专利名称：一种抗肿瘤药物23－羟基白桦酸脂肪乳剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂及其制备方法，属中药、药物制剂技术领域。
背景技术：
随着人类生活环境、生活水平和生活方式的变化以及医学的进步，疾病谱发生了显著的变化，恶性肿瘤成为日益常见且严重威胁人类生命和生活质量的主要疾病之一。目前在全世界乃至中国，癌症已成了人口死亡的第二大原因。据卫生部统计，近几年中国每年新增肿瘤病人200万人，死亡130多万人，目前全国肿瘤患者总数约为450万人左右。如此众多的肿瘤患者，形成了一个庞大的抗肿瘤药物市场。预计未来几年内，对发病率高的胃癌、肝癌、肺癌和食管癌等的对症治疗药物以及新型抗癌药物将成为医药市场上的新热点；研制和生产新型抗肿瘤药物特别是新型天然抗肿瘤药物将具有广阔的市场前景。
23-羟基白桦酸是从传统中药白头翁(Pulsatilla Chinensis)根部分离出的一种五环三萜类皂苷，是中药白头翁的特征性成分，其结构式为 分子式为C30H48O4，类白色粉状物，分子量为472，易溶于氯仿、乙酸乙酯、乙醇等有机溶剂，不溶于水。它可通过采取“23-羟基白桦酸在制备治疗或预防肿瘤和艾滋病药物中的应用”(中国专利申请号为03152904.6的发明专利申请文件中作了详细的叙述)而获得，但这不是获得23-羟基白桦酸的唯一方法和唯一来源。
23-羟基白桦酸具有广泛的抗肿瘤活性，体内外抗黑色素瘤作用强，对多种肿瘤细胞系如人胃癌SGC-7901细胞系、人卵巢癌A0细胞系、人白血病HL-60细胞系、人白血病K562细胞系、人宫颈癌Hela细胞系及小鼠腹水瘤S180细胞系性等均有抑制作用。其作用机制可能为诱导细胞凋亡。此外，对肺癌、肝癌、脑神经胶质瘤、肠道肿瘤、艾滋病毒等均有抑制作用。
23-羟基白桦酸为强疏水性药物，利用一般的制剂学方法，不能有效解决生物利用度的问题。小鼠体内药代动力学研究表明23-羟基白桦酸在体内呈现溶解限速，制剂中23-羟基白桦酸的溶解度直接影响其体内吸收。小鼠灌胃23-羟基白桦酸混悬液(200mg/Kg)的生物利用度＜10％，混悬液中23-羟基白桦酸的实际溶解度经LC-MS法测定仅为67ug/mL(溶剂为1％羧甲基纤维素钠)。因其强疏水性，目前只有口服片剂，必将限制其临床应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂及其制备方法，本制剂是抗肿瘤药物23-羟基白桦酸的新剂型，作为脂肪乳剂剂型，可供口服或注射使用，以期提高生物利用度。
本发明的技术方案包括两项内容(1)一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂；(2)一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的制备方法。
一、一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂本发明依据23-羟基白桦酸溶于有机溶剂、微溶于水，极性较低等理化性质特点，并根据药效学、药动学研究，将其制备成可供注射或口服用的脂肪乳剂。
本发明一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂，它主要包含抗肿瘤活性成分23-羟基白桦酸、可药用的植物油、乳化剂、渗透压调节剂和注射用水。其处方为活性成分23-羟基白桦酸 0.5-5g植物油100-250g乳化剂5-20g渗透压调节剂 18-25g注射用水 加至1000mL。
制备脂肪乳剂的可药用的植物油一般选用大豆油、玉米油、芝麻油、橄榄油、亚麻子油、藏红花油以及这些植物油的混合物，也可以用甘油三脂肪酸酯，本发明实施例中植物油选用大豆油。
可药用的乳化剂选用大豆磷脂或卵磷脂，本发明实施例中乳化剂选用大豆磷脂。
可药用的渗透压调节剂选用甘油、葡萄糖、甘露醇、山梨醇以及这些调节剂的混合物，本发明实施例中渗透压调节剂选用的是甘油。
本发明药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的各组分的用量和质量应当符合药学的一般标准。为了保证本发明抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂达到注射用标准，其所有组分包括活性成分23-羟基白桦酸、水、植物油、乳化剂、渗透压调节剂以及其它用料，都应当同时达到注射用标准。
在本发明抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的组分中，植物油是抗肿瘤活性成分23-羟基白桦酸的溶媒，由于植物油种类繁多，不同种类的植物油其极性又各有不同，因此23-羟基白桦酸在不同种类的植物油中的溶解度亦有差别。在本发明实施例中，植物油选用大豆油，其合理用量应在100-250mg/mL之间，优选用量为200mg/mL.。
为保证23-羟基白桦酸脂肪乳剂的乳化质量和稳定性，在本发明的抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂中，乳化剂的用量与植物油的用量应当匹配。在本发明实施例中，选用注射用大豆磷脂为乳化剂，用量约为5-20mg/mL，优选用量为12mg/mL。此外，由于不同种类的乳化剂乳化能力有差别，在用量上也应有所不同。
在本发明的抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂组分中，渗透压调节剂的作用是使本发明抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的渗透压调节至人的正常生理范围内。一般来说，不同的渗透压调节剂由于其分子大小和极性不同，即使相同重量，不同渗透压调节剂所产生的渗透压也可不同。同时还必须注意，在本发明抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂中，其它组分(如抗肿瘤活性成分、植物油、乳化剂等)对渗透压也产生一定影响，鉴于以上原因，每种渗透压调节剂的用量须根据23-羟基白桦酸脂肪乳剂中其它组分的用量以及该种所选定的渗透压调节剂的分子大小和极性强弱而定。在本发明实施例中，为了使本发明的抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的渗透压在人正常生理范围内，所选用的渗透压调节剂甘油其合适用量为18-25mg/ml，优选用量为22mg/ml。
综上所述，本发明药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的一般处方是活性成分23-羟基白桦酸 0.5-5g大豆油 100-250g大豆磷脂5-20g甘油18-25g注射用水加至1000mL。
其优选处方是
活性成分23-羟基白桦酸 2.0g大豆油 200g大豆磷脂 12g甘油 22g注射用水 加至1000mL。
在本发明抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂中，还可以含有其它的抗肿瘤活性成分，借此可以提高疗效、降低毒副作用以及扩大应用范围，如包含紫杉醇、卡铂、环磷酰胺、氟尿嘧啶、阿霉素等已知的抗肿瘤活性成分。
此外，在本发明抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂中，也可以加入抗氧化剂如维生素E、抗坏血酸等；也可以加入增加乳粒表面电势，提高23-羟基白桦酸脂肪乳剂稳定性的稳定剂，如油酸、胆酸、脱氧胆酸及它们相应的盐。
本发明的抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂可以通过注射或口服的方式给药，用作肿瘤的治疗。
本发明抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂可以用以下所述工艺制备而得。
二、一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的制备方法本发明抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的制备方法其内容包括处方和工艺，其处方如上所述，其制备工艺包括如下步骤1.将23-羟基白桦酸粉碎，使23-羟基白桦酸的粒径小于75μm；2.称取处方量的已粉碎的23-羟基白桦酸，加入处方量的注射用植物油中，充分混匀，成为油相(必要时水浴加温溶解)；3.称取处方量的注射用乳化剂、渗透压调节剂及适量(至少使乳化剂完全溶解为水相)的注射用水，混合后高速搅拌(8000-20000转/分钟)，使完全溶解为水相；4.在高速搅拌条件下，将油相以线状加入水相中，加完后，再继续搅拌15分钟，以0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.5～7.5，再加注射用水至1000mL，得乳白色初乳；5.将制得的初乳移入高压匀质机，匀化；6.乳液以0.45μm微孔滤膜过滤；7.将乳剂灌封于适当的容器内；8.置100℃条件下灭菌30分钟，即得。
在上述含23-羟基白桦酸的油相溶液的制备过程中，为了节省时间，必要时可采取水浴加热的方式加速23-羟基白桦酸在可药用植物油中的溶解，水浴温度可在40-80℃之间。
本发明的有益效果采用本发明制得 23-羟基白桦酸脂肪乳剂，经检测其质量外观均一，呈乳白色液状，PH为6.8-7.3，无菌、内毒素等质量指标符合中华人民共和国药典相关规定。
本发明依据23-羟基白桦酸溶于植物油等有机溶剂的性质，将其制成油与水能均匀混合的脂肪乳剂，供口服或注射使用，不仅制备方法简单，而且所制得的23-羟基白桦酸脂肪乳剂具有显著的抗肿瘤作用，毒性较低，生物利用度明显提高，并增加临床应用剂型。根据一般脂肪乳剂药剂学的特点，本发明的抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂还具有缓释、靶向、为机体提供能量等作用。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限在这些实施例中。
实施例123-羟基白桦酸脂肪乳剂，其组成为23-羟基白桦酸0.5g注射用大豆磷脂 5g注射用大豆油100g甘油18g注射用水加至1000mL上述脂肪乳剂的制备方法1.将23-羟基白桦酸粉碎，使23-羟基白桦酸的粒径小于75μm；2.称取处方量的已粉碎的23-羟基白桦酸，加入处方量的注射用大豆油中，充分混匀，成为油相；3.称取处方量的注射用大豆磷脂、甘油及适量(至少使磷脂完全溶解为水相)的注射用水，混合后高速搅拌(8000-20000转/分钟)，使完全溶解为水相；4.在高速搅拌条件下，将油相以线状加入水相中，加完后，再继续搅拌15分钟，以0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.5～7.5，再加注射用水至1000mL，得乳白色初乳；5.将制得的初乳移入高压匀质机，匀化；6.乳液以0.45μm微孔滤膜过滤；7.将乳剂灌封于适当的容器内；8.置100℃条件下灭菌30分钟，即得。
实施例2、3、4
实施例2、3、4的工艺步骤与实施例1完全相同，其处方中各组分及用量如表1所示表1实施例中所用的组分
实施例5、6、7、8、9、10实施例5、6、7、8、9、10的工艺步骤与实施例1完全相同，其处方中各组分及用量如表2所示表2实施例中所用的组分
在上述实施例中，所用的植物油注射用大豆油，也可用注射用玉米油、芝麻油、橄榄油、亚麻子油、藏红花油、甘油三脂肪酸酯等油溶剂及其混合物来替换；所用的乳化剂注射用大豆磷脂亦可用注射用卵磷脂或两者混合物来替换；所用的渗透压调节剂甘油也可用葡萄糖、甘露醇、山梨醇以及这些调节剂的混合物来替换。
以下通过试验例来进一步阐明本发明药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的有益效果，这些试验包括脂肪乳包封率测定，体内抗肿瘤试验及口服生物利用度测定。
脂肪乳包封率测定1、试验材料氚标记23-羟基白桦酸(中国原子高科氚标课题组合成)，透析袋(上海生工)，液闪测定仪(BECKMAN)。
2、试验方法氚标记23-羟基白桦酸溶液加入不同量的23-羟基白桦酸，用适量有机溶剂溶解后，氮气吹干。按上述制备方法制得不同浓度脂肪乳剂(含23-羟基白桦酸10μg/mL-2mg/mL)。将脂肪乳剂1mL置透析袋中，置10mL生理盐水中，4℃放置24h，分别从透析袋内取10uL、透析袋外取100uL，加闪烁液，暗室放置过夜后测放射性计数。同时作氚标23-羟基白桦酸的对照，以确认透析袋对23-羟基白桦酸的透过能力。脂肪乳的包封率用下式计算 3、试验结果试验结果显示，透析袋内外氚标23-羟基白桦酸的计数一致，可见所用透析袋对23-羟基白桦酸无截留。10-2000ug/mL的23-羟基白桦酸的脂肪乳包封率均大于99％。
体内法抗肿瘤试验1、试验材料23-羟基白桦酸脂肪乳剂(江苏省原子医学研究所制备)，阳性对照药注射用环磷酰胺(上海华联制药集团出品)；瘤源小鼠肝癌HepA腹水鼠(江苏省肿瘤医院提供)；实验动物ICR小鼠(由扬洲实验动物中心提供)。
2、试验方法小鼠肝癌HepA瘤动物皮下接种模型无菌条件下取肝癌HepA腹水鼠的腹水，以适当量的生理盐水稀释成细胞匀浆，浓度为1-2×107cell/mL，于昆明种小鼠右腋皮下接种0.2ml/只，次日开始给药。23-羟基白桦酸脂肪乳剂分低、中、高三个剂量组(25、50、75mg/Kg)，每天灌胃1次，连续给药7天；对照设阴性空白对照和阳性对照两组，阴性空白对照组小鼠每天给予相同体积的空白乳剂，连续给药10天。阳性对照组小鼠每天给予环磷酰胺(25mg/Kg)，连续灌胃给药7天。末次给药后24h处死各组动物，剖取肿瘤称重，按下列公式计算肿瘤抑制率
3、试验结果试验结果显示，低、中、高剂量23-羟基白桦酸脂肪乳剂对动物皮下接种肝癌HepA模型肿瘤生长增殖均有抑制作用，抑制率分别为37.16±27.23％，41.00±15.14％，65.37±5.09％。试验过程中还发现，23-羟基白桦酸脂肪乳剂试验组小鼠活动、饮食、毛色均正常，体重增加。提示23-羟基白桦酸对肿瘤的生长增殖具有显著的抑制作用，而且无明显毒性。
小鼠体内药动学1、试验材料氚标记23-羟基白桦酸(中国原子高科氚标记课题组提供)；23-羟基白桦酸脂肪乳剂(江苏省原子医学研究所制备)，实验动物ICR小鼠(由扬洲实验动物中心提供)。
2、试验方法配制不同浓度的氚标记23-羟基白桦酸脂肪乳剂(静脉注射10mg/Kg，灌胃200mg/Kg)，ICR小鼠经尾静脉注射或灌胃后分别于不同时间尾部采血10μL置闪烁瓶中，消化后加闪烁液，暗室放置过夜后测计数。统计矩法计算药动学参数。
3、试验结果试验结果显示，脂肪乳剂静注后最大血药浓度为一般制剂的2倍；灌胃后生物利用度明显提高(＞30％)。
权利要求
1.一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂，其特征在于它主要包含可药用的植物油、乳化剂、渗透压调节剂、注射用水和溶解在植物油中的抗肿瘤有效量的活性成分23-羟基白桦酸；其处方为活性成分23-羟基白桦酸0.5-5g植物油 100-250g乳化剂 5-20g渗透压调节剂 18-25g注射用水 加至1000mL。
2.如权利要求1所述的一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂，其特征在于所述的可药用的植物油选用大豆油、玉米油、芝麻油、橄榄油、亚麻子油、藏红花油、甘油三脂肪酸酯以及这些植物油的混合物；乳化剂选用大豆磷脂、卵磷脂；渗透压调节剂选用甘油、葡萄糖、甘露醇、山梨醇以及这些调节剂的混合物。
3.如权利要求1所述的一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂，其特征在于所述的植物油为大豆油，乳化剂为大豆磷脂，渗透压调节剂为甘油。
4.如权利要求1所述的一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂，其特征在于其处方为活性成分23-羟基白桦酸0.5-5g大豆油 100-250g大豆磷脂 5-20g甘油 18-25g注射用水 加至1000mL。
5.如权利要求1、4所述的一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂，其特征在于其处方为活性成分23-羟基白桦酸2.0g大豆油 200g大豆磷脂 12g甘油 22g注射用水 加至1000ml。
6.如权利要求1的一种抗肿瘤药物23-羟基白桦酸脂肪乳剂的制备方法，其特征在于用权利要求1、4或5所述的处方，经过以下步骤1).将23-羟基白桦酸粉碎，使23-羟基白桦酸的粒径小于75μm；2).称取处方量的已粉碎的23-羟基白桦酸，加入处方量的注射用植物油中，充分混匀，成为油相；3).称取处方量的注射用乳化剂、渗透压调节剂及至少使乳化剂完全溶解为水相所需的适量的注射用水，混合后高速搅拌，使完全溶解为水相；4).在高速搅拌条件下，将油相以线状加入水相中，加完后，再继续搅拌15分钟，以0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.5～7.5，再加注射用水至1000mL，得乳白色初乳；5).将制得的初乳移入高压匀质机，匀化；6).乳液以0.45μm微孔滤膜过滤、灌封、灭菌，即得23-羟基白桦酸脂肪乳剂。
全文摘要
本发明涉及一种抗肿瘤药物23－羟基白桦酸脂肪乳剂及其制备方法，属中药、药物制剂技术领域。该脂肪乳剂以23－羟基白桦酸为活性成分与药用辅料组成，包括0.5－5克/升23－羟基白桦酸、5－20克/升注射用乳化剂、100－250克/升注射用植物油、18－25克/升渗透压调节剂、其余为注射用水。本发明不仅制备方法简单，而且所制得的23－羟基白桦酸脂肪乳剂具有显著的抗肿瘤作用，可供口服或静脉注射使用，毒性较低，生物利用度明显提高，并具有缓释、靶向、为机体提供能量等作用。
文档编号A61K9/107GK1682741SQ20051003842
公开日2005年10月19日 申请日期2005年3月11日 优先权日2005年3月11日
发明者王广基, 杨敏, 叶文才, 项景德, 曹国宪, 徐宇平, 王颂佩 申请人:中国药科大学