一种治疗骨折的药物组合物的制作方法

专利名称：一种治疗骨折的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗骨折的药物组合物，该药物组合物的有效组分为从淫羊藿或其它淫羊藿属植物药中提取的总黄酮和从三七中提取的三七总皂苷。
背景技术：
骨折是一种由外伤所致的以骨折病变为主的疾病。近十多年来发病率上升很快，尤其是骨质疏松性骨折愈合困难，甚至不愈合，目前各种疗法效果均不确切，因此如何促进衰老骨的修复重建关系到老年人的生活质量和寿命。目前，国外及国内西医临床治疗骨折的主要方法是使用普通活血化瘀、通络止痛剂、或提供外援性固定等。
中药促进骨折愈合的机理主要是改善血液循环，纠正血液流动状态及抗凝的过程，其作用有三(1)防止较大的血肿形成，及时预防和消除血凝块，缩小无菌性炎症范围，从而缩小软骨内化骨的范围。(2)改善血管壁的通透性，从而有利于离子交换，提高骨折局部微量元素的含量以及促进骨折部位钙盐的沉积。(3)刺激骨折局部骨基质胶原的合成以及骨生长因子的分泌与合成。
骨折愈合过程是一个复杂的组织学、生物学、内分泌学及生物力学的动态过程。临床上，各种原因所致的骨折延迟愈合和骨折不愈合是常见病，又是骨伤科当前一大难题。利用生物力学，组织学、免疫组化和分子生物学等方法，特别是应用免疫组化和原位杂交技术来研究中药对各种细胞因子及胶原的影响，有助于进一步探讨中药促进骨折愈合的作用机制。
骨不愈合及延迟愈合的最佳治疗方法是自体骨移植。然而，合适的移植骨是有限的，且移植后会增加供骨部位的发病率。目前，骨不愈合或延迟愈合的治疗原则已有进步，目标是提供无损伤、并发症少及安全的治疗.骨折愈合是一个极其复杂的生物学修复过程，约有5％-10％的骨折因各种原因发生骨延迟愈合或不愈合，而需进一步手术治疗。具有传导成骨和诱导成骨的自体骨移植虽能促进骨折愈合，但存在着供骨量有限和供骨区并发症等缺点。为避免手术并发症，促进骨折愈合，许多新的中医药治疗方法已被广泛应用于临床，且取得了较好的疗效。近年来国内临床用中医药治疗该病的治愈率远远高于西药疗法。但目前绝大部分为传统口服或外用制剂，如接骨续筋片，正骨水，跌打红药片等，缺乏剂型先进、起效快，疗效好的中药制剂。如何促进骨折愈合而缩短其愈合时间，减少并发症的发生，一直是大家所关心并亟待解决的问题，也是骨科界近年来研究的热点之一。

发明内容本发明的目的就是提供一种治疗骨折的药物组合物。
本发明在有效成分和药理作用研究的基础上，将从淫羊藿或其它淫羊藿属植物药中提取的总黄酮与从三七中提取的总皂苷配伍，发现该组合物具有优良的活血化瘀，通络止痛，补肾壮骨和接骨续筋功效，从而完成了本发明。
本发明的药物组合物包含从淫羊藿或其它同属植物药中提取的总黄酮和从三七中提取的三七总皂苷。其中，淫羊藿总黄酮含有淫羊藿苷，朝藿定B，朝藿定c等黄酮类化合物，三七总皂苷包含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R)等皂苷类成分。
在本发明的药物组合物中，淫羊藿总黄酮与三七总皂苷的重量比为1∶1-8或1-8∶1，重量比的优选范围为1-2∶1-3；其重量比的最佳值为1∶1。
在本发明的药物组合物中，淫羊藿总黄酮可采用水或醇溶剂，乙醇-大孔树脂或正丁醇等常规的黄酮提取纯化方法从淫羊藿或其它同属植物药中提取得到；三七总皂苷可采用醇-大孔树脂或正丁醇等常规的皂苷提取纯化方法从三七中提取得到。详细提取纯化工艺可参考《中药化学成分提取分离手册》(杨云主编，中国中医药出版社，1998年第一版)。
本发明的药物组合物可通过临床上常用的各种给药途径给药，如口服给药，注射给药，皮肤给药。
本发明的药物组合物可选用药学上可接受的各种附加剂，包括填充剂，湿润剂，粘合剂，崩解剂，表面活性剂，稀释剂，润滑剂等。
本发明的药物组合物以淫羊藿总黄酮与三七总皂苷之比为1∶1-8或1-8∶1为主，再根据不同的给药途径配有不同的辅剂制成不同的剂型，例如加入一定量经丙纤维素等制成片剂；加入一定量微粉硅胶等制成胶囊剂；制成针剂采用加适量吐温80，再加注射用水，等等。采用本领域常规制剂技术即可把本发明药物组合物制成药学上的各种制剂，包括普通制剂和缓(控)释制剂，如片剂、透皮吸收剂，胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴九、缓释微丸、注射液、注射用冻干和粉针剂等。
方解淫羊藿与骨折根据中医“肾主骨”的理论，用补肾中药淫羊羹可以促进骨折愈合；证明中医“肾主骨”理论有其一定的组织形态学基础。补肾中药有调节下丘脑-垂体-性腺轴的功能，淫羊羹具有性激素祥作用，而性激素能使骨的生长速度显著增快，所以淫羊藿是通过调节内分泌系统来促进骨折愈合的。
淫羊藿具有如下作用(1)促进骨痂生长淫羊童组前期的矿化骨痂面积及其均宽明显大于对照组，P＜0.01，说明在骨折愈合早期淫羊藿能促进骨痂生长，结合同期动态参数可见，骨形成率(面积、体积和BMU水平)都大于对照组，P＜0.05，而骨再建周期却明显小于对照组，P＜0.05。因此可以认为，淫羊羹促进骨痂生长使其数量增加的关健在于促进了基本多细胞单位(BMU)水平上的骨形成，同时缩短了骨再建单位(BRU)的转换周期，加快了骨痂的再建，使骨痂代谢(吸收与形成)出现正平衡，结果使骨痂量增多。而大量矿化骨痂的出现使骨折端得到良好的固定。有实验表明，淫羊羹能通过促进鸡胚股骨蛋白多糖的合成活性而促进试管内鸡胚股骨的生长。(2)提高成骨细胞的活性骨折后期淫羊藿组成骨细胞活性明显大于对照组(P＜0.05)，而且其骨形成率(BMU)也显著高于同期对照组，P＜0.05，说明淫羊藿在骨折愈合后期能提高成骨细胞的活性，并在BMU水平上产生新的有效骨痂。产生这样的效果的原因，可能与淫羊藿含有丰富的锰、锌等微量元素有关。因为锰、锌等是胶原超氧化歧化酶的重要辅酶，对成骨细胞的活动起着积极的调节作用。锌对骨的生长发育极为重要，能促进骨折愈合。(3)促进基质的钙化骨痂的钙化是骨折愈合过程中关键的一环，也是最终目的，它影响着骨痂的质量。研究发现，淫羊藿组前后期的矿化表面百分比都明显多于同期对照组，P＜0.05，说明淫羊藿能促进骨痂的矿化，增加骨痂的钙盐沉积，产生大量的骨性骨痂。淫羊羹组后期的矿化延迟时间明显短于对照组P＜0.05，则又说明淫羊藿组的成骨细胞分泌合成类骨质后在较短的时间内即开始钙化，而同期对照组则需较长的时间才开始钙化。证明淫羊藿能加速骨痂的钙化，有利于骨折愈合。另外，淫羊藿组后期的类骨质面积及均宽都明显少于对照组P＜0.05，亦说明淫羊藿能促进类骨质钙化，结果导致类骨质比对照组少。(4)提高破骨细胞的活性及数量，加速骨痂的改建破骨细胞的功能大小及数量的多少，直接影响着骨折的愈合。在骨折愈合早期，它能吸收清除血肿、组织碎片及坏死骨碎片，为骨折修复铺平道路；到后期，破骨细胞能吸收掉老或无用的骨痂，对骨痂进行改建，使髓腔再通。淫羊藿组前期吸收性陷窝百分比、骨吸收率(BMU)及破骨细胞活性，后期吸收性陷窝百分比、活性吸收面百分比及破骨细胞指数都明显大于对照组(P＜0.05)；说明淫羊藿能提高破骨细胞活性，增加破骨细胞数量，加速血肿吸收和骨痂的改建，使髓腔较对照组提前再通，促进骨折的愈合。
三七与骨折中医认为，三七具有活血、止痛、止血、散瘀消肿等功效。三七总苷是三七的主要成分，具有抗炎效应，其药理作用的研究已有许多报道。研究表明在治疗心脑血管疾病方面有很好的作用，有抗心律失常、舒张血管、抗血栓、增加冠状流量、改善血流变和微循环、降血脂及抗动脉粥样硬化等作用。三七是骨伤科最为常用的药物之一。有研究表明三七总甙可降低TNF-amRNA的表达。TNF可刺激破骨细胞形成和促进骨吸收，抑制成骨细胞ALP生成并减少细胞内钙含量，抑制骨形成和钙化。TNF-a是强有力的骨吸收诱导剂，且必须在成骨细胞存在时发挥作用。同时三七总皂苷(total Panax notoginsengsaponins，tPNS)能特异性地阻断受体操纵性的钙离子通道，具有活血祛瘀，通脉止血，保护脊髓、视神经及心脑缺血性损伤等作用。有实验提示三七总皂苷可抑制钙离子内流，减轻脊髓和视神经损伤过程中由于钙离子内流所引起的损伤，对神经元有保护和促进修复作用作用，使骨折部位提前愈合，并且使其达到或接近骨折前的功能。
本发明配制的药物组合物采用常规的药效及毒性试验经试验结果如下一、对家兔骨折模型的影响动物分组取家免42只，随机分为三组，每组14只，分别为模型组(等体积生理盐水)，试验组大剂量组(61.6mg/kg，相当于3.20g生药/kg)，小剂量组(15.4mg/kg，相当于0.80g生药/kg)。
骨折模型的制作适应性饲养一周后，家兔用3％戊巴比妥钠溶液按1ml/kg剂量静脉麻醉后，两侧前肢剪毛，75％酒精消毒，在无菌条件下用医用手术牙科钻在两侧挠骨中上段1/3交界处横形钻成宽约为3mm，深入骨髓腔形成骨损伤，缝合皮肤，手术后次日开始给药，连续给药，给药后第14、28天取各组家兔中的7只，测定各项指标。
骨密度测定分别于14、28天截取两侧挠骨，其长度包括骨损伤及上、下各正常段骨质，用美国LUNAR公司Piximusbonedensito-meter测定仪测定骨密度，观察骨折愈合情况。
血生化测定用全自动生化分析仅测定血清中的钙、磷，碱性磷酸酶等指标。
病理形态截取两侧挠骨，其长度包括骨损伤及上下各正常段骨质，置于10％福尔马林内固定，经脱钙后常规石蜡包埋，切片厚4～5um，HE染色，根据损伤处结缔组织、软骨、骨增生修复的程度，分为五级，以骨组织占所有增生组织(包括结缔组织、软骨、骨组织)的比例记分，骨组织占1/5者记为1分，骨组织占2/5者记为2分，依此类推，损伤处完全由骨组织取代者(骨组织占5/5)记为5分，并依据修复程度分为+骨组织修复轻度，++中度，+++重度，++++基本修复，+++++完全修复。分值越高，提示疗效越好。
表1对家兔骨折模型骨密度的影响(X±SD)
注与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01以上实验结果表明连续给药14天后，大剂量组的骨密度增加，与模型组比较有显著性差异P＜0.01，小剂量组也有显著差异P＜0.05。给药28天后可见大剂量组与模型组比较有差异P＜0.01。并且28天的骨密度比14天的增大，结果表明该药可以加快骨矿沉积速率，提高骨密度，促进家兔骨损伤部位愈合。
表2对家兔骨折后血清ALP、磷、钙的影响(14dX±SD)
表3对家免骨折后血清ALP、磷、钙的影响(28dX±SD)
注与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01以上实验结果表明给药14、28天后，该药物大剂量组能显著升高血清中的ALP，钙，磷含量。
表4对骨损伤14天后家兔病理形态的影响
表5对骨损伤28天后家兔病理形态的影响
骨折后修复早期表现为纤维组织增生，以后出现软骨化生，类骨基质形成，最后形成骨组织。损伤后14天显示模型组修复状况较其他各组差，而该药高剂量组损伤后修复较小剂量组好。损伤后28天高剂量组修复最好，多数兔(6/7例)骨创伤处已全为骨小梁修复。模型组修复状况最差，明显低于实验组。
二、本发明药物组合物的毒性试验注试验方法参考《中药新药研究的技术要求》取昆明种小鼠140只，雌雄各半，随机分成7组，分别口服和腹腔注射本发明药物组合物，连续观察7天，记录动物毒性反应、体重变化及死亡情况，用Bliss计算小鼠的半数致死量(LD50)，结果为口服8023mg/kg，腹腔注射62lmg/kg，毒性极低。
本药品具有如下优点(1)改善血液循环，促进血肿的吸收和机化 骨折愈合需要新生血管参与，成骨细胞的生长机能也要依赖血供状态。三七和淫羊藿具有较明显的改善外周循环作用，并认为通过这种作用，使血肿逐渐吸收机化。
(2)促进骨折部位骨基质钙盐沉积 在骨折愈合过程中，钙盐沉积是一个突出的关键步骤，骨组织的修复必须经过基质的钙化过程，才能趋于完成。实验研究发现淫羊藿能促进骨痂的钙化，增加骨痂的钙盐沉积。实验证实三七通过其促进再吸收作用能把骨折临近部位的钙更多地动员出来沉积到骨折部位，以利骨折愈合。
(3)提高骨痂的质量和生物力学性能 新骨组织的机械强度与基质钙化的程度密切相关，骨的无机盐含量高，其内在强度大，即骨钙状况与骨的力学性能存在显著的相关性。有实验表明三七和淫羊藿可促进骨痂的钙化程度，说明应用本制剂后对骨骼强度的增加有明显影响。
(4)提高成骨细胞的活性及指数 实验研究发现淫羊藿在骨折愈合过程中的早期是通过提高成骨细胞的数量来大量合成类骨质的，而后期则是通过提高成骨细胞的活性来促进骨痂的生长。体外实验表明，淫羊藿提取液对可抑制骨髓细胞诱导破骨细胞的形成以减少破骨细胞的产生。研究证明三七有促进骨原细胞增殖，使细胞内DNA合成加速，成骨细胞机能活跃。
(5)刺激骨生长因子的分泌与合成 该药无能够刺激骨形态发生蛋白(BMP)的合成，BMP的主要生物学作用是作用于未分化的有成骨潜能的间充质细胞表面受体，在一定环境下，诱导间充质细胞分化成软骨细胞和骨细胞，进而产生新骨。用免疫组化技术进行图像定量分析，结果表明该药剂能促进骨折修复细胞的增殖，增加成骨细胞的活性，诱导BMP合成，加速骨折愈合。
(6)加速骨质疏松性骨折愈合 研究证实，淫羊藿可以促进成纤维细胞成骨表型表达并促进细胞增殖，与三七合并应用治疗复杂骨质疏松性骨折或骨折伴巨大骨缺损者也获得了满意的疗效。
(7)对陈旧性骨折延迟愈合和骨折不愈合的治疗效果明显 虽然外科治疗骨折不愈合或延迟愈合及陈旧性骨折疗效确切，但是存在很多严重并发症。为避免手术并发症，促进骨折愈合。临床上5％-10％的骨折发展为延迟愈合或不愈合。因此，采用本制剂以加速并促进骨折愈合，不仅可提高骨折治疗和骨科手术的成功率，又可缩短疗程，迅速恢复功能。
(8)充分利用中医“肾主骨”的理论 补肾中药有调节下丘脑-垂体-性腺轴的功能，淫羊藿具有性激素祥作用，而性激素能使骨的生长速度显著增快，所以淫羊藿是通过调节内分泌系统来促进骨折愈合的。用补肾中药淫羊藿可以促进骨折愈合。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不对其有任何限制。
实施例一选用下列用量的药物组合物与附加剂
淫羊藿总黄酮100g，三七总皂苷100g，径丙纤维素130g，微粉硅胶30g，预胶化淀粉20g，硬脂酸镁适量，制成1000片。
将上述药物组合物与附加剂混合均匀，用10％预胶化淀粉浆作为粘合剂，湿法制粒，烘干，加入适量硬脂酸镁混合，压制成片剂。
实施例二选用下列用量的药物组合物与附加剂淫羊藿总黄酮150g，三七总皂苷100g，经丙纤维素60g，微粉硅胶30g，乙醇适量，硬脂酸镁适量，制成1000粒。
将上述药物组合物与经丙纤维素及微粉硅胶混合，用适量70％乙醇做湿润剂，湿法制粒，过40目筛制成颗粒，烘干，加入硬脂酸镁，混合，装入硬胶囊。
实施例三选用下列用量的药物组合物与附加剂淫羊藿总黄酮100g、三七总皂苷150g、乳糖20g、羟丙纤维素30g、聚乙烯吡咯烷酮(PVPK30)适量、羧甲级纤维素适量，制成1000片。
将上述药物组合物与经丙甲纤维素、乳糖及径丙纤维素混合均匀，加入10％PVP乙醇溶液作粘合剂，湿法制粒，烘干，加硬脂酸镁，混匀，压制成片。
实施例四选用下列用量的药物组合物与附加剂淫羊藿总黄酮150g、三七总皂苷50g、聚乙二醇6000350g、硬脂酸5％、制成1000粒。
将苫淫羊藿总黄酮和三七总皂苷研细(100目筛)，与聚乙二醇6000和硬脂酸混匀，边搅拌边加热(90-100℃)，持全部熔化后，料液在80-85℃保温条件下控速滴入甲基硅油冷凝液中，冷凝成丸。
实施例五选用下列用量的药物组合物与附加剂淫羊藿总黄酮20g、三七总皂苷20g、蔗糖200g、防腐剂适量蒸馏水适量，制成1000ml。
取蒸馏水适量，加入淫羊藿总黄酮和三七总皂苷，边加热边搅拌使溶解，过滤。另将蔗糖和防腐剂用蒸馏水加热溶解，在搅拌下缓缓加入上述溶液中，加蒸馏水至全量，混匀，冷藏，过滤，灌封，灭菌，制得口服液。
实施例六选用下列用量的药物组合物与附加剂淫羊藿总黄酮5g、三七总皂苷5g、吐温80适量、注射用水适量，制成1000ml。
取适量注射用水，加入淫羊藿总黄酮和三七总皂苷，加热，搅拌使充分溶解，加入4％吐温80，充分搅匀，过滤，加氢氧化钠调pH至6.5，加注射用水至足量，中空纤维超滤，精滤，灌封，灭菌，得注射液。
实施例七选用下列用量的药物组合物与附加剂淫羊藿总黄酮100g、三七总皂苷100g、吐温80适量、注射用水适量、制成1000支。
取适量注射用水，加入淫羊藿总黄酮和三七总皂苷，加热，搅拌使充分溶解，过滤，加氢氧化钠调pH至6.5，加注射用水至足量，中空纤维超滤，精滤，灌装，冷冻干燥，制得注射用冻干制剂。
权利要求
1.一种治疗骨折的药物组合物，其特征在于它包含的有效组分为淫羊藿和三七，淫羊藿与三七的重量比范围为1∶1-8或1-8∶1。
2.根据权利要求1所述的一种治疗骨折的药物组合物，其特征在于所述的淫羊藿包括淫羊藿药材，或淫羊藿总黄酮，或淫羊藿总多糖。
3.根据权利要求2所述的一种治疗骨折的药物组合物，其特征在于所述的淫羊藿总黄酮包括含有淫羊藿苷，朝藿定B、朝藿定c基黄酮类化合物。
4.根据权利要求1所述的一种治疗骨折的药物组合物，其特征在于所述的三七包括三七总皂苷，或多糖类成分。
5.根据权利要求4所述的一种治疗骨折的药物组合物，其特征在于所述的三七总皂苷包含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1皂苷类化合物。
6.根据权利要求1所述的一种治疗骨折的药物组合物，其特征在于所述的淫羊藿与三七重量比的优选范围为1～2∶1～3。
7.根据权利要求1所述的一种治疗骨折的药物组合物，其特征在于所述的淫羊藿与三七重量比的最佳值为1∶1
8.根据权利要求1所述的一种治疗骨折的药物组合物，其特征在于可制成的剂型包括片剂，颗粒剂，胶囊剂，滴丸剂，溶液剂，缓控释剂，注射液，注射用粉针剂和冻干制剂。
全文摘要
本发明涉及一种治疗骨折的药物组合物，该药物组合物含有一定比例淫羊藿和三七，根据不同的给药途径，配有不同的辅料制成不同的剂型。
文档编号A61P19/00GK1806814SQ20051004779
公开日2006年7月26日 申请日期2005年11月24日 优先权日2005年11月24日
发明者王学东, 吕志会, 马占之, 李志强, 曹翠香 申请人:沈阳双鼎制药有限公司