专利名称：非甾族氨基磺酸酯化合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类化合物。
本发明特别涉及一类非甾族化合物和涉及含有该非甾族化合物的药物组合物。
背景技术：
证据提示在内分泌依赖性组织，例如乳房和子宫中，雌激素在涉及促进肿瘤生长中是重要的促细胞分裂剂。虽然在患乳腺癌和没有乳腺癌的妇女的血浆中雌激素浓度相近，但是在乳腺肿瘤中雌酮和雌二醇水平明显高于在正常乳房组织或血液中的水平。认为雌激素的原地合成是使肿瘤中雌激素达高水平做重要贡献，因此，雌激素生物合成的特殊抑制剂具有用于内分泌依赖性肿瘤治疗的潜在重要性。
过去的二十多年中，对芳构化酶途径的抑制剂的发展有极大的关注，该途径将雄性激素前体雄二酮转变为雌酮。然而，现在有证据雌酮硫酸酯酶(E1-STS)途径，即雌酮硫酸酯水解为雌酮(E1S转至E1)，与芳构化酶途径相反，在乳房肿瘤中是雌激素的主要来源1，2。这一理论通过绝经后患乳房癌用芳构化酶抑制剂，例如氨基苯乙哌啶酮和4-羟基雄二酮治疗的妇女有节制地降低血浆雌激素浓度支持3，4，还通过在这些芳构化酶抑制剂治疗的病人保持相对高的血浆E1S浓度的事实证实。在血浆中E1S的长的半衰期(10-12h)与未连接的雌激素(20min)5和肝中甾体硫酸酯酶活性的高水平6，以及正常和恶性乳房组织比较，也支持这一理论。
PCT/GB92/01587指明新型甾体硫酸酯酶抑制剂和含有它们的药物组合物在雌激素依赖性肿瘤，特别是乳腺癌的治疗上的应用。这些甾体硫酸酯酶抑制剂为氨基磺酸酯，如N，N-二甲基雌酮-3-氨基磺酸酯，优选雌酮-3-氨基磺酸酯(或称为“EMATE”)。
EMATE是一个有效的E1-STS抑制剂，因为0.1μM的EMATE在整体MCF-7细胞中它显示超过99％的抑制E1-STS活性。EMATE还以时间依赖的方式和浓度依赖的关系抑制E1-STS酶，显示它起着活化点-方向失活剂7，8的作用。虽然EMATE原来是设计为抑制E1-STS，但它还抑制脱氢表雄酮硫酸酯酶(DHA-STS)，该酶为确信在调节雌激素甾体雄甾二醇的生物合成中起关键作用8，9。现在还有证据提示雄甾二醇作为乳腺肿瘤生长的促进剂可能更为重要10。EMATE在体内也有活性，几乎完全抑制鼠肝E1-STS(99％)和DHA-STS(99％)的活性，服药方式既可以口服，亦可以皮下注射11。另外，EMATE还表明增强鼠的记忆作用14。对鼠的研究提示DHA-STS活性与调节部分免疫应答之间有关系，认为这一点也可能发生在人类15，16。在EMATE中氨基磺酸酯基的3-O-原子桥对于抑制活性是重要的。因此，当3-O-原子被其它杂原子(图1)替换，如雌酮-3-N-氨基磺酸酯(4)和雌酮-3-S-氨基磺酸酯(5)，这些类似物是较弱的非时间依赖的失活剂12。
虽然对于E1-STS的抑制的最佳效能在EMATE上可能已经获得，但是在硫酸酯酶抑制期间可能释放雌酮，并且EMATE和它的雌二醇同类物可能具有雌激素活性13。
发明内容
因此，本发明寻找提供合适抑制E1-STS的化合物，但是该化合物不具有雌激素作用，或者具有较小的雌激素作用。
根据本发明的第一个方面，提供适合于作为雌酮硫酸酯酶抑制剂的非甾族氨基磺酸酯化合物，其中该化合物具有至少第一个环和第二个环的多环结构；其中第一个环和第二个环模仿雌酮的A环和B环；以及其中多环结构不是四氢萘酚。
不论是第一个环，还是第二个环，优选含有一个α，β-不饱和内酯基团。
优选第一个环为苯酚环。
优选化合物具有双环结构。
优选化合物具有通式(A)(见图8)。在通式(A)中，R1-R6独立选自H，卤素，羟基，氨基磺酸酯、烷基和各种取代物或它们的盐；但其中R1-R6中至少1个为氨基磺酸酯基团；以及其中X为O，S，NH，取代的N，CH2，或取代的C中任何1个。
优选X为O。
若化合物的氨基磺酸酯基可被硫酸酯基替换形成硫酸酯化合物，那么优选该硫酸酯化合物可被具有甾体硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解。
在高度优选的具体实例中，该化合物不可被具有甾体硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解。
根据本发明的第二个方面，提供非甾族化合物，其中该化合物具有通式(B)(见图8)。在通式(B)中，R1-R6独立选自H，卤素，羟基，氨基磺酸酯，烷基和各种取代物或它们的盐；但其中R1-R6中至少1个为氨基硫酸酯基。
根据本发明的第三个方面，提供化合物4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯。
根据本发明的第四个方面，提供根据本发明的非甾族化合物作为药物的应用。
根据本发明的第五个方面，提供根据本发明的非甾族化合物用于抑制雌酮硫酸酯酶。
根据本发明的第六个方面，提供含有根据本发明的非甾族化合物以及药用可接受的载体，赋形剂或稀释剂的药物组合物。
根据本发明的第七个方面，提供根据本发明的非甾族化合物在用于抑制雌酮硫酸酯酶的药品生产中的应用。
根据本发明的第八个方面，提供用于制备根据本发明的化合物的方法，该方法包括香豆素的硫酸酯化。
根据本发明的第九个方面，提供用于制备根据本发明的化合物的方法，该方法包括香豆素的氨基磺酸酯基化。
通式(A)或通式(B)中的烷基可为任何适合的直链或支链烷基，该烷基可为饱和的或不饱和的和/或取代的或非取代的。烷基甚至可为环烷基。例如，R1-6中至少两个键合形成另外环基团。
优选R1-R5各自独立选自H，烷基和卤代烷基；优选其中R1-R5各自独立选自H，C1-6烷基和C1-6卤代烷基。
优选R1-R5为独立选自H，C1-3烷基和C1-3卤代烷基。
优选的R1-R5独立选自为H，甲基和卤代甲基。
优选的R6为OSO2NH2。
优选的化合物为如图2中表明的化合物12-16的化合物中的任何1个。
优选的化合物为4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯。
在通式(A)或通式(B)中，R1-R6中的两个或多个可键合在一起形成另一个环结构。这一化合物的典型实例具有通式(C)(见图其中R3-R6中任何1个为氨基磺酸酯基，并且其中n为整数。典型的R6为氨基磺酸酯基。典型的氨基磺酸酯基为-OS(O)(O)-NH2。优选的n为从3至10的整数，优选从3至7。通式(C)的基团(CH2)n随意可为取代的烷基链。
通式C范围内的典型的化合物为如图9中显示的化合物(D)(其中n＝3)，化合物(E)(其中n＝4)，化合物(F)(其中n＝5)，化合物(G)(其中n＝6)，化合物(H)(其中n＝7)。对于这些化合物，R6为通式-OS(O)(O)-NH2的氨基磺酸酯基，并且R3-R5中的每一个为H。
这里使用的术语“氨基磺酸酯”包括氨基磺酸，或氨基磺酸N-取代的衍生物的酯，或它们的盐。因此，该术语包括通式-O-S-(O)(O)-N(R7)(R7)的功能基，其中R7和R8为独立选自H，卤素，直链的或支链的饱和的或不饱和的和/或取代的或非取代的烷基，芳基，或任何其它合适的基团。优选R7和R8中至少1个为H。在优选的具体实例中，R7和R8都为H。
这里使用的术语“模仿的”是指它的正常意义-即具有不同的结构，但具有类似功能作用。
本发明的非甾族化合物的关键优势在于它在体内有效，并具有较小的雌激素活性，因此，可以认为是“非雌激素化合物”。这里使用的术语“非雌激素化合物”是指不显示或实际上不显示雌激素活性的化合物。
因此，本发明提供减小了雌激素活性的非甾族化合物。基于这一点，本发明的非甾族化合物作为E1-STS抑制剂。
另一个优势是这类化合物不可被代谢为显示或诱导激素活性的化合物。
本发明的化合物还具有口服活性的优势。
本发明的化合物进一步的优势在于它们可能具有不可逆转的作用。
本发明的化合物进一步的优势在于它们还可以抑制DHA-STS。
因此，在优选的具体实例中，该非甾族化合物用于治疗乳腺癌。另外，该非甾族化合物用于非恶性病例的治疗，例如自身免疫疾病的预防，尤其是当从早年需要服用药物时。
特别优选的根据本发明的非甾族化合物为4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯。该化合物的特殊优势在于它以类似于EMATE的方式作为时间依赖和浓度依赖的抑制剂起作用。该非甾族化合物的另一个关键优势在于它是一个具有不可逆转的口服活性的化合物。另外，它不代谢为具有激素活性的化合物。
因此本发明的高度优选的具体实例涉及含有4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯以及药用可以接受的载体，赋形剂或稀释剂的药物组合物。
因此本发明涉及适于作为硫酸酯酶抑制剂使用的非甾族化合物。
除了是体内有效的，硫酸酯酶抑制剂之外，本发明的化合物降低雌激素活性，或甚至降低至最小或降低至没有。
许多研究表明，本发明的氨基磺酸酯以剂量依赖的方式，以类似于EMATE的效力抑制在完整的MCF-7细胞中的酶E1-ETS。
优选的香豆素氨基磺酸酯中，4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯与香豆素-7-0-氨基磺酸酯一起在体内显出最大活性。在这一点上，10μM 4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯在整体MCF-7乳腺癌细胞中抑制E1-STS 93.3％，IC50为380nM。这种失活被表明是类似于EMATE的方式的时间依赖和浓度依赖的抑制剂。10μM 4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯还抑制胎盘微粒体的脱氢表雄酮硫酸酯酶93.6％。该化合物还显示降低的雌激素活性，这一点通过在治疗卵巢切除大鼠的子宫重量缺乏明显增加观察到。
该化合物还具有口服活性的效力。
本发明的非甾族化合物，特别是优选的香豆素硫酸酯酶代表了非甾族硫酸酯酶抑制作用最佳化的重要化合物。还相信该化合物除了用于内分泌依赖的癌症治疗外，还具有一些治疗用途，例如自身免疫疾病的治疗。
现在本发明仅仅通过伴有绘图的参考实例描述，其中图1说明雌激素(1)，雌激素硫酸酯(2)，EMATE(3)和甾体氨基磺酸酯(4-5)的已知结构；图2说明了7-羟基香豆素(11)，7-(次硫酸(Sulphoxy))-4-甲基香豆素(12)和香豆素氨基磺酸酯(13-16)的结构；图3说明了7-羟基-4-甲基香豆素的硫酸化；吡啶/SO3-吡啶复合物；NaOH在甲醇中(路线a)；图4说明了7-羟基-4-甲基香豆素的氨磺酰化；NaH/DMF，H2NSO2Cl在甲苯中(路线b)；图5说明了用香豆素-7-0-氨基磺酸酯(13)，4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯(14)，3，4，8-三甲基-香豆素-7-0-氨基磺酸酯(15)和4-(三氟甲基)香豆素-7-0-氨基磺酸酯(16)在完整的MCF-7乳腺癌细胞中雌酮硫酸酯酶的剂量依赖性抑制作用；图6说明了用4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯(14)对雌酮硫酸酯酶的时间依赖和浓度依赖性失活作用。
图7为曲线图。
图8代表通式(A)，(B)和(C)；以及图9代表通式(D)，(E)，(F)，(G)和(H)。
具体实施例方式
实施例本发明的化合物可用包括Packman合成步骤的方法制备。Packman合成是技术人员已知的。
香豆素的氨磺酰化香豆素氨磺酰化的通法如下。合适的香豆素的无水DMF溶液(每克香豆素在40ml DMF中)与氢化钠(60％分散体；1当量)在0℃，N2气氛下进行反应，停止氢气的放出后，加入氨磺酰氯的甲苯溶液(大约0.68M，1.5当量)，在室温下保温过夜后将反应混合物倾到水中，然后粗产品淬火。乙酸乙酯(150ml)中的有机成分彻底用饱和食盐水洗涤、干燥(MgSO4)、过滤、蒸发。得到的粗产品用闪式柱层析纯化，随后重结晶得到相应的氨基磺酸酯。所有新化合物用光谱和燃烧分析彻底定性。图4说明4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯的合成。
按照这一通法制备化合物13-16(如图2说明)即得豆素-7-0-氨基磺酸酯(13)，4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯(14)，3，4，8-三甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯(15)和4-(三氟甲基香豆素)-7-0-氨基磺酸酯。这些化合物更详细的合成如下。
下面还讨论化合物12的合成(如图2说明的)香豆素-7-0-氨基磺酸酯(13)的制备按照上述提到的通法，7-羟基香豆素(500mg，3.082mmol)得到粗产品(605mg)，该粗产品在硅胶(200g)柱上用氯仿/丙酮(8∶1，500ml；4∶1，1000ml，然后2∶1，500ml)梯度洗脱纯化。蒸发，第二部分得奶黄色残留物(389mg，52.3％)，该残留物用乙酸乙酯/己烷(1∶1)重结晶得灰白色结晶(13)(239mg)。
分析数据如下M.p.170.0-171.5℃；Rfs＝0.48(乙醚)，0.67(乙酸乙酯)，0.19(氯仿/丙酮，4∶1)；νmax(KBr)3360，3210，3060，1720，1615，1370，1125cm-1；δH(DMSO-d6/CDCl3，ca.1∶25)6.415(1H，d，JC-4-H，C-3-H＝9.7Hz，C-3-H)，7.285(1H，dd，JC-8-H，C-6-H＝2.3Hz and JC-5-H，C-6-H＝8.5Hz，C-6-H)，7.379(1H，d，JC-6-H，C-8-H＝2.2Hz，C-8-H)，7.508(2H，br s，D2O交换的，-NH2)，7.543(1H，d，JC-6-H，C-5-H＝8.4Hz，C-5-H)and 7.760(1H，d，JC-3-H，C-4-H＝9.7Hz，C-4-H).MSm/z(E.I.，相对强度)241.0(10)，162.0(97)，134.0(100)，105.0(23).Acc.MSm/z 241.0068，C9H7NO5S要求241.0045.实测值C，44.8；H，2.89；N，5.82.C9H7NO5S要求C，44.81；H，2.92；N，5.81％.
4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯(14)的制备按照上述通法，7-羟基-4-甲基香豆素(500mg，2.753mmol)得粗产品(633mg)，该粗产品层析硅胶(200g)，用氯仿/丙酮(8∶1，500ml；4∶1，1000ml，2∶1，500ml，然后用1∶1，500ml)梯度洗脱。蒸发后，第二部分得奶黄色残留物(425mg，60.5％)，该残留物用丙酮/氯仿(3∶5)重结晶得无色菱形结晶(14)(281mg)。
分析数据如下
M.p.165-167℃；Rfs＝0.48(乙醚)，0.29(乙醚/己烷8∶1)，0.26(氯仿/丙酮，4∶1)；νmax(KBr)3320，3180，3080，1700，1620，1560，1380，1125cm-1；δH(丙酮-d6)2.507(3H，s，-CH3)，6.339(1H，s，C-3-H)，7.299(2H，m，C-6-H和C-8-H)，7.390(2H，br s，D2O交换的，-NH2)和7.850(1H，d，JC-6-H，C-5-H＝9Hz，C-5-H).MSm/z(+ve ion FAB in m-NBA，相对强度)542.2(15)，511.1[45，(2M+H)+]，461.2(20)，409.1[60，(M+H+NBA)+]，393.3[60，(M+H+NBA-16)+]，329.2[10，(M+H+NBA-80)+]，256.1[100，(M+H)+].MSm/z(-ve ion FAB in m-NBA，rel.intensity)421.0(20)，407.1[15，(M-H+NBA)-]，335.1(14)，254[100，(M-H)-]，175.1[32，(M-H-79)-]，121.0(17).实测值C，47.2；H，3.56；N，5.51.C10H9NO5S要求C，47.06；H，3.55；N，5.49％.
3，4，8-三甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯(15)的制备按照上述通法，7-羟基-3，4，8-三甲基香豆素(1.0g，4.896mmol)得粗产品(1.33g)，该粗产品用热乙酸乙酯重结晶得238mg原料香豆素。蒸发母液，得到的白色残留物(1.13g)在硅胶(200g)上用乙醚纯化。收集第二部分，蒸发，得到的残留物(519mg，37.4％)用丙酮/己烷(1∶2)重结晶得淡黄色结晶(15)(312mg)。
分析数据如下M.p.197-202℃；Rfs＝0.50(乙醚)，0.69(乙酸乙酯)；νmax(KBr)3310，3040，1680，1600cm-1；δH(丙酮-d6)2.176，2.383和2.458(9H，three s，3×CH3)，7.374(1H，d，JC-5-H，C-6-H＝8.8Hz，C-6-H)，7.390(2H，br s，D2O交换的，-NH2)和7.682(1H，d，JC-6-H，C-5-H＝8.8Hz，C-5-H).MSm/z(E.I.，相对强度)283.1(10)，204.1(45)，176.1(40)，161.1(22)，69.1(56)，57.1(40)，43.1(100).Acc.MSm/z 283.0497，C12H13NO5S要求283.0514.实测值C，50.86；H，4.63；N，4.97.C12H13NO5S要求C，50.88；H，4.63；N，4.94％.
4-(三氟甲基)香豆素-7-0-氨基磺酸酯(16)的制备按照上述通法，7-羟基-4-(三氟甲基)-香豆素(0.90g，3.911mmol)得粗产品(1.20g)，该粗产品在硅胶(200g)上用乙醚/氯仿(1∶4)纯化。从第三组分得到的残留物(392mg)进一步在硅胶(100g)上用乙醚纯化。然后收集第一组分得残留物(295mg，24.4％)该残留物用乙酸乙酯/己烷(1∶3)重结晶得白色针形结晶(16)(160mg)。
分析数据如下M.p.165-168℃；Rfs＝0.67(乙醚)，0.24(乙醚/氯仿，1∶4)；νmax(KBr)3360，3240，3100，1720，1620，1380，1160cm-1；δH(丙酮-d6)6.995(1H，s，C-3-H)，7.461(1H，dd，JC-8-H，C-6-H＝2.8Hz和JC-5-H，C-6-H＝8.1Hz，C-6-H)，7.478(1H，s，C-8-H)，7.53(2H，br s，D2O交换的，-NH2)和7.89(1H，m，C-5-H).1H-(16)的1HNMR谱DMSO-d6/CDCl3(ca.1∶15)表明部分分散为原料香豆素MSm/z(E.I.，相对强度)309.0(2.6)，230.0(77)，202.0(100)，183.5(5)，173.0(10)，69.0(33).Acc.MSm/z 308.9874，C10H6F3NO5S要求308.9919.实测值C，38.8；H，1.85；N，4.53.C10H6F3NO5S要求C，38.84；H，1.96；N，4.53％.
7-(次硫酸(Sulphoxy))-4-甲基香豆素钠盐(12)的制备在N2气氛下[图3]往7-羟基-4-甲基香豆素(1.0g，5.676mmol)的无水吡啶(20ml)溶液中加入三氧化硫-吡啶复合物(1.8g，11.35mmol，2当量)，反应混合物搅拌过夜。除去吡啶后，得到的奶油状糖浆中加入甲醇(20ml)，得到的浅黄色溶液中滴加氢氧化钠的甲醇溶液(1M，ca.18ml)碱化pH～8。形成的亮黄色悬浮液过滤，沉淀用较多的甲醇洗涤。然后滤液浓缩至30-40ml，分次加入乙醚(总量120ml)直到完全沉淀。收集浅米色沉淀(711mg)，其中的582mg用甲醇/乙醚(1∶1)重结晶得浅奶黄色结晶(12)(335mg)。
分析数据如下M.p.172-175℃(分解)；Rfs＝0.51(甲醇/乙酸乙酯，1∶3)，0.67(甲醇/乙醚，1∶3)；νmax(KBr)3500(br)，3080，1680，1610，1560，1300，1260，1050cm-1；δH(DMSO-d6)2.407(3H，s，-CH3)，6.269(1H，s，C-3-H)，7.20(2H，m，C-6-H和C-8-H)，a和7.695(1H，d，JC-6-H，C-5-H＝8.8Hz，C-5-H).MSm/z(+ve离子FAB in m-NBA，相对强度)176(100，NBA+Na+).MSm/z(-ve离子FABm-NBA，相对强度)175.1(14，M-Na+-SO3)，255.0(100，M-Na+)，408.0(8，M-Na++NBA)，431.0(15，M+153)，444.0(20)，533.0(15).230.0(77)，202.0(100)，183.5(5)，173.0(10)，69.0(33).Acc.MSm/z(-ve离子FAB甘油，相对强度)254.9982(25)，C10H7O6S 要求s 254.9963.实测值C，40.3；H，2.92.C10H7O6NaS·H2O要求C，40.55；H，3.06％.HPLC[Spherisorb ODS5，25×4.6mm；流动相MeOH/H2O(70∶30)，流速1ml/min；λmax316nm]tR＝1.5min，c.f.7-羟基-4-甲基香豆素，3.6min.
其它数据如下化合物(12)在碱中，例如氢氧化钠的甲酸溶液中稳定，但在酸性条件中不稳定，此外，反应混合物用氢氧化钠的甲醇溶液(小于3当量)不完全碱化可导致(12)的分解。需要2当量氢氧化钠消耗过量的三氧化硫-吡啶复合物得中性的硫酸钠。因此，氢氧化钠的不足量会导致酸性的硫酸氢钠的形成。化合物12显示对高温的不稳定性，因为一个实验已经表明在90℃加热固体(12)4小时后完全分解为7-羟基-4-甲基香豆素。
体外实验大致如前面描述的，用整体MCF-7乳腺癌细胞或胎盘微粒体(100,000g片段)检测上述提到的香豆素氨基磺酸酯抑制E1-STS活性的能力。
为了检验化合物(12)是否能够作为E1-STS的基质起作用，100μg的该化合物与胎盘微粒体在没有EMATE或在EMATE的存在下(10μM)孵育1小时。孵育结束时形成的未连接的香豆素用乙醚萃取，蒸发除去溶剂后，用TLC检测残留物，用乙酸乙酯/甲醇(80∶20)为洗脱剂，在该洗脱剂下，香豆素硫酸酯(12)和7-羟基-4-甲基香豆素的Rf值分别为0.79和0.95。在化合物(12)与胎盘微粒体孵育后，只检测到未连接的7-羟基-4-甲基香豆素。含有EMATE的反应混合物降低了化合物(12)通过E1-STS的水解，表明香豆素硫酸酯的确是硫酸酯酶的底物。
从图5可知香豆素-7-0-氨基磺酸酯(13)，4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯(14)。3，4，8-三甲基-香豆素-7-0-氨基磺酸酯(15)和4-(三氟甲基)香豆素-7-0-氨基磺酸酯(16)在整体MCF-7乳腺癌细胞的雌酮硫酸酯酶的剂量依赖性的抑制。大致如前面描述的完成检测。(7，8)在25cm3烧瓶中单层整体MCF-7细胞在37℃与[3H]雌酮硫酸酯(2nM)和0.1-10μM香豆素氨基磺酸酯孵育20小时。用测定形成的3H-标记的雌酮和雌二醇的总量检测雌酮硫酸酯酶活性。在未处理的细胞中硫酸酯酶活性为100～200fmol/20h/106细胞。每一点代表3次测量的平均值±S.D值。
所有制备的香豆素氨基磺酸酯的游离母体香豆素检测至多10μM时显示低的或不显示E1-STS抑制活性。然而，相反，所有四种香豆素氨基磺酸酯(化合物13-16)以剂量依赖的方式抑制雌酮硫酸酯酶抑制活性(图5)，并且10μM时的抑制作用为自化合物(16)的71.5％至化合物(14)的93.3％。用整体的MCF-7细胞测量化合物14(最有效的抑制剂)对E1-STS的抑制作用的IC50为380nM。
从图6可知，4-甲基-香豆素-7-0-氨基磺酸酯(14)使雌酮硫酸酯酶时间依赖和浓度依赖性的失活作用。在37℃胎盘微粒体(200μg)与(14)预孵育0-30分钟(对照，●；0.5μM，△以及10μM，★)，随后在4℃与葡聚糖-炭孵育10分钟。离心沉淀葡聚糖-炭，然后上清液部分在37℃与[3H]雌酮硫酸酯(20μM)孵育1小时以确定其余的硫酸酯酶活性。在每一个浓度点重复实验，但在每一个实验中在不同时间进行测定残留的活性。
在二相式中，化合物14与EMATE抑制E1-STS活性是以时间和浓度依赖方式的(图6)，显示类似的作用机制(两个活化位点的可能的化学修饰)。10μM时，用抑制剂预孵育酶20分钟后化合物14降低了原来E1-STS活性的95％。
另一实验揭示，在相同浓度时化合物14抑制胎盘微粒体DHA-STS活性的93.6％。
体内实验为了检测是否化合物14具有雌激素活性，以及也检测其在体内抑制E1-STS的能力，在大鼠进行卵巢切除14天后给它服药(皮下注射1mg/kg，在丙二醇中，5天)。
化合物14的服用不造成这些大鼠子宫重量上任何明显增加(没有说明数据)，说明化合物14显示降低雌激素激动性质。从这些动物中得到的子宫中的E1-STS活性与在未处理的动物中的活性比较抑制为89.4％。
初步数据还证明，在大鼠中化合物14有效的口服活性，类似于对EMATE观察到的活性。
除这些体内结果外，其它一系列大鼠(每只重量大约200g)服用4-甲基香豆素-7-0-氨基磺酸酯(化合物14)，以丙二醇溶液方式口服，或以单一剂量(SD)，或每天服用，共服7天(多剂量，MD)。
确定SD或MD后收集的白血细胞(wbcs)中硫酸酯酶活性的抑制，用标记的雌酮硫酸酯作为底物，并测定雌酮的释放，测定硫酸酯酶活性。
图7说明了结果，见下表剂量mg/kg ％抑制率SD MD0.1 72 651.0 85 8510.0 96 89用肝细胞发现类似的结果。
因此化合物14显示有效的口服活性。
本发明的其它改进方案对于那些技术人员是显而易见的。
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权利要求
1.非甾族氨基磺酸酯化合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用，其中该化合物具有以下的通式(B) 其中R1-R6为独立选自H、卤素、羟基、氨基磺酸酯、C1-6烷基和C1-6卤代烷基或它们的盐；但其中R1-R5中至少1个为氨基磺酸酯基，且其中R1-R6中的任选两个或以上键合在一起形成另一个环结构。
2.权利要求1所述的应用，其中R1-R6中的两个或以上键合在一起形成另一个环结构。
3.权利要求1所述的应用，其中R1-R5独立选自H、C1-6烷基和C1-6卤代烷基。
4.权利要求1所述的应用，其中R1-R5独立选自H、C1-3烷基和C1-3卤代烷基。
5.权利要求1所述的应用，其中R1-R5独立选自H、甲基和卤代甲基。
6.权利要求1所述的应用，其中R6为OSO2NH2。
7.权利要求1-6中任一项所述的应用，其中所述化合物具有以下的通式(C) 其中n为3-10的整数。
8.权利要求1-6中任一项所述的应用，其中所述化合物选自具有以下通式的化合物
9.权利要求1所述的应用，其中所述化合物选自具有以下通式的化合物
10.权利要求1所述的应用，其中所述化合物为
全文摘要
本发明公开了非甾族氨基磺酸酯化合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用，其中该化合物具有以上的通式(B)，其中R
文档编号A61K31/37GK1701790SQ20051007589
公开日2005年11月30日 申请日期1997年2月17日 优先权日1996年2月16日
发明者M·J·雷德, B·V·L·波特尔 申请人:斯特里克斯有限公司