合物， R1是-COOH，-低级烷基-COOH，-低级醇，-CH2OCH3，-CH2NH2，-CH2NHSO2R7，-C(＝O)R8，-CNHCH2CH2-R8，-C(＝NH)-R8，-(CH2)nNHC(＝O)R9，-(CH2)mC(＝O)N(R11)(R12)，-C(＝NH)-R13或-(CH2)n-R14；R2是 或 其中X是-CH或-N；R3、R4、R5和R6各自选自以下基团组成的组-H，-低级烷基，-N(CH3)2，-N(CH3)CH2CH3，-N(CH2CH3)CH2CH3，-卤代基，-O-低级烯基，-低级烷氧基，-O-低级醇，和-O(CH2)n-环烷基；或者其中R5和R6是位于相邻环碳原子上的取代基，任选R5和R6与它们所连的碳原子一起形成5或6元饱和碳环；R7是-CF3，-低级烷基，-CH2Cl，-CH2CF3或-R8；R8是5或6元饱和的取代或未取代的杂环，所述杂环含有选自N、O和S的一个杂原子，其中所述的取代的环是被-OH或-苯基取代的杂环；R9是-低级烷基，-低级烷氧基或-(CH2)nR10；R10是含有选自N和O的一个或两个杂原子的5或6元饱和或不饱和杂环；R11是-H或-CH3；R12是-H，-低级烷基，-C≡N，-OH，-低级烷氧基或-CH2COOCH2CH3；R13是-低级烷氧基，-NH2或-N-低级烷基；R14是饱和或不饱和的取代或未取代的5元杂环，该杂环含有1至4个杂原子，其中杂原子选自N、O和S，其中所述的取代的环是在一个或两个环碳处被＝O取代的杂环，或者在环N处被-低级醇或-低级烷基取代的杂环；m是0、1或2；n是0或1；或其可药用的盐或酯。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1是-COOH，低级烷基-COOH，(CH2)nNHC(＝O)R9，-CH2NHSO2R7或-(CH2)n-R14。
3.根据权利要求1或2的化合物，其中R1是-COOH，-低级烷基-COOH，其中-低级烷基-COOH是-CH2COOH或-(CH2)n-R14。
4.根据权利要求1至3中任何一项的化合物，其中R1是-COOH或-(CH2)n-R14，并且R14是未取代的杂环。
5.根据权利要求1至4中任何一项的化合物，其中R1是四唑。
6.根据权利要求1或2的化合物，其中R1是-(CH2)nNHC(＝O)R9或-CH2NHSO2R7。
7.根据权利要求1、2或6中任何一项的化合物，其中R9是低级烷基。
8.根据权利要求1、2、6或7中任何一项的化合物，其中R7是-CF3。
9.根据权利要求1至8中任何一项的化合物，其中R2是 或
10.根据权利要求1至9中任何一项的化合物，其中X是-CH。
11.根据权利要求1至9中任何一项的化合物，其中X是-N。
12.根据权利要求1至11中任何一项的化合物，其中R1是-(CH2)nR14，其中R14是未取代的环，-COOH，-CH2COOH，-低级醇，-CH2OCH3或-CH2NH2；R2是 或 其中X是-CH或-N；R3、R4、R5和R6各自选自-H，-低级烷氧基，-N(CH3)CH3，-低级烷基和-O-低级烯基；或者其中R5和R6是位于相邻环碳原子上的取代基，任选R5和R6与它们所连的C原子一起形成5或6元饱和碳环。
13.根据权利要求1至12中任何一项的化合物，其中-低级烷基是甲基，-低级醇是-甲醇，-低级烷氧基是-甲氧基，并且-低级烷基-COOH是-CH2-COOH。
14.根据权利要求1至13中任何一项的化合物，其中R3、R4、R5和R6各自选自-H，含有1至4个碳原子的-低级烷基，-N(CH3)2，含有1至4个碳原子的-低级烷氧基，-卤代基和含有1至4个碳原子的-O-低级烯基；或者R5和R6是位于相邻环碳原子上的取代基，任选R5和R6与它们所连的C原子一起形成6元饱和碳环。
15.根据权利要求1至14中任何一项的化合物，所述化合物选自(萘-2-基)-[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-甲酮，和(萘-1-基)-[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-甲酮，或者它们的可药用盐。
16.根据权利要求1至14中任何一项的化合物，所述化合物选自[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-喹啉-3-基-甲酮，和[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-喹啉-8-基-甲酮，或者它们的可药用盐。
17.根据权利要求1至14中任何一项的化合物，所述化合物选自[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(4-甲氧基-萘-1-基)-甲酮，[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(4-二甲基氨基-萘-1-基)-甲酮，[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(4-甲基-萘-1-基)-甲酮，(2-烯丙氧基-萘-1-基)-[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-甲酮，[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(7-甲基-萘-2-基)-甲酮，[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(1，2，3，4-四氢-菲-9-基)-甲酮，和[6，7-二甲氧基-4-(1H-四唑-5-基)-异喹啉-1-基]-(2-甲氧基-萘-1-基)-甲酮；或者它们的可药用盐。
18.根据权利要求1至14中任何一项的化合物，所述化合物选自1-(4-二甲基氨基-萘-1-羰基)-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-羧酸，和1-(4-甲氧基-萘-1-羰基)-6，7-二甲氧基-异喹啉-4-羧酸，和6，7-二甲氧基-1-(1，2，3，4-四氢-菲-9-羰基)-异喹啉-4-羧酸；或者它们的可药用盐。
19.根据权利要求1至14中任何一项的化合物，其中所述的化合物是6，7-二甲氧基-1-(萘-1-羰基)-异喹啉-4-羧酸或其可药用盐。
20.一种制备根据权利要求1至19任何一项的化合物的方法，该方法包括a)下式的化合物， 在NaN3和NH4Cl存在下的反应，以得到下式的化合物， 其中R2’是 或 X是CH或N；R3’是H或CH3；R5’是H，OCH3或OCH2CH＝CH2；R6’是H，OCH3，N(CH3)2或CH3；或者b)下式的化合物， 在碱存在下的反应，以获得下式的化合物， 其中R2”是 或 并且R4”是H，OCH3或N(CH3)2。
21.用作治疗活性物质的根据权利要求1至19中任何一项的化合物。
22.用于制备药物的根据权利要求1至19中任何一项的化合物，所述药物用于预防和治疗II型糖尿病。
23.一种药物组合物，该药物组合物包含根据权利要求1至19中任何一项的化合物和治疗惰性载体。
24.根据权利要求1至19中任何一项的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和预防II型糖尿病。
25.用权利要求20的方法制造的根据权利要求1至19中任何一项的化合物。
26.一种治疗患者II型糖尿病的方法，所述患者需要这种治疗，该方法包括以约10mg至约1,000mg/天的量，将治疗有效量的根据权利要求1至19中任何一项的化合物或者其可药用盐向患者给药。
27.如上所述的本发明。
全文摘要
提供式(I)的化合物，其中R
文档编号A61K31/47GK1867559SQ200480029835
公开日2006年11月22日 申请日期2004年10月7日 优先权日2003年10月16日
发明者戴维·罗伯特·博林, 陈少清, 史蒂文·格雷戈里·米施克, 钱义民 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司